实验四_水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离[1].pptx

水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数。

细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。

由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。

3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分蛋白胨10 g牛肉膏 3 g氯化钠 5 g琼脂10~20 g蒸馏水1000 mL2.2 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。

），经103.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4.仪器和材料4.1仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。

4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。

4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。

5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。

5.2纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。

5.3地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。

6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。

一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。

二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。

2．干热灭菌(烘箱)。

3．水浴隔热培养箱。

4．冰箱。

5.培养皿(直径9ml)。

6．吸管(10.0ml、1.0m1)。

三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。

四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。

[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。

二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。

实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。

但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。

本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。

实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。

实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。

痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。

测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。

常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。

实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。

在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。

断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。

实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。

通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。

通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。

（4）倒平板：分别取1mL纯净水原液、纯净水0.1、 自来水原液、自来水0.1放入编号号的无菌平皿内， 并混合均匀，每个稀释度做3个平板，然后在酒精 灯周围往每个平皿内倒入融化后并冷却至45℃— —50℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基。待培养皿内 液体凝固后，将平板放入恒温培养箱中倒置培养。 （5）观察计数
实验内容与步骤
一、制备牛肉膏蛋白胨培养基： （1）称量：牛肉膏1g、蛋白胨2g、Nacl1g、琼脂4g、 自来水500mL （2）溶解 （3）加热煮沸：用瓷缸盛装溶解后的溶液，放在微 波炉上加热，并不断搅拌，直至煮沸为止 （4）装瓶：用锥形瓶盛培养基，用棉塞塞住瓶口， 再用报纸包住瓶口 （5）灭菌：将装好的培养基放入高压蒸汽灭菌板计数计数测定水中细菌总数，由 于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条 件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一 种条件下使水中所有的细菌均能生长繁殖。因此， 从一定的培养基平板上生长出来的菌落计算出来 的水中细菌总数仅是一种近似值，目前一般是采 用普遍牛肉膏蛋白胨培养基
二、倍比稀释 （1）编号：取4支灭菌试管分别标记纯净水原液、 纯净水10倍、自来水原液、自来水10倍。另取12 个培养皿分别标记纯净水原液、纯净水10倍、自 来水原液、自来水10倍各三个培养皿。 （2）取样：取10mL的纯净水放入纯净水原液的 试管中，另取10mL的自来水放入自来水原液的试 管中。 （3）倍比稀释：用灭菌的移液枪吸取纯净水原液 1mL,放入纯净水10倍的试管内（注：每吸取一次 液体，需要更换移液枪的枪头）然后吸取无菌水 9mL放入纯净水10倍的试管内。自来水的倍比稀 释也是同理。
水中细菌总数的测定
生物制药二班 五组
实验目的
1、了解和学习水中细菌总数的测定原理和测定意 义 2、学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总 数的方法