模拟试卷五及参考答案
一、名词解释(10 分)
1.同尾酶；
2. 基因文库 ;
3. gene therapy；
4. gel retardation；
5. 反义 RNA 技术二、
填空 (20 分 )
1. 质粒是存在于细菌细胞中能独立于染色体DNA 而自主复制的、、的双链 DNA 分子。
2. 1973 年， Cohen 等获得了抗四环素和新霉素的重组菌落，标志着基因工程的。
3. 基因工程的应用主要在、、分离鉴定生物体的遗传
信息、研究基因的表达调控等方面。
4. 带有两种宿主复制子，因而能在两种生物体内复制的载体分子，称为。
5.λ DNA 两端各有 12 个核苷酸的突起，而且可以通过碱基互补配对形成环状分子，配对
的区域称为。
6.EB-CsCl 梯度离心法可以纯化质粒DNA，其中EB 的作用有两个：、。
7.建立生物基因文库所需克隆的数目，可通过公式进行估算。
8. 将噬菌体 DNA 转入细菌的方法主要有、两种。
9.利用 lacZ ’基因的插入失活鉴定需要在培养基中添加IPTG 和两种物质，根据蓝白斑选择重组克隆。其中IPTG 的作用是。
10.PCR 反应的每一次循环都包括、、三个步骤，通过
25-30cycles，可以扩增大量的目的片段。
11.植物基因直接转移技术的原理是：。
12.按照限制性内切酶的命名原则，BamH I 中，Bam 表示，H 表示，
I 表示。
13.PCR 反应中的一个引物序列为 AGTCA TCAGAGAAACCCTTT，其 Tm值大约是。
14.常用的标记探针的方法有、、，杂交后，可用放射性自显影等方法显示杂交带。
15.通过、两种策略，可以达到改良植物性状的目的。
16.在动物基因工程中，常用的载体主要有、、、__________。
17. YAC载体的中文名称是，包括着丝粒、、
_________________等结构，才能保证其正常的复制。
18.在连接反应中，平头末端的连接效率要粘性末端的连接效率。
19.农杆菌侵染植物材料时，Ti 质粒上的识别植物创伤信号，启动基因表达，将
切割下来，转移到植物染色体DNA 上。
20.在大肠杆菌中，基因的表达调控主要有两种方式和。
三、选择题 (10 分 )
1.下列哪种方法不能用于重组菌落的鉴定？（）
a.根据外源 DNA 的序列进行 PCR 分析
b.菌落原位杂交
c.酶切鉴定
d.提取重组 DNA 分子，电泳分析。
2. oligonucletide-directed mutagensis 中，需要DNA ，因此一般用_______作为克
隆载体。（）
a. 单链， pUC19
b. 单链， M13
c. 双链， M13
d. 双链，λ载体
3.要建立人类的基因文库，下列那种载体所需要的克隆数目最少？（）
a. plasmid
b. λ载体
c. Cosmid
d. BAC
4.在酵母载体中，的转化率最高，最稳定。（）
a. YEps, YIps
b. YRps, YIps
c. YIps, YEps
d. YEps, YRps
5.低等真核生物如酵母、丝状真菌等的染色体可以通过下列哪种方法进行分离。（）
a. 琼脂糖凝胶
b. 聚丙烯酰胺凝胶
c. OFAGE
d. 变性琼脂糖凝胶
6.为了提高质粒DNA 的产量，在细菌培养过程中，可加入（）增加质粒的拷贝数。
a. 噬菌体
b. 氯霉素
c. Kan
d. amp
7.在植物遗传转化中，可以利用P1噬菌体，它含有基因，可以识别靶序列并将其切
割下来。因此，我们可以将Kan 抗性基因置于其靶序列中间，利用这一系统可将Kan 抗性基因从转基因植株中剔除。
a. Cre
b. NPT II
c. tra
d. Cos
2.下列那种酶可以降解RNA:DNA 杂交分子中的RNA?()
a. Reverse transcriptase
b. RNase H
c. DNase I
d. 拓扑异构酶
9.大肠杆菌质粒克隆 DNA 片段的大小是下列哪种情况？（）
a. <3kb
b.10--20kb
c. <8kb
d. 40kb
10.下列哪种人体蛋白不能通过大肠杆菌来表达？（）
a. 胰岛素
b.生长激素
c. 重组因子 VIII
d.生长激素抑制素
四、问答题(30 分)
1.怎样测定 DNA 的浓度和纯度？要求写出两种测定浓度的方法。
2.估算 DNA 分子量的方法有哪些？
3.重组率指得是含有外源 DNA 片段的重组分子与加入的载体分子数之比，请问如何提高重
组率？
4.克隆 PCR 片段的方法有哪些？
5.怎样鉴定 DNA 分子上的蛋白质结合位点？
6.目前已在 E. coli 中合成了大量的人体蛋白，但不可能利用 E. coli 合成所有的人体蛋白，
为什么？
7.分子标记有哪些类型？在作物遗传育种中有哪些应用？
8.植物基因转移的方法有哪些？各自有哪些优缺点？
五、方案设计(15 分)
1.从一双链 DNA 病毒上克隆了一个基因，请设计一个方案，对克隆的基因进行定位分析。
2.从人体中分离了一种重要酶，请设计一个方案，利用大肠杆菌来生产这种人体蛋白。
六、论述题 (15 分 )
1.结合 GMO 的生物安全性，谈谈你对转基因技术发展前景的看法？
标准答案
一、名词解释(10 分)
3.同尾酶：识别位点不同，但切出的DNA 片段具有相同的末端序列。
4.基因文库：某种特定的生物所含有的能够包含所有基因的足够数目的克隆的集合。
5.gene therapy：基因治疗，用正常基因取代病人细胞中的缺陷基因，以达到战胜分子病
的目的。包括基因诊断、基因分离、载体构建、基因转移等步骤。
6.gel retardation ：凝胶滞后。 DNA 结合蛋白后，分子量将会增加，电泳时的迁移率降低。
7.反义 RNA 技术：与天然 mRNA 反向互补的 RNA 分子（ 1 分），在基因工程中用来阻止内源
mRNA 的表达，从而改变生物的性状。
二、填空 (20 分 )
1 共价、闭和、环状；2诞生； 3 生产生物大分子、购建新物种；
4穿梭质粒； 5 cos 位点；
6降低 DNA 浮力密度分离超螺旋 DNA 和线状 DNA ，指示条带位置；
7N=ln(1-P)/ln(1-a/b)8转染、体外装配9 X-GAL、诱导物
10变性、退火、延伸
11超螺旋结构质粒 DNA，可以随机整合到植物基因组
12发现酶的细菌，细菌的菌株或品系，第一种酶
13 56；14 末端填充（ End filling ）、随机引物（ Random Priming ）、缺刻平移（N ick Translation ）
15基因附加、基因扣除16腺病毒、猿猴病毒、牛痘病毒、杆状病毒
17酵母人工染色体18低
19 Vir 、 T －DNA20诱导、抑制
三、选择题(10 分)
1. d
2. b
3. d
4. a
5.c
6. b
7. a
8.b
9. c10.c
每题 1分。
四、问答题(30 分)
9.怎样测定DNA 的浓度和纯度？要求写出两种测定浓度的方法。浓
度： 1）测定 260nm的吸光值， 1OD相当于 50ug 双链 DNA/ml 。
2）电泳检测
纯度： A260/A280=1.8 ， <1.8 表示含有酚或蛋白质；>2.0 说明含有RNA 。
10.估算 DNA 分子量的方法有哪些？
