富血小板纤维蛋白膜_PRF_引导成骨能力的比较研究_许丰伟

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中国口腔种植学杂志2012年第17卷第1期血小板凝集物在口腔颌面外科手术,尤其是种植外科手术中的使用将会得到普及和进一步的发展。富血小板纤维蛋白膜(PRF)作为一种富含自体生长因子和血小板的生物材料得到了广泛重视[1]。PRF区别之前热议的富血小板血浆(PRP)主要在于它是一种纯天然的血液制品,不添加任何抗凝剂及其他物质,被认为是一种最佳的天然血凝块[2]。有临床及实验结果表明PRF对引导骨再生有促进作用[3,4]。海奥生物膜作为一种引导骨再生的生物材料,已广泛应用于临床,在成骨方面取得了良好的效果。本实验以新西兰大白兔双侧下颌骨缺损为实验模型,探讨及比较富血小板纤维蛋白膜(PRF)、海奥生物膜联合骨粉用于新西兰大白兔下颌骨缺损处早期引导骨生成的能力。

富血小板纤维蛋白膜(PRF)引导成骨能力的比较研究

许丰伟柳忠豪董凯孟祥王超孙爱杰【摘要】目的:探讨及比较富血小板纤维蛋白膜(PRF)、海奥生物膜联合骨粉用于新西兰大白兔下颌骨缺损处早期引导骨生成的能力。方法:选取雌性新西兰大白兔9只,在其双侧下颌骨下缘上2mm做圆形骨缺损,A组植入骨粉后覆盖PRF,B组植入骨粉后覆盖海奥生物膜,C组植入骨粉。术后2,4,8周分期分组处死动物,取下颌骨缺损植骨区标本。标本行大体观察、CT及组织学观察成骨情况。结果:大体观察,骨缺损区早期骨愈合坚硬度A组>B组>C组。CT观察,骨缺损区骨密度早期A组>B组>C组,统计学分析,2周、4周时A组B组C组之间骨密度值分别具有统计学差异,8周组A组B组无统计学差异,与C组分别存在统计学差异。组织学观察,同期比较A组新生骨组织及再生血管化均优于B组、C组,新生骨排列较B组、C组规则。结论:PRF在骨缺损的修复中能够促进新骨的形成,提高新骨形成的时间和质量,对引导成骨起到有效促进作用。【关键词】骨缺损;富血小板纤维蛋白;膜引导骨再生中图分类号:R782.1文章标识码:A文章编号:1007-3957(2012)01-10-04

ThecompareresearchofPlatelet-richfibrin(PRF)guideboneregenerationXUFengwei,LIUZhonghao,DONGKai,etalBinzhonMedicalCollege,264008AbstractObjection:ToexploretheeffectofboneregenerationusingPRFandhaiaomembranerespectively.Method:NineadultNewZealandwhiterabbits,femaleweredividedthreegroups(A,B,C)randomly.Agroup:PRF+boneparticle;Bgroup:Haiaomembrane+boneparticle;Cgroup:onlyboneparticle.After2weeks,4weeks,8weeks,3rabbitsweresacrificedbyinjectingairtothevein.ThenthejawsweretakentoinvestigatebyCT,histologyofHEstainingandeyesresearch.Result:At2weeks,4weeksCTbonedensity:A>B>C.8weeksthereisnodistinguisheddifference.Conclusion:TheeffectofPRFisbetterthanHaiaomembraneinshorttime,PRFhaveabletoimproveboneregeneration.Keyword:bonedefect;platelet-richfibrin(PRF);GBR

作者单位:264008滨洲医学院(许丰伟,董凯);烟台市口腔医院(柳忠豪,孙爱杰);大连医科大学(孟祥赟,王超)。通讯作者:柳忠豪

斌10..中国口腔种植学杂志2012年第17卷第1期1材料与方法1.1主要材料和仪器一次性使用静脉血管(湖北致远医疗科技有限公司)离心机(湖南凯达科学仪器有限公司)骨粉、海奥生物膜(烟台市正海生物技术有限公司)CT(NEWTOM烟台市口腔医院提供)电子显微镜(美国MediaCyberneticsIMAGE-PROPLUS)1.2下颌骨缺损模型的分组及建立12月龄雌性新西兰大白兔9只,体重3~3.5kg,清洁级(滨州医学院动物实验中心提供)。将9只新西兰大白兔随机分为A、B、C组3组,每组3只。实验动物称重,3%戊巴比妥钠注射液按1ml/kg剂量耳缘静脉麻醉至麻醉适度后,①耳中动脉抽血5ml置于采血管,离心机3000r/min离心12min,静置3-5分钟,可见血液分为3层,取离心后试管中的中间层,即为PRF凝胶,遂置于2层无菌纱布之间,轻轻按压,使之成为膜状,获得PRF膜。②离心的同时,下颌下缘区脱毛备皮,常规消毒铺巾后于双侧下颌骨下缘做一长约2cm切口,依次切开皮肤,分离皮下组织、肌层直达骨膜。③剥离骨膜后,在距下颌骨下缘2mm处,用7mm直径环形取骨钻滴水降温下切割至深5mm,形成直径7mm深5mm的骨缺损模型。④生理盐水冲洗,分别于A组:植入骨粉后覆盖PRF,B组:植入骨粉后覆盖海奥生物膜,C组:植入骨粉。⑤分层严密缝合肌肉及皮肤,术后给予每天4万单位庆大霉素注射液肌肉注射,共5天。1.3观察指标在手术后第2、4、8周,采用耳缘静脉空气栓塞法致死动物,取双侧下颌骨缺损区(剥离周围软组织),生理盐水冲洗,放入4%多聚甲醛液固定24小时,拍CT观察骨密度及植骨区骨吸收情况。然后将部分骨缺损标本经过脱钙、包埋、切片,HE染色后进行镜下组织学观察,观察新生骨百分比。2结果2.1大体标本图1取兔下颌骨剥离骨膜后的大体标本实验动物均生存良好,无一例感染化脓及瘘管等情况发生。2周:PRF组骨缺损表面PRF吸收,骨粉颗粒少量存在,骨缺损区表面质地较韧,与软组织区粘连,骨缺损边缘清晰。胶原膜组骨缺损区胶原膜未完全吸收,骨粉少量存在,较PRF组稍多,骨缺损区表面质地较韧,与软组织黏连较PRF组轻,骨缺损边缘清晰。骨粉组表面骨粉部分存在,结合成整体,骨缺损区表面质地较韧,骨缺损边缘清晰。4周:PRF组骨缺损表面颗粒不清,骨缺损区表面质地较坚硬,骨缺损区边缘不清,与软组织稍粘连。胶原膜组膜完全吸收,表面颗粒不清,骨缺损区表面质地较同期PRF组坚硬度略低。骨粉组骨缺损区表面质地略低于前两组。8周:PRF组骨缺损表面骨颗粒完全吸收,骨缺损区表面质地坚硬,边界模糊,基本与正常骨组织一致。胶原膜组胶原膜、骨颗粒完全吸收,骨缺损区表面质地坚硬,周围界限模糊。骨粉组骨颗粒基本完全吸收,骨缺损区表面质地较坚硬。各组骨缺损处均基本保持下颌骨外形弧度。2.2CT骨密度测量

图2利用CBCT测量及显示局部骨缺损处骨密度值利用CT测得骨密度值平均值如下表:组别2周4周8周盖PRF1112.91570.921965.01盖膜921.011105.741858.21骨粉682.711007.331544.76统计学分析,术后2、4、8周CT测量骨密度值,应用spss13.0软件,以P=0.05标准进行方差分析,并进行两两比较。术后2周、4周时A、B、C三组之间骨密度值分别具有统计学差异(P<0.05),8周时,A、B组之间无统计学差异(P>0.05),A组、B组分别与C组之间存在统计学差异(P<0.05)。

11..中国口腔种植学杂志2012年第17卷第1期2.3组织学观察将所取得骨缺损区标本近远中向石蜡切片,行HE染色,10倍物镜下观察。2周:PRF组骨缺损区充满大量纤维结缔组织和新生毛细血管,外周骨缺损边缘处有新生骨向骨缺损中心延伸生长,均质粉染,见丰富的成骨细胞存在。胶原膜组骨缺损处同样充满大量纤维结缔组织包绕骨粉颗粒,但周边新生骨与新生毛细血管较PRF组少,周边活跃的成骨细胞较PRF组少。骨粉组纤维结缔组织充满骨缺损区,少量新骨存在于周边,成骨细胞及新生毛细血管较PRF组和胶原膜组少。4周:PRF组新生骨数量及毛细血管更加丰富,并向骨缺损中心进一步延伸,成骨细胞增生,排列与骨粉颗粒周围,新生骨形态较同期胶原膜组及骨粉组规则,骨陷窝丰富,出现骨钙化迹象。胶原膜组新生骨数量增多,向骨缺损中心延伸,纤维结缔组织较少新生骨排列不规则。骨粉组新生骨数量增加,较前两组少。8周:PRF组新生骨组织趋于成熟,骨钙化程度增高,出现编制骨,骨组织的排列较规则,进一步向骨缺损中心生长,仍然存在少量纤维结缔组织,血运丰富。胶原膜组相比较PRF组相差不大。骨粉组新骨生成增多,趋于成熟,存在部分纤维结缔组织。3讨论3.1海奥生物膜的引导成骨作用海奥口腔修复膜是用于修复口腔黏膜及软组织缺损的材料,广泛应用于口腔黏膜缺损的修复、腮腺切除术预防味觉出汗综合征。其生产工艺先进,是一种可吸收的双层胶原膜。它具有生物相容性好、不含化学交联剂、没有细胞毒性等特点,在生产中去除了可诱发宿主免疫排斥反应的细胞成分,而保留了真皮支架和基底膜,也可用于口腔种植GBR手术的屏障膜。在引导骨再生的过程中,膜的降解时间长,其代谢产物没有细胞毒性。可吸收性胶原膜保留了胶原蛋白的三维空间结构、细胞外基质及真皮支架,可为周围细胞的迁移、增殖提供支架,有利于细胞在支架内生长、增殖和分化,促进组织生长和创面愈合。可吸收性胶原膜不仅能保护血凝块保持细胞生长的间隙,引导骨组织的生长和沉积[5]。解永富在46例种植患者中使用海奥口腔修复膜行GBR技术,引导种植体周围骨再生,术后4个月拍摄X射线片显示,44例种植体周与组织紧密贴合无透射间隙,无明显横行骨吸收发生。在植骨区,可见骨代用品高密度造影。种植Ⅱ期手术时种植体稳固无松动[6]。临床上,海奥生物膜作为GBR屏障膜作用的一种可靠的可吸收膜已得到广泛应用。3.2富血小板纤维蛋白膜(PRF)的引导成骨作用富血小板纤维蛋白(PRF)是由Choukroun等学者从血液中提取的富含血小板、白细胞及各种生长因子的纤维性血液制品,成为近年来临床应用及研究广泛的一种生物材料[7]。其中分别讨论一下各自在引导成骨方面的作用。一、血小板的作用:PRF主要结构组成是离心得到的富集的血小板,血小板内的а-颗粒被凝血酶、胶原等激活后释放多种生长因子,如血小板源性生长因子,转移性生长因子-β1,转移性生长因子-β2,类胰岛素生长因子,表皮生长因子和血管内皮细胞生长因子等血小板由来的生长因子,一方面对细胞的分化,血管增生和成骨细胞的增殖起着促进作用,同时抑制破骨细胞的功能。与重组生长因子不同,这些生长因子之间的比例是天然的,它们之间具有协同效应并与其他促进细胞活性的因子如BMP等相互作用相互影响,共同维持着组织环境的平衡,对创伤愈合,特别是骨缺损的修复、再生起着重要的作用[8]。二、纤维蛋白的作用:富血小板纤维蛋白的纤维蛋白疏松多孔网状结构,使得营养成分及氧气可以轻松的弥散至细胞周围,促进骨髓干细胞分化为成骨细胞,沉积骨质,加速成骨过程。PRF纤维基质的生物学作用①纤维蛋白是血管化的天然诱导物。②纤维蛋白结构是免疫反应的天然支持。③纤维基质引导创面的组织愈合并影响上皮细胞和成纤维细胞的新陈代谢[9]。.三、白细胞的作用:纤维蛋白在自然凝集过程中网络了血浆中除红细胞外几乎所有的细胞成分,经离心法制作的PRF中几乎包含了血液中所有的白细胞。因此很容易推论富血小板纤维蛋白可以发挥更明显的抗感染作用。迄今为止所有临床试验都发现PRF似乎能减少术后的疼痛和水肿,避免甚