石榴皮中乌索酸和齐墩果酸含量的反相高效液相色谱测定

中药陆英研究进展

邹盛勤,陈武* (江西省天然活性成分重点实验室,宜春学院生物工程研究所,江西宜春336000)摘要 从本草考证、化学成分、生药鉴别和药理作用等方面综述了中药陆英的现代研究概况,为进一步开发利用提供文献依据。关键词 陆英;化学成分;药理作用;研究进展中图分类号 S567.1+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2006)13-3092-03ResearchAdvancesinSumbucusChinensisLindl.ZOUSheng-qinetal (ProvincialKeyLaboratoryofResearchonActiveIngredientsinNaturalMedicine,BioengineeringResearchInstituteofYichunUniversity,Yichun,Jiangxi336000)Abstract Theresearchontheherbalogicaltextual,chemicalcomposition,medicinalmaterialsandpharmacologicaleffectofSumbucuschinensisLindlwasgeneralized.Keywords SumbucuschinensisLindl;Herbalogicaltextualresearch;Pharmacologicaleffect;Researchadvance 陆英(SambucuschineseLindl.)又名接骨草、八棱麻、走马风,为忍冬科接骨木属植物,分布于华北、华东、华南、西南及陕西、甘肃、宁夏等省区,以根、茎及叶人药,具活血散瘀、祛风除湿、通经活络之功效,能治扭伤、腰肌劳损、骨折、风湿痹痛等症,又能作兽药治牛跌伤[1]。茎、叶含绿原酸、乌索酸、齐墩果酸、α-香树酯醇、β-谷甾醇,并显黄酮甙、鞣质及还原糖反应,种子含氰甙类[2,3]。陆英为民间常用药,应用广泛。笔者就陆英的本草考证、化学成分、生药鉴别和药理作用等进行了综述。1 本草考证[4-10]《神农本草经》载:陆英,味苦寒。主骨问诸痹,四肢拘挛疼酸,膝寒痛,阴痿,短气不足,脚肿。生川谷。《本草经集注》载:别录曰:陆英生熊耳及冤句,立秋采,又曰:鑋藿,味酸、温、有毒。一名堇,一名芨,生田野,春夏采叶,秋冬采茎根。《唐本草》认为陆英即鑋藿。《药对》及古方无鑋藿,惟言陆英也。《本草图经》载:生熊耳川谷及冤句。鑋藿不载所出州土,但云生田野,今所在有之。春抽苗,茎有节,节间生枝;叶大似水芹及接骨。春夏采叶,秋冬采根茎。或云即陆英也。苏恭云:《药对》及古方无鑋藿,惟言陆英,明非别物。今注以性味不同,疑非一种。谓其类耳,然亦不能细别,再详陆英条,不言所用。鑋藿条云用叶、根、茎,盖一物而所用别。故性味不同,何以明之?又按《尔雅》云:华 也,华 荣也。木谓之华,草谓之荣,不荣而实者为秀,荣而不实者谓之英。然则此物既有英名,当是其花耳。故《本经》云:陆英立秋采。立秋正是其花时也。又葛氏方有用鑋藿者,有用鑋藿根者,有用叶者,三用名别。正与经载三时所采者相会,谓陆英为花无疑也。《证类本草》载:令注鑋藿条,唐本编在狼跋子之后,而与陆英条注解并云剩出一条。今详陆英味苦、寒,无毒。鑋藿,味酸、温,有毒。既此不同,难谓一种,盏其类尔。今但移附陆英之下。臣禹锡等谨按日华子云:味苦,凉,有毒。治 癞风痹,并煎汤浸,并叶用。《本草纲目》载:志曰:苏恭以陆英、鑋藿为一物今详陆英味苦寒无毒,鑋藿微酸温有毒,既此不同,难谓一种,盖其类尔。宗 曰:鑋藿与基金项目 国家“863”计划资助项目(2002AA2Z3217);江西省教育厅科研项目(赣教技字[2006]267号)。作者简介 邹盛勤(1970-),男,江西奉新人,副教授,从事天然药物成分提取与分析研究。*通讯作者,教授。收稿日期 2006-04-03陆英性味及出产皆不同,治疗又别,自是二物,断无疑矣。时珍曰:陶苏本革、甄权药性论,皆言陆英即鑋藿,必有所据。马志、寇宗 虽破其说,而无的据。仍当是一物,分根茎花叶用,如苏颂所云也。气味苦、寒,无毒。权曰:陆英一名鑋藿,味苦、辛,有小毒。主治骨问诸痹,四肢拘挛疼酸,膝寒痛,阴痿,短气不足,脚肿。能捋风毒,脚气上冲,心烦闷绝,水气虚肿,风瘙皮肤恶痒,煎汤入少酒浴之,妙。《本草纲目拾遗》载:陆英即鑋藿,甄权药性论云:田野村墟甚多,人家所植,高大色赤者陆英。田野所生,叶上有粉者是鑋藿。二味所主大率相类,其论颇明白可据,濒湖纲目分陆英蒴藿为二,于陆英集解下之陶苏本草甄权药性论,皆言陆英即鑋藿,必有所据,又不引入何耶。从上述可知,陆英即鑋藿有存异点,然而各本草除性味不同外,其形态、功用主治较为相符。陆英列《神农本草经》下品,鑋藿列《名医别录》下品。古方之中惟有陆英记载而无鑋藿记载,历代本草又皆言陆英和鑋藿为一物,但两者却各单载。笔者以为陆英和鑋藿应是一物,只是药用部位不同,陆英为花,鑋藿为茎叶或根,古载性味相异是因为药用部位不同,性味也就有所不同了。《中药大辞典》载陆英为花,鑋藿为全草及根分别用于临床。两者性味也相异:陆英苦辛,寒;鑋藿甘酸,温。但功用主治相同:祛风除湿,活血散瘀,治风湿疼痛、肾炎水肿、脚气浮肿、痢疾、黄疸、慢性气管炎、风疹瘙痒、丹毒、疮肿、跌打损伤、骨折等。因此,陆英和鑋藿虽称呼不同,却是一物无疑。2 化学成分2.1 挥发油 蒋道松[11]等采用GC-MS联用技术分离了陆英全草挥发油的34种成分,结合计算机检索鉴定了其中的26种成分,已鉴定成分占总量的98.006%,未鉴定成分占1.994%。其中1-甲氧基-4-(2-烯丙基)苯含量最高,占总量的35.651%;其次为3-甲基丁酸,占总量的30.507%;含量大于1%的成分还有3-甲基戊酸(13.613%)、n-十六烷酸(3.834%)、2-甲氧基-3-烯丙基苯酚(3.398%)、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇(2.185%)、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚(1.659%)和植醇(1.220%)。2.2 三萜类 陈武等[12]从忍冬科接骨木属植物陆英中提取分离出5种成分,经鉴定分别为乌索酸、齐墩果酸、α-香树脂醇、β-香树脂醇、β-谷甾醇。杨德泉[13]采用薄层扫描法测定了陆英不同采收期叶与茎中β-谷甾醇的含量,陆英叶、茎中安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2006,34(13):3092-3094 责任编辑 罗芸 责任校对 罗芸的β-谷甾醇均在开花期间最高,叶的含量高于茎的含量约7倍。应在开花时采收为佳,药材宜以采收叶为主。邹盛勤等[14]采用HPLC法同时测定了不同采收期陆英根、茎、叶中乌索酸和齐墩果酸的含量,陆英叶中乌索酸含量较高,茎次之,根中含量最低,但乌索酸含量均远高于齐墩果酸的含量。李开泉等[15]采用“醇提凝析法”从陆英中分离出高纯度乌索酸产品,提取及分离过程仅使用乙醇为溶剂,工艺简单,为乌索酸的工业化生产提供了科学依据。2.3 黄酮 黄酮类化合物是中药陆英的活性成分之一。涂剑平等[16]采用分光光度法测定了陆英中总黄酮的含量,其含量占药材干重的0.28%。并对测定条件进行了优化,表明减少碱加入量对黄酮类化合物的显色和测定结果无影响。2.4 其他 刘传安等[17]建立高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定了陆英叶中绿原酸的含量,并采用光电二极管阵列检测器分析了陆英样品中绿原酸组分的纯度,证实其为单一组分,其紫外光谱与对照品一致。杨燕军等[18]从陆英全草中分离出2种化合物,鉴定为3β-香树酯醇乙酸醋、咖啡酸乙醋,均为首次从该植物中获得。3 生药鉴定和质量标准研究董立莎等[19]从药材性状、显微特征及薄层色谱方面对陆英进行了生药鉴定研究,实验表明,陆英的性状、显微、理化特征对其生药学鉴别有实际意义,尤其是茎的皮层和髓部均含有单宁细胞,在显微镜中很容易观察到,为接骨木属(Sambucus)的一个重要鉴别特征。此外,该品在性状上有特异的臭气,在叶横切、茎及根茎中含大量油细胞。田晓玲[20]等采用GC法建立了陆英药材的指纹图谱,取采集到的10个不同产地的陆英药材制备供试液,将供试液在气相色谱仪上进样分析,记录色谱图,将各色谱数据文件导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会)软件中,得到陆英对照指纹图谱。图谱共有11个共有峰,以β-谷甾醇的保留时间和峰面积为参照,得到11个峰的保留时间(T)、相对保留时间(RT)、峰面积(A)和相对峰面积(RA)。将不同产地陆英的GCFP导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件,计算出各批次的陆英与对照指纹图谱的相似度分别为0.93,0.95,0.74,0.97,0.98,0.98,0.96,0.97,0.92,0.85。陆英的GC指纹图谱显示有11个共有峰,方法准确、简单,精密度和稳定性等均符合要求,为陆英的鉴别和质量检测提供了依据。4 药代动力学研究QiongfengLiao等[21]建立了LC-MS法用于陆英提取物乌索酸在大鼠体内的药代动力学研究。大鼠口腔灌服陆英提取物(乌索酸剂量80.32mg/kg)后测定其血浆中乌索酸的含量。结果表明,乌索酸的吸收很迅速,峰浓度发生在口服给药后1h,给药12h后乌索酸浓度低于定量下限(LLOQ)。尽管口服给药剂量为80.32mg/kg(以乌索酸计),但在大鼠血浆中乌索酸的浓度却极低。暗示了乌索酸可能有很高的器官结合活性和低的血液分布,或是乌索酸的生物利用度很低,因为乌索酸可由肠壁和肝脏代谢,而肠道对它的吸收却很少。主要的药代动力学参数为:t1/2为4.3h;Ke为0.16l/h;tmax为1.0h;Cmax为294.8ng/ml;AUC0-t和AUC0-∞分别为1007.1、1175.3(ng・h)/ml。5 药理作用5.1 抗肝炎作用 陈武[12]等对CCl4致急性肝损伤大鼠每日皮下注射陆英提取物乌索酸20mg/kg(以吐温80配成悬浮液),观察乌索酸对急性肝损伤的影响。结果表明,乌索酸能使急性肝损伤大鼠血清SGPT及肝甘油三脂明显下降,血清甘油三脂及肝糖原含量明显增加,并能减轻肝细胞变性、坏死,对急性肝损伤有明显保护和治疗作用。同时,选择甲、乙型急性病毒性肝炎221例,临床采用病例随机分组,以齐墩果酸为对照,双盲法给药进行试验观察,试验组用乌索酸片(20mg/片),以120mg/d,60mg/次的剂量给药,平均治疗时间21d,治愈率91.2%,治愈率优于同期100例齐墩果酸片对照组的疗效(P<0.01)。乌索酸具有显著而迅速降低谷丙转氨酶、消除黄疸、增进食欲和恢复肝功能的作用。对42例HBeAg阳性患者的转阴率为61.9%,对42例HBsAg阳性转阴率为42.8%,表明乌索酸对乙型肝炎病毒具有一定的治疗作用。陆英冲剂临床用于治疗304例急性病毒性肝炎患者,结果共治愈263例,显效22例,好转13例,无效6例,总有效率98%。304例病人中谷丙转氨酶恢复正常281例,247例黄疸消除。乙型肝炎在该组病人中有11例,均取得较好疗效,4例HBsAg转阴性。证实陆英对不同类型的病毒性肝炎疗效无显著差异,且随疗程增加相应提高[22]。杨威[23]等采用急性CCl4肝损伤模型、D-半乳糖胺盐酸盐大鼠急性肝损伤模型、刀豆蛋白(ConA)致小鼠急性肝损伤模型研究陆英颗粒灌胃给药对急性实验性肝损伤的保护作用。陆英颗粒能显著对抗CCl4致小鼠急性肝损伤导致的血清中ALT、AST升高,能显著降低CCl4致小鼠急性肝损伤时所导致的肝脏MDA含量升高,明显对抗CCl4致肝线粒体脂质过氧化,提高CCl4中毒小鼠肝细胞膜和微粒体膜的Ca2+-ATPase的活性。病理结果也表明陆英颗粒对肝细胞损伤具有明显的保护作用,并且在不同剂量的陆英颗粒之间存在较明显的量效关系,陆英颗粒对CCl4致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用,其保肝作用可能与对抗脂质过氧化以及提高肝细胞膜和微粒体膜钙泵的活性有关。陆英颗粒也能显著对抗D-半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤导致的血清中ALT、AST的升高和Glu含量的急剧降低,对抗D-半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤肝组织酶、Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性降低,并能显著对抗ConA导致的小鼠血清ALT、AST升高,提示陆英颗粒对D-半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤和ConA所致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。5.2 镇痛作用 陆英煎剂能使风湿疼痛消失,陆英嫩叶捣碎成泥外敷扭伤处可消肿、止痛。陆英脂溶性成分无镇痛作用,推测其水溶性成分中含有麻醉止痛的成分。在毒性动物实验中,小白鼠灌胃超过最大耐受剂量时,动物临死前普遍烦躁不安,甚至抽搐,角弓反张,大小便失禁。腹腔注射动物临死前也可见明显脊髓兴奋现象。说明陆英达到一定剂量时,对神经系统有毒性反应,而上述症状与麻醉成分对神经系统作用的表现十分相似。另外陆英针剂在使用过程中有390334卷13期 邹盛勤等 中药陆英研究进展

氨基酸和生物资源２００７，２９（３）：５１—５３　ＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ＆ＢｉｏｔｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｓ　

正交试验法优选毛泡桐中乌索酸提取工艺条件　

邹盛勤　，刘名权　，陈武　，刘　燕　

（１，江西省天然药物活性成分研究重点实验室，宜春学院生物工程研究所，江西宜春，３３６０００；　

２，宜春学院化学与生物工程学院，３３６０００；３．宜春学院生命科学与资源环境学院，江西宜春，３３６０００）　

摘要：采用正交设计ｋ（３　）方法，考察乙醇浓度（Ａ）、超声时间（Ｂ）、超声功率（ｃ）、料液比（Ｄ）对乌索酸提取率的影响，　用高效液相色谱法测定含量，并与常规提取法进行对比，确定了毛泡桐中乌索酸的最佳超声提取工艺条件。所考察的因素对　毛泡桐中乌索酸提取的影响按各因素作用主次顺序为：乙醇浓度＞料液比＞超声时间＞超声功率；乌索酸超声提取的最佳条　

件为：Ａ３Ｂ３Ｃ２Ｄ１，即毛泡桐叶粉末用６倍量体积分数９５％乙醇超声提取２　ｈ，超声功率为２００　Ｗ。与常规的提取方法相比，超　声提取具有提取时间短、操作简单、提取率高、无需加热等优点。优选的工艺条件稳定，操作简便，方法可行，可用于毛泡桐中　

乌索酸的提取。　关键词：高效液相色谱法；毛泡桐；乌索酸；正交设计　中图分类号：Ｑ５０３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—８３７６（２００７）０３—００５１—０３　

泡桐属（Ｐａｕｌｏｗｎｉａ）植物是玄参科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉ—　

ａｃｅａｅ）落叶乔木，原产于我国，现有９个种，４个变　种…。毛泡桐不仅是材质优良的树种，而且可供药　

用。泡桐的药用价值早在我国古代就有记载，《本　

草纲目》（１５７８年）记有“桐叶……主恶蚀疮著阴皮　

主五痔、杀三虫，花主傅猪疮，消肿、生发。”泡桐的　

花、叶、果、木、皮，根均可入药　。根据民间经验将　

泡桐叶、花、果、枝等试用于临床，均有一定的药理作　

用Ｉ３］。泡桐叶含熊果酸，并含糖苷及多酚类，可用　

于治疗痈疽、疔疮、创伤出血　。其中三萜酸类，特　

陆英抗肝炎活性成分的研究

陈武;张建慧

【期刊名称】《宜春医专学报》

【年(卷),期】2000(012)004

【摘 要】人忍冬科接骨木属植物陆英中提取分离出５种成分，经鉴定分别为乌索酸、齐墩果酸、α－香树脂醇、β－香树脂醇、β－谷甾醇。经动物实验和临床试验证实：含量较高的乌索酸为陆英抗肝炎的主要活性成分，对ＣＣＬ４引起的急性肝损伤大鼠血清ＳＧＰＴ及肝甘油三脂明显降低，血清甘油三脂及肝糖原含量增加。并能明显减轻肝细胞变性、坏死、临床应用乌索酸治疗病毒性肝炎１２１例，治愈率９１．２％。明显优于同期对照组的疗效（Ｐ〈０．

【总页数】2页(P239-240)

【作 者】陈武;张建慧

【作者单位】江西宜春学院;江西省宜春市医科所

【正文语种】中 文

【中图分类】R259.126

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女贞子的成分分析及鉴定

胡红

（阿坝师范高等专科学校 08化教 学号20082036）

【摘要】目的为女贞子药材的质量评价提供科学依据。方法： 以固相萃取（SPE）进行样品供试液的前处理，采用RPHPLC法，分别测定齐墩果酸与熊果酸的含量，色谱柱：Kromasil

KR1005 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：［乙腈甲醇（体积比1∶1）水（体积比90∶10）］；流速：0.8 mL/min；检测波长：210 nm；柱温25 ℃；进样量：2 μL。结果 样品中齐墩果酸与熊果酸得到较好的分离；齐墩果酸在0.108～3.24

μg的范围内、熊果酸在0.060～1.800 μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率分别为100.50％、98.05％；11批次样品中齐墩果酸的含量为0.639～1.340 mg/g，熊果酸的含量为0.168～0.377 mg/g。结论 采用SPE进行供试品溶液前处理，能够有效消除女贞子药材中杂质成分对末段吸收波长的干扰，所建立的方法具有简便、稳定、可重复的特点，可用于女贞子药材的质量控制。固相萃取（SPE）是一种新兴的样品前处理技术，近年来已经应用于中药含量测定方法研究［6-10］，但还未见有将此方法应用于女贞子的含量测定中。本文报道采用此技术进行女贞子药材样品的前处理，结合反相高效液相色谱法，消除了样品中杂质对齐墩果酸、熊果酸在紫外末端测定的干扰，使样品中齐墩果酸与熊果酸在同一色谱条件下较好地得到了分离，并进行了多批次样品的含量比较，以期为女贞子药材的质量评价提供更稳定可靠的方法。

【关键词】女贞子；齐墩果酸；对羟基苯乙醇苷类和裂环环烯醚萜苷类；挥发油类；多糖；磷脂；微量元素；其它；含量测定；固相萃取；HPLC

1概述

女贞子为常用中药，具有滋补肝肾、明目乌发的功效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白、目暗不明等证［1］724。女贞子中主要含有三萜类成分，其中齐墩果酸为主要的代表性成分，此外尚含有熊果酸等。有关女贞子药材及含女贞子中药复方制剂的质量多以齐墩果酸的含量作为评价指标［1］728。中国药典2005年版（一部）［3］收载女贞子的含量测定方法为薄层扫描法测定齐墩果酸的含量。近年来，亦有文献采用HPLCUV方法［4］以及HPLCELSD方法［5］测定本品中两成分的含量，但由于HPLCUV测定波长在末端吸收，不能有效排除供试品中的杂质对测定结果准确度的影响；而ELSD检测器还未能普遍应用。因此上述方法都有一定的局限性。