天柱黑番鸭催乳素基因内含子1的PCR-RFLP分析

鸭瘟病毒强弱毒株PCR检测方法的建立谢丽基;邓显文;钟传德;黄莉;谢芝勋;王盛;黄娇玲;张艳芳;范晴;罗思思;谢志勤【摘要】根据基因库中鸭瘟病毒强毒株和弱毒株UL2基因保守区设计特异性引物,优化PCR反应的引物浓度和退火温度等,初步建立了可同时鉴别鸭瘟病毒强毒株和弱毒株的PCR检测方法,并对建立的方法进行了敏感性、特异性验证和临床样品检测.该PCR检测方法最低能检出1 pg的鸭瘟病毒强毒和弱毒DNA模板.对鸭瘟病毒强毒和弱毒模板的检测,得到了与试验设计相符的827 bp(强毒)和299 bp(弱毒)的扩增条带,而对鸭副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鸭圆环病毒、番鸭细小病毒、鸭Ⅰ型肝炎病毒、禽流感病毒和小鹅瘟病毒等病原体的检测均为阴性.说明建立了一种敏感性高、特异性好的鉴别鸭瘟病毒强毒和弱毒的PCR检测方法.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)008【总页数】4页(P19-22)【关键词】鸭瘟病毒;强毒;弱毒;聚合酶链反应【作者】谢丽基;邓显文;钟传德;黄莉;谢芝勋;王盛;黄娇玲;张艳芳;范晴;罗思思;谢志勤【作者单位】广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西玉林市动物疫病预防控制中心,广西玉林537000;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1;S858.32鸭瘟是由鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)引起鸭的一种急性败血性传染病，发病率和病死率都甚高，是危害养鸭业最为严重的传染病之一[1]。

鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株VP1基因克隆、原核表达及抗原性分析向毅勇;罗薇;靳艳玲;刘内生;刘群;龙虎【摘要】应用巢氏PCR(nested-PCR)扩增出1型鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株结构蛋白VP1基因片段,将VP1克隆到pMD18-T载体上,测序结果为714bp,GenBank登录号:GU363950.对MY株VP1基因编码蛋白的主要抗原位点进行预测,aa208-aa222氨基酸区段表现很高的亲水性、抗原指数和表面可及性.VP1经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得重组质粒pET-VP1,转入BL21 PLyss(DE3)细胞中,IPTG诱导后SDS-PAGE检测结果表明,在大肠杆菌中表达了1个相对分子质量为47 ku的融合蛋白.Western blotting分析结果表明,该重组蛋白可与鸭肝炎标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)012【总页数】6页(P68-73)【关键词】鸭肝炎;原核表达;SDS-PAGE;Western blotting【作者】向毅勇;罗薇;靳艳玲;刘内生;刘群;龙虎【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041;中国科学院成都生物研究所,成都,610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】Q781型鸭病毒性肝炎是由1型鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus 1,DHV 1)引起的雏鸭急性死亡的传染病,主要侵害4周龄内的雏鸭,死亡率高,是危害养鸭业最为严重的传染病之一(辛朝安,2003)。

DHV 1为小RNA病毒科成员(Cornelia,2005),病毒粒子呈球形或类球形,核衣壳20面体对称,无囊膜,胞浆内繁殖,具有不分节段的单股正链RNA(蔡宝祥,2001),病毒基因组只含1个开放阅读框,编码3种结构蛋白(VP1、VP0、VP3)和9种非结构蛋白(Tseng等,2007)。

孙国波ꎬ王㊀健ꎬ陆艳凤ꎬ等.番鸭羽色与产肉性状的观测研究[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０１９ꎬ４７(２):１７３－１７６.ｄｏｉ:１０.１５８８９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００２－１３０２.２０１９.０２.０４４番鸭羽色与产肉性状的观测研究孙国波ꎬ王㊀健ꎬ陆艳凤ꎬ靖永慧ꎬ宋㊀茜(江苏农牧科技职业学院ꎬ江苏泰州２２５３００)㊀㊀摘要:为了解番鸭羽色与产肉性状的内在关联ꎬ以高繁型番鸭(纯黑羽色番鸭)㊁快长型番鸭(头部白羽㊁身体全黑羽色番鸭)为研究素材ꎬ在进行正反交试验的基础上ꎬ重点主要开展了体质量与体尺发育㊁屠宰及肉品质等方面的对比观测研究ꎮ结果表明ꎬ高繁型番鸭体质量与体尺发育明显低于快长型番鸭ꎬ屠宰性能指标却部分高于快长型番鸭ꎬ肉品质指标尚未发现与羽色相关ꎮ通过开展羽色与产肉性状的关联分析ꎬ揭示了番鸭羽色对番鸭产肉具有明显影响ꎬ白羽更有利于番鸭产肉ꎬ但其内在深层次的关联还需要进一步的研究ꎮ㊀㊀关键词:黑羽番鸭ꎻ羽色ꎻ产肉性状ꎻ相关性ꎻ对比㊀㊀中图分类号:Ｓ８３４.２㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀文章编号:１００２－１３０２(２０１９)０２－０１７３－０４收稿日期:２０１７－０９－１８基金项目:江苏省农业重大新品种创制项目(编号:ＰＺＣＺ２０１７３７)ꎻ２０１６年江苏省农业三新工程项目(编号:ＳＸＧＣ[２０１６]２９３)ꎻ２０１６年江苏省大学生创新创业训练计划(编号:２０１６１２８０６００７Ｙ)ꎻ江苏农牧科技职业学院院级课题(编号:ＮＳＦ２０１６２０㊁ＮＳＦＰＴ２０１７４４㊁ＮＳＦＰＴ２０１７２７)ꎮ作者简介:孙国波(１９８１ )ꎬ男ꎬ江苏盐城人ꎬ硕士ꎬ副教授ꎬ主要从事水禽育种研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｓｇｂ１９８１＠１２６.ｃｏｍꎮ㊀㊀羽色是家禽及鸟类一个重要的质量性状ꎬ也是其区分和鉴别的重要特征之一ꎮ为加快优质家禽的改良育种ꎬ质量性状和数量性状的选择都是其主要研究领域ꎬ尤其是羽色性状选择已成为鸡㊁鸭等家禽育种的研究重点ꎮ黑羽番鸭作为本单位培育的优良肉鸭产品ꎬ具有生长速度快㊁饲料报酬高㊁肉质鲜美等特点ꎬ符合养殖增效和产品提质要求ꎬ产业化发展前景广阔ꎬ但由于黑羽番鸭羽色遗传的不稳定性ꎬ且通过常规育种方法不能解决其羽色稳定遗传ꎬ黑羽番鸭后代主要会出现白羽㊁黑羽和花羽３种羽色番鸭ꎬ这严重影响了外观品质的均一性和产品推广的同质性ꎬ并且羽色性状是品种(配套系)培育的重要指标内容ꎬ因此对黑羽番鸭羽色遗传研究刻不容缓ꎮ目前ꎬ国内学者认识到了番鸭羽色遗传的复杂性和不稳定性ꎬ早在１９９９年孙亮先等就开展了相关研究[１]ꎬ随后陈岩峰等也相继开展了该项研究[２－６]ꎬ但主要集中在番鸭羽色类型分析㊁番鸭羽色遗传关联基因介绍等方面的研究性综述文献ꎬ也有一些集中在半番鸭羽色遗传研究领域ꎬ还有零星关于番鸭羽色关联基因多态性分析ꎮ本研究主要是开展番鸭羽色变化对产肉性状影响的观测研究ꎬ为后期开展羽色选育和分子辅助选择奠定基础性资料ꎮ１　材料与方法２０１５年１１月至２０１６年１１月ꎬ本试验在江苏丰达水禽育种场(江苏省泰州市农业开发区内)进行了不同羽色番鸭与产肉性能的比较研究ꎮ１.１㊀试验动物分别选取健康㊁符合特征的出雏番鸭２００羽(其中高繁型番鸭１００羽ꎬ快长型番鸭１００羽)ꎬ公母各半ꎮ高繁型番鸭为纯黑羽色番鸭ꎬ快长型番鸭为头部白羽㊁身体全黑羽色番鸭(图１)ꎬ对所有试验鸭佩戴翅号ꎬ分群饲养ꎮ１.２㊀主要仪器托盘电子天平(型号为ＢＬ－３２０Ｓ㊁ＪＡ３０Ｋ－１)ꎬ购自上海精密仪器仪表有限公司ꎻ肌肉嫩度仪(型号为Ｃ－ＬＭ２)ꎬ购自北京天翔飞域仪器设备有限公司ꎻ膨胀仪ꎬ购自北京天翔飞域仪器设备有限公司ꎻｐＨ计(型号为ＰＨ－ＳＴＡＲ)ꎬ购自北京天翔飞域仪器设备有限公司ꎮ１.３㊀饲养管理０~４周龄封闭式舍饲ꎬ５~１３周龄半封闭式地面饲养ꎬ３７１ 江苏农业科学㊀２０１９年第４７卷第２期１４~２７周育成舍笼养ꎬ２８周龄及以后产蛋笼饲养ꎬ具体相关饲养管理要求㊁营养水平及饲料配方等均参见泰州市农业地方标准«黑羽番鸭繁育技术规程»(ＤＢ３２１２/Ｔ１３７ ２０１６)执行ꎮ１.４㊀测定项目及方法１.４.１㊀体质量发育㊀测定４周龄㊁１３周龄㊁５１周龄的不同羽色试验鸭体质量ꎮ１.４.２㊀体尺测量㊀测定试验鸭群１３周龄㊁５１周龄的体斜长㊁胸深㊁胸宽㊁龙骨长㊁胫长㊁胫围㊁半潜水长等指标ꎮ１.４.３㊀屠宰测定㊀分别随机抽取１３周龄㊁５１周龄不同羽色试验鸭６０羽(公母各半)ꎬ测定其屠宰质量㊁半净膛质量㊁全净膛质量㊁胸肌质量㊁腿肌质量ꎬ并计算相应百分率ꎮ采集胸腿肌组织样ꎬ以供肉品测定ꎮ１.４.４㊀肉品质测定㊀测定１３周龄㊁５１周龄肉品质ꎬ具体指标包括ｐＨ值㊁剪切力㊁失水率等ꎮ１.５㊀数据的统计分析所有数据采用 平均数ʃ标准差 表示ꎬ统计分析用ＳＰＳＳ１９ ０软件进行比较分析ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀番鸭羽色的正反交结果为初步了解番鸭羽色遗传的基本情况ꎬ本研究以产蛋期高繁型番鸭１２０羽(公番鸭２０羽)㊁快长型番鸭１２０羽(公番鸭２０羽)为研究对象ꎬ利用正反交试验ꎬ收集种蛋ꎬ观察杂交后代番鸭的羽色分布情况ꎬ具体统计结果如表１ꎮ由表１可知ꎬ正交试验㊁反交试验后代番鸭的羽色几乎均有分布(除正交后代纯白母番鸭)ꎬ且无明显规律可循(羽色主要集中于纯黑㊁白头等类型)ꎬ说明番鸭羽色遗传不是简单的正反交遗传ꎮ因此ꎬ本研究开展了羽色对产肉性状的常规选育研究ꎮ表１㊀黑羽番鸭正反交试验后代番鸭羽色统计试验入孵种蛋(枚)出雏数量(羽)公番鸭(羽)母番鸭(羽)白头纯黑纯白花番白头纯黑白头ˑ黑羽(正交)３１５１３２(４１.９％)９(６.８％)５９(４４.７％)０５(３.８％)２１(１５.９％)３８(２８.８％)黑羽ˑ白头(反交)４６３２０３(４３.８％)１１(５.４％)７４(３６.５％)８(３.９％)１(０.５％)３６(１７.７％)７４(３６.５％)２.２㊀不同羽色番鸭体质量观测结果为了加快番鸭羽色选育ꎬ必须了解不同羽色对番鸭产肉性状的影响ꎮ因此ꎬ本研究开展了不同羽色番鸭的体质量发育监测试验ꎬ获得了４周龄㊁１３周龄㊁５１周龄的公母番鸭数据ꎮ由表２可知ꎬ３个阶段黑羽类型的番鸭体质量均小于白头类型的番鸭ꎬ除第４周龄体质量数据在相同性别间差异不显著以外ꎬ其余２个阶段体质量指标差异显著(Ｐ<０.０５)ꎬ且所有组别间ꎬ公母差异均显著(Ｐ<０.０５)ꎮ表２㊀不同羽色番鸭不同阶段体质量情况统计(ｎ＝３０)ｋｇ㊀类型性别４周龄体质量１３周龄体质量５１周龄体质量高繁型番鸭(黑羽)公０.８２ʃ０.０７∗３.１５ʃ０.２４ｂ∗３.９３ʃ０.２８ｂ∗母０.６９ʃ０.０６∗１.９２ʃ０.１８ｂ∗２.５６ʃ０.１９ｂ∗快长型番鸭(白头)公０.９１ʃ０.０８∗３.７５ʃ０.３３ａ∗４.８８ʃ０.３１ａ∗母０.７４ʃ０.０６∗２.６２ʃ０.２１ａ∗３.２２ʃ０.２７ａ∗㊀㊀注: ∗ 表示同列同羽色不同性别间差异显著(Ｐ<０.０５)ꎬ ∗∗ 表示同列同羽色不同性别间差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎬ不同小写字母表示同列相同性别不同羽色差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ表２至表６同ꎮ２.３㊀不同羽色番鸭体尺测量结果本研究开展１３周龄㊁５１周龄体尺测量ꎬ指标包括体斜长㊁胸深㊁胸宽㊁龙骨长㊁胫长㊁胫围㊁半潜水长等指标ꎮ由表３可知ꎬ１３周龄体尺测量所有指标相同羽色公母差异显著(Ｐ<０.０５)ꎬ其中半潜水长指标公母差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎮ在不同羽色类型番鸭间ꎬ仅体斜长㊁半潜水长指标快长型公番鸭显著性高于高繁型公番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ其余指标差异不显著ꎮ表３㊀不同羽色类型番鸭１３周龄体尺测量结果(ｎ＝３０)ｃｍ㊀类型性别体斜长胸深胸宽龙骨长胫长胫围半潜水长高繁型番鸭公２４.１ʃ２.１１ｂ∗７.１ʃ０.７４∗１２.１ʃ１.０３∗１６.４ʃ１.３５∗１０.０ʃ０.９６∗４.９ʃ０.４２∗５６.４ʃ５.１０ｂ∗∗母２０.４ʃ１.９８∗６.４ʃ０.６５∗９.６ʃ０.９２∗１３.１ʃ１.０３∗７.７ʃ０.８１∗４.０ʃ０.３５∗４５.４ʃ４.４５∗∗快长型番鸭公２７.６ʃ２.４５ａ∗７.２ʃ０.６８∗１２.６ʃ１.２２∗１６.５ʃ１.５４∗１０.３ʃ０.９５∗５.２ʃ０.４８∗５８.７ʃ４.８３ａ∗∗母２２.９ʃ２.０３∗６.５ʃ０.６６∗９.９ʃ１.０１∗１３.４ʃ１.２３∗８.０ʃ０.８３∗４.１ʃ０.３０∗４７.５ʃ４.１２∗∗㊀㊀由表４可知ꎬ５１周龄体尺结果与１３周龄体尺结果基本类似ꎬ所有指标相同羽色公鸭显著性高于母鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ且体斜长㊁半潜水长指标存在极显著差异(Ｐ<０.０１)ꎻ在不同羽色类型间ꎬ快长型公母番鸭体斜长㊁半潜水长指标均显著性高于高繁型公母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ快长型母番鸭龙骨长㊁胫围指标显著性高于高繁型母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎮ表４㊀不同羽色类型番鸭５１周龄体尺测量结果(ｎ＝３０)ｃｍ㊀类型性别体斜长胸深胸宽龙骨长胫长胫围半潜水长高繁型番鸭公３１.２ʃ３.３０ｂ∗∗８.９ʃ０.８５∗１４.４ʃ１.０４∗１８.２ʃ１.９０∗１０.１ʃ０.９３∗５.４ʃ０.４５∗６４.６ʃ５.１８ｂ∗∗母２４.５ʃ２.１２ｂ∗∗７.９ʃ０.７６∗１０.４ʃ１.１１∗１４.５ʃ１.３８ｂ∗８.１ʃ０.７２∗４.３ʃ０.４０ｂ∗５０.４ʃ５.１３ｂ∗∗快长型番鸭公３６.０ʃ３.４５ａ∗∗９.１ʃ０.８３∗１４.３ʃ１.３５∗２０.７ʃ１.９３∗１０.３ʃ０.９５∗５.６ʃ０.４１∗６８.１ʃ６.３５ａ∗∗母２８.７ʃ２.６１ａ∗∗８.２ʃ０.７７∗１０.２ʃ０.９２∗１６.９ʃ１.４４ａ∗８.５ʃ０.８４∗４.７ʃ０.３３ａ∗５６.３ʃ５.２２ａ∗∗４７１ 江苏农业科学㊀２０１９年第４７卷第２期２.４㊀不同羽色番鸭屠宰测定结果本试验主要测定了高繁型番鸭㊁快长型番鸭１３周龄的主要屠宰指标ꎬ包括屠宰率㊁半净膛率㊁全净膛率㊁胸肌率㊁腿肌率ꎬ由表５可知ꎬ相同羽色番鸭间ꎬ仅有快长型番鸭屠宰率指标㊁高繁型番鸭全净膛率与半净膛率指标公母番鸭差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ在相同性别间ꎬ屠宰率㊁全净膛率㊁半净膛率指标高繁型公番鸭显著性高于快长型公番鸭ꎬ其他差异不显著ꎮ表５㊀番鸭１３周龄主要屠宰性能指标测定结果(ｎ＝３０)％㊀类型性别屠宰率全净膛率半净膛率胸肌率腿肌率高繁型番鸭公９１.８５ʃ８.３３ａ７９.２９ʃ７.８０ａ∗８５.４２ʃ８.１１ａ∗１７.８５ʃ１.６６１１.６７ʃ１.１２母９０.２１ʃ８.９４７５.３６ʃ７.６２∗８２.５３ʃ８.２５∗１８.５０ʃ１.８７１０.１９ʃ０.９９快长型番鸭公８８.５０ʃ８.２７ｂ∗７４.６４ʃ７.１９ｂ８２.４５ʃ８.２３ｂ１６.５２ʃ１.４３１１.１１ʃ０.９８母９０.７２ʃ９.１１∗７６.２０ʃ７.５８８３.４８ʃ８.３９１７.４１ʃ１.７０１１.０６ʃ１.０１㊀㊀由表６可知ꎬ相同羽色番鸭全净膛率指标公母差异显著(Ｐ<０.０５)ꎬ快长型番鸭胸肌率㊁腿肌率指标差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎬ高繁型番鸭半净膛率指标差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎮ不同羽色类型间ꎬ屠宰率指标高繁型公番鸭显著高于快长型公番鸭(Ｐ<０.０５)㊁快长型母番鸭显著高于高繁型母番鸭(Ｐ<０ ０５)ꎬ半净膛率㊁全净膛率指标快长型母番鸭显著高于高繁型母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ胸肌率指标高繁型母番鸭显著高于快长型母番鸭(Ｐ<０ ０５)ꎮ表６㊀番鸭５１周龄主要屠宰性能指标测定结果(ｎ＝３０)％㊀类型性别屠宰率全净膛率半净膛率胸肌率腿肌率高繁型番鸭公９１.３５ʃ８.３５ａ∗７９.９０ʃ７.６６∗８４.７０ʃ８.２７∗２２.５７ʃ２.１１１１.４２ʃ１.０５母８２.３６ʃ８.４４ｂ∗６４.５５ʃ６.３１ｂ∗７０.６０ʃ６.５４ｂ∗２２.１３ʃ２.０９ａ１０.４７ʃ１.０８快长型番鸭公８９.２１ʃ８.１２ｂ７６.８３ʃ７.０９∗８２.２９ʃ８.１３２３.２９ʃ２.１３∗１１.０１ʃ０.９７∗母８９.６９ʃ９.０３ａ７１.８４ʃ７.１２ａ∗８０.６６ʃ８.０１ａ１８.１７ʃ１.８０ｂ∗９.４９ʃ０.９２∗２.５㊀不同羽色番鸭肉品质测定结果本研究测定了１３周龄不同羽色番鸭胸肌㊁腿肌的常规肉品质ꎬ由表７可知ꎬｐＨ值指标在所有组织㊁不同性别㊁不同羽色间均差异不显著ꎬ剪切力㊁失水率指标均呈现组织间显著差异(Ｐ<０.０５)ꎬ且前者指标是公番鸭显著高于母番鸭(Ｐ<０ ０５)ꎬ后者指标则是母番鸭显著高于公番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ不存在不同羽色间的显著差异ꎮ表７㊀不同羽色番鸭１３周龄主要肉品质指标测定结果(ｎ＝３０)类型性别肌肉组织剪切力(Ｎ)失水率(％)ｐＨ值高繁型番鸭公腿肌３４.１ʃ３.２７ａ３３.５ʃ３.２２ｂ６.２ʃ０.４７胸肌３１.２ʃ３.０８ｂ３７.２ʃ２.６５ａ６.０ʃ０.４４母腿肌３２.６ʃ３.１５ａ３２.８ʃ３.０３ｂ６.３ʃ０.５９胸肌２８.１ʃ２.９４ｂ３６.７ʃ３.４７ａ６.１ʃ０.５８快长型番鸭公腿肌３５.２ʃ３.６３ａ３１.９ʃ３.０１ｂ６.２ʃ０.５２胸肌３２.７ʃ３.３０ｂ３６.８ʃ３.６７ａ６.１ʃ０.６２母腿肌３３.７ʃ３.２７ａ３１.６ʃ３.０９ｂ６.１ʃ０.５４胸肌２９.０ʃ２.８８ｂ３７.１ʃ３.６８ａ６.０ʃ０.５０㊀㊀注:不同小写字母表示同列相同性别不同组织差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ表８同ꎮ㊀㊀由表８可知ꎬ与表７相比较ꎬ除剪切力指标与１３周龄的规律保持一致ꎬ其余２个指标均有所不同ꎮ失水率指标仅见快长型番鸭胸肌指标显著性高于腿肌(Ｐ<０.０５)ꎬｐＨ值指标仅有高繁型母番鸭㊁快长型母番鸭胸肌显著高于腿肌(Ｐ<０ ０５)ꎮ表８㊀不同羽色番鸭５１周龄主要肉品质指标测定结果(ｎ＝３０)类型性别肌肉组织剪切力(Ｎ)失水率(％)ｐＨ值高繁型番鸭公腿肌４１.９ʃ４.０７ａ２８.５ʃ２.７３５.７ʃ０.４８胸肌３４.５ʃ３.５５ｂ２９.２ʃ３.０４５.９ʃ０.５３母腿肌４２.５ʃ４.２４ａ２９.１ʃ２.９９５.９ʃ０.５７ｂ胸肌３７.３ʃ３.６６ｂ３１.１ʃ３.１５６.２ʃ０.６０ａ快长型番鸭公腿肌４３.３ʃ４.１３ａ２９.２ʃ２.８６ｂ５.９ʃ０.６１胸肌３４.７ʃ３.５２ｂ３１.５ʃ３.０７ａ６.０ʃ０.５５母腿肌４２.６ʃ４.０９ａ２９.９ʃ２.８３ｂ５.８ʃ０.５９ｂ胸肌３５.４ʃ３.６０ｂ３２.７ʃ３.１０ａ６.１ʃ０.６２ａ ５７１江苏农业科学㊀２０１９年第４７卷第２期３　讨论与结论羽毛是鸟类皮肤组织的衍生物之一ꎬ也是鸟类特有的特征之一ꎬ在求偶㊁社交㊁拟态㊁保温㊁防湿㊁防护日光灼伤等方面具有重要作用ꎮ羽毛的颜色是重要的遗传标记ꎬ鸟类羽色主要是黑色素和类胡萝卜素交互作用产生的结果ꎮ在家禽方面ꎬ禽类羽色仅分为有色和无色(白色)２种ꎬ其颜色主要由２种黑色素的相对生成量决定ꎬ分别是黑色至棕色的真黑色素(或称优黑素)和黄色至红色的伪黑色素(或称褐黑素㊁脱黑素)ꎮ由于黑色素受许多遗传基因控制ꎬ并容易受季节变化㊁性别及地理环境等诸多因素的影响ꎬ其羽色变化是十分复杂的过程ꎬ它是受遗传效益和环境效益叠加影响的产物ꎮ番鸭的羽色遗传也是如此ꎬ为了基本了解羽色与产肉性能的影响ꎬ本研究开展了高繁型番鸭(羽色纯黑)㊁快长型番鸭(白头黑身)正反交研究ꎬ发现正交试验㊁反交试验后代番鸭的羽色出现了性状分离ꎬ且无明显的羽色显隐性关系ꎬ但羽色主要集中于纯黑㊁白头等类型ꎬ该研究与孙亮先等的研究结果[１]一致ꎮ为了进一步了解番鸭羽色对性状的影响ꎬ本研究在前期工作基础上ꎬ开展了羽色对产肉性状的常规选育试验ꎮ在不同羽色番鸭生长体质量观测方面ꎬ本研究获得了４㊁１３㊁５１周龄的公母番鸭数据ꎬ发现除公母性别差异造成体质量差异显著外(Ｐ<０.０５)ꎬ３个阶段的黑羽类型番鸭体质量均小于白头类型的番鸭ꎬ除第４周龄体质量数据在相同性别间差异不显著以外ꎬ其余２个阶段体质量指标差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎬ其中公番鸭１３周龄体质量快长型番鸭(白头黑身)较高繁型番鸭高出０.６ｋｇ㊁５１周龄体质量高出０.９５ｋｇꎻ母番鸭１３周龄体质量快长型番鸭(白头黑身)较高繁型番鸭高出０ ７０ｋｇ㊁５１周龄体质量高出０.６６ｋｇꎮ由此得出ꎬ白头黑身类型番鸭较全黑羽番鸭更具有产肉优势ꎬ这些结果与吉文林等的结论[７]相一致ꎮ在体尺测量研究方面ꎬ与体质量差异一致ꎬ１３㊁５１周龄公番鸭均显著高于母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ其中１３周龄半潜水长指标公母差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎬ差值为１１.０~１１.２ｃｍꎬ５１周龄体斜长㊁半潜水长指标存在极显著差异(Ｐ<０.０１)ꎬ差值分别为６.７~７.３ｃｍ㊁１１.８~１４.２ｃｍꎮ在不同羽色类型番鸭间ꎬ快长型番鸭(白头黑身)体尺指标整体上较高繁型番鸭大ꎬ其中１３周龄体斜长㊁半潜水长指标快长型公番鸭显著高于高繁型公番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ５１周龄体斜长㊁半潜水长指标快长型公母番鸭均显著高于高繁型公母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ５１周龄龙骨长㊁胫围指标快长型母番鸭显著高于高繁型母番鸭(Ｐ<０ ０５)ꎮ由于体尺与体质量存在正相关ꎬ也充分说明了体质量大的个体其体尺指标也较大ꎬ这些结果也与吉文林等[７]的研究相吻合ꎮ在屠宰性能测定方面ꎬ本试验主要测定了高繁型番鸭㊁快长型番鸭１３周龄㊁５１周龄的主要屠宰指标(百分率值)ꎮ结果发现ꎬ公母番鸭存在一定差异ꎬ但无明显规律可循ꎬ即１３周龄快长型番鸭屠宰率㊁５１周龄快长型番鸭全净膛率㊁胸肌率㊁腿肌率指标以及高繁型番鸭全净膛率与半净膛率指标公母番鸭差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ在不同羽色类型番鸭间ꎬ１３周龄的屠宰率㊁全净膛率㊁半净膛率指标高繁型公番鸭显著高于快长型公番鸭ꎬ５１周龄的屠宰率指标高繁型公番鸭显著高于快长型公番鸭(Ｐ<０.０５)㊁快长型母番鸭显著高于高繁型母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ５１周龄的半净膛率㊁全净膛率指标快长型母番鸭显著高于高繁型母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎬ５１周龄的胸肌率指标高繁型母番鸭显著高于快长型母番鸭(Ｐ<０.０５)ꎮ总体而言ꎬ依据屠宰性能的指标百分值ꎬ高繁型番鸭(羽色纯黑)更有利于屠宰ꎬ依据屠宰性能的指标绝对值(通过与对应周龄体质量换算)ꎬ快长型番鸭(白头黑身)产肉较多ꎮ林谦等的研究也涉及到 屠宰性能番鸭雄性个体均优于雌性个体㊁产肉性能白羽类型番鸭具有较好的种质优势 等相关阐述[８]ꎮ在肉品质测定方面ꎬ本研究测定了不同羽色番鸭胸肌㊁腿肌的常规肉品质ꎬ发现ｐＨ值指标基本差异不显著(除５１周龄高繁型母番鸭㊁快长型母番鸭)ꎬ剪切力㊁失水率指标多呈现组织间显著差异(Ｐ<０.０５)ꎬ１３周龄㊁５１周龄相同肌肉组织剪切力指标腿肌显著高于胸肌(Ｐ<０.０５)ꎬ１３周龄失水率指标相同性别胸肌显著高于腿肌(Ｐ<０.０５)ꎬ５１周龄失水率指标仅见快长型番鸭胸肌指标显著性高于腿肌(Ｐ<０.０５)ꎬ且５１周龄ｐＨ值指标高繁型母番鸭㊁快长型母番鸭胸肌指标显著性高于腿肌(Ｐ<０.０５)ꎮ综上所述ꎬ本研究在进行高繁型番鸭㊁快长型番鸭正反交的基础上ꎬ初步了解羽色遗传的复杂性ꎬ为了揭示羽色对产肉性状的影响ꎬ进而开展了生长发育㊁屠宰测定㊁肉品测定的相关研究ꎬ结果发现ꎬ快长型番鸭(白头黑身)体质量㊁体尺指标都高于或显著高于高繁型番鸭(纯黑番鸭)ꎬ说明白羽(花羽)番鸭产肉性能总体上优于黑羽番鸭ꎬ这为后期开展番鸭产业推广㊁黑羽番鸭育种等都具有较强的现实意义ꎮ参考文献:[１]孙亮先ꎬ谢进金.番鸭羽型分布及快慢羽性状遗传的研究[Ｊ].山东畜牧兽医ꎬ１９９９(６):１－２.[２]陈岩锋ꎬ陈㊀晖ꎬ郑嫩珠ꎬ等.半番鸭羽色性状ＲＡＰＤ分子标记初探[Ｊ].福建畜牧兽医ꎬ２００４ꎬ２６(６):１－２.[３]郑嫩珠ꎬ辛清武ꎬ缪中纬ꎬ等.黑色素基因在半番鸭及番鸭不同羽色中的差异表达研究[Ｊ].福建农业学报ꎬ２０１３ꎬ２８(５):４２７－４３１.㊀[４]郑嫩珠ꎬ陈晓燕ꎬ卢立志ꎬ等.半番鸭羽色相关基因均一化差减文库的构建和鉴定[Ｊ].中国农业科学ꎬ２０１２ꎬ４５(２２):４６８８－４６９６. [５]高鑫凤ꎬ许继国ꎬ叶㊀峭ꎬ等.影响番鸭羽色性状的候选基因研究现状[Ｊ].中国家禽ꎬ２０１５ꎬ３７(１０):４３－４７.[６]徐㊀琪.番鸭的羽色突变及变异[Ｊ].中国畜牧兽医ꎬ２００４ꎬ３１(８):３６－３８.[７]吉文林ꎬ段修军ꎬ孙国波ꎬ等.黑羽番鸭２个品系生长发育规律及体尺比较[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０１２ꎬ４０(１２):２０５－２０７. [８]林㊀谦ꎬ吴买生ꎬ蒋桂韬ꎬ等.不同羽色和性别番鸭屠宰性能及肌肉成分比较研究[Ｊ].家畜生态学报ꎬ２０１４ꎬ３５(１):３０－３４.６７１ 江苏农业科学㊀２０１９年第４７卷第２期。

番鸭不同质地蛋壳超微结构及其与蛋壳强度的关联分析梅慧灵;郑定黔;赵邦哲;田若宁;陈莹;李昂;连森阳;梅景良;吴旭【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2024(36)2【摘要】本试验旨在研究番鸭正常蛋、沙壳蛋和条纹蛋等3种不同质地蛋壳在超微结构性状上的异同,并分析蛋壳超微结构性状与蛋壳强度之间的关联性。

试验选用300日龄笼养白羽番鸭所产白色的正常蛋、沙壳蛋和条纹蛋厚度相近的蛋壳各12枚,分别作为3种不同质地蛋壳的试验组,每组设12个重复,每个重复1枚蛋壳。

使用S3400N型扫描电镜观察蛋壳的超微结构,测定乳突层厚度和乳突间隙,计算有效厚度和平均乳突大小。

结果表明:1)蛋壳强度在3种蛋之间差异显著(P<0.05),表现为正常蛋>沙壳蛋>条纹蛋;3种蛋间蛋形指数和钙化壳重差异均不显著(P>0.05)。

2)在超微结构上,沙壳蛋和条纹蛋蛋壳的外表面皲裂较正常蛋蛋壳多而深,气孔较多,表观不平整;与正常蛋蛋壳相比,沙壳蛋蛋壳内表面纤维疏松凌乱,纤维间空隙较多,而条纹蛋蛋壳内表面纤维分布较沙壳蛋更为稀少,纤维间有明显间隙;沙壳蛋和条纹蛋蛋壳的横断面平整性和致密度都更差,乳突层与壳膜层联系也更加不紧密。

在超微结构性状中,3种蛋壳间的钙化壳厚度和平均乳突大小差异不显著(P>0.05);沙壳蛋和条纹蛋蛋壳的乳突间隙均显著大于正常蛋蛋壳(P<0.05),而沙壳蛋和条纹蛋蛋壳之间差异不显著(P>0.05);乳突层厚度在3种蛋壳之间均存在显著差异(P<0.05),表现为正常蛋<沙壳蛋<条纹蛋;3种蛋壳间有效厚度也存在显著差异(P<0.05),但表现为正常蛋>沙壳蛋>条纹蛋。

3)3种蛋壳的乳突层厚度与蛋壳强度呈显著负相关(P<0.05),其相关系数分别为-0.868、-0.856和-0.837;乳突间隙与蛋壳强度也呈显著负相关(P<0.05),其相关系数分别为-0.736、-0.764和-0.781;有效厚度与蛋壳强度呈显著正相关(P<0.05),其相关系数分别为0.693、0.743和0.657;钙化壳厚度和平均乳突大小与蛋壳强度的相关性均不显著(P>0.05)。

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２３ꎬ３９(２):４６１￣４７０ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ陶志云ꎬ朱春红ꎬ刘宏祥ꎬ等.鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２３ꎬ３９(２):４６１￣４７０.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２２３.０２.０１９鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定陶志云１ꎬ㊀朱春红１ꎬ㊀刘宏祥１ꎬ㊀施祖灏２ꎬ㊀章双杰１ꎬ㊀徐文娟１ꎬ㊀宋卫涛１ꎬ㊀王志成１ꎬ㊀李慧芳１(１.江苏省家禽科学研究所ꎬ江苏扬州２２５１２５ꎻ２.谱尼测试集团江苏有限公司ꎬ江苏苏州２１５１２３)收稿日期:２０２２￣０６￣１４基金项目:畜禽种质资源精准鉴定项目 表型鉴定专题ꎻ重大品种创制项目子课题(ＰＺＣＺ２０１７３６)ꎻ江苏省现代农业(水禽)产业技术体系建设项目[ＪＡＴＳ(２０２２)４０４]作者简介:陶志云(１９７９－)ꎬ女ꎬ安徽滁州人ꎬ博士ꎬ副研究员ꎬ主要从事家禽免疫及遗传育种研究ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｚｈｉｙｕｎ２＠１２６.ｃｏｍ通讯作者:李慧芳ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)３４９０１９０９３＠ｑｑ.ｃｏｍ㊀㊀摘要:㊀本研究根据金定鸭个体蛋质量情况ꎬ选择２种极端表型ꎬ分为高蛋质量组(ＷＨ)和低蛋质量组(ＷＬ)ꎮ基于混池全基因组重测序和选择清除分析技术筛选组间差异显著基因组区域内的单核苷酸多态性(ＳＮＰ)位点及相关功能基因ꎬ并通过单个样本重测序对筛选的蛋质量相关ＳＮＰ进行验证ꎬ分析各ＳＮＰ位点不同基因型之间的蛋质量大小差异ꎮ研究发现ꎬ在低蛋质量组和高蛋质量组获得的高质量ｒｅａｄｓ数量分别为１９４１１５４２４和２２８０８９０８４ꎬ共定位到ＳＮＰ差异显著区间１７８个ꎬ共富集到受选择候选基因４０个ꎬ而且这些区间和基因均位于Ｚ号染色体ꎮ鉴定出候选基因ＡＲＳＢ上Ｚ￣２２９０８８３１㊁Ｚ￣２２９６６６９５突变位点显著影响３００ｄ㊁４５０ｄ蛋质量ꎬＲＯＲＢ上Ｚ￣３５２５１０７２㊁Ｚ￣３５２５６９４７突变位点显著影响４５０ｄ蛋质量ꎬＲＯＲＢ上Ｚ￣３５２７８１９６突变位点显著影响３００ｄ㊁４５０ｄ蛋质量ꎬＲＡＳＥＦ上Ｚ￣３９５８８５７０突变位点显著影响４５０ｄ蛋质量ꎮ本研究结果为通过分子育种技术提高蛋鸭产蛋性能选育提供了依据ꎬ加快了选育进程ꎮ关键词:㊀鸭ꎻ蛋质量ꎻ遗传变异ꎻ功能基因中图分类号:㊀Ｓ８３４㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２３)０２￣０４６１￣１０Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｒｅｌａｔ￣ｅｄｔｏｅｇｇｗｅｉｇｈｔｉｎｄｕｃｋｓＴＡＯＺｈｉ￣ｙｕｎ１ꎬ㊀ＺＨＵＣｈｕｎ￣ｈｏｎｇ１ꎬ㊀ＬＩＵＨｏｎｇ￣ｘｉａｎｇ１ꎬ㊀ＳＨＩＺｕ￣ｈａｏ２ꎬ㊀ＺＨＡＮＧＳｈｕａｎｇ￣ｊｉｅ１ꎬ㊀ＸＵＷｅｎ￣ｊｕａｎ１ꎬ㊀ＳＯＮＧＷｅｉ￣ｔａｏ１ꎬ㊀ＷＡＮＧＺｈｉ￣ｃｈｅｎｇ１ꎬ㊀ＬＩＨｕｉ￣ｆａｎｇ１(１.ＪｉａｎｇｓｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｏｕｌｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＹａｎｇｚｈｏｕ２２５１２５ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＰｏｎｙＴｅｓｔｉｎｇＧｒｏｕｐＪｉａｎｇｓｕＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＳｕｚｈｏｕ２１５１２３ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀ＩｎｔｈｅｓｔｕｄｙꎬｔｗｏｅｘｔｒｅｍｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆＪｉｎｄｉｎｇｄｕｃｋｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｅｇｇｗｅｉｇｈｔ:ａｈｉｇｈ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐ(ＷＨ)ａｎｄａｌｏｗ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐ(ＷＬ).Ｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ(ＳＮＰ)ｓｉｔｅｓａｎｄｒｅｌａｔｅｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｔｈａｔｌｏｃａｔｅｄｉｎｒｅｇｉｏｎｓｗｉｔｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｇｅｎｏｍｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｍｉｘｅｄｐｏｏｌｗｈｏｌｅ￣ｇｅｎｏｍｅｒｅ￣ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｃｌｅａｒａｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ.ＴｈｅｓｃｒｅｅｎｅｄＳＮＰｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｅｇｇｗｅｉｇｈｔｗｅｒｅｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｒｅ￣ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｅａｃｈｓａｍｐｌｅꎬａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｅｇｇｗｅｉｇｈｔｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｅａｃｈＳＮＰｓｉｔｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ.Ｔｏｔａｌｓｏｆ１９４１１５４２４ａｎｄ２２８０８９０８４ｈｉｇｈ￣ｑｕａｌｉｔｙｒｅａｄｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｉｎｔｈｅＷＬａｎｄＷＨｇｒｏｕｐｓꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ１７８ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔＳＮＰｆｒａｇｍｅｎｔｒｅｇｉｏｎｓꎬａｎｄ４０ｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ.ＴｈｅｓｅｉｎｔｅｒｖａｌｓａｎｄｇｅｎｅｓｗｅｒｅｌｏｃａｔｅｄｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅＺ.Ｚ￣２２９０８８３１ａｎｄＺ￣２２９６６６９５ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｔｅｓｉｎｔｈｅｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅＡＲＳＢｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅｅｇｇｗｅｉｇｈｔｏｆ３００￣ｄａｙ￣ｏｌｄａｎｄ４５０￣ｄａｙ￣ｏｌｄｄｕｃｋｓ.Ｚ￣３５２５１０７２ａｎｄＺ￣３５２５６９４７ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｔｅｓｉｎＲＯＲＢｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅｅｇｇｗｅｉｇｈｔｏｆ４５０￣ｄａｙ￣ｏｌｄｄｕｃｋｓ.Ｚ￣３５２７８１９６ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｔｅｉｎＲＯＲＢｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅｅｇｇｗｅｉｇｈｔｏｆ３００￣１６４ｄａｙ￣ｏｌｄａｎｄ４５０￣ｄａｙ￣ｏｌｄｄｕｃｋｓꎬａｎｄＺ￣３９５８８５７０ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｔｅｉｎＲＡＳＥＦｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅｅｇｇｗｅｉｇｈｔｏｆ４５０￣ｄａｙ￣ｏｌｄｄｕｃｋｓ.Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｐｒｏｖｉｄｅａｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｆｏｒｉｍｐｒｏｖｉｎｇｅｇｇ￣ｌａｙｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇｔｈｅｂｒｅｅｄｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｉｎｄｕｃｋｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀ｄｕｃｋꎻｅｇｇｗｅｉｇｈｔꎻｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎꎻｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅ㊀㊀蛋鸭的产蛋性能ꎬ包括开产日龄㊁平均蛋质量㊁产蛋数㊁蛋品质等ꎬ是衡量其经济价值的主要指标[１￣２]ꎮ通过生物学方法ꎬ筛选影响蛋鸭产蛋性能的候选基因ꎬ将分子育种相关技术用于蛋鸭育种ꎬ是提高蛋鸭产蛋性能的有效手段[１￣２]ꎮ全基因组重测序技术是对基因组序列已知的个体进行全基因组测序ꎬ并在个体或群体水平上进行差异性分析的方法ꎬ可挖掘出大量的遗传变异位点[３]ꎬ进而对挖掘的变异位点进行定位和鉴定ꎬ发现影响性状的重要基因及其功能ꎬ从而阐释性状差异的原因[４]ꎮ随着测序成本的不断降低ꎬ该技术已成为育种研究领域中快捷㊁有效的方法之一ꎬ在畜禽育种研究中也得到了广泛应用[５]ꎮ目前ꎬ利用全基因组重测序技术对鸡产蛋性能进行研究已获得较大进展[６]ꎮ如ꎬＬｉｕ等[７]发现１３号染色体ＯＤＺ２基因上１个单核苷酸多态性(ＳＮＰ)与开产日龄显著相关ꎬ７号染色体ＧＲＢ１４基因上１个ＳＮＰ与产蛋数相关ꎻＳｈｅｎ等[８]发现５号染色体ＧＡＲＮＬ１基因上５个ＳＮＰ与开产日龄相关ꎮＦａｎ等[９]发现９个与开产日龄及体质量显著相关的ＳＮＰꎬ４个与产蛋数显著相关的ＳＮＰꎬ５个与蛋质量相关的ＳＮＰꎮ全基因组重测序技术用于监测鸭产蛋性能的相关研究较少ꎬ在绍兴鸭中发现了１０个与产蛋性能显著关联的ＳＮＰꎬ其中４个位于２号染色体的ＳＮＰ与开产日龄相关ꎬ４个位于２号染色体和２个位于２９号染色体的ＳＮＰ与６６周龄产蛋数显著关联[１]ꎮ蛋质量相关ＳＮＰ的研究更是非常有限ꎮ本研究拟利用全基因组混池重测序和选择清除分析技术ꎬ分析蛋质量差异大的鸭群体ꎬ以期筛选㊁鉴定出鸭蛋质量相关差异基因组区域内的遗传变异位点和功能基因ꎬ为通过分子育种技术提高蛋鸭产蛋性能提供依据ꎬ加快育种进程ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料试验鸭为金定鸭ꎬ来源于国家家养动物种质资源库ꎬ共５００只ꎬ按照蛋鸭饲养标准饲养ꎬ育成期结束后上笼饲养ꎬ在２９９ｄ㊁３００ｄ㊁３０１ｄ㊁４４９ｄ㊁４５０ｄ和４５１ｄ时分别称量蛋质量ꎬ统计个体３００ｄ和４５０ｄ的平均蛋质量ꎮ１.２㊀个体选择和样品采集根据个体３００日龄时蛋质量情况分别选取蛋质量高㊁蛋质量低２种极端表型个体各３０只ꎬ经统计ꎬ高蛋质量组(ＷＨ)的平均蛋质量为(８６.０９ʃ２ ２２)ｇꎬ低蛋质量组(ＷＬ)的平均蛋质量为(６４.４３ʃ１ ６８)ｇꎬ差异极显著(Ｐ<０ ０１)ꎮ分别采集２组个体的抗凝血ꎬ置于－２０ħ冰箱ꎬ用于ＤＮＡ提取ꎮ１.３㊀ＤＮＡ提取㊁文库构建及测序基因组ＤＮＡ的提取采用十六烷基三甲基溴化铵(ＣＴＡＢ)法ꎬ提取后用ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光光度计检测其纯度和质量浓度ꎮ采用ＮＥＢ建库试剂盒进行建库ꎬ再用仪器ｑＰＣＲ￣ＡＢＩ７５００㊁Ａｇｉｌｅｎｔ２１００对文库进行定量和检测ꎮ库检合格后ꎬ在ＨｉｓｅｑＸ１０ＰＥ１５０平台进行双末端(ＰＥ)测序ꎮ最后去除片段低于１０ｂｐ的低质量ｒｅａｄｓ以及一些接头被污染的ｒｅａｄｓꎬ获得ｃｌｅａｎｒｅａｄｓꎮ１.４㊀序列比对㊁基因变异的检测利用比对软件ＢＷＡ将获得的ｃｌｅａｎｒｅａｄｓ数据比对到参考基因组ꎬ利用软件Ｐｉｃａｒｄ对结果进行排序并标记重复序列ꎮ用Ｓａｍｔｏｌｓ软件将比对结果转换成Ｍｐｉｌｅｕｐ格式ꎬ转换过程中ꎬ将碱基质量值小于２０和质量值小于２０的碱基去除ꎮ转换成Ｍｐｉｌｅｕｐ格式后ꎬ为避免插入/缺失(ＩｎＤｅｌ)引起的ＳＮＰ簇对计算结果的影响ꎬ将ＩｎＤｅｌ及ＩｎＤｅｌ附近５ｂｐ内的变异位点去除ꎮ１.５㊀选择清除分析基于过滤后的Ｍｐｉｌｅｕｐ文件ꎬ使用Ｐｏｐｏｏｌａｔｉｏｎ软件计算单个混池内的π值ꎬ将２个池的π值相除ꎬ获得π￣ｒａｔｉｏ指标(ｐｉＲａｔｉｏ)ꎮ将２个混池的Ｍｐｉｌｅｕｐ格式转换为Ｓｙｎｃ格式(Ｐｏｐｏｏｌａｔｉｏｎ２专用格式)后ꎬ用Ｐｏｐｏｏｌａｔｉｏｎ２软件进行混池间的固定指数(Ｆｓｔ)计算ꎮ１.６㊀ＳＮＰ准确性检验基于ＩｌｌｕｍｉｎａＸ￣１０测序平台对筛选获得的遗传变异进行单样本的个体测序验证ꎮ在差异显著的基２６４江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第２期因组区间内随机选择１２个差异显著的ＳＮＰꎬ扩增出２个混池中６０个个体的目标位点片段ꎬ统计每个个体１２个位点的基因分型情况ꎮ１.７㊀不同基因型鸭蛋质量差异分析采用ＳＰＳＳ２０.０软件对在ＷＨ㊁ＷＬ组间基因组差异显著区域内随机选择的１２个多态位点基因型鸭３００ｄ㊁４５０ｄ时蛋质量进行Ｏｎｅ￣ｗａｙＡＮＯＶＡ分析ꎬ比较各位点不同基因型间的蛋质量差异ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀测序结果概述２.１.１㊀全基因重测序和组装㊀表１显示ꎬＷＬ㊁ＷＨ２个混池得到的ｒｅａｄｓ数分别为１９５５７９１３４和２２９６９６１８０ꎬ过滤后得到的高质量ｒｅａｄｓ数分别为１９４１１５４２４和２２８０８９０８４ꎬ过滤率均超过９９％ꎮ２个池比对到基因组上的ｒｅａｄｓ数分别为１８６０６３４０４和２１８７３０５９３ꎬ比对率超过９５％ꎬ２个池分别产生６６５２３５６个和６７３１９４１个ＳＮＰꎮ表１㊀鸭蛋质量相关全基因重测序和组装Ｔａｂｌｅ１㊀Ｗｈｏｌｅ￣ｇｅｎｏｍｅｒｅ￣ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄａｓｓｅｍｂｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｄｕｃｋｅｇｇｗｅｉｇｈｔ项目㊀㊀低蛋质量组高蛋质量组总碱基数２９３３６８７０１００３４４５４４２７０００ＧＣ(％)４３.１４４２.９６Ｑ３０(％)９４.１９９４.３０原始测序ｒｅａｄｓ数１９５５７９１３４２２９６９６１８０过滤后ｒｅａｄｓ数１９４１１５４２４２２８０８９０８４过滤率(％)９９.２５９９.３０比对上的ｒｅａｄｓ数１８６０６３４０４２１８７３０５９３比对率(％)９５.８５９５.９０测序深度２４.７３２９.０４ＳＮＰ总数６６５２３５６６７３１９４１纯合子数５４２２１０６２１４２５３杂合子数５１７６８８６１０９０４６ＧＣ(％)表示在ＤＮＡ４种碱基中ꎬ鸟嘌呤和胞嘧啶所占的比率ꎻＱ３０(％)表示质量值ȡ３０的碱基所占的百分比ꎻＳＮＰ表示单核苷酸多态性ꎮ２.１.２㊀ＳＮＰ在基因组中的分布㊀表２显示ꎬ在ＷＨ和ＷＬ中均获得了大量的ＳＮＰꎬ其中在外显子区的ＳＮＰ数量分别为１２４７７６和１２３８３３ꎬ内含子区的ＳＮＰ数量分别为３４３１８６５和３３９４８０２ꎮ２.１.３㊀ＳＮＰ编码信息统计㊀对ＷＨ和ＷＬ的鸭进行ＤＮＡ测序ꎬ统计分析比对后获得的ＳＮＰ编码信息情况ꎬ结果(表３)表明ꎬ２组获得的非同义突变数分别为２９２３７和２９０８９ꎬ同义突变数分别为８７１７８和８６４１８ꎮ表２㊀高蛋质量组和低蛋质量组有效ＳＮＰ在基因组分布的数量统计Ｔａｂｌｅ２㊀Ｇｅｎｏｍｉｃｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙ￣ｍｏｒｐｈｉｓｍ(ＳＮＰ)ｎｕｍｂｅｒｉｎｈｉｇｈａｎｄｌｏｗｅｇｇｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｏｆｄｕｃｋｓ基因组位置ＳＮＰ数量高蛋质量组低蛋质量组转录终止位点下游１ｋｂ以内８３４２３８２４９７外显子区１２４７７６１２３８３３某些转录本的外显子区ꎬ另一些转录本的可变剪切区３１２８基因间２８１２０８３２７７４６４４内含子区３４３１８６５３３９４８０２可变剪切位点２ｂｐ以内２７６２７５转录起始位点上游１ｋｂ区域内８５９１３８５００５某些转录本的上游区ꎬ另一些转录本的下游区７９４９７８０３３ᶄＵＴＲ区１３５３８５１３３６９４５ᶄＵＴＲ区５０１３２４９６７０某些转录本的５ᶄＵＴＲ区ꎬ另一些转录本的３ᶄＵＴＲ区１０８１０５ＳＮＰ表示单核苷酸多态性ꎻＵＴＲ:非翻译区ꎮ表３㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组ＳＮＰ编码信息统计Ｔａｂｌｅ３㊀ＳｔａｔｉｓｔｉｃｓｏｆＳＮＰｃｏｄｉｎｇｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｈｉｇｈａｎｄｌｏｗｅｇｇｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｏｆｄｕｃｋｓ突变类型㊀㊀㊀ＳＮＰ数量高蛋质量组低蛋质量组非同义突变２９２３７２９０８９终止密码子获得２０３１９３终止密码子缺失３８４０同义突变８７１７８８６４１８未知功能８１５１８１２１ＳＮＰ表示单核苷酸多态性ꎮ２.２㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组的选择清除分析㊀㊀通过群体多样性差异指标分析ＷＬ和ＷＨ２个群体ＳＮＰ在染色体上的多样性差异情况ꎬ２个群体多样性差异主要分布在１号㊁２号㊁３号㊁４号㊁５号及Ｚ号染色体(图１Ａ)ꎮ由ＷＬ和ＷＨ２个群体固定指数值分布的曼哈顿图(图１Ｂ)可知ꎬ２个群体遗传分化相对严重的区域集中位于Ｚ号染色体ꎮ３６４陶志云等:鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定结合固定指数㊁多样性差异倍数的结果ꎬ各自按０ ０１水平筛选显著区域ꎬ交集部分为可靠的候选区间ꎬ共定位到１７８个ＳＮＰ显著差异区间(图１Ｃ)ꎬ这些区间均位于Ｚ号染色体ꎬ对２个指标筛选出的显著区间ꎬ提取出各自区间的基因ꎬ并用韦恩图将２个区间基因的交集和并集情况进行展示ꎬ共富集到４０个受选择候选基因(图１Ｄ)ꎮＡ:群体多样性差异倍数分布图ꎻＢ:固定指数分布图ꎻＣ:由固定指数和群体多样性差异倍数确定的选择信号示意图ꎻＤ:由固定指数和群体多样性差异倍数确定的受选择基因Ｖｅｎｎ图ꎮ图１㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组选择清除分析Ｆｉｇ.１㊀Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｃｌｅａｒａｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｉｇｈ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐａｎｄｌｏｗ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｏｆｄｕｃｋｓ２.３㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组的受选择基因通过Ｆｓｔ和π￣Ｒａｔｉｏ指标确定的４０个受选择基因情况见表４ꎬ其中包括与跨膜转运㊁物质转运和代谢相关的Ｓｌｃ４９ａ３㊁ＴＲＰＭ６㊁Ｓｅｍａ４ｄ㊁ＲＡＳＥＦꎻ与发育相关的ＮＩＰＢＬ㊁ＺＦＡＮＤ５等ꎬ有多个基因功能未知ꎮ２.４㊀测序结果准确性验证使用ＩｌｌｕｍｉｎａＸ￣１０测序平台对６０个样本１２个ＳＮＰ位点进行单样本的个体重测序ꎬ以验证等位基因频率准确性ꎬ结果(表５)表明ꎬ全基因组混池重测序和单个样本重测序所得等位基因频率的一致性为０ ８３３ꎮ２.５㊀候选基因ＧＯ富集分析将获得的差异基因向ＧＯ数据库的各条目映射ꎬ计算每个条目的基因数并分类统计ꎬ图２显示ꎬ在０ ０１水平ꎬ这些差异基因在生物过程㊁细胞组分㊁分子功能中均有涉及ꎮ在生物过程方面ꎬ以细胞过程㊁单生物体过程㊁生物过程调节㊁生物调节㊁代谢过程几个条目中涉及基因较多ꎬ数量分别为１４㊁１３㊁１２㊁１２㊁１１ꎻ在细胞组分方面ꎬ以细胞器㊁细胞㊁细胞部分几个条目中涉及基因较多ꎬ数量分别为１２㊁１１㊁１１ꎻ在分子功能方面ꎬ以结合㊁催化活性２个条目中涉及基因较多ꎬ数量分别为１４和４ꎮ４６４江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第２期表４㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组的受选择基因情况Ｔａｂｌｅ４㊀Ｌｉｓｔｏｆｓｅｌｅｃｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎｈｉｇｈ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐａｎｄｌｏｗ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｏｆｄｕｃｋｓ序列号㊀㊀基因㊀㊀基因描述基因功能ｎｃｂｉ＿１０１７９４１３８Ｓｌｃ４９ａ３溶质载体家族４９成员３激活跨膜转运蛋白活性ｎｃｂｉ＿１０６０１５９４３ＧＡＤＤ４５Ｇ生长停滞和ＤＮＡ损伤可诱导蛋白γＤＮＡ损伤修复ｎｃｂｉ＿１１３８４００８３ＣＺＨ９ｏｒｆ４０染色体Ｚ上９号染色体开放阅读框４０同源物未知ｎｃｂｉ＿１１３８４０２０７ｎｃｂｉ＿１０１８００２９４ｎｃｂｉ＿１１０３５１１９２ＴＲＰＭ６转化受体电位阳离子通道亚家族Ｍ成员维持稳态ꎬ在上皮镁转运及肠道㊁肾脏镁的主动吸收中具有重要作用ｎｃｂｉ＿１０１８０３５３６ＬＨＦＰＬ２脂肪瘤高迁移率蛋白ＩＣ融合辅基样２未知ｎｃｂｉ＿１１３８４０１１２ＮＭＲＫ１烟酰胺核糖激酶１与尿镁钙排泄相关ｎｃｂｉ＿１０１７９１３４７Ｇｄａ鸟嘌呤脱氨酶催化鸟嘌呤转变为黄嘌呤ｎｃｂｉ＿１１３８４０３８０ＬＯＣ１１３８４０３８０未知未知ｎｃｂｉ＿１０１７８９５６７ＤＤＸ５８ＤＥｘＤ/Ｈ盒解旋酶５８ＲＮＡ识别ｎｃｂｉ＿１０１７９１５２７ＡＢＨＤ１７Ｂ含α/β水解酶结构域蛋白１７Ｂ参与蛋白质去棕榈酰化ｎｃｂｉ＿１０１７９３８４１ＣＨＲＮＡ７神经元乙酰胆碱受体亚单位α￣７启动乙酰胆碱门控阳离子选择性通道ｎｃｂｉ＿１１３８４０３７９ＬＯＣ１１３８４０３７９未知未知ｎｃｂｉ＿１０１７９６２１８ＬＰＬ脂蛋白脂肪酶具有甘油三脂水解酶和受体介导的脂蛋白摄取的配体/桥接因子的双重功能ｎｃｂｉ＿１０１７８９７５１ＡＣＯ１乌头酸酶１三羧酸循环中重要的酶ꎬ控制细胞内铁水平ｎｃｂｉ＿１１３８４０２７４ＬＯＣ１１３８４０２７４未知未知ｎｃｂｉ＿１０１８０２４０７Ｂｈｍｔ甜菜碱￣同型半胱氨酸Ｓ￣甲基转移酶１催化甜菜碱和同型半胱氨酸转化为二甲基甘氨酸和蛋氨酸ｎｃｂｉ＿１０１８０２９５６ＮＩＰＢＬＮｉｐｐｅｄＢ样蛋白质发育调节ｎｃｂｉ＿１１３８４０２２１ＭＡＰ１Ｂ微管相关蛋白１Ｂ参与微管组装ꎬ在神经系统的发育和功能中起重要作用ꎻ具有激活肌动蛋白结合㊁微管结合㊁磷脂结合活性的作用ｎｃｂｉ＿１０１８０２５９４ＤＭＧＤＨ二甲基甘氨酸脱氢酶催化二甲基甘氨酸氧化脱甲基形成肌氨酸ｎｃｂｉ＿１０１７９２６０１ＲＯＲＢ维甲酸相关孤儿受体ＤＮＡ结合蛋白ꎬ可参与器官发生和分化ꎻ参与调节昼夜节律有关基因的表达ｎｃｂｉ＿１１３８４０３８１ＬＯＣ１１３８４０３８１未知未知ｎｃｂｉ＿１０１７９２１１２Ｓｅｍａ４ｄ信号素４Ｄ参与磷脂腺肌醇３￣激酶信号的正向调节㊁传递神经元发育的调控㊁磷酸盐代谢过程等ｎｃｂｉ＿１０１７９６７９４ＣＡＲＮＭＴ１肌肽Ｎ￣甲基转移酶１将骨骼肌中的肌肽转化为鹅肌肽ｎｃｂｉ＿１０１８０３５４３ＲＡＳＥＦ含ＲＡＳ和ＥＦ域的蛋白质调节膜转运ꎬ具有肿瘤抑制作用ｎｃｂｉ＿１０１８０４３６１ＦＲＭＤ３含四叶苜蓿形蛋白结构域蛋白３为一种单通道膜蛋白ꎬ主要存在于卵巢中ꎬ但其功能尚未确定ｎｃｂｉ＿１１３８４０３７６ＬＯＣ１１３８４０３７６未知未知ｎｃｂｉ＿１１３８４０２６９ＬＯＣ１１３８４０２６９未知未知ｎｃｂｉ＿１１３８４０２２７ＬＯＣ１１３８４０２２７未知未知ｎｃｂｉ＿１０１７９４８０６ＴＰＰＰ２促微管蛋白聚合蛋白家族成员２具有微管蛋白结合活性ꎬ位于细胞质中ꎬ参与鞭毛虫精子运动ｎｃｂｉ＿１０１７９６６３６ＰＲＲ１６富含脯氨酸１６参与孔眼大小和翻译的正向调节ｎｃｂｉ＿１０１７９９６９８Ｄｉｒａｓ２ＤＩＲＡＳ家族成员２未知ｎｃｂｉ＿１０１７９２６１４ＭＡＮ２Ａ１甘露糖苷酶α类２Ａ成员１一种定位于高尔基体的糖基水解酶ꎬ在天冬酰胺连接的低聚糖(Ｎ￣聚糖)成熟途径的最终水解步骤中发挥催化作用ｎｃｂｉ＿１０１７９５００７ＬＯＣ１０１７９５００７脾酪氨酸蛋白激酶未知ｎｃｂｉ＿１０１８０４３７６ＰＣＧＦ３多疏族环指蛋白３未知ｎｃｂｉ＿１０１８０２９７８ＡＲＳＢ芳基硫酸酯酶Ｂ水解Ｎ￣乙酰￣Ｄ￣半乳糖胺㊁硫酸软骨蛋白和硫酸皮肤素的硫酸盐基团ｎｃｂｉ＿１１０３５２０２９ＣＺＨ９ｏｒｆ８５染色体Ｚ上９号染色体开放阅读框Ｃ９ｏｒｆ８５同源物未知ｎｃｂｉ＿１０１８０１９８１ＺＦＡＮＤ５ＡＮ１型锌指蛋白５与细胞生长㊁分化等过程有关ｎｃｂｉ＿１０１８００４８５ＯＳＴＦ１破骨细胞刺激因子１间接诱导破骨细胞的形成和骨质吸收５６４陶志云等:鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定表５㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组全基因组混池重测序与单样本重测序等位基因频率一致性比较Ｔａｂｌｅ５㊀Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｏｆａｌｌｅｌｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｂｅｔｗｅｅｎｗｈｏｌｅｇｅｎｏｍｅｍｉｘｅｄｐｏｏｌｒｅ￣ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄｓｉｎｇｌｅｓａｍ￣ｐｌｅｒｅ￣ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｉｎｈｉｇｈ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐａｎｄｌｏｗ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｏｆｄｕｃｋｓ突变位点㊀突变碱基混池重测序低蛋质量组高蛋质量组单样本重测序低蛋质量组高蛋质量组Ｚ￣１１９１０２０６Ｔ０.２８００.８８００.１１０１.０００Ｃ０.７２００.１２００.８９００Ｚ￣１２０１７０８３Ａ０.２８００.８５００.１２５０.８３０Ｃ０.７２００.１５００.８７５０.１７０Ｚ￣１２０１７０９７Ａ０.７２００.８５０００.８６０Ｇ０.２８００.１５０１.００００.１４０Ｚ￣２２９０８８３１Ｇ０.６９００.０８００.６７００.１１０Ａ０.３１００.９２００.３３００.８９０Ｚ￣２２９６６６９５Ａ０.６４００.０８００.８０００.１４０Ｇ０.３６００.９２００.２０００.８６０Ｚ￣３５２５１０７２Ｃ０.６９００.１５００.８３００Ｔ０.３１００.８５００.１７０１.０００Ｚ￣３５２５６９４７Ｔ０.８７００.１２００.７５００Ｃ０.１３００.８８００.２５０１.０００Ｚ￣３９５８８５７０Ａ０.８１００.９６００.７５００.９２０Ｇ０.１９００.０４００.２５００.０８０Ｚ￣５０７８９６８３Ｃ０.５６００.８０００.１７０１.０００Ｔ０.４４００.２０００.８３００Ｚ￣５０８１７０６１Ｃ０.３１００.０８００.１２５０.６７０Ｔ０.６９００.９２００.８７５０.３３０Ｚ￣５６１６３９２５Ａ０.１０００.９６００.２５００.９２０Ｔ０.９０００.０４００.７５００.０８０Ｚ￣３５２７８１９６Ｔ０.３７００.１５００.７５００Ｃ０.７３００.８５００.２５０１.０００２.６㊀候选基因ＫＥＧＧ分析进行通路显著性富集分析ꎬ前２０个显著富集的ＫＥＧＧ通路见图３ꎬ其中代谢通路信号转导途径中富集的基因最多ꎬ甘氨酸㊁丝氨酸和苏氨酸代谢途径次之ꎬ富集到代谢通路的基因包括Ｇｄａ㊁ＡＣＯ１㊁Ｂｈ￣ｍｔ㊁ＤＭＧＤＨ㊁ＭＡＮ２Ａ１㊁ＡＲＳＢꎮ２.７㊀１２个突变位点不同基因型鸭蛋质量差异分析将筛选获得的１２个突变位点不同基因型鸭个体蛋质量数据进行差异分析ꎬ结果(表６)表明ꎬＡＲ￣ＳＢ基因上突变位点Ｚ￣２２９０８８３１的ＧңＡ的突变引起３００ｄ㊁４５０ｄ蛋质量显著下降(Ｐ<０ ０５)ꎻＡＲＳＢ基因上突变位点Ｚ￣２２９６６６９５的ＡңＧ的突变和ＲＯＲＢ基因上突变位点Ｚ￣３５２７８１９６的ＴңＣ的突变引起鸭３００ｄ和４５０ｄ蛋质量显著增加(Ｐ<０ ０５)ꎻＲＯＲＢ基因上突变位点Ｚ￣３５２５１０７２的ＣңＴ突变以及Ｚ￣３５２５６９４７的ＴңＣ的突变引起鸭４５０ｄ蛋质量显著增加ꎻＲＡＳＥＦ基因上突变位点Ｚ￣３９５８８５７０的ＡңＧ突变引起４５０ｄ蛋质量显著增加(Ｐ<０ ０５)ꎮ３㊀讨论全基因组关联(ＧＷＡＳ)技术被广泛用于遗传变异的发现和新基因的挖掘ꎬ且取得了较大进展ꎮ本研究利用全基因组重测序技术对金定鸭ＷＬ和ＷＨ２个不同蛋质量组进行混池重测序ꎬ获得的高质量ｒｅａｄｓ数分别为１９４１１５４２４和２２８０８９０８４ꎬ比对到基因组的比对率均高于９５％ꎬ获得的ＳＮＰ数量分别为６６５２３５６和６７３１９４１ꎬ说明本研究的测序质量较高ꎬ可用于后续差异分析ꎮ采用选择清除分析共定位到ＳＮＰ差异显著的基因组区间为１７８个ꎬ受选择候选基因为４０个ꎬ这些差异基因组区间和基因均位于Ｚ号染色体ꎬ说明Ｚ号染色体与鸭蛋质量密切相关ꎮ在受选择区间内选择１２个突变位点进行个体测序验证ꎬ结果与全基因组混池重测序的一致性为８３.３３％ꎬ说明全基因组混池结果可靠ꎬ可用于进一步数据分析ꎮ㊀㊀有研究结果表明ꎬ影响蛋质量的因素很多ꎬ其中遗传因素是重要的影响因素之一[１０]ꎬ蛋质量的遗传力较高ꎬ可达到０.４５０~０ ５５０[１１]ꎬ山麻鸭的３００日龄蛋质量遗传力高达０.６１４[１２]ꎬ因此ꎬ可通过选育改变蛋质量ꎮ蛋质量大小受到多个基因控制[１１]ꎬ禽类中与蛋质量相关的基因有ＰＲＬ[１３]㊁ＰＲＬＲ[１４]㊁ＧＨＲ[１５]㊁ＧｎＩＨ[１６]㊁ＯＶＲ[１７]㊁ＶＩＰＲ￣１[１８]等ꎮ最近在鸡的研究中发现了一些新的候选基因ꎬ包括ＰＲＫＡＲ２Ｂ㊁ＨＭＧＡ２㊁ＬＥＭＤ３㊁ＧＲＩＰ１㊁ＥＨＢＰ１㊁ＭＡＰ３Ｋ７和ＭＹＨ[１９]ꎬ在鸭的研究中也陆续发现一些新的与蛋质量相关的基因ꎬ如ＣＯＬＸ[２０]㊁ＰＮＲＣ[２１]㊁ＣＡ２[２２]ꎮ本研究在鸭蛋质量差异较大的２个群体中ꎬ发现４０个与３００ｄ㊁４５０ｄ蛋质量相关的受选择基因ꎬ主要包括参与跨膜转运的Ｓｌｃ４９ａ３㊁ＲＡＳＥＦ㊁ＴＲＰＭ６ꎬ参与ＤＮＡ损伤修复的ＧＡＤＤ４５Ｇꎬ尿镁钙排泄相关的ＮＭＲＫ１ꎬ具有催化活性的Ｇｄａ㊁Ｂｈｍｔ和ＤＭＧＤＨꎬ具有水解作用的ＭＡＮ２Ａ１㊁ＬＰＬ㊁ＡＲＳＢꎬ与发育调节相关的ＮＩＰＢＬ㊁ＺＦＡＮＤ５ꎬ与微管蛋白结合活性相关的ＭＡＰ１Ｂ㊁ＴＰ￣ＰＰ２ꎬ以及与昼夜节律相关的ＲＯＲＢ等ꎬ这些基因均是在鸭上新发现的与蛋质量相关的候选基因ꎮ６６４江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第２期ａ１~ａ２０属于生物过程ꎻｂ１~ｂ１１属于细胞组分ꎻｃ１~ｃ７属于分子功能ꎮａ１:细胞过程ꎻａ２:单生物体过程ꎻａ３:生物过程调节ꎻａ４:生物调节ꎻａ５:代谢过程ꎻａ６:对刺激的反应ꎻａ７:信号ꎻａ８:定位ꎻａ９:多细胞生物过程ꎻａ１０:运动(力)ꎻａ１１:生物过程的正调节ꎻａ１２:细胞成分组织或生物发生ꎻａ１３:发展过程ꎻａ１４:生物过程的负调节ꎻａ１５:生物黏附ꎻａ１６:多生物过程ꎻａ１７:免疫系统过程ꎻａ１８:生殖过程ꎻａ１９:生殖ꎻａ２０:发育ꎻｂ１:细胞器ꎻｂ２:细胞ꎻｂ３:细胞部分ꎻｂ４:细胞膜ꎻｂ５ꎻ细胞膜部分ꎻｂ６:高分子复合物ꎻｂ７:细胞器部分ꎻｂ８:细胞连结ꎻｂ９:膜封闭腔ꎻｂ１０:突触部分ꎻｂ１１:突触ꎻｃ１:结合ꎻｃ２:催化活性ꎻｃ３:分子传感器活性ꎻｃ４:转录因子活性㊁蛋白质结合ꎻｃ５:分子功能调节器ꎻｃ６:核酸结合转录因子活性ꎻｃ７:信号传感器活性ꎮ图２㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组差异基因富集分析ＧＯ聚类图(０.０１水平)Ｆｉｇ.２㊀ＧＯｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｓｂｅｔｗｅｅｎｈｉｇｈ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｄｕｃｋｓａｎｄｌｏｗ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｄｕｃｋｓａｔ０.０１ｌｅｖｅｌ图３㊀鸭高蛋质量组和低蛋质量组差异基因富集分析ＫＥＧＧ聚类图(０.０１水平)Ｆｉｇ.３㊀ＫＥＧＧｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｓｂｅｔｗｅｅｎｈｉｇｈ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｄｕｃｋｓａｎｄｌｏｗ￣ｅｇｇ￣ｗｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｄｕｃｋｓａｔ０.０１ｌｅｖｅｌ㊀㊀对获得的受选择基因进行ＧＯ富集分析和ＫＥＧＧ分析ꎬＧＯ分析结果表明ꎬ在生物进程分类中ꎬ受选择基因主要涉及单生物体过程㊁细胞过程㊁生物调节㊁生物过程调节ꎻ细胞组分分类中ꎬ受选择基因主要涉及细胞㊁细胞部分和细胞器ꎻ在分子功能分类中ꎬ受选择基因主要涉及结合㊁催化活性ꎮＫＥＧＧ分析结果表明ꎬ受选择基因以代谢通路信号途径中参与的基因最多ꎬ包括Ｇｄａ㊁ＡＣＯ１㊁Ｂｈｍｔ㊁ＤＭＧＤＨ㊁ＭＡＮ２Ａ１和ＡＲＳＢꎬ推测这些基因可能是通过参与物质代谢过程调节蛋质量大小ꎮ７６４陶志云等:鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定表６㊀各突变位点不同基因型鸭蛋质量差异分析Ｔａｂｌｅ６㊀Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｅｇｇｗｅｉｇｈｔｏｆｄｕｃｋｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒ￣ｅｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓａｔｅａｃｈｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｔｅ突变位点㊀基因基因型３００ｄ蛋质量(ｇ)４５０ｄ蛋质量(ｇ)Ｚ￣１１９１０２０６ＮＩＰＢＬＴ７５.８１ʃ８.７７ａ７３.０２ʃ７.６５ａＣ７３.２１ʃ８.０３ａ７１.１３ʃ５.５７ａＺ￣１２０１７０８３Ａ７５.８１ʃ８.７７ａ７３.０２ʃ７.６５ａＣ７３.２１ʃ８.０３ａ７１.１３ʃ５.５７ａＺ￣１２０１７０９７Ａ７５.８１ʃ８.７７ａ７３.０２ʃ７.６５ａＧ７３.２１ʃ８.０３ａ７１.１３ʃ５.５７ａＺ￣３５２５１０７２ＲＯＲＢＣ７２.３５ʃ８.９９ａ６９.１２ʃ６.７２ａＴ７５.８７ʃ８.４９ａ７３.８７ʃ７.１０ｂＺ￣３５２５６９４７Ｔ７１.９８ʃ９.７６ａ６８.７０ʃ７.１２ａＣ７５.６２ʃ８.４３ａ７３.５５ʃ７.０７ｂＺ￣３５２７８１９６Ｔ７１.４５ʃ８.９５ａ６８.０６ʃ６.０４ａＣ７６.２１ʃ８.４１ｂ７４.２０ʃ７.０２ｂＺ￣２２９０８８３１ＡＲＳＢＧ７６.１７ʃ８.６５ｂ７４.０６ʃ８.５７ｂＡ７１.５７ʃ７.９６ａ６６.５６ʃ５.２４ａＺ￣２２９６６６９５Ａ７１.３０ʃ７.８３ａ６８.９９ʃ５.７３ａＧ７６.５５ʃ８.５４ｂ７４.００ʃ７.３０ｂＺ￣３９５８８５７０ＲＡＳＥＦＡ７１.９８ʃ９.７６ａ６８.７０ʃ７.１２ａＧ７５.８０ʃ８.３６ａ７３.５５ʃ７.０７ｂＺ￣５０７８９６８３ＰＣＧＦ３Ｃ７６.２５ʃ８.９２ａ７３.２５ʃ７.３４ａＴ７２.８６ʃ８.０６ａ７１.７０ʃ７.２４ａＺ￣５０８１７０６１Ｃ７２.３８ʃ７.２３ａ７１.１５ʃ５.６０ａＴ７６.０４ʃ９.０７ａ７３.３２ʃ７.６８ａＺ￣５６１６３９２５ＭＡＮ２Ａ１Ａ７６.０３ʃ８.８５ａ７３.００ʃ７.４４ａＴ７４.１８ʃ６.２２ａ７３.７３ʃ６.５４ａ同列数据后不同小写字母表示同一基因同一突变位点不同基因型间蛋质量差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎮ㊀㊀ＲＯＲＢ是一种孤儿核受体ꎬ与维甲酸㊁甲状腺激素受体相关ꎬ主要在大脑皮质㊁丘脑中表达ꎬ在视交叉上核㊁松果体和视网膜中也有表达ꎬ而且在松果体和视网膜中ｍＲＮＡ的丰度随昼夜节律振荡ꎬ在夜间达到峰值[２３]ꎮＲＯＲＢ－/－小鼠表现出鸭子般的步态㊁视网膜发育缺陷㊁雄性生育能力延迟等[２４]ꎮ小鼠ＲＯＲβ缺乏ꎬ还表现出昼夜节律异常[２５]ꎬ研究结果表明ꎬＲＯＲｓ可被ＢＭＡＬ１㊁ＣＬＯＣＫ和ＣＲＹ１等几个时钟基因识别ꎬ从而调节昼夜节律[２６￣２９]ꎮ除此之外ꎬＲＯＲｓ还调节下游靶基因的节律表达ꎬ因此ꎬＲＯＲｓ可作为耦合昼夜节律振荡与各种生理过程的循环控制的中间产物ꎬ包括能量平衡㊁脂质代谢等[３０￣３１]ꎮ本研究发现ꎬＲＯＲＢ基因上３个位点突变显著影响３００ｄ或４５０ｄ的鸭蛋质量ꎬ推测鸭ＲＯＲＢ可能是通过调控鸭昼夜节律基因的表达而影响其能量代谢过程ꎬ从而引起蛋质量的变化ꎮＡＲＳＢ的２个位点Ｚ￣２２９０８８３１㊁Ｚ￣２２９６６６９５突变显著影响３００ｄ㊁４５０ｄ蛋质量ꎮＡＲＳＢ是一种溶酶体酶ꎬ这种酶活性的缺乏会导致未降解底物的积累和溶酶体储存障碍ꎬ即粘多糖病ＶＩ型ꎮ已经发现ＡＲＳＢ的多个突变均与人的ＶＩ型粘多糖病相关[３２￣３４]ꎬ尚未见ＡＲＳＢ在禽类中的相关报道ꎬ本研究首次发现ＡＲＳＢ的位点突变与蛋质量相关ꎬ提示鸭的ＡＲＳＢ基因可能通过影响机体代谢参与鸭产蛋过程ꎮＲＡＳＥＦ(含ＲＡＳ和ＥＦ域的蛋白质)属ＲａｂＧＴ￣Ｐａｓｅ蛋白家族成员ꎬ在Ｃ端区域包含１个ＲａｂＧＴ￣Ｐａｓｅ结构域ꎬ内部区域包含１个卷曲的线圈基序和２个ＥＦ结构域ꎬ它们对结合Ｎ端的钙离子非常重要[３５￣３６]ꎮ研究结果表明ꎬＲａｂ４５/ＲＡＳＥＦ可在人的心㊁肝㊁肺㊁肾脏㊁前列腺和睾丸等中检测到[３５]ꎬ而且与结直肠癌[３７￣３８]㊁肺癌[３５]㊁葡萄膜黑色素瘤[３９]㊁乳腺癌[４０￣４２]等肿瘤相关ꎬＲＡＳＥＦ在肿瘤中的作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞的生长从而抑制肿瘤[３８￣３９]ꎮ本研究首次发现ＲＡＳＥＦ点突变与鸭蛋质量相关ꎬ但具体调节机制有待进一步挖掘ꎮ４㊀结论本研究通过高通量混池重测序结合选择清除分析技术筛选鸭蛋高质量组㊁低质量组组间基因组差异显著区域内的ＳＮＰ和功能基因ꎬ筛选到１７８个定位于Ｚ号染色体与鸭蛋质量相关的ＳＮＰ显著差异区间及４０个受选择候选基因ꎮＫＥＧＧ分析结果表明ꎬ这些受选择ＳＮＰ位点和基因主要涉及代谢通路ꎮ通过比较１２个突变位点不同基因型间鸭３００ｄ㊁４５０ｄ蛋质量差异ꎬ鉴定出一些蛋质量相关候选突变位点及基因ꎬ这些基因可作为目标候选基因做进一步研究ꎮ本研究结果可为通过分子育种技术提高蛋鸭产蛋性能选育提供依据ꎮ参考文献:[１]㊀王珍珍.不同蛋鸭品种产蛋性能的比较分析及绍兴鸭产蛋性能的全基因组关联分析[Ｄ].金华:浙江师范大学ꎬ２０２０. 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[２０]ＣＨＡＮＧＭＴꎬＣＨＥＮＧＹＳꎬＨＵＡＮＧＭＣ.Ａｎｏｖｅｌｎｏｎ￣ｓｙｎｏｎｙ￣ｍｏｕｓＳＮＰｏｆｔｈｅＣＯＬＸｇｅｎｅａｎｄｉｔｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｄｕｃｋｒｅｐｒｏ￣ｄｕｃｔｉｖｅｔｒａｉｔｓ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＰｒｏｂｅｓꎬ２０１２ꎬ２６(５):２０４￣２０７.[２１]ＣＨＡＮＧＭＴꎬＣＨＥＮＧＹＳꎬＨＵＡＮＧＭＣ.ＡｎｏｖｅｌＳＮＰｏｆｔｈｅＰＮＲＣ１ｇｅｎｅａｎｄｉｔｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｒａｉｔｓｉｎＴｓａｉｙａｄｕｃｋｓ[Ｊ].Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙꎬ２０１２ꎬ７８(１):１４０￣１４６.[２２]ＣＨＡＮＧＭＴꎬＣＨＥＮＧＹＳꎬＨＵＡＮＧＭＣ.ＮｏｖｅｌｇｅｎｅｔｉｃｍａｒｋｅｒｓｏｆｔｈｅｃａｒｂｏｎｉｃａｎｈｙｄｒａｓｅＩＩｇｅｎｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｅｇｇｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｒａｉｔｓｉｎＴｓａｉｙａｄｕｃｋｓ[Ｊ].ＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＤｏ￣ｍｅｓｔｉｃＡｎｉｍａｌｓꎬ２０１３ꎬ４８(１):９８￣１０４.[２３]ＳＣＨＡＥＲＥＮ￣ＷＩＥＭＥＲＳＮꎬＡＮＤＲＥＥꎬＫＡＰＦＨＡＭＭＥＲＪＰꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＥｘＤｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆｔｈｅｏｒｐｈａｎｎｕｃｌｅａｒｒｅｃｅｐｔｏｒＲＯＲβｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇａｎｄａｄｕｌｔｒａｔｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｓｕｇｇｅｓｔｓａｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆｓｅｎｓｏｒｙｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｉｎｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍ[Ｊ].ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅꎬ１９９７ꎬ９(１２):２６８７￣２７０１. [２４]ＡＮＤＲÉＥꎬＣＯＮＱＵＥＴＦꎬＳＴＥＩＮＭＡＹＲＭꎬｅｔａｌ.Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｏｆｒｅｔｉｎｏｉｄ￣ｒｅｌａｔｅｄｏｒｐｈａｎｒｅｃｅｐｔｏｒｂｅｔａｃｈａｎｇｅｓｃｉｒｃａｄｉａｎｂｅｈａｖｉｏｒꎬｃａｕｓｅｓｒｅｔｉｎａｌｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｌｅａｄｓｔｏｖａｃｉｌｌａｎｓｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌꎬ１９９８ꎬ１７(１４):３８６７￣３８７７. [２５]ＭＡＳＡＮＡＭＩꎬＳＵＭＡＹＡＩＣꎬＢＥＣＫＥＲ￣ＡＮＤＲＥＭꎬｅｔａｌ.Ｂｅ￣ｈａｖｉｏｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍｓｂｙｌｉｇｈｔａｎｄｍｅｌａｔｏｎｉｎｉｎＣ３Ｈ/ＨｅＮｍｉｃｅｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｆｏｒｔｈｅＲＯＲβｋｎｏｃｋｏｕｔ[Ｊ].ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＲｅｇｕｌａｔｏｒｙꎬＩｎｔｅｇｒａ￣ｔｉｖｅａｎｄＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２００７ꎬ２９２(６):Ｒ２３５７￣Ｒ２３６７. [２６]ＧＵＩＬＬＡＵＭＯＮＤＦꎬＤＡＲＤＥＮＴＥＨꎬＧＩＧＵÈＲＥＶꎬｅｔａｌ.Ｄｉｆｆｅｒ￣ｅｎｔｉａｌｃｏｎｔｒｏｌｏｆＢｍａｌ１ｃｉｒｃａｄｉａｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｂｙＲＥＶ￣ＥＲＢａｎｄＲＯＲｎｕｃｌｅａｒｒｅｃｅｐｔｏｒｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｈｙｔｈｍｓꎬ２００５ꎬ２０(５):３９１￣４０３.[２７]ＫＵＭＡＫＩＹꎬＵＫＡＩ￣ＴＡＤＥＮＵＭＡＭꎬＵＮＯＫＤꎬｅｔａｌ.Ａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｈｉｇｈ￣ａｍｐｌｉｔｕｄｅＣｉｓ￣ｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋ[Ｊ].ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉ￣ｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａꎬ２００８ꎬ１０５(３９):１４９４６￣１４９５１.[２８]ＰＲＥＩＴＮＥＲＮꎬＤＡＭＩＯＬＡＦꎬＬＯＰＥＺ￣ＭＯＬＩＮＡＬꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｏｒ￣ｐｈａｎｎｕｃｌｅａｒｒｅｃｅｐｔｏｒＲＥＶ￣ＥＲＢαｃｏｎｔｒｏｌｓｃｉｒｃａｄｉａｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｌｉｍｂｏｆｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｃｉｒｃａｄｉａｎｏｓｃｉｌｌａｔｏｒ[Ｊ].Ｃｅｌｌꎬ２００２ꎬ１１０(２):２５１￣２６０.[２９]ＳＡＴＯＴＫꎬＰＡＮＤＡＳꎬＭＩＲＡＧＬＩＡＬＪꎬｅｔａｌ.Ａｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅ￣ｎｏｍｉｃｓｓｔｒａｔｅｇｙｒｅｖｅａｌｓＲｏｒａａｓａｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｃｉｒ￣ｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋ[Ｊ].Ｎｅｕｒｏｎꎬ２００４ꎬ４３(４):５２７￣５３７.[３０]ＫＡＮＧＨＳꎬＡＮＧＥＲＳＭꎬＢＥＡＫＪＹꎬｅｔａｌ.Ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏ￣ｆｉｌｉｎｇｒｅｖｅａｌｓａｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｆｏｒＲＯＲαａｎｄＲＯＲγｉｎｐｈａｓｅＩａｎｄｐｈａｓｅＩＩｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ[Ｊ].ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌＧｅｎｏｍｉｃｓꎬ２００７ꎬ３１(２):２８１￣２９４.[３１]ＪＥＴＴＥＮＡＭ.Ｒｅｔｉｎｏｉｄ￣ｒｅｌａｔｅｄｏｒｐｈａｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ(ＲＯＲｓ):ｃｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｓｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬｉｍｍｕｎｉｔｙꎬｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍꎬａｎｄｃｅｌｌｕｌａｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ[Ｊ].ＮｕｃｌｅａｒＲｅｃｅｐｔｏｒＳｉｇｎａｌｉｎｇꎬ２００９ꎬ７:ｅ００３. [３２]ＵＴＴＡＲＩＬＬＩＡꎬＲＡＮＧＡＮＡＴＨＰꎬＪＡＩＮＳＪꎬｅｔａｌ.Ｎｏｖｅｌｍｕｔａ￣ｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅａｒｙｌｓｕｌｐｈａｔａｓｅＢ(ＡＲＳＢ)ｇｅｎｅｉｎＩｎｄｉａｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓｔｙｐｅＶＩ[Ｊ].ＩｎｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＲｅ￣ｓｅａｒｃｈꎬ２０１５ꎬ１４２(４):４１４￣４２５.[３３]ＷＡＮＧＰꎬＭＡＲＧＯＬＩＳＣꎬＬＩＮＧꎬｅｔａｌ.ＭｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓｔｙｐｅＶＩｉｎａｇｒｅａｔＤａｎｅｃａｕｓｅｄｂｙａｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＡＲ￣ＳＢｇｅｎｅ[Ｊ].ＶｅｔｅｒｎａｒｙＰａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ５５(２):２８６￣２９３. [３４]ＭＡＬＥＫＰＯＵＲＮꎬＶＡＫＩＬＩＲꎬＨＡＭＺＥＨＬＯＩＥＴ.Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌａｎａｌ￣ｙｓｉｓｏｆＡＲＳＢｇｅｎｅｉｎｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓｔｙｐｅＶＩ:ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ９６４陶志云等:鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定ｏｆｔｈｒｅｅｎｏｖｅｌｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎＩｒａｎｉａｎｐａｔｉｅｎｔｓ[Ｊ].ＩｒａｎｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１８ꎬ２１(９):９５０￣９５６.[３５]ＯＳＨＩＴＡＨꎬＮＩＳＨＩＮＯＲꎬＴＡＫＡＮＯＡꎬｅｔａｌ.ＲＡＳＥＦｉｓａｎｏｖｅｌｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｂｉｏｍａｒｋｅｒａｎｄａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０１３ꎬ１１(８):９３７￣９５１.[３６]ＭＩＴＲＡＳꎬＦＥＤＥＲＩＣＯＬꎬＺＨＡＯＷꎬｅｔａｌ.Ｒａｂ２５ａｃｔｓａｓａｎｏｎ￣ｃｏｇｅｎｅｉｎｌｕｍｉｎａｌＢｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒａｎｄｉｓｃａｕｓａｌｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＳｎａｉｌｄｒｉｖｅｎＥＭＴ[Ｊ].Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔꎬ２０１６ꎬ７(２６):４０２５２￣４０２６５. [３７]ＹＵＸꎬＦＡＮＧＺꎬＬＩＧꎬｅｔａｌ.ＨｉｇｈＲＡＳＥＦｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓａｓｓｏｃｉａｔ￣ｅｄｗｉｔｈａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｂｅｔｔｅｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｉｎ￣ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ１１(９):４２７６￣４２８２.[３８]ＹＵＸꎬＦＡＮＧＺꎬＬＩＧꎬｅｔａｌ.ＨｉｇｈＲＡＳＥＦｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓａｓｓｏｃｉａｔ￣ｅｄｗｉｔｈａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｂｅｔｔｅｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｉｎ￣ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ１１(９):４２７６￣４２８２.[３９]ＭＡＡＴＷꎬＢＥＩＢＯＥＲＳＨꎬＪＡＧＥＲＭＪꎬｅｔａｌ.Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｒｅｇｕｌａ￣ｔｉｏｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓＲＡＳＥＦａｓａｔｕｍｏｒ￣ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｉｎｕｖｅａｌｍｅｌａｎｏ￣ｍａ[Ｊ].ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ＆ＶｉｓｕａｌＳｃｉｅｎｃｅꎬ２００８ꎬ４９(４):１２９１￣１２９８.[４０]ＳＨＩＢＡＴＡＭꎬＫＡＮＤＡＭꎬＳＨＩＭＩＺＵＤꎬｅｔａｌ.ＲＡＳＥＦｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓｔａｔｕｓｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｏｎｃｏｌ￣ｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１８ꎬ１６(６):７２２３￣７２３０.[４１]ＸＩＡＯＢꎬＨＡＮＧＪꎬＬＥＩＴꎬｅｔａｌ.Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｋｅｙｇｅｎｅｓｒｅｌｅ￣ｖａｎｔｔｏｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆＥＲ￣ｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄＥＲ￣ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｂａｓｅｄｏｎａｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅ￣ｐｏｒｔｓꎬ２０１９ꎬ４６(２):２１１１￣２１１９.[４２]ＣＡＩＭＪꎬＬＩＡＮＧＸꎬＳＵＮＸꎬｅｔａｌ.Ｎｕｃｌｅａｒｒｅｃｅｐｔｏｒｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ２ｐｒｏｍｏｔｅｓｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｂｙｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅＭＡＰＫ/ＥＲＫｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＯｎｃｏｌｏｇｙꎬ２０１９ꎬ９:１６４.(责任编辑:王㊀妮)０７４江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第２期。

不同饲养方式黑羽番鸭的生理生化指标变化秦豪荣;孙国波;徐琪;董飚;张扬【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2016(044)005【摘要】为黑羽番鸭的饲养模式创新和产业化生产提供参考,对笼养和地面平养黑羽番鸭的睾酮(TES)、孕酮(PRG)、雌二醇(E2)等生殖激素和17种血液生化指标进行测定.结果表明:笼养黑羽番鸭公鸭TES含量达3.6 ng/mL,显著(P＜0.05)高于平养;笼养母番鸭高产期E2含量(287.2 pg/mL)极显著(P＜0.01)高于平养,但休产期笼养与平养间差异不显著;高产期PRG含量(0.9～1.2 ng/mL)显著高于休产期(0.1～0.2 ng/mL),但不同饲养方式相同生理阶段间无显著差异.笼养与平养公鸭的谷草转氨酶、碱性磷酸酶、尿酸和超氧化物歧化酶等血液生化指标含量差异显著(P ＜0.05),其他指标间差异不显著;母番鸭的谷草转氨酶、超氧化物歧化酶含量间差异极显著(P＜0.01),谷丙转移酶、碱性磷酸酶、谷氨酰胺转移酶、总蛋白、尿素、肌酐、尿酸和钙等含量间差异显著(P＜0.05).【总页数】3页(P84-86)【作者】秦豪荣;孙国波;徐琪;董飚;张扬【作者单位】江苏农牧科技职业学院,江苏泰州225300;江苏现代畜牧科技园,江苏泰州225300;江苏农牧科技职业学院,江苏泰州225300;江苏现代畜牧科技园,江苏泰州225300;扬州大学动物科技学院,江苏扬州225009;江苏农牧科技职业学院,江苏泰州225300;江苏现代畜牧科技园,江苏泰州225300;扬州大学动物科技学院,江苏扬州225009【正文语种】中文【中图分类】S834+.89【相关文献】1.不同饲养方式下黑羽番鸭血清生化指标的比较 [J], 陆艳凤;韩大勇;孙国波;孟伊宁;伊丽婷2.法国白羽番鸭和福建黑羽番鸭生长曲线及肉用性能比较分析 [J], 黄江南; 刘林秀; 陈小连; 季华员; 魏岳; 傅秋玲; 韦启鹏; 谢金防3.法国白羽番鸭和福建黑羽番鸭生长曲线及肉用性能比较分析 [J], 黄江南;刘林秀;陈小连;季华员;魏岳;傅秋玲;韦启鹏;谢金防4.樱桃谷鸭、白羽番鸭、黑羽番鸭和苏牧鸭肉品质的比较研究 [J], 王锦锋;包小成5.黑羽番鸭与法国番鸭生长及生产性能的比较研究 [J], 吉文林;段修军;秦豪荣;赵旭庭;高勤学因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

摘要DGAT是脂肪合成代谢中的关键酶之一，它与脂类在脂肪细胞中的沉积、血浆中三酰甘油的调节、肌肉中能量代谢以及畜禽卵母细胞的形成等有密切的关系。

研究证明，DGAT基因是影响畜禽肉质性状、产奶性状和体脂性状的重要候选基因，已成为进行分子标记辅助育种主要因素之一，对筛选和鉴定影响新疆良种驴的肉质、产奶等生产性状，具有重要的理论意义和应用价值。

本实验采用PCR-SSCP技术，对新疆和田和喀什良种驴的DGAT2基因的多态性进行了检测，对不同SSCP带型的DNA片段进行测序，分析了新疆良种驴的遗传多样性及多态性位点与生产性状的关系，为其合理保护、开发和利用提供了科学依据。

实验结果如下：（1）PCR-SSCP技术检测结果分析检测了新疆和田和喀什良种驴DGAT2基因第3、4、5内含子和第5、6外显子的多态性，仅发现第3内含子存在多态性现象，有两种等位基因分别命名为A和B，存在AA和AB两种基因型，没有检测到BB基因型，其中AA基因型为优势基因型。

纯合子AA型有两条带，杂合子AB有四条带。

基因型频率AA＞AB，基因型频率为0.6964（0.3036）。

测序结果表明：AB型与AA型相比存在A→G的碱基突变。

（2）DGAT2基因第3内含子多态性与体尺性状的相关性分析DGAT2基因第3内含子多态性与体尺性状有极显著或显著的相关性。

和田良种驴AA与AB基因型个体相比，体高和胸围差异极显著（P＜0.01），体长差异显著（P＜0.05），AB型体高、胸围和体长高于AA型。

喀什良种驴AA与AB基因型个体相比，体高差异显著（P＜0.05），AB型体高、胸围和体长高于AA型，但体长和胸围差异不显著（P ＞0.05)。

实验群体中喀什良种驴在体高、体长和胸围高于和田良种驴，差异极显著（P ＜0.01）。

（3）DGAT2基因第3内含子多态性与屠宰性状的相关性分析和田良种驴AA和AB基因型个体的体重、胴体重、屠宰率及净肉重差异不显著（P ＞0.05)，只有净肉率差异极显著（P＜0.01），但这几项测定值均是AB型高于AA型。

荧光定量pcr内参基因
荧光定量PCR是一种常用的分子生物学技术，常用于测量目标
DNA的含量。

在PCR反应中使用内参基因来标准化目标基因的表达是
很重要的，因为它可以消除反应的效率差异和不同样品之间的差异性。

内参基因也被称为参比基因或标准基因，它们是稳定表达的基因，其
表达量在各个细胞和组织中基本不变。

通过选择一个稳定的内参基因，可以确保PCR反应的可靠性和准确性。

以下是一些常用的荧光定量PCR内参基因：
1. GAPDH：糖酵解途径中的酶，参与氧化糖分解过程，在多个细胞和
组织中表达水平稳定。

2. β-actin：负责细胞的细胞骨架形态维持，在多个细胞和组织中表达水平稳定。

3. 18S rRNA：核糖体组成部分之一，在不同种类的细胞和组织中表达
水平相对稳定。

4. HPRT：鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶，参与细胞DNA合成，在多个细
胞和组织中表达水平稳定。

5. Cyclophilin A：负责细胞免疫应答和蛋白质折叠，在不同种类的细胞
和组织中表达水平相对稳定。

选择合适的内参基因并进行相关实验前，需要充分了解目标基因和研究细胞/组织的特点。

同时，还要确定一个高质量的RNA样品并进行RNA纯化和浓度测定等步骤。

只有这样，荧光定量PCR才能提供可靠准确的分析结果。

黑番鸭高产优质专门化品系的选育研究辛清武;郑嫩珠;缪中纬;朱志明;陈晖;刘凤辉【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2014(35)2【摘要】采用家系和个体选择相结合的方法对黑番鸭高产专门化品系进行世代选育,以期选育出黑羽率高、产蛋性能好、群体整齐一致且后代生长速度较快的黑番鸭高产优质专门化品系.结果表明:(1)经过4个世代选育,群体1～2级黑羽率从42.23％提高到98.46％,群体呈现出以黑羽色为主基调.(2)经过3个世代选育,公母鸭70日龄群体体重变异系数分别从12.37％和14.52％下降到6.54％和7.49％,群体趋于整齐一致；70日龄与180日龄F3代公母鸭的体重均极显著高于F1代(P ＜0.01).(3)经过3个世代的家系选育,300日龄产蛋量F3代极显著高于F1代(P＜0.01),提高幅度为13.98％,选育进展显著；(4)F3代黑番鸭的开产日龄极显著早于F1代(P＜0.01),平均提早了7.53 d；300日龄蛋重由原来的79.23 g至80.05 g,提高幅度较小.【总页数】5页(P21-24,30)【作者】辛清武;郑嫩珠;缪中纬;朱志明;陈晖;刘凤辉【作者单位】福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省莆田市荔城区畜牧站,福建莆田351100【正文语种】中文【中图分类】S811.6【相关文献】1.黑羽番鸭2个品系生长发育规律及体尺比较 [J], 吉文林;段修军;孙国波;董飚;卞友庆2.法国番鸭与地方番鸭不同品系杂交的效果 [J], 何世山;任晋东;翁长阳;陶争荣;宋美娥;王玉泉;刘雅丽;沈军达;卢立志3.白羽半番鸭亲本专门化品系的选育 [J], 陈红萍;陈晖;郑嫩珠;朱志明;缪中纬;林如龙4.法国白羽番鸭和福建黑羽番鸭生长曲线及肉用性能比较分析 [J], 黄江南; 刘林秀; 陈小连; 季华员; 魏岳; 傅秋玲; 韦启鹏; 谢金防5.樱桃谷鸭、白羽番鸭、黑羽番鸭和苏牧鸭肉品质的比较研究 [J], 王锦锋;包小成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。