HPLC法测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量_吕兆林

酸 峰面积
间
最低 检 测 限 将 浓度 为 为
一
和最低定量限
及
「
潘 海燕 二潘海燕
的研 究
苹 果酒 苹 果酸一 乳 酸 发酵 的研 究 剑 徐岩 王栋 等
时间八
色谱柱 的使 用 寿命 , 因此 , 在 本 实 验 中 采 用 低 浓度 的甲酸 作为缓 冲液 , 并加 入适 量 的 甲醇 , 以 改善有 机 酸分 离效 果和 峰形 。 实验 中 甲醇 添加量 为 和 。 当 甲醇添 加量 为 时 , 苹 果酸 和乳 酸 而添加 量为
苹果酸
崔 绷 淤 匀
该 法 定 量 线 性 关 系 良好
在 。
苹 果 酸标 准 曲 线
以 内 , 峰面 积 以
为
的线 性 相 关 系 数 在 以内 ,
可达
日内 进 样 保 留 时 间 相 对 标 准 偏 差 以内 峰面积的
可达
日间进 样 保 留时 间 的
最小检测量
在
, 乳 酸的
以内
苹果酸的最低检出限
可达 了 ,
卜 述 方 法 对 于 测 定 苹 果酒 中 苹果 酸及 乳 酸 含量 线 性 关 系 良好 、 重 现 性 好 、 灵 敏 度 高 。 关锐词 高效液相色谱法 苹果酸 乳酸 含量 测 定
接进样 。 仪器及 其条 件
拜 微孔 滤膜 过 滤 , 稀 释
倍 , 直
是 一种 快 速分 离 色谱 柱 , 该 柱颗 粒 粒 径 比普 通 柱 要 小 , 为 拼 。快速分离 柱高效液相 色谱 法与传 统高 效液相 色谱 法相 比 , 具有 分离 时间
色谱柱
柱温
过滤 波长 流速 。
·拌
℃ 流动相
川 进样量
进 样 浓度的 选择
速过低则 分 离时 间过 长 、 柱 效 差 ·拼 。 、
使用 发现
而 流速 过 高 又导
致峰 挤 在 一 起 分 不 开 。 本 实 验 使 用 · 色谱 柱 , 分 析 了 、
选 用不 同浓 度苹 果酒 样 品进 样进 行液 相色 谱分 析 , 结 果如 图 所 示 。 从 实 验 的结 果 看 出 , 发 酵 所
· 一 柱 , 柱 ,
柱 ,
分析 纯
色谱 纯
使 用 的色谱柱 进行 了优选 。 本 实验 选用 了
拌 拜
拜 只
色谱纯
实 验仪 器
分析 天 平 公司 公司 一
, 德 国赛 多 利 斯 型数控 超声 波清 洗器 , 江苏 省 昆 循环 式 多 用 真空 泵 珍 高效 液 相 色谱 仪 , 计 , 德 国赛 多利
酸 、 乳酸标 准 品色谱 图进行 对照 , 根 据保 留时 间初
步确 定苹果 酒 中有机 酸种类 , 同时用 加样 外标 法和 光谱 图数据 进行 辅助定 性 。 有机酸 定量
、 酸 、 、 、
机 酸衍 生化 , 且 常 因为衍 生化反 应不 易定量 而直接 影 响测定 结果 的准确性 川 。 高效液 相色谱 法是 目前 分 析有机 酸 的较优 方法 , 广 泛应用 于果蔬 及其 制 品 中有机 酸 含 量 的 测 定巨 卜 `〕。 何 海 霞 等 用 反 相 高 效 液相 色谱 的方 法 测定 了 芦荟 及 芦 荟 饮 料 中 的有 机 酸「 `口, 贾洪 锋 等 用 反 相 高效 液 相 色 谱 法 测 定 了发 酵辣 椒 中 的有 机 酸 ' 〕。 而使 用 高 效 液 相 色 谱 法 测 定苹 果酒 中 的苹 果 酸及乳 酸 的方法鲜 有报 道 , 由于 不 同样 品基体 的复杂 性 , 现有 的一些 方法 通用性 较 差 , 该 研 究将有 利 于苹果 酒 品质评价 及性 质评定 。 本文 系统研 究 了苹果 酒有 机酸 的反相 高效液 相 色谱 分析法 , 对 色谱 柱 的型号 、 流动 相 的配 比 、 流 速 、 检 测 波长等 色谱 条件 进行 了优化 , 为苹 果酒 有
分 离 , 故 选 择 甲醇 的 添 加 量 为 一 柱 。 ①
由上 至 下 分 别 为
②图尹③产柱。图谱
检 测 波 长的选择
种 型号 的色谱 柱 对应 的
根 据苹 果酸 和 乳 酸 在
长扫描 如图 所示
一
吸光度的波
, 苹 果酸最大吸收波长均在 , 发现
流 动相 成 分的选 择
左右 , 乳 酸最 大 吸 收 波 长 为
一 旋 涡混 合器 , 上海 隆 拓仪 器设 备 有 限
。 以苹果 酸一 乳 酸 混和标 样及 自制苹 果酒 为样 品考察 了 种 柱子 的分离 效果 , 在 相 同的洗脱 程序 。从 图 可看
柱具 有 更 好
山市超 声仪 器有 限 公 司
下进 行 测 试 , 得 到 的 色 谱 图 见 图
出 , 在 相 同 的分 析 时 间 下 的分 离 效 果
流速下有 机酸标样 的色谱 图 。 观察
流速测定样 品时 出峰 比较缓 时 峰不 能 很好 的
得 的苹 果酒 原样 浓度 较 大 , 色谱 峰堆 叠 , 经过 稀 释
后 能使 组分 有效 分离 , 色 谱 图大有 改 观 , 最终 选定
进 样浓 度 为苹 果酒 倍 稀 释浓 度 。
慢 , 不利 于 快 速 测 定
作 图 , 绘 制 出标准 曲线 。
结果 与 讨 论
液 相色谱 分离条 件 的选择 在苹 果酒 的有 机 酸 检 测 中 , 重 要 的是
优选 有机酸 的色谱 分离 条件 , 这些 条 件涉 及色谱 柱
型号 、 流动 相配 比 、 流 速 、 检测 波长 等 。 色谱 柱 的 选 择
材料 与方 法
实验材 料
着 苹果 酒 的 酸 味 一 几 一。 基 于有 机 酸 对 苹 果 酒 风 味 品 质 的 贡献 , 有 机酸 的定 量 分析倍 受 关注 。
收 稿 日期 基金项 目
工 一
一 别 项 口 “苹 果 酒 规模 化 发酵 工 艺新 技 术 引进 ” 项 口编 号
一
国家 林 业 局 洲
作者简介
吕兆 林
一
川
年
月
吕兆林 等
日' 戈 ' 法测定 苹果 酒 中苹 果酸及 乳 酸含量
精确度 以 苹果酒 中苹果 酸 和乳 酸的峰 面积 和保 留时 间
苹果 酸 和乳 酸 日内 、 日间保 留时 间 和峰 面积 的重 现 性 。从表 中可 知 , 日内进 样 保 留时 间 的
在 以内
在
日间 进 在 。
来评 价 该方 法 的 精 确 度 , 按 照
, 每 天 固定 在 上 午 进 样 , 保 留 时 之 内 , 峰面积 的
显 示 了苹 果 酒 中
表
一 之 间 , 说 明该 分析方 法 比较稳 定 , 测 定结 果 准确 可靠 。
苹 果 酸 和 乳 酸 保 留 时 间和 峰 面 积 的精 确 度
苹 保 留时间
」 内
姜
果
酸 峰面积 保 留时 间
乳
·
甲酸
拜 检测
短 , 分析速 度快 , 流动 相消 耗小 , 分 析成本 低等 优 点「 “一' 〕。 为 高 效 地 完 成 测 试 工 作 , 本 研 究 在 各 峰
甲醇 , 使 用前 经过 。
拼 混合 纤 维树 脂膜 抽 真空
分离效 果较好 的前 提条件 下 , 尽可 能让 所需 的分离 时间缩 短 , 因此我们 最 终选 择 了 作 为 实验用 分析柱 。 柱
内连续 进 样 次 , 日间 每
的
分析
, 一 间的
以内 , 峰面积的 样 , 连 续分 析 在
条 件 进 行 实 验 , 做 苹 果 酒 日内 与 日间 的 重 现 性 , 日 进 样一 次 , 保 持 , 以保 留时 间 和 峰 面 积 的相 对 标 准 偏差 来评价 该 方法 的 准确 度 。 表
为
琐酸
、
时间,
峰型较 好 , 且 不 易 受 其 他 峰 的 干 扰
咔 创 挤 ︸ 州
苹 果 酸
一
匕 ' 酸
时 间 朋
时 , 随着 甲醇 在 流 动 相 中 比例 的 加 大 , 使 得 流 动相 的缓 冲能 力 降 低 , 峰 型 出 现 裂 分 而 且 有 所 拖
尾 , 苹 果 酸与 乳酸 无法 有效 分离 , 为 了使 物 质彻 底
女 , 博士
副教授
精 细 与 专 用化 学 品
第
卷第
期
机酸 的构 型 , 但 是每 次 只能测定 一种 有机酸 , 比较 耗 时 。 气相 色谱 法 的灵敏 度和选 择性 相对较 好 , 但
是 由于主要 的短 链有 机酸 是非挥 发性 酸 , 需 要将 有
有机 酸定 性
将 苹果酒提取 液色谱 图与苹果
20 1 2 年
月
吕兆林 等
目
' 法测 定苹 果酒 中苹 果酸 及 乳酸含 量 常 用 的 磷 酸 盐 有 、 、 , 和
益 果酸
。。 由于 过 高 浓 度 的缓 冲 盐 会 使 得 疏 水 性 色谱柱 的柱效 降低 或者使 色 谱柱 结 晶或 塌 陷 , 影 响
, 目 刀刀 目 月 〔 呱 〕气 川 弓加 生田
色谱 柱 流动 相配 比影 响着 流 动相 的
值 , 从
当波长为
左右 时 , 响应 值较 大 , 但倒 吸 峰 噪
而对 柱 效 和 峰 的 分 离 均 有 影 响 , 磷 酸 盐一 磷酸体 系 是反 相 高效 液相 色谱 法 测定有 机酸 常 用 的缓 冲盐 ,
,习 毛
音 亦较大 , 当增大 吸收波长时 , 响应 值则 相应 减小 , 因此在本实 验 中选择 为紫外 检测波 长 。
拜 又
测 定 苹 果 酒 中 苹 果 酸 及乳 酸 含 量 的 方 法 , 即 采 用 配 紫 外 检 测 器 及