植物病原菌拮抗放线菌的分离筛选与鉴定
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桃根癌病菌拮抗放线菌抑菌活性物质的分离及其初步鉴定季敬霖;刘志民;马焕普【摘要】[ Objective] The paper was to isolate and preliminarily identify the antimicrobial active substances of antagonistic actinomycetes strain G19 obtained from the soil highly affected by peach crown gall (Agrobacterium tumefaciens). [ Method] The antimicrobial substances of antagonistic actinomycetes strain G19 were extracted using protein precipitation method, then isolated and purified using high performance liquid chromatography and middle-pressure chromatography. Its molecular weight was determined by MALDI-TOFMS method, and the related functional groups were verified through chemical color reaction. [ Result ] Seven peptide portions were produced from the antimicrobial substances of antagonistic actinomycetes strain G19 after isolation and purification with the molecular weights of 900 - 1 300 Da. It could be also inferred that it contained Cys, and carried with H2O and Na+. Color reaction of functional groups verified that the substance was polypeptide containing glycosyl. [ Conclusion] The result provided basis for the final definition of the structure of antimicrobial substances in antagonistic actinomycetes strain G19.%[目的]分离并初步鉴定从桃树高发根癌病土壤中获得的拮抗线菌G19菌株的抑菌活性物质.[方法]采用蛋白沉淀法对拮抗放线菌G19菌株的抑菌活性物质进行粗提,利用高效液相色谱仪、中压制备色谱仪对其进行分离、纯化,应用MALDI-TOFMS法进行分子量的测定,最后通过化学显色反应进行相关官能团的验证.[结果]经分离纯化后拮抗放线菌G19的抑菌物质被抨击出7个肽段,是分子量范围为900~1 300 Da,同时推断其含有一个Cys并携带H<,2>O,Na<'+>;官能团显色反应验证该物质为多肽且含有糖基.[结论]研究结果为拮抗放线菌G19菌株的抑菌物质结构的最终确定奠定了基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)015【总页数】4页(P9013-9016)【关键词】桃树根癌病;放线菌;抑菌肽【作者】季敬霖;刘志民;马焕普【作者单位】北京农学院植物科学技术学院,北京,102206;北京农学院植物科学技术学院,北京,102206;北京农学院植物科学技术学院,北京,102206【正文语种】中文【中图分类】S436.621.1桃树根癌病是由特殊功能的根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以自然转基因引起的基因病害,是一种难以防治的土传细菌病害[1-2]。
放线菌筛选的一般方法1.放线菌样本的收集:可以从自然环境中收集土壤、植物、水体等样本,也可以从实验室中保存的菌种库中选取菌种作为筛选对象。
2.放线菌的分离:将收集到的样本通过稀释涂布、均匀涂布等方法进行分离。
将分离出的放线菌菌落定植于选择性培养基上,利用差异营养需求、抗生素抑制等原理,筛选出纯培养基。
3.放线菌培养:将分离出的纯净菌株接种到适宜的培养基上进行培养,包括液体培养和固体培养。
液体培养可以用于代谢产物的筛选,固体培养主要用于菌株保存和鉴定。
4.代谢产物的筛选:通过对放线菌培养液或菌体提取物的分离、纯化和结构鉴定,筛选出具有生物活性的代谢产物。
常用的筛选方法包括生物测定法、波谱分析法等。
其中,生物测定法是通过对目标活性的生物测定,如抗菌活性、抗肿瘤活性、抗炎活性等,筛选出具有生物活性的化合物。
5.进一步筛选与优化:在获得具有初步生物活性的代谢产物后,可以进一步对其进行筛选与优化。
可以通过改变培养条件(如培养基、温度、pH值等)、发酵工艺等方式提高活性代谢产物的产量和纯度。
6.结构鉴定:对优选的生物活性代谢产物进行结构鉴定,通常使用核磁共振谱、质谱、红外光谱等波谱技术进行分析。
结构鉴定有助于揭示生物活性物质的药理作用机制,为后续研究提供基础。
7.生产量扩大与优化:当获得了具有潜在药用价值的放线菌菌株和代谢产物后,可以进行大规模的发酵生产以提高产量。
在此过程中,需要不断优化发酵工艺、培养基成分和培养条件,以提高产量和纯度。
综上所述,放线菌筛选的一般方法包括放线菌样本的收集、放线菌的分离、放线菌培养、代谢产物的筛选、进一步筛选与优化、结构鉴定和生产量扩大与优化。
这些方法的应用能够帮助科学家发现新的放线菌菌株和生物活性化合物,并为新药研发提供重要的基础信息。
植物病原真菌拮抗细菌的筛选鉴定及活性成分分析任建军;师光禄;高美娟;王有年【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】为了获得应用于植物病害防治的高效广谱拮抗细菌菌株,从采自北京不同农田区的土样中分离得到103株细菌,采用平板对峙培养法、发酵产物活性测定法,并根据16 S rRNA基因序列分析以及生理生化反应鉴定、筛选了拮抗菌株。
选用不同饱和度的( NH4)2 SO4溶液提取拮抗蛋白并分析其抗菌活性。
结果表明:分离的菌株中,菌株RN-61和RN-88对供试的10种病原真菌均具有明显的抑制作用;菌株RN-61和RN-88的发酵液对桃褐腐病菌的抑制率较大,分别为87.31%和80.15%( P<0.05);对棉花红腐病菌、辣椒炭疽病菌的抑制率低于40%(P<0.05)。
RN-61与枯草芽孢杆菌相似度最高,为99%,确定其为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis RN-61),NCBI登录号为GenBank accession no.KC840668。
菌株RN-88与Pseudomonas fluorescens F113等相似度为99%,确定其为假单胞菌属的荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens RN-88)。
对不同盐浓度提取的菌株RN-61抗菌蛋白活性研究发现,效果最好的是饱和度为80%的( NH4)2 SO4溶液提取的蛋白。
蛋白原液对桃褐腐病菌的抑菌活性最强,96 h后的病原真菌直径为29.0 mm(P<0.05)。
【总页数】7页(P126-132)【作者】任建军;师光禄;高美娟;王有年【作者单位】北京林业大学,北京,100083;北京农学院;北京农学院;农业部都市农业北方重点开放实验室北京农学院【正文语种】中文【中图分类】S763.13【相关文献】1.1株植物病原真菌拮抗细菌的鉴定 [J], 何亮;宋新华;王智文;吴凡;刘训理2.土壤拮抗细菌的分离与抗植物病原真菌活性初步研究 [J], 刘春来;李新民;王爽;夏吉星;杨帆;刘宇;苏宝华3.一种从土壤中筛选植物病原真菌拮抗细菌的新方法初步研究 [J], 吕娟;邓小叶;郑服丛;张荣意4.1株广谱拮抗植物病原真菌的芽孢杆菌HNA3的鉴定及其活性成分分析 [J], 徐菱菱;王丽;陈龙男;谢福莉;李友国5.大丽轮枝菌拮抗细菌菌株12-51的筛选鉴定与抗菌物性质分析 [J], 王伟;李术娜;李红亚;王全;朱宝成因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
土壤中拮抗放线菌的筛选与鉴定一、培养基1 放线菌培养基高氏一号液体培养基:可溶性淀粉20g,KNO3 1g,K2HPO4 0.5g,NaCl 0.5g,MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,H2O 1000mL,pH 7.2~7.4。
黄豆粉固体培养基:大豆粉20g(沸水煮30min,过滤保留滤液),蔗糖10g,可溶性淀粉5g,蛋白胨2g,酵母膏2g,NaCl 2g,CaCO31g,MgSO4·7H2O 0.5g,KH2PO40.5g,琼脂15g,H2O 1000mL,初始pH7.0。
放线菌发酵培养基:大豆粉20g(沸水煮30min,纱布过滤后保留滤液),蔗糖10g,可溶性淀粉5g,蛋白胨2g,酵母膏2g,NaCl2g,CaCO31g,MgSO4·7H2O 0.5g,KH2PO40.5g,H2O 1000mL,初始pH7.0。
2 放线菌形态及培养特征研究用培养基察氏培养基(ISP1):蔗糖30g,NaNO32.0g,K2HPO41.0g,MgSO4.7H2O 0.5g,KCl 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,H2O 1000mL,pH 7.2~7.4。
麦芽膏-酵母膏培养基(ISP2):酵母膏4.0g,葡萄糖4.0g,麦芽膏10.0g,微量盐溶液1mL,H2O 1000mL,琼脂20g,pH 7.0~7.4。
燕麦片培养基(ISP3):燕麦片20g(加1000mL 水煮20 分钟,然后用离心或过滤得澄清滤液并补足1000mL),微量盐溶液1mL,pH 7.2(微量盐溶液:FeSO4.7H2O 0.1g,MnCl2.4H2O 0.1g,ZnSO4.7H2O 0.1g,H2O 100mL)。
甘油-天门冬酰胺培养基(ISP5):L-天门冬酰胺1.0g,甘油10.0g,K2HPO41g,微量盐溶液1mL,琼脂20g,pH 7.0~7.4。
放线菌的分离和鉴定放线菌的分离和鉴定实验器材:1.⼟壤材料 5 ---10cm 处⼟壤,放于采集袋中带回实验室。
2.培养基淀粉琼脂培养基(⾼⽒Ⅰ号培养基( w /v))可溶性淀粉2%,KNO3 0. 1%,NaCL 0. 05%,K2HP04 0. 05%,MgSO4 0. 05%,FeSO4 0. 001%,琼脂2% 3.溶液和试剂(1) 20% ⽢油( 2) 0. 1%美蓝 A 液: 美蓝0. 3g ,95% ⼄醇300ml;B 液: 0. 01% KOH 100ml 混合A 和B 液即成⾰兰⽒染液3( 1) 结晶紫染⾊液: 甲液结晶紫2g,95% ⼄醇20ml;⼄液草酸铵0. 8g,蒸馏⽔80ml。
甲⼄液先分别溶解,然后混合在⼀起,过滤除去残渣后装⼊滴瓶中备⽤。
( 2) 碘液: 碘1g,碘化钾2 个,蒸馏⽔100ml 先取少量蒸馏⽔加⼊碘和碘化钾,使碘完全溶解后再加⼊全部蒸馏⽔,分装于滴瓶中备⽤。
( 3) 复红酒精溶液: 碱性复红0. 4g,95%⼄醇100ml,溶解装⼊滴瓶备⽤。
4.仪器和其他⽤品⽆菌纸、带玻璃珠的三⾓烧瓶、1ml⽆菌吸管、⽆菌试管、⽆菌培养⽫⼀.⽬的要求:1. 掌握倒平板的⽅法和常⽤分离纯化微⽣物的基本操作。
2. 初步观察⼟壤中放线菌菌落形态。
3. 初步了解掌握微⽣物分类的基本⽅法。
⼆.实验原理:放线菌在⾃然界中主要⽣存于陆地和淡⽔中,⼟壤为这类微⽣物的主要习居场所,⽆论在种类和数量上都⽐其他地⽅繁多。
在中性或偏碱性的⼟壤和有机质等丰富的⼟壤中较多。
放线菌以孢⼦和菌丝⽚段的形式存在于⼟壤,每克⼟壤内含有数万、数⼗万的孢⼦。
放线菌的⽣活史和形态特征放线菌的孢⼦和孢囊孢⼦在适宜的环境下吸收⽔分,膨胀萌发,⽣出芽管1 -3 个,芽管伸长长出分枝,分枝越来越多,形态菌丝体。
因其菌丝体在培养基内,即基内菌丝或称营养菌丝体。
基内菌丝体⼀般没有横隔,由于菌丝体长⼊培养基内和培养基表⾯,并纠缠在⼀起形成密集的菌落,所以⽤接种针将整个菌落培养基挑起⽽不破裂。
湖南农业大学学报(自然科学版)2023,49(4):442–447.DOI:10.13331/ki.jhau.2023.04.010Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)引用格式:郑迪文,周游,谢芳玲,谢宗宝,刘峰,朱宏建.辣椒疫霉病菌拮抗菌的筛选鉴定及生防潜力[J].湖南农业大学学报(自然科学版),2023,49(4):442–447.ZHENG D W,ZHOU Y,XIE F L,XIE Z B,LIU F,ZHU H J.Screening and identification of antagonisticstrain against Phytophthora capsici and the biocontrol potential[J].Journal of Hunan AgriculturalUniversity(Natural Sciences),2023,49(4):442–447.投稿网址:辣椒疫霉病菌拮抗菌的筛选鉴定及生防潜力郑迪文1,周游1,谢芳玲1,谢宗宝1,刘峰2,3,朱宏建1*(1.湖南农业大学植物保护学院,湖南长沙410128;2.岭南现代农业科学与技术广东省实验室,广东广州510006;3.湖南农业大学园艺学院,湖南长沙 410128)摘要:从湖南省长沙、衡阳、岳阳等地辣椒种植区土样中分离筛选出6株拮抗辣椒疫霉病菌的放线菌,采用含毒介质法检测,发现L57–60菌株发酵液的5倍稀释液对辣椒疫霉菌的抑制效果达到98.61%;通过形态学特征观察、生理生化特性鉴定以及16S rDNA、recA基因、atpD基因和rpoB基因联合建树分析,确定L57–60菌株为橄榄色链霉菌(Streptomyces olivaceus)。
抗菌谱测定结果表明,L57–60菌株发酵液对辣椒枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、烟草炭疽病菌(Colletotrichum micotianae)、水稻纹枯病菌(Thanatephorus cucumeris)等12种病原菌均有拮抗作用。
土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选的开题报告
一、研究背景
拮抗微生物是指存在于土壤中的一类微生物,具有特定的抵抗能力,可以通过与其他微生物进行生理和生化竞争,遏制它们的生长繁殖和致病。
放线菌是土壤中常见
的一类拮抗微生物,广泛应用于生物防治、生物肥料等农业领域。
土壤是放线菌生长
的主要环境,因此,对土壤中拮抗放线菌的分离、鉴定和筛选具有重要的研究价值和
现实意义。
二、研究目的
本研究的目的是通过对不同土壤样品进行分离鉴定,获取一系列拮抗放线菌菌株,并通过对其抗菌活性的筛选和评价,为寻找高效的生物拮抗剂提供基础研究支持。
三、研究内容和方法
1、采集不同来源的土壤样品:在不同的农业生产区采集土样,经过筛选、混匀、干燥后作为本研究的土壤样品,进行后续实验的拮抗放线菌的分离和鉴定。
2、拮抗放线菌的分离及鉴定:采用传统的拮抗放线菌培养基,对选定的土壤样
品进行放线菌的分离和纯化,并对纯化后的放线菌进行形态特征分析、生理生化测试
和16S rRNA序列分析,鉴定其种类和类别。
3、拮抗放线菌的抗菌活性筛选:采用坑板扩散法和涂布法,对采集到的放线菌
产生的代谢产物进行药效测定,评价其抗菌活性以及抗生素谱,筛选出具有较强抗菌
活性的菌株。
四、预期结果
通过对不同土壤样品的分离和鉴定,预计可以获取一系列新的拮抗放线菌菌株,并通过抗菌活性筛选,筛选出具有高效抗菌能力的生物拮抗剂,提供给有需要的农业
生产者使用,为推广和应用生物农药提供基础研究支持。
拮抗稻瘟病病菌放线菌Amy-627的筛选及鉴定张丽;王勇;谢程程;宫立晶;王雪【摘要】Amy-627, an actinomycete strain, was obtained from Changbai mountain. It had extensive antimicrobial spectrum of fermentation filtrate. The growth of 22 plant pathogens and 3 bacteria were strongly inhibited by Amy-627 on PDA plate. Especially, the pathogenic fungus, Pyricularia oryzae, was inhibited significantly by it. Besides, the morphology, cultural characteristics, physiological-biochemical characteristics and antimicrobial spectrum of this strain were studied comparatively. The results showed that the characteristics of this strain and Streptomyces hygroscopicu were similar and the homology of them was 99% by 16S rDNA sequences' comparison. Base on the polyphasic taxonomical study and phylogenetic tree analysis, the strain Amy-627 was identified as Streptomyces hygroscopicus for the time being.%菌株Amy-627是一株从长白山地区分离纯化出的对22种植物病原真菌和3种致病细菌都有较明显抑制效果的放线菌,其抗菌谱较广,尤其对水稻稻瘟病病菌(Pyricularia oryzae)具有显著的拮抗作用.通过形态特征、培养特征、生理生化检测及抑菌谱等一系列比较.结果表明,发现该菌株与链霉菌属的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的特征基本相符,通过16S rDNA序列比对同源性达99%.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析,将该菌株暂归入吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)类.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2011(050)014【总页数】4页(P2864-2867)【关键词】水稻稻瘟病病菌;链霉菌;拮抗;筛选;鉴定【作者】张丽;王勇;谢程程;宫立晶;王雪【作者单位】辽宁科技大学化学工程学院,辽宁鞍山114044;辽宁科技大学化学工程学院,辽宁鞍山114044;辽宁科技大学化学工程学院,辽宁鞍山114044;辽宁科技大学化学工程学院,辽宁鞍山114044;辽宁科技大学化学工程学院,辽宁鞍山114044【正文语种】中文【中图分类】S476放线菌种类繁多,代谢功能各异,是一类有着广泛实际用途的生物资源。
葡萄霜霉病菌拮抗放线菌QH94的筛选及鉴定蒋欣陶;赵奎华;刘长远;梁春浩;臧超群【摘要】为筛选出葡萄霜霉病菌的拮抗放线菌,对采自辽宁省沈阳、葫芦岛、锦州、鞍山、朝阳等地区葡萄园的23份土样中的放线菌进行分离,并对获得的119株放线菌进行防效评价,得到1株拮抗放线菌菌株QH94,其田间防效可达68.83%~89.80%.采用平板对峙培养法进行抑菌谱的测定,QH94菌株对9种病原菌有抑制作用,其中对稻瘟病菌的抑制作用最强,抑菌带宽度为10.57am.根据菌株QH94的形态特征、培养特征、生理生化特性以及16S rDNA序列分析结果,将其初步鉴定为细黄链霉菌[Streptomyces microflavus (Krainsky) Waksman&Herici].【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2015(046)003【总页数】6页(P303-308)【关键词】葡萄霜霉病菌;生物防治;放线菌;细黄链霉菌【作者】蒋欣陶;赵奎华;刘长远;梁春浩;臧超群【作者单位】沈阳农业大学植物保护学院,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161;辽宁省农业科学院植物保护研究所,沈阳110161【正文语种】中文【中图分类】S436.631.1.9葡萄霜霉病[Plasmopara viticola(Berk.et Curt.)Berl.et de Toni]是葡萄生产上的重要病害,世界各葡萄主要产区均有发生。
该病主要为害叶片,也为害新梢、叶柄、卷须、幼果、果梗和花序等幼嫩部分,可造成叶片早期干枯脱落,葡萄果穗不能正常发育,浆果不易成熟;同时影响枝条成熟、植株的抗寒性减弱,可造成第二年产量严重损失。
一般年份葡萄霜霉病可造成减产10%~20%,严重年份可达60%以上[1-2]。