几种厌氧菌的培养方法

第二十二章 厌氧性细菌及检验

本章考点：

1.概述

概念，分类标准及分类

2.厌氧菌的分布与临床意义

自然界和正常人体中的分布，临床意义

3.厌氧菌标本的采集与送检

标本的采集方法，标本的运送和处理

4.分离与鉴定

检验程序，检验方法概述

一、概 述

（一）概念

厌氧性细菌是一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

（二）厌氧菌的分类

主要厌氧菌的分类见表5-22-1。

种和亚种类 主要常见菌种

革兰阳性有芽胞杆菌 83 破伤风梭菌、肉毒梭菌、溶组织梭菌、

梭菌属 产气荚膜梭菌等

革兰阳性无芽胞杆菌

丙酸杆菌属 8 痤疮丙酸杆菌、颗粒丙酸杆菌、贪梦丙

酸杆菌

优杆菌属 34 不解乳优杆菌、迟缓优杆菌、粘性优杆

菌、短优杆菌等

乳酸杆菌属 51 本菌属与致病关系不大

放线菌属 12 衣氏放线菌、溶齿放线菌、化脓放线菌

等

蛛网菌属 1 丙酸蛛网菌

双歧杆菌属 24 两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧 杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌等

革兰阴性无芽胞杆菌

类杆菌属 18 脆弱类杆菌、多形类杆菌、多形杆菌、

普通类杆菌

厌氧菌培养的条件

厌氧菌生长需要特定的环境条件，包括一定的温度范围、pH范围、氧气浓度、营养物质等。这些条件对于不同的厌氧菌有所不同，因此在培养之前需要了解相应厌氧菌的生长特点。

一、温度范围

厌氧菌的温度范围一般比较窄，因此需要在特定的温度下培养。有些厌氧菌喜欢高温环境，可以在50℃到70℃之间生长，如泥沼气弧菌属；而有些厌氧菌则偏向于低温环境，可以在10℃到25℃之间生长，如乳酸菌属。

二、pH范围

不同的厌氧菌对pH值的适应范围不同。例如，有些厌氧菌可以在酸性环境（pH 4）中生长，如酸菌属；而有些则更喜欢碱性环境（pH 9），如硫还蛋白菌属。细胞内的pH值调节对于细胞内的物质代谢和能量产生至关重要，因此需要根据具体情况调整合适的pH值。

三、氧气浓度

厌氧菌不能在大气中的高氧环境下生长，因此需要用特定的装置，如分配器、箱式培养箱等，控制氧气浓度。对于不同的厌氧菌，最佳的氧气浓度不同。例如，类芽胞杆菌的最佳氧气浓度是2%到 5%，而硫杆菌则需要更低的氧气浓度，只需0.1%左右。

四、营养物质

不同的厌氧菌对营养物质有不同的需求，需要在培养基中添加特定的营养物质。例如，缓慢生长的乳酸菌属需要含有复杂碳水化合物的基础培养基；而以氢气为电子供体的硫杆菌需要硫酸盐、硫酸化合物和羧酸等物质。

在厌氧菌的培养过程中，化学性质均匀的基础培养基、气氛控制、培养箱温度稳定、滤器等条件都要非常注重。同时，要注意隔绝氧气的干扰。因为在可以接受氧气与不能接受氧气环境之间，生长方式、代谢途径等都会有很大的差异。因此，如果想要深入了解厌氧菌的生长和代谢特点，必须进行有效的培养。

双歧杆菌的培养和分离

双歧杆菌是专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，双歧杆菌的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。

双歧杆菌的最适生长温度37℃~41℃，最低生长温度25℃~28℃，最高43℃~45℃。初始最适pH 6.5~7.0，在pH4.5~5.0或pH 8.0~8.5不生长。其细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。革兰氏阳性，不抗酸，不形成芽孢，不运动。双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地。双歧杆菌是人体内的正常生理性细菌，定殖于肠道内，是肠道的优势菌群，占婴儿消化道菌丛的92%。该菌与人体终生相伴，其数量的多少与人体健康密切相关，是目前公认的一类对机体健康有促进作用的代表性有益菌。该菌可以在肠粘膜表面形成一个生理性屏障，从而抵御伤寒沙门氏菌、致泻性大肠杆菌，痢疾致贺氏菌等病原菌的侵袭，保持机体肠道内正常的微生态平衡；能激活巨噬细胞的活性，增强机体细胞的免疫力；能合成B族维生素、烟酸和叶酸等多种维生素；能控制内毒素血症和防治便秘，预防贫血和佝偻病；可降低亚硝胺等致癌物前体的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羟自由基及脂质过氧化，具有抗衰老功能。

双歧杆菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。本实验介绍的是一种简便的试管培养法——亨盖特厌氧滚管技术该技术的优点是：预还原培养基制好后，可随时取用进行试验；任何时间观察或检查试管内的菌都不会干扰厌氧条件。

近年来兴起的一种新的RAPD等分子生物学技术对双歧杆菌进行基因指纹图谱的构建，分析不同双歧杆菌种间存在的同源性和多态性；RAPD技术也可用于双歧杆菌菌种鉴定及分型。一般来讲，我们都应用适合鉴定所有厌氧菌的方法，主要包括双歧杆菌特定酶的检测、乙酸、乳酸等有机酸的测定、糖发酵试验和其他相关指标等。

细菌富集培养实验报告

实验名称：细菌富集培养实验报告

一、实验目的

本实验旨在通过细菌富集培养的方法，对环境样品中的细菌进行富集，以便进一步研究和鉴定其中的菌种。

二、实验原理

1. 细菌富集培养

细菌富集培养是指通过一系列特殊的培养条件，使环境样品中的微生物菌种得到相对富集。富集培养的目的是增加待鉴定菌种的数量，提高其在培养基或培养条件上表现的优势特征。

2. 常用富集培养方法

（1）厌氧培养方法：采用无氧或微氧条件下进行培养，以富集厌氧菌。

（2）温度培养方法：调整培养温度，以增殖特定菌种。

（3）碳源选择性培养方法：选择性添加特定碳源，以利于某些菌种的富集。

（4）氮源限制培养方法：限制氮源的供给，以促进某些菌种的富集。

三、实验步骤

1. 采集样品：从待富集的环境中采集样品，如土壤、水源等。

2. 初步处理：对采集的样品进行初步处理，如振荡、稀释等，以分散菌落。 3. 富集培养：将处理过的样品接种于特定培养基中，在特定的富集条件下培养，如改变培养温度、添加特定碳源等。

4. 培养时间控制：根据所富集菌种的特性，选择不同的培养时间进行培养。

5. 鉴定富集菌种：通过观察和鉴定，确定富集培养得到的菌种。

四、实验结果

在本次实验中，我们从土壤样品中进行了细菌富集培养实验。首先，我们对土壤样品进行了初步处理，即将样品进行振荡分散。然后，将处理后的样品接种于含有特定培养基的培养皿中，在37摄氏度下进行培养。培养时间为48小时。经过观察，我们观察到了多个菌落的形成，并从中分离出了几株菌种。

五、讨论与分析

根据我们对菌落形态、生理特性和生化反应的观察和鉴定，我们初步确定了所富集培养得到的菌种。其中，有些菌种属于厌氧菌，适应于无氧条件下的培养。而其他菌种则是好氧菌，适应于氧气充足的环境下。此外，我们还注意到一些菌种对特定碳源和氮源显示出了较强的选择性需求。

在细菌富集培养实验中，我们采用了一系列特殊的培养条件来富集土壤样品中的细菌。通过此种方法，我们成功地得到了多个菌种，并初步进行了鉴定。然而，鉴定过程中仅仅有限地使用了形态学和生理特性来进行判断，对于一些形态相似的菌种还需进一步的分子生物学鉴定。