医学硕士研究生开题

河南中医学院硕士研究生学位 论文开题申请书

课题名称：补肾降浊法对LDL-R基因敲除大鼠血脂、 OX-LDL及CECs影响的研究 研 究 生： 裴英豪 导 师： 朱翠玲 教 授 指导小组： 朱明军 教 授 闫奎坡 博 士 学科专业： 中医内科学 学位类型： 医学专业学位 所在部门： 河南中医学院第一临床医学院 申请日期： 2013年4月7日

河南中医学院研究生处制 1

一、本研究的立项依据和目标 1本项目研究意义、同类研究工作国内外研究现状与存在问题并列出主要参考文献 1.1 研究意义

血脂异常(dyslipidemia)通常是指血中胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)超过正常或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低下。既往常采用高脂血症(hyperlipidemia)的概念，主要是指TC、LDL-C 或TG增高。而近年来，HDL-C 在动脉粥样硬化中的作用日益受到重视，因而将低HDL-C 血症纳入其中，统称为血脂异常。 高脂血症是临床多发病、常见病，也是动脉粥样硬化、冠心病的主要危险因素之一。近缺陷有关，导致血清中低密度年研究表明，血脂失调症患者存在LDL-R功能缺陷和不同程度的损伤，不仅家族性高胆固醇血症患者有LDL-R功能缺陷，而且无家族性高胆固醇血症患者中也有相当一部分与LDL-R功能脂蛋白水平升高，形成动脉粥样硬化。人血中70%的胆固醇由低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)携带。 与血脂异常同样重要的是血管内皮损伤，现代医学研究表明：血中TC、TG升高，HDL-C下降是血脂异常的主要特征和生化基础，内皮细胞的损伤是其主要的病理特征。CECs的数量多在血管损伤性疾病中显著升高，并与血管内皮损伤的严重程性病变、动脉粥样硬化症和肿瘤患者化疗程度有关，因而被认为是各种血管性疾病内皮细胞损伤的标志。导致CEcs数量增多的病理因素主要见于以下情况：(1)心血管疾病：CECs在某种程度上可以反映动脉粥样硬化斑块的状态及血管内皮损伤的程度。Quilici等发现，CECs计数可作为非ST段抬高ACS的早期、特异性、独立的诊断标志物，可使早期诊断率明显提高30％，如联合TnI则诊断率更高。CECs数量还是ACS患者预后的判断因素之一。Lee等对156例ACS患者的CECs进行检测，发现48h的CECs数量是唯一的30天和1年时的死亡和主要心血管终点事件的独立预测因子。国外最新研究表明，在高血压高危人群与恶性高血压病人中，内皮细胞的增多、动脉硬化与心血管病的危险分层之间有密切的关系。(2)代谢性疾病：见于糖尿病、高胆固醇血症、高同型半胱氨酸血症、代谢综合征等。2型糖尿病患者CECs数量升高的水平与HbAIC水平不相关，即使控制血糖亦不能降低CECs数量，表明存在持续的血管内皮损伤：国内有报道，代谢综合征(MS)患者CECs显著高于健康者，提示MS可引起血管内皮损伤，其机制可能与MS各个组成要素直接和(或)间接损伤血管内皮细胞(VECs)有关。 2

低密度脂蛋白（LDL） 迁移在动脉内膜后易发生氧化形成OX－LDL ，它不像LDL那样容易降解，而易于聚集在巨噬细胞内形成泡沫细胞；OX－LD L 可影响凝血系统，血小板聚集和组织凝血酶活性；OX－L DL 有免疫源性，能产生自身抗体，参与动脉粥样硬化的形成。LDL氧化过程中产生的过氧化脂质可以直接损伤内皮细胞。OX－LDL可使内皮细胞对LDL的通透性增高, 胞浆发生空泡变性, 浆膜皱缩, 甚至可使细胞最终坏死。 近20 年来学者们对于血脂异常的发生机制及治疗措施等进行了大量的研究，发现中医药多靶点、多效应、不良反应少的治疗血脂异常提供了，也为血脂异常的治疗提供新的思路。但对于中药制剂对低密度脂蛋白受体基因缺陷的血脂异常患者血管内皮功能的干预方面的研究报道甚少，通过本实验寄希望能为中医药治疗血脂异常及血管内皮损伤的修复开辟新的思路与方法。 1.2 国内外研究现状与存在问题 目前单味中药对高脂血症大鼠的干预确实取得了确切的疗效，但中药提取物有效成分并不明确，结论大多数为猜测性的，作用机制尚待研究。且无相关不良反应报道，应用于临床则不能不令人担忧。且假定上述研究确实能够治疗高脂血症大鼠血脂水平，是否能够延缓高脂血症大鼠的动脉硬化的发展吗？单味药治疗真有体现辨证论治的思想吗? 中药运用单味药治疗高脂血症，上述研究主要从西药药理的作用对中药降脂效果进行研究。传统的中药方剂也有单味药，如: 独参汤即仅有人参一味，治疗是气虚证，治疗机理是益气固脱，虽说是只是一味药，但理法方药齐全。而目前单味中药治疗高脂血症的研究，虽说是采用单味中药，但多是从其西药药理作用研究出发，从单味药中提炼出治疗高脂血症的物质，这种方法遵循了西医的治疗理念，而缺乏真正系统的中医理论的指导，这样研究的结果不能体现中医理论的特色。如果完全按照目前单味药研究的方向走下去，会走向弃医存药的歧途，中医在治疗高脂血症方面也肯定不能成为主流的治疗手段。 1.3 理论研究 肾与高脂血症的相关性 长期以来，许多医家对高脂血症形成的原因和机制进行了探讨，并提出了各种学说，如脾虚主痰说、气滞血疲说、痰疲互阻说，我们通过研习中医文献，结合临床体会、现代研究，认为肾虚应是影响血脂代谢的始动因素，而高血脂与肾虚所致的病理产物有关,近年来，流行病学、临床和实验研究证实高脂血症的发生与肾虚呈显著正相关。肾虚是形成高脂血症的始动因素，中医虽无血脂的概念，但对人体脂膏早已有所认识，每常膏 3

脂并称，或以膏概脂。《灵枢·五癃津液别》 ：“五谷之津液，和合而为膏者，内渗于骨空，补益脑髓，而下流于阴股。”指出膏是人体的组成成分之一，由水谷所化生，并随津液行而敷布，有注骨空，补脑髓、润肌肤等作用；张景岳又说：“津液和合为膏，以填补骨空之中，则为脑为髓，为精为血。”认为膏由津液所化，与肾相关甚密，膏也可以化血，初步认识到血脂的存在。可见，膏是津液之稠浊者，是血的成分之一，源于水谷，其正常生理与肾的主宰关系非常密切，肾主津液，对津液的贮存、分布、利用及对津、液、精、血之间的转化起主导作用，肾虚膏脂布化失调，或酿而为湿，或酿而生热，浊脂生痰，日久浸淫脉道，痹阻血络，终致痰阻络癖。 1肾阳虚衰，水凝为痰 明·王伦《明医杂著》谓：“痰之本，水也，源于肾；痰之动，湿也，主于脾。”提示脾肾两脏对痰湿形成具有举足轻重的作用。肾主元阳，主一身之水液，若肾阳虚衰，失于温熏，蒸化无力，膏脂不化，浊凝为痰，最终形成高脂血症。患者可有头晕、健忘、神疲、肢冷形寒、腰酸膝软、纳呆、夜尿多、五更泄，或有阳萎、滑精等症，舌淡胖、苔白腻或水滑，脉沉缓或沉细。现代研究表明高脂血症与肾功能衰退呈正相关。临床上用附子、桂枝、黄茂、杜仲、黄精、首乌、熟地、山萸肉等药治疗肾阳虚型高脂血症有一定疗效。侯双凤等实验证明八味地黄丸对于实验性动脉粥样硬化具有一定的防治效果。从药物反证，说明肾阳虚甚，水凝为痰是形成高脂血症的重要原因之一。 2肾阴亏虚,虚火灼津 明·赵献可《医贯》 ：盖痰者，病名也，原非人身之所有，非水泛为痰，则水沸为痰，但当分有火无火之异耳„„，阴虚火动，则水沸腾，动于肾者犹龙火之出于海，龙兴而水附„„，指出肾阴对痰浊的生成有一定影响。人到中年以后，阴气自半，肾气亏虚，精气渐衰，肾阴不足，阴虚火旺，虚火灼津，炼液为痰，清从浊化，脂浊停留，积蓄体内，浸淫脉道，痹阻不畅，酿生他变。痰浊疲阻，留滞不去，又可郁而化热，损伤肾阴，终至阴阳两伤，虚实错杂，变证丛生。王氏[7]等研究发现：用“益肾养阴，活血化痰法”治疗肾阴虚证高脂血症，治疗前后血糖、血脂、血液流变学方面均有显著性差异(P<0.05)，提示该法可直接或间接地纠正糖代谢和脂代谢紊乱，改善血液粘稠度，促进血液循环。此病病位在肾，病性为本虚标实。临床有用六味地黄丸 治疗高脂血症取得显著疗效的报导。以滋肾化痰疲法治疗高脂血症[9]，结果降Tc幅度分别为24.98%，24.1%；降TG幅度分别为32.79%，40.1%；HDL-C/TC升高比值分别为2.8% ，3.68%；LDL-C呈明显下降。 4

3精气虚弱，脂质停留 高脂血症的发生与先天享赋密切相关，现代医学认为重度高脂血症往往是由遗传缺陷所致。遗传方面主要是脂蛋白。脂蛋白受体和脂酶的先天性基因缺陷致。例如，载脂蛋白ß100基因缺陷可引起家族性载脂蛋白ß100缺陷症，LDL受体的基因缺陷可引起家族性高胆固醇血症，LPL的基因缺陷可引起家族性高甘油三醋血症等。由于家族成员中某些遗传基因缺陷，导致胆固醇和脂肪代谢障碍而发生此种疾病。这与中医肾为先天之本，肾、精、气、阴阳失调而导致高脂血症发生的始动因素十分一致。《素问·本神篇》曰：“生之来，谓之精，两精相搏谓之神。”说明人体体质察赋来自于父母，享受于先天，遗传因素在高脂血症中起着一定的作用，临床上许多高脂血症患者有家族史。近30年来，比较一致的看法是高脂血症的发生除与遗传相关，还与神经、内分泌免疫有密切联系。经研究证实年龄的增长也可使血中胆固醇和甘油三酷逐渐升高，尤其是女性更年期雌激素分泌减少可致高脂血症发病率增高，雌激素减少使LDL胆固醇浓度逐步增高。在对542名健康妇女的研究中，绝经后妇女的总胆固醇高14%，LDL高27%，HDL低7%，中医学认为是由肾气虚所决定的，这一点已被现代医学所证实，随着年龄的增长，出现代谢障碍，脂质停留，血脂增高。有用“益肾祛脂汤”治疗高脂血症发现治疗前后血糖值、血脂值、血液流变学方面均有显著性差异(P<0.05)，补肾可以直接地纠正糖代谢和脂代谢紊乱，改善血液粘稠度，促进血液循环。再次证明：肾气在脂质代谢中发挥的作用。为我们从肾论治血脂异常提供了理论基础。

1.4 中医药研究现状 中医药在调节血脂方面具有毒副作用小的独特优势, 国内外都进行了大量研究, 取得一定成果。现将近两年相关单味中药及复方制剂研究进展综述如下： 1.4.1 杜仲：刘静，濮智颖等在杜仲叶黄酮降血脂及抗氧化作用的研究实验[1]中发现杜仲叶黄酮可以降低营养性高脂血症小鼠的血浆总胆固醇、总甘油三酯，低密度脂蛋白胆固醇等指标，升高高密度脂蛋白胆固醇水平，有效降低高脂血症动物的动脉粥样硬化指数，显示杜仲叶黄酮具有较好的降血脂作用，对于预防动脉粥样硬化、冠心病等疾病应该有一定作用，提示黄酮是杜仲叶中具有降血脂作用的活性成分之一。 1.4.2 当归：孙冉、刘岩在当归的化学和药理学研究进展[2]中提出当归有如下药理作用： 抗血栓形成作用。当归中阿魏酸钠和藁本内酯可降低血液粘滞性，减少血浆纤维蛋白原，凝血酶原时间延长，红细胞和血小板电泳时间缩短，具有抗血栓形成作用。