反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸黄慧敏;张伟国【摘要】Reversed phase HPLC method was applied to determine organic acid in malic acid fermentation liquor in this paper. The chromatographic conditions are finally conformed to apply to all kinds of organic acid content deter-mination in the fermentation. The conditions are as follows：COSMOSIL 5C18 - PAQ column （4.6 mm I.D. × 250 mm） was used at 23℃. UV detection wavelength was 210 nm. Solution containing 1% acetonitrile and 20mmol/L KH2PO4 at pH 2.8 was used as mobile phase with flow rate of 0.5 mL/min. The seven organic acids in malic acid fermentation liquor were preferably separated under these conditions. The recovery ratio was 94.2% - 102.7% and the method had good accuracy and precision.%采用反相高效液相色谱法分析测定苹果酸发酵液中的有机酸，最终确定了适用于发酵液中各种有机酸含量测定的色谱条件，色谱柱：COSMOSIL5C18-PAQ（4．6mmI．D．×250mm）；紫外检测波长：210nm；流动相：1％乙腈-20mmol／L KH2PO4溶液（pH2．8）；流速：O．5mL／min；柱温：23℃。
正相反相高效液相色谱法的定义
正相液相色谱法（Reverse Phase Liquid Chromatography，简
称RPLC）是一种液相色谱分离技术，它利用非极性或弱极性的固定
相和极性的流动相进行分离。
在正相液相色谱法中，固定相是疏水
性的，而流动相是极性的，这与传统的正相色谱相反，因此称为
“正相相反”。
这种技术常用于分离极性化合物，如蛋白质、药物、生物分子等。
正相液相色谱法的定义可以从以下几个角度进行解释：
1. 工作原理，正相液相色谱法利用固定相和流动相之间的亲疏
水性相互作用来实现样品分离。
样品在流动相的作用下通过固定相，不同成分因其与固定相的亲疏水性不同而在固定相中产生不同程度
的滞留，从而实现分离。
2. 应用领域，正相液相色谱法在生物化学、药物分析、环境监
测等领域具有广泛的应用。
例如，在药物分析中，可以用于分离和
鉴定药物成分；在生物化学中，可以用于分离蛋白质、核酸等生物
大分子。
3. 优点和局限性，正相液相色谱法具有分离效率高、分析速度快、对样品的要求较低等优点，但也存在固定相易受污染、不适用于分离非极性物质等局限性。
总之，正相液相色谱法是一种重要的液相色谱分离技术，通过固定相和流动相之间的亲疏水性相互作用实现样品的分离，具有广泛的应用前景和理论研究价值。
反相离子对色谱法
反相离子对色谱法（Reversed-Phase Ion Pair Chromatography, RP-IPC）是一种液相色谱法，常用于对带正电或负电的离子类化合物进行分离和定量分析。
该方法的原理是在一定的流动相条件下，使用一种含正离子对剂的有机溶剂作为移动相，使得样品中的离子类化合物与正离子对剂形成离子对的结合，在反相色谱柱上进行分离。
正离子对剂通常是醇胺类、季铵盐类或草酸钠等。
其中带正电的离子类化合物与正离子对剂形成胶束结构，经过反相液相色谱柱后分离，负电的离子类化合物与正离子对剂发生离子对结合，再经柱分离。
与传统的反相色谱相比，反相离子对色谱法的优势在于可以分离和定量测定带电离子类化合物，如药物类、生物活性物质、蛋白质和核酸等。
同时，由于离子对剂的存在，可以提高某些带电离子类化合物的保留率和分离度，增强色谱法的选择性和灵敏度。
反相离子对色谱法在药物分析、环境分析、食品安全等领域有广泛的应用。
它可以用于测定药物中杂质的含量、药物代谢产物的分离和定量、食品中添加剂的检测等。
同时，该方法还可以与其他色谱技术（如气相色谱、离子色谱等）或质谱联用，进一步提高分析的选择性和灵敏度。
