北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com Tris平衡酚(pH＞7.8)
简介：
苯酚(Phenol，C6H5OH)分子量为94.11，CAS号为108-95-2，是一种具有特殊气味的无色针状晶体，温度升高时呈液体状态。Tris平衡酚(pH＞7.8)是经Tris-HCl缓冲液(pH8.0)
充分平衡的酚，其pH值在7.8左右，呈黄色，并含有抗氧化剂。Tris平衡酚多用于酚氯仿
法从核酸样品中去除蛋白质等，一般配制成酚：氯仿：异戊醇=25：24：1，用于提取DNA，当颜色呈深红色应弃用。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 编号
名称 NE0096 Storage
Tris平衡酚(pH＞7.8) 100ml RT 使用说明书 1份
- 1-
中文摘要
目的：用试剂盒法和碱法提取p16重组质粒的比较。方法：1.5ml菌液移入50mlLB液体培养基中培养12h，将试剂盒法和碱法各分3组，每组加入3.0ml菌液，每种方法中有两组是对照试验；紫外分光光度计法测OD值；酶切；琼脂糖凝胶电泳。结果：碱裂法的OD值分别为：1.583；1.575；1.735，质粒DNA的浓度为：3.060；3.150；2.370。试剂盒法的OD（260/280）值为：1.614；1.605；1.656。质粒DNA的浓度为：；0.390；0.420；0.600。结论：碱法与试剂盒法用统计学分析没有显著差异。试剂盒法简单、快捷，DNA纯度高，但质粒DNA的浓度低，提取质粒DNA的量少，并且试剂盒价格昂贵，碱法价格低廉，质粒DNA的浓度高，提取质粒DNA的量多，所以具有较强的实用性，适用于一般实验室研究工作。
关键词：质粒；试剂盒法；碱法；
- 2- Abstract
Purpose : Draw the comparison that p16 recombinated the plasmid with the reagent box law
and alkali law. Method : 1. 5ml fungus liquid move in 50mlLB liquid culture train 12h, reagent box
law and alkali law all 3 group, every group joins 3. The fungus liquid of 0ml, there are two groups
that are tested by the contrast in each kind of method; The law of purple other spectrophotometer
examines OD value; The enzyme is cut; Agar-agar candy gel electrophoresis. Result: It split alkali
SDS-酚氯仿法
1.实验方法步骤：
1）试剂的配制
（1）SDS提取液的配置，PH=8.0 (常温保存)：
（Tris-Hcl 100ml；Nacl 100ml；EDTA 100ml；SDS 1g）
（2）氯代异戊醇（氯仿：异戊醇=24：1）
（3）蛋白酶K（-20℃冰箱保存）
（4）Tris-平衡酚 （-20℃冰箱保存）
2）DNA的提取：
（1）先将标本的足取下，放在1.5ml的离心管中，放在-80℃的冰箱中冷冻3-5分钟，以便使标本更易研磨；
（2）用研磨棒将足在离心管中充分研磨，加入SDS提取液400µl，再用研磨棒充分研磨；
（3）加入蛋白酶K 5µl，56℃水浴加热3-3.5个小时，再加入等体积的酚（即是400µl）；
（4）放入12000转/分离心机离心10分钟，取上清液，加入与上清液等体积的氯代异戊醇（氯仿：异戊醇=24：1）；
（5）再取上清液（如果上清液较浑浊，可以再放入12000转/分离心机，离心10分钟）；
（6）加入上清液2倍体积的100%的乙醇，放入-20℃的冰箱中1小时以上，使DNA充分沉淀；
（7）放入12000转/分离心机离心10分钟，去除液体后加入300µl 70%的酒精，再放入12000转/分离心机离心10分钟
（8）去除酒精，使其自然风干，加入40µl的灭菌蒸馏水，放在-20℃的冰箱中保存备用。
3）PCR扩增
（1） PCR反映液的试剂成分和比例：
Takapa taq(5U/µl) 0. 25µl 0.2µl
10×PCR Buffer (Mg2+Free) 5.0µl 2.5µl
Mgcl2 (25mM)*1 3.0µl 2.0µl
DNTP Mixture (各2.5mM) 4.0µl 2.0µl
模板DNA 2.5µl 2.0µl
引物1（20µM） 1.0µl 0.5µl
引物2（20µM） 1.0µl 0.5µl
北京雷根生物技术有限公司
Tris-EDTA缓冲液(1×TE,pH8.0)
产品简介：
Tris-EDTA缓冲液简称TE, 即Tris-EDTA buffer(10mM Tris，1mM EDTA，pH8.0)，
常用分子生物学试剂，用于溶解DNA、保存DNA等。其主要原理是溶液中的金属离子溶
液破坏DNA，而EDTA可以螯合金属离子，以达到保护DNA的目的。该试剂经高压灭菌
处理。
产品组成：
主要成分：主要由Tris、EDTA.2Na等组成。
操作步骤（仅供参考）：
1、依据具体实验要求。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 注意无菌操作。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关产品：
编号
名称 R00192 R00192 Storage
Tris-EDTA buffer(1×TE,pH8.0) 100ml 500ml RT
使用说明书 1份
产品编号 产品名称
CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)
CC0023 D-Hanks平衡盐溶液(1×,无酚红)
CC0065 HEPES溶液(1mol/L,pH7.4)
CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
R00017 EDTA溶液(0.5mol/L,pH8.0)
R00067 MES buffer(0.1mol/L,pH5.5)
R00195 Tris-EDTA缓冲液(10×TE,pH8.0)
番茄基因组DNA提取步骤
1. 取大约200mg叶片置于研钵中，液氮下充分研磨
2. 将粉末转移至新的2ml离心管中，加入1mlCTAB（含有4%的PVP和2%的BME），充分震荡混匀，放入65℃水浴1-2h，期间不间断上下颠倒以达到最大DNA提取效果
3. 12000g离心10min，转移上清至一新的2ml离心管
4. 加入300ul的5M kAc（pH5.5），4℃放置15min
5. 12000g离心10min，取上清转移至新的2ml离心管中
6. 加入700ul的氯仿/异戊醇（24:1），充分上下颠倒混匀，室温放置3-5min
7. 重复5；6步骤一次
8. 12000g离心10min，转移上清至新的2ml离心管，切勿吸到中间层，加入700ul异丙醇，充分混匀，室温放置20min以上
9. 12000g离心10min，弃上清，此时能看到离心管底部有白色DNA沉淀，将离心管倒置放在室温充分干燥
10. 加入500ulddH2O（含有终浓度为100mg/L的RNase），充分溶解，37℃放置1h充分消化RNA
11. 加入等体积的Tris平衡酚，充分上下颠倒混匀
12. 12000g离心10min，转移上清至一新的1.5ml离心管，加入等体积的氯仿
13. 12000g离心10min，取上清至一新的1.5ml离心管
14. 加入1/10体积的3MNaAc，上下颠倒混匀，然后加入2-2.5倍体积的无水乙醇，颠倒混匀，-20℃过夜沉淀DNA
15. 12000g离心10min，弃上清，此时会看到无色透明的DNA沉淀，用75%乙醇洗涤一次，室温倒置放置充分干燥
16. 加入适量ddH2O溶解，于-20℃保存
