2017 生物学仪器分析B-流式细胞分析
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质谱流式细胞仪工作原理随着生物技术和分子生物学的快速发展,细胞分析已经成为生物学研究中不可或缺的一部分。
流式细胞仪是目前最常用的细胞分析工具之一,它可以快速、精确地分析单个细胞的特征。
而质谱流式细胞仪则是一种结合了质谱分析和流式细胞仪技术的新型仪器,它可以同时分析单个细胞的形态、结构和代谢产物等信息,为细胞分析提供了更加全面的工具。
一、流式细胞仪的基本原理流式细胞仪是一种利用光学原理进行细胞分析的仪器,它可以将单个细胞从细胞混合物中分离出来,并通过光学检测和计算机处理,对细胞的大小、形状、表面标记、活性等多个方面进行分析。
流式细胞仪的基本原理是利用激光光源对细胞进行照射,使其发生荧光或散射,然后通过光学系统对细胞进行检测和分析。
流式细胞仪的主要组成部分包括激光、光学系统、流体控制系统和计算机等。
二、质谱分析的基本原理质谱分析是一种常用的分析技术,它可以通过对化学物质分子的质量-电荷比进行分析,来确定化学物质的成分和结构。
质谱分析的基本原理是将化学物质分子通过电离、加速和分离等过程,将其分解成带正电荷的离子,并通过磁场和电场的作用,将这些离子分离出来,并对其进行检测和分析。
三、质谱流式细胞仪的工作原理质谱流式细胞仪是一种结合了流式细胞仪和质谱分析技术的新型仪器,它可以同时分析单个细胞的形态、结构和代谢产物等信息。
质谱流式细胞仪的基本工作原理是将单个细胞通过流体控制系统进行分离,然后利用激光照射对其进行荧光或散射检测,同时将其离子化。
离子化后的细胞代谢产物经过分离和检测,可以得到细胞代谢产物的质谱图谱,从而确定细胞的代谢状态和代谢产物组成。
质谱流式细胞仪的主要组成部分包括激光、流体控制系统、离子源、分析器和检测器等。
激光是质谱流式细胞仪的光源,它可以对单个细胞进行荧光或散射检测,并将其离子化。
流体控制系统是质谱流式细胞仪的核心部分,它可以将单个细胞从细胞混合物中分离出来,并将其送入离子源进行离子化。
流式细胞仪的原理与使用一、定义流式细胞仪(flow cytometer):是集光电子物理、光电测量、计算机、细胞荧光化学、单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。
流式细胞术(flow cytometry , FCM):是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。
流式细胞仪的发展综合了激光技术、计算机技术、荧光光度测定技术、流体喷射技术、分子生物学和免疫学等多门学科的知识及技术。
二、基本结构1.流动室和液流系统流动室由样品管、鞘液管、喷嘴等组成,由透明稳定的材料(化学玻璃、石英等)制成,是液流系统的核心部分。
样品管贮放样品,单个细胞悬液在液流压力下从样品管射出。
鞘液由鞘液管由四周流向喷孔,包围在样品外周后由喷嘴射出。
2.激光源和光学系统光源根据被激发物质的激发光谱而定,常用弧光灯和激光。
常用的弧光灯为汞灯,激光器多为氩离子激光器、氪离子激光器或染料激光器。
经过特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发荧光供收集检测。
3.光电管和检测系统荧光染色或荧光标记后的细胞受到合适的光激发后产生的荧光通过光电转换器转变为电信号进行测量。
通常使用光电倍增管(PMT)。
PMT响应时间短,为ns数量级,具有较强光谱响应特性,200~900nm光谱区内光量子产额较高,其增益从103到108可连续调节,有利于弱光的测量。
由PMT输出的电信号放大后输入分析仪器。
流式细胞仪中一般备有两类放大器。
一类为线性放大器,即输出信号辐度与输入信号成线性关系,适用于在较小范围内变化的信号以及代表生物学线性过程的信号,例如DNA测量。
另一类是对数放大器,输出信号和输入信号之间成常用对数关系。
在免疫学测量中常使用对数放大器。
免疫分析时需要同时显示阴性、阳性和强阳性三个亚群,其荧光强度相差1~2个数量级;在多色免疫荧光测量中,用对数放大器采集数据易于解释。
此外还有调节便利、细胞群体分布形状不易受外界工作条件影响等优点。
BD流式细胞仪⽬录简介流式细胞仪 (3)流式细胞仪的临床检验项⽬淋巴细胞亚群分析 (4)肿瘤细胞DNA检测分析 (5)⽩⾎病及淋巴瘤免疫分型 (6)残余⽩⾎病检测 (6)⽹织红细胞计数 (7)造⾎⼲细胞计数 (7)⾎⼩板疾病及活化⾎⼩板检测 (8)HLA-B27检测 (8)器官移植的配型及免疫状态监控 (9)AIDS诊断及治疗监控 (9)流式细胞仪的临床/医学研究 (10)流式细胞技术的发展及国内现况 (10)建议流式细胞仪之机型----BD公司FACSCalibur仪器主要特点 (11)配套设施(计算机、软件、试剂、样本制备仪、售后服务) (12)仪器主要技术参数 (15)BD公司全球及中国业务介绍BD公司流式细胞仪培训计划BD公司推荐配置单BD公司仪器与其他⼚家仪器⽐较表⼀、简介流式细胞仪(⼀)流式细胞仪概念流式细胞术(FlowCytometry,FCM)是⼀种对处在液流中的细胞或其它⽣物微粒(如细菌)逐个进⾏多参数的快速定量分析和分选的技术。
简⾔之,流式细胞仪是测量染⾊细胞标记物荧光强度的细胞分析仪,是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质,如⼤⼩、内部结构、DNA、RNA、蛋⽩质、抗原等进⾏快速测量并可分类收集的⾼技术,FCM以其快速、灵活、⼤量、灵敏和定量的特⾊,⼴泛应⽤于基础研究和临床实践各个⽅⾯,包括细胞⽣物学、肿瘤学、⾎液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等,在各学科领域发挥着重要的作⽤。
(⼆)原理待测样本的细胞悬液,在鞘液的包围和约束下,细胞排成单列⾼速由流动室喷嘴喷出,形成细胞液柱。
当液柱通过检测区,在⼊射的激光束照射下产⽣前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC),它们分别反映细胞⼤⼩和颗粒度,根据这些特性可以将细胞分类。
经⼀种或⼏种特殊荧光标记的样本,在激光束的激发下所产⽣的特定荧光,可被光学系统检测并输送到计算机进⾏分析,得到细胞相应的各种特性。