葡萄糖-6- 磷酸酶染色液( 铅法)使用说明

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconate dehydrogenase，6-PGDH）活性测定试（50T/48S）说明书货号:BC2100测定意义：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)依次催化NADP+生成NADPH，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。

此外，6PGDH 在逆境生理中具有重要作用。

测定原理：6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+在260nm处有特征吸收峰；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6-PGDH活性。

自备仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配置：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

粗酶液提取：称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。

测定：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于37℃（哺乳动物样本）或者25℃（其他）水浴预热30min以上。

3.空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s 吸光值记为A2。

4.测定管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL粗酶液，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s 吸光值记为A4。

6PGDH活性计算：活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC2100规格:50T/48S产品内容：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

；产品说明：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。

此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的处理称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。

二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。

3.加样表：在比色皿中依次加入试剂名称（μL）测定管（μL）空白管（μL）样本100-蒸馏水-100试剂一700700试剂二100100试剂三100100于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。

记△A测定=A2测定-A1测定，△A空白=A2空白-A1空白。

三、6PGDH活性计算：1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。

6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=536×(△A测定-△A空白)÷Cpr（2）按样本鲜重计算活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。

迪信泰检测平台
6-磷酸葡萄糖酸检测
6-磷酸葡萄糖酸（6-Phosphogluconic acid）是戊糖磷酸途径与恩特纳–杜德洛夫途径中的一种中间代谢产物，由6-磷酸葡萄糖酸内酯酶生成，并被磷酸葡萄糖酸脱氢酶作用以产生核酮糖5-磷酸。

6-磷酸葡萄糖酸也可以被6-磷酸葡萄糖酸脱水酶作用而产生2-酮, 3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸。

迪信泰检测平台采用液相质谱联用(LC-MS)的方法，使用Thermo Scientific的
U3000快速液相色谱对样品进行分离，Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定，可高效、精准的检测6-磷酸葡萄糖酸的含量变化。

此外，我们还提供其他糖酵解类物质检测服务，以满足您的不同需求。

LC-MS测定6-磷酸葡萄糖酸样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关参数（中英文）。

3.质谱图片。

4. 原始数据。

5. 6-磷酸葡萄糖酸含量信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。

葡萄糖测定试剂盒使用说明书(OX法)GLUCOSE MENSURATION REAGENT KIT OPERATION INSTRUCTION[用途]本试剂用于体外定量测定人血清、血浆或尿液中葡萄糖的浓度。

葡萄糖的准确测定对于诊断和处理高糖血症和低糖血症是十分重要的。

葡萄糖浓度的升高可由糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症和脑血管意外等引起。

葡萄糖浓度的降低则可由胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍或厌食等引起。

通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和刺激试验与葡萄糖测定一同进行。

[方法原理]采用葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase,GOD）偶联Trinder反应。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的氧化产生葡萄糖酸和过氧化氢，后者与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸经过氧化物酶的作用（Trinder反应）形成红色的醌亚胺化合物，从而引起500nm处吸光度的上升，此种变化与样本中的葡萄糖浓度成正比。

双光束分析时，空白波长可设于660-700nm。

[产品规格]规格1（R1：4×60ml，R2：1×60ml），包装总量：300ml规格2（R1：2×80ml，R2：2×20ml），包装总量：200ml规格3（R1：4×20ml，R2：1×20ml），包装总量：100ml规格4（R1：4×1000ml，R2：1×1000ml），包装总量：5000ml[试剂成份]试剂1 对羟基苯甲酸盐25mmol/L 磷酸盐缓冲液100mmol/L试剂2 葡萄糖氧化酶>1KU/ml 过氧化物酶>1.5KU/L4-氨基安替比林0.3mmol/L 磷酸盐缓冲液100mmol/L[试剂制备]底物启动方式（双试剂模式）试剂1和试剂2均为液体制品，可直接使用。

样本启动方式（单试剂模式）将试剂1和试剂2以4:1的比例混匀。

[试剂稳定性和贮存]在2-8℃避光条件下未开封的试剂,可稳定12个月。

葡萄糖含量试剂盒说明书（测组织、细菌或细胞）使用说明分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC2500规格：50管/48样产品内容：试剂一：0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体25ml×1瓶，4℃保存；试剂三：液体25ml×1瓶，4℃保存；产品说明：葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。

植物可通过光合作用产生葡萄糖。

就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505nm有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵和蒸馏水操作步骤：一、葡萄糖提取：1、组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

2、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2、混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三1:1等体积混合，用多少配多少。

3、加样表（在EP管中加入下列试剂）：试剂（μL）空白管标准管测定管样本100试剂一100蒸馏水100混合试剂900900900混匀，置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中，保温15min，于505nm波长处读取吸光度。

果糖-6-磷酸激酶（6-phosphofructokinase，PFK）试剂盒使用说明微量法货号：BC0535规格：100管/96样产品内容：提取液：100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。

试剂三：粉剂×1支，4℃保存。

试剂四：液体×1支，4℃保存。

产品简介：PFK（EC2.7.1.11）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖-1,6二磷酸和ADP，是糖酵解过程的关键调节酶之一。

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的前处理1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或者200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2.样本测定（1）在试剂二瓶中加入17ml试剂一和1.13ml蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴5分钟。

用不完的试剂4℃保存一周。

碱性磷酸酶-PAS联合染色液使用说明书货号：G2450规格：6×50ml保存：4℃避光，3个月。

产品组成：名称6×50ml Storage 试剂(A):ALP孵育液50ml4℃避光试剂(B):Co溶液50ml RT试剂(C):ALP硫化溶液2×1ml RT避光试剂(D):氧化剂50ml4℃避光试剂(E):Schiff试剂50ml4℃避光试剂(F):亚硫酸溶液50ml RT试剂(G):ALP对照液10ml4℃避光产品简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2～9.8。

此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉膜之内皮。

此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

1946年McManus最先使用PAS法显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖。

氧化剂能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基使之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。

由于氧化剂还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化。

ALP-PAS联合染色液不仅能够显示碱性磷酸酶活性位点和糖原等物质，亦能区分二者。

冰冻切片及石蜡切片均可。

自备材料：1、蒸馏水2、温箱或水浴锅操作步骤：1、石蜡切片脱蜡至水，冰冻切片直接入水。

2、冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2~5min。

3、切片入ALP孵育液(阴性对照切片入ALP对照液)，置于37℃温箱。

冰冻切片孵育5-15min，石蜡切片孵育2-12h。

流水洗2min后入蒸馏水。

4、入Co溶液，置于37℃温箱染色5min。

流水洗5min后入蒸馏水。

6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒产品简介：6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP还原为NADPH，以供生物合成及维持细胞内的还原状态，因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。

G6PDH能使NADP还原成NADPH，6-磷酸葡萄糖+NADP→6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH；在一定反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。

本测试盒通过在340nm下测定NADPH增加速率来反应G6PDH活性的大小，NADPH浓度升高越多则G6PDH 活力越大。

试验中所需的仪器和试剂：紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、蒸馏水产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：储备液50mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275µL双蒸水充分溶解备用；试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275µL双蒸水充分溶解备用。

操作步骤：一、样品测定的准备：(1)细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400µL提取液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。

8000g离心10分钟，取上清，置冰上待测。

组织：称取100mg组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

（2）血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作表：测定管对照管试剂一（µL）750750试剂二（µL）1010试剂三（µL）1010样本（µL）30蒸馏水（µL）30将上述试剂按顺序加入1mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃或25℃水浴中（哺乳动物用37℃，非哺乳动物用25℃），准确反应5分钟。