第三章样品采集制备和保存课件
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动物血液样品采集制备与保存的方法
采集动物血液样品是许多生物学领域研究的一个必要步骤,可在研究动物体内代谢产物、蛋白质和其他生物化学成分等方面提供重要数据。正确采集、制备和保存动物血液样品对保证实验可重复性和数据可靠性至关重要。在此,我们将详细介绍动物血液采集、制备和保存的一般步骤和技巧。
一、动物血液采集步骤
1.选择采集方法
动物血液样品可以通过多种方法采集,例如尾静脉、脚趾或心室,选择采集方法需要考虑动物品种、体重、年龄、健康状态和需要采集的样品量等因素。 尾静脉是大多数小鼠、大鼠和兔子采集血液的首选方法,他们的尾部通常被轻轻加热以促进血流量。草食性动物的脚趾可以作为血液采集的理想位置,例如绵羊和牛。 对于较大的动物,例如猪和狗,则通常会选择从心室采集血液,这通常是有经验的实验室技术员或兽医完成的。
2.准备采集器具
为了在采集血液样本之前确保动物的安全和正确采集血液,需要准备一些必要的器具,例如消毒的手套、注射器、切口刀、愈合事物、血液管、离心螺旋管等。
3.准备动物 在采集血液样品之前需要让动物充分的适应工作环境和操作过程。对于大型动物,需要麻醉或镇定,以确保安全。对于小型动物,例如小鼠和大鼠,在采集血液之前需要使用一个温和的方法略微加热尾巴以刺激血流。
4.采集血液
在采集血液之前,需要消毒所使用的器具并穿戴手套以减少感染风险。在采集血液时,需要将血液针或血转移管插入血管并抽取所需的血液量。在采集血液之前,需要确保血液管正确插入血管,这通常会导致血液快速流出采集器。
5.处理采集的血液
在采集血液后,需要立即将其转移到适当的容器中,例如离心螺旋管等,并按照相应的实验流程进行处理。
二、动物血液制备和保存的步骤
1.离心制备
在采集和转移到离心管的过程中,需要立即离心制备样品。离心的目的是将血细胞和血浆分离,这样可以分离出血浆,以便分离蛋白质和其他分子。通常离心螺旋管需置于离心机中,并按照相关的实验流程进行离心。
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生物样品的采集制备和预处理
一、生物样品采集
1、植物样品的采集
(1)采集的植物样品要具有代表性、典型性、适时性。
(2)布点方法
常采纳梅花形五点取样法或交叉间隔取样法。
(3)采样方法
①采样前应预先准备好采样工具。
②依据实际情况确定样品采样量。
③选择优势莳植物在采样区内按梅花形五点或交叉间隔取样方式采集5-10处的植株混合构成一个代表样品。
④将采好的样品装入布口袋或聚乙烯塑料袋中,贴好标签,并填写采样登记表。
2、动物样品的采集
(1)尿的采集
定性检测尿液成分时应采集晨尿。
定量检测尿液成分时一般采集24h总排尿量。 第 2 页 共 4 页 (2)血液的采集
一般用注射器抽取10mL血样冷藏备用。常用于分析血液中所含金属毒物及非金属毒物。
(3)毛发和指甲的采集
采集和保存较为便利,重要用于汞、砷等含量的测定。
(4)组织和脏器采集
二、生物样品的制备
对于液体状态的动物样品常无需制备,对动物组织和脏器重要是采纳捣碎的方法制成浆状鲜样备用,而对植物样常依据不怜悯况,利用不同方式进行样品制备。
植物样品的制备
(一)平均样的获得
四分法、切成块的1/4-1/8混合
(二)分析试样的制备
1、鲜样
2、风干样:60-70摄氏度低温真空干燥箱中烘干(匀浆、小片)
3、水分含量测定(100-105摄氏度烘干/真空干燥/低温烘干) 第 3 页 共 4 页 三、生物样品的预处理
常用的预处理方法有湿法消解法、灰化法、提取、分别和浓缩法等。
1、湿化消解法
利用强酸等与生物样品共同煮沸,将样品中有机物分解成二氧化碳和水除去。
常用的消解试剂体系有浓硝酸-高氯酸、浓硝酸-浓硫酸、浓硫酸-过氧化氢等。
2、灰化法
利用坩埚或氧燃烧瓶,使样品在高温条件下分解,并用适当的溶液溶解或汲取分解产物,制成分析试液。
3、提取法
整个过程包括提取、分别、浓缩三个步骤。
畜禽血液样品的采集、制备与保存方法
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畜禽血液样品的采集、制备与保存方法
血液不断地在全身流动,参与机体的各种功能活动,对动物的新陈代谢以及维持内环境和保持与外界环境间的平衡起着重要的作用。当血液发生病理变化时,常常会影响全身的组织和器官,而组织和器官的病变又可以引起血液成分的变化,因此,血液的检验在疾病的诊断中起到十分重要的作用;临床检验采用的血液样品分为全血、血清和血浆。全血主要用于血细胞成分的检验,血清和血浆主要用于大部分临床化学检查和免疫学检验。血液样品的采集、制备与保存是重要的前期工作,是保证正确诊断的基本条件。
1.采集部位与方法
畜禽血液样品的采集部位和方法,与种类、检测项目、试验方法及用血量有关,视实际情况而定。
1.1鸡的采血技术
1.1.1翅静脉采血:是常用的采血部位,翅静脉在肘关节腹侧的表面,清晰地暴露于皮肤之下,肉眼可见。采血时先拔去该部位的羽毛,抽血时,动作轻柔缓慢,防止血管塌陷不回流,采血后略移动皮肤轻压即可止血;由于鸡的皮肤游离性大,采血后容易形成血肿。
1.1.2心脏采血:此方法多用于进行尸体剖检前的血液采集检验。将鸡仰卧保定,针头从V型锁骨前端刺入,或者在靠近心脏的胸侧壁刺入;心脏采血过程中,如果操作不慎,易损伤肺脏,更有慎者,引起大出血死亡。
1.1.3颈静脉采血:鸡的左侧颈静脉很细,通常右侧颈静脉采血。在皮肤上的一个无毛的沟正好是右侧颈静脉所处的位置。颈静脉游离性大,皮肤松弛,采血后易于形成血肿。
1.2猪采血技术 1.2.1前腔静脉采血:猪前腔静脉是由左右两侧的颈静脉与腋静脉至第一对肋骨间的胸骨柄汇合形成。采血时,针头刺入部位在与耳根和对侧肩胛骨上缘连线垂直线的胸骨端处,大猪采用站立保定,小猪可以采用仰卧保定法。左侧靠近膈神经,故以右侧采血为宜。
1.2.2耳静脉采血:一般用于体格较大的猪。保定后,耳部消毒灭菌,以手指压迫近心端耳部静脉,使血管努张,针头刺入血管后,动作要轻柔,采血要缓慢,否则血液不回流使静脉瘪陷。
×代表样点位置 图1
土壤采样点的方式 土壤样品的采集和制备
一、土壤样品的采集
土壤样品的采集是土壤分析工作中一个最重要最关键的环节,它是关系到分析结果是否正确的一个先决条件,特别是耕作土壤,由于差异较大,若采样不当,所产生的误差(采样误差)远比土壤称样分析发生的误差大,因此,要使所取的少量土壤能代表一定土地面积土壤的实际情况,就得按一定的规定采集有代表性的土壤样品。如何采样?这要根据分析的目的,要求来决定采样的方法。
(一)土壤样品的采集方法、种类和注意事项:
1.混合样品的采集
由于土壤是一个不均匀的体系,为了要了解它的养分状况,物理性、化学性,我们不能把整块土都搬进实验室进行分析,因此,就必须选取若干有代表性的点子取样混合后成为混合样品,混合样品实际上就是一个平均样品,这个平均样品就要具有代表性。
要使样品真正有代表性,首先要正确划定采样区,找出采样点,划采样区(采样单元或采样单位)时是根据土壤类别、地形部位、排水情况、耕作措施、种植栽培情况、施肥等等的不同来决定的。每一个采样区内,再根据田块面积的大小及被测成分的变异系数,来确定采样点的多少,当然,取的点子越多,代表性越强,那就越好,但它会造成工作量的增多,因此一般人为的定为5-10,10-20点或根据计算应取多少点。
(1)试验田土壤样品的采集:
一般试验小区为一采样区。
(2)大田(旱地)土壤样品的采集:
在进行土壤养分状况的调查时,一般是根据土壤类别、地形、排水、耕作、施肥等不同来划分采样区;也有的是根据土壤肥力情况按上、中、下来划分采样区。
(3)水田土壤样品的采集。
它和大田土壤样品的采集基本一致
(4)采样点的布置(参见P276-277)
在采集多点组成的混合样品时,采样点的分布,要尽量做到均匀和随机,均匀分布可以起到控制整个采样范围的作用:随机定点可以避免主观误差,提高样品的代表性,布点以锯齿形或蛇形(S形)较好,直线布点或梅花形布点容易产生系统误差(图1),因为耕作,施肥等农业技术措施一般都是顺着一定方向进行的,如果土壤采样与农业操作的方向一致,则采样点落在同一条件的可能性很大,易使混合土样的代表性降低。