利用SRAP分子标记技术鉴定大白菜种子纯度

２１ ０ １年 ６月
Ｊｎ． ０ １ ｕ ｅ ２ １
热 带 农 业 科 学
Ｃ ＮＥ Ｅ Ｊ ＲＮＡＬ ＯＦ Ｔ ＨＩ Ｓ ＯＵ ＲＯＰ Ｃ Ｉ ＡＬ ＡＧＲＩ ＣＵＬ ＵＲ Ｔ Ｅ
第 ３ 卷第 ６期 １
Ｖｏ ． ，Ｎｏ６ １３１ ．
利用 Ｓ Ａ 分子标记技术鉴定大 白菜种子纯度① ＲＰ
对 于大 白菜杂 交种 传统 的纯 度检 验 多采用 田间鉴定
法 ，它 既 占用 土地 ．又 需耗 费较 长 的时 间 ，影 响种 子 的 及 时 销 售 本 试 验 利 用 Ｓ Ａ Ｒ Ｐ分 子 标 记 方 法 ． 进行 大 白菜一 代杂 种纯 度 的快速 鉴定 ．以使合 格种 子尽 快应 用 于生产
，
通 过
对 ５ ４对 Ｓ Ａ Ｒ Ｐ标 准 引 物 的 筛 选 ，获 得 了能 区 分 大 白菜 多 抗 ３及 其 亲 本 的 引 物 Ｍ ４ ／ ｍ Ｒ 采 ｈ ４ ／ ｍ Ｒ引 物 对 ｅＦ Ｅ ３ 。 ｌ ＦＥ３ ｅ
对 ５份 多 抗 ３系 列 商 品 种子 纯度 进 行 检 验 ，种 子 的 纯度 分 别 为 ７． ％ ２ 、８ ．％ ８ 和 ７％ ５ ５ 、７％ ０ ５ 、６％ ３ ．与 田间 种 植 纯
合 成 。 引 物 序 列 分 别 为 ：上 游 序 列 Ｍ ｌ 、Ｍ ２ 、 ｅ Ｆ ｅ Ｆ
Ｍ ３ 、Ｍ ４ 、Ｍ ５ 、Ｍ ６ ； 下 游 序 列 Ｅ Ｉ 、Ｅ ２ 、 ｅＦ ｅ Ｆ ｅＦ ｅ Ｆ ｍ Ｒ ｍ Ｒ
Ｅｍ Ｒ Ｅ ４ Ｅ Ｒ Ｅｍ Ｒ Ｅ Ｒ Ｅ Ｒ Ｅｍ Ｒ ＰＣ ３ ｍＲ ｍ５ ６ ｍ７ ｍ８ ９ Ｒ
严 慧玲 ② 闰树 成 ｚ 杨 慧 民 ） ） ③ 汲江 科 蒋 艳 霞 ｚ ） 】
００５ ： ５０ １ （ １河北省 农林科 学院经 济作物研 究所 河北石 家庄
２ 河 北冀蔬科技 有限公 司 河北石 家庄 ０ ０ ５ ） ５０ １
摘 要 以 大 白菜 品种 多 抗 ３ 其 父 母 本 为 研 究材 料 ，利 用 Ｓ Ａ （ 关序 列扩 增 多 态 性 ）分 子 标 记 方 法 及 ＲＰ 相
度 鉴 定 结 果 符 合 率 分 别 为 ９ ． ％ ９ ３ 、９ ． ％ ５ ５ 和 ９ ． ５ 。 说 明 利 用 Ｓ Ａ ４ ６ 、８ ． ％ ３ ２ 、９ ． ％ １２ ％ Ｒ Ｐ分 子 标 记 方 法 对 多 抗 ３大 白
菜 一 代 杂 种进 行 快 速 、准确 的纯 度 鉴定 是 可 行 的 关键词
分类号
大 白菜 ：Ｓ Ａ ＲＰ分 子 标 记 ： 品种 纯 度 ‘
￥ ３ ６４
Ｐ ｒｔ ｅｔｏ ｉｅｅ Ｃ ｂ ａ ｅ（ ｒｓｉ ａ ａ ｓｐ Ｐ ｋｎ ｎｉ ｕ ｉ Ｔ ｓ ｆＣｈｎ ｓ ａ ｂ ｇ Ｂ ａｓ ａ ｒｐ ｓ ． ｅ ｉｅ ｓ ） ｙ ｃ ｓ
Ｆ ａ ｉｔ ｓｂ ＲＡ ｒ ｅ ｌＶ ｒ ｉ ｙ Ｓ Ｐ Ｍａ ｋ ｒ ｅｅ
ｒ ｓ ｌ ｈｏ ｅ ｈ ｔＭ ｅ Ｆ Ｅｍ ３ ｃ ｎ ｄｓｉｇ ｉｈ ＦＩｈ ｂ ｄ ｆＣｈ ｎ ｓ ａ ｂ ｇ ｕ ｋ ｎ ３ ａ ｄ ｉ ａ ｅ ｔ． ｅ ｕｔ ｓ ｗ ｄ ｔ ａ ４ ／ ｓ Ｒ ａ ｉｔ ｕ ｓ ｙ ｒ ｓｏ ｉ ｅ ｅ ｃ ｂ ａ ｅｄ ｏ ａ ｇ ｎ ｔ ｐ ｒ ｎｓ ｎ ｉ ｓ Ｓｅ ｄ ｐ ｒｆｅ ｆｆ ｅ Ｃｈｉｅ ｅ ｃ ｂ ｇ ｕ ｋ ｎ ３ Ｆ１ｈ ｂ ｄ ｒ ｅ ｔｄ ｂ ｒｍ ｅ ａｒ ｅ Ｆ Ｅｍ ３ Ｔｈ ｅ ｕ ｉ ｓｏ ｖ ｉ ｉ ｎ ｓ ａ ｂａ ｅ ｄ ｏ ａ ｇ ｙ ｒ ｓｗｅ ｅ ｔｓｅ ｙ ｐ ｉ ｉ ｒｐ ｉｓＭ ４ ／ Ｒ． ｅ ｐ ｒｔ ｏ ｖ ｓ ａｅ Ｆ１ ｙ ｒｄ ｗａ ７ ．％ ， ７ ％ ， ８ ．％ ， ６ ％ ａ ７ ％ ｕｉ ｙ ｆｆ ｅ ｈ ｓ ｉ ｒ ｈ ｂ ｓ ｉ ｓ ５５ ２ ０５ ８ ｎｄ ３ ｂ Ｓ ｙ ＲＡＰ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｔｃ ｎ ｌｇ ，
Ｓ Ｒ和 Ａ Ｌ Ｓ Ｆ Ｐ等传 统 分 子标 记 方 法 。 目前 ．该 标 记 技 术 已用 于多种植 物 的遗 传 图谱构 建 、比较基 因组
① 基 金 项 目 ：河北 省 财 政 专项 （０ ９ ５０ ２ 。 ２０ ０ ５ ０ ）
是农 作物种 子质量 的最重 要指标之 一 ．只有纯度 达
全 ，进 行种 子质量 监控 和市 场管 理 ．防止 给生 产造 成 损 失和 保护 农 民利 益 ．均具 有 一 定 的 重要 意 义
反应 体 系 为 ：Ｄ Ａ模 板 １ ０ ｇ Ｎ ５ 、引 物 各 ３ ｇ ． ｎ ０ｎ 、０ ２
ｍ ｏ ／ Ｎ Ｐ 、 １×Ｐ ＲＢ ｆ ｅ ｍ ｌ Ｌｄ Ｔ ｓ Ｃ ｕ ｆ ｒ、２ ５ ｍ ｏ ／ ｇ １ 、 ． ｍ ｌ Ｌ Ｍ Ｃ ２
２ Ｈｅ ｅ ｉ ｕ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｉ ｔｄ Ｃ ｍ ａ ｙ ｈｊ ｚ ｕ ｎ ，Ｈｅ ｅ ５ ０ ｂ ｉＪｓ ｅ ｈ ｏｏｙ Ｌｍｉ ｏ ｐ ｎ ，Ｓ ｉａｈ ａ ｇ ｈ ｅ ｉ ｂ ｉ０ ０ ５ ） １
Ａｂ ｔａ ｔ Ｐ ｌｍ ｏ ｐ ｉ ｒｍｅ ａｒ ｅｅ ｓ ｌｃ ｅ ｏ ５ ＲＡＰ ｒｍｅ ａｒ ｈ ｏ ｇ ｉｅ ｅ ｃ ｂ ａ ｅ ｓｒ ｃ ｏ ｙ ｒ ｈ ｃ ｐ ｉ ｒｐ ｉｓｗ ｒ ｅｅ ｔｄ ｆ ｍ ４ Ｓ ｒ ｐ ｉ ｒｐ ｉｓｔｒ ｕ ｈ Ｃｈｎ ｓ ａ ｂ ｇ
学 、 质 鉴 定 和遗 传 多 样 性 分 析 等 ㈨ 冯 英 利 用 种 ＲＰ Ａ Ｄ分 子 标记 的方 法对 ５个 大 白菜 杂 交 品种 的种 子 纯度 进行 了鉴 定 Ｉ．田雷 等 利用 Ａ Ｌ ７ ］ Ｆ Ｐ分 子 标 记 的方 法对 ｌ ３个大 白菜材 料杂 交 种子 的纯 度 进行 了 鉴定 ［．而利 用 Ｓ Ａ ８ ］ Ｒ Ｐ标 记 技术 对 大 白菜种 子 纯 度 进行 快速 、 准确 的鉴定 未 见有报 道 。鉴定 种子纯 度
泳 系 统 采用 北 京 君 意 的测 序 电 泳槽 ．扩 增 产 物 用
供试 材料 为河 北省 农林 科学 院经 济作 物研 究所
６ 的变性 聚丙 烯 酰胺胶 电泳 检测 ．７ ％ ０ Ｗ恒功率 电泳
９ ｉ ．电泳后 银染 观察 。 ０ｍ ｎ
１ ２ ３ 田 间 种 植 鉴 定 分 析 ． ．
白菜 课 题 组 提 供 的 大 白菜 品 种 多 抗 ３父 母 本 多抗 ３ Ｐ 、多抗 ３ Ｐ ；５份 未经 加工 的商 品种 子 ，编 号 一１ 一２
分 别 为 ：多抗 ３ ３ 、多 抗 ３ ３ 、多 抗 ３ ３ 、多抗 —１ —９ —８
３ ２ 、多 抗 ３ ｌ —３ 一２
１ ２ 方 法 ．
８ ３ ，９ ．％ ，９ ．％ ａ ｄ ９ ．５ ， ｅｐｅ ｔｖ ｌ ９．％ ３２ ５５ ｎ １２ ％ ｒ ｓ ｃｉ ｅｙ．Ｓ ＲＡＰ ａ ａｙ ｉ ｏ ｌ ｅ ａ ｒ ｐ ｄ ａ ｄ ｒ ｌ ｂｅ ｍ ｅｈ ｄ ｔ ｎ ｌ ｓｓｃ ｕｄ ｂ ａ ｉ ｎ ｅｉ ｌ ｔ ｏ ｏ ａ
在河 北 省农林科 学 院经 济作 物研究 所试验 田内
将 大 白菜 品种 多抗 ３的 ５份 杂交 种 播 种 ５ ０株 多
抗３ 植物 学性 状 为 株高 ５ ￣６ ｍ ０ ０ｃ ．株展 ５ ｍ １ｃ ，叶
相 关 序 列扩 增 多态 性 （ｅ ｕ ｎ ｅ ｒｌｔ ｍ ｌ Ｓ ｑ ｅ ｃ －ｅ ｅ ａ ｐｉ ａｄ —
ｌ ｏ ｏｐ ｉ ｆ ｄ ｐｌｍ ｒｈｓ Ｓ Ａ ） 由 Ｌ 等 发 展 的一 种 新 ｅ ｙ ｍ． Ｒ Ｐ 是 ｉ 型的基 于 Ｐ Ｒ的标记技术 ．采用 一对 引物对 开放 阅 Ｃ 读 框 进 行 扩增 ［。 由于 Ｓ ｆ Ｉ ］ Ｒ Ｐ技 术 简 便 、 速 ．不 ｉ 快 需 预 知 物 种 的 序 列 信 息 ，故 而 优 于 Ｒ Ｌ 、 Ａ Ｄ Ｆ Ｐ ＲＰ 、
一
５ — ０
严 慧玲 等 利 用 Ｓ Ａ Ｒ Ｐ分 子标 记 技 术鉴 定 大 白菜种 子 纯度 到规 定 的要 求 ．才 能发 挥其 品种在 抗逆 性 、品质 和 产 量 等诸 多方 面 的优 良特性 。建立 快 速 、 确 、 准 实
用 的 大 白 菜 杂 交 种 纯 度 鉴 定 方 法 ． 对 保 证 种 子 安 ＳＡ Ｒ Ｐ标 准 引 物 由 上 海 生 物 ＿ 程 技 术 服 务 有 限 公 司 丁
１ ａ Ｔ ｑ酶 ，总体 积 为 ２ Ｌ Ｕ ０ ，不 足部 分用 ｄ ＨＯ补 ｄ２ 充 Ｐ Ｒ扩增 在 Ｂ ｏ ｅ ｒ 一 ｒ ｎ ｉ ｎ Ｃ Ｃ ｉ ｍ ｔ ａＴ ６ ａ ｄ ｅ ｔＰ Ｒ仪 上 进
行 ， 程 序 为 ： ９ ℃ 预 变 性 ３ｍ ｎ ４ 变 性 １ ｉ ， ４ ｉ ；９ ℃ ｎ ｍ
Ｙ ｉ ｇ’ Ｙ ｈ ｃ ｅ ｇ ＡＮ Ｈｕ ｌ ’ ｉ ｎ ＡＮ Ｓ ｕ ｈ ｎ Ｙ ＡＮＧ Ｈｕ ｍｉ圆 Ｊ Ｊａ ｇ ｅ ｉ ｎ Ｉ ｉ ｎ ｋ ＪＡＮＧ ａ ｘａ Ｉ Ｙ ｎ ｉ￣
（ Ｉｓｔ ｅｏ ｃｎｍ ｃＣｏ ｓ Ｈ ｂｉＡ ａｅ ｙ ｏ Ａ ｒ ｕ ｕｅａ ｄＦ ｒｓｙ Ｓｉ ｃｓ １ ｎｔｕ ｆＥ ｏｏ ｉ ｒｐ， ｅｅ ｃｄｍ ｆ ｇ ｃｌ ｒ ｎ ｏ ｔ ｃ ｎｅ， ｉｔ ｉ ｔ ｅｒ ｅ Ｓ ￣ａｈ ａｇ ｅｅ ００ ５ ； ｈ ｉ ｕｎ，Ｈ ｂｉ ５０ ｚ １
收 稿 Ｅ 期 ：２ １ ４ ２ ｌ ０ 卜０ — ５；责 任 编 辑／ 小 玲 ；编 辑 部 Ｅ ｍ ｉ ：ｒ ｎ ￣ ６ ． ｏ 。 古 － ａ ｌ ｄ ｋ １ ３ｃ ｍ
② 严 慧 玲 （９８ ） １７ ￣ ，女 ，湖北 武 汉 人 ，博 士 。
③ 通 讯 作 者 。Ｅ ｍ ｉ ：ｙ ｈ ｈ ０４ １６ ｃｍ － ａ ｌ ｓ ｃ ２０ ＠ ２ ．ｏ 。
ｄｏ ａｇ １ｈ ｂ ｄ ｈ ｍ ｕ ｋｎ ３Ｆ ｙ ｒ ｓａｄｉ ｒ ｓ ｙＳ ＡＰｆ ｑｅｃ— ｌ ｄａ ｐｉ ｄｐ ｌ ｒ ｉ ）ｍａ ｅｓ Ｔ ｅ ｉ ｔｐ ｎ ｓ ｒ￣ ｉ ｆ ｙ ｐ ｓ ｒ ｒ． ｈ ｋ
ｔｓ ｔｅｐ ｒ ｆ ｈｎ ｓ ａ ｂ ｇ ｕ ｋ ｎ ３ ｅ ｔ ｕｉ ｏ ｉｅｅｃｂ ａ ｅｄ ｏ ａ ｇ ． ｈ ｙ ｔ Ｃ
Ｋｅｗ ｒｓ Ｃ ｉｅｅ ａｂｇ Ｓ Ａ ｓｑ ｅｃ－ ｌ ｅ ｌ ｅ ｏｙ ｏｐ ｉ ） ｐｒｙｏ ｅ ｙ ｏｄ ｈｎｓ ｂ ａｅ； Ｒ Ｐ（ ｕｎ ｅ ｅａ ｄａ ｉ ｄ ｌ ｒｈｓ ； ｕｉ ｆ ｅｄ ｃ ｅ ｒ ｔ ｍｐ ｆ ｐ ｍ ｉ ｍ ｔ ｓ
３ ℃ 退 火 １ｍ ｎ ７ ℃ 延 伸 １５ｍ ｎ ５个 循 环 ； ５ ｉ． ２ ． ｉ ， ９ ℃ 变 性 ｌｍ ｎ ０ 退 火 １ｍ ｎ ２ 延 伸 １５ ４ ｉ ．５ ℃ ｉ ，７ ℃ ．
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
ｍ ｎ ５个 循 环 ：７ ℃ 延 伸 １ ｉ ；８Ｃ保 存 。 电 ｉ 。３ ２ ０ｍ ｎ ０
、
ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ ｅ ｐ ｃｉ ｌ．Ｔｈ ｃ ｏ ｄ ｎ ａｅ ｂ ｔ ｅ ＲＡ Ｐ ｔｃ ｎ ｌｇ ｎ ｅｄ ｐ ａ ｔ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔｏ ｓ ９ ．％ ｖ ｅ ａ ｃ ｒ ａ ｔｒ ｔ ｅｗｅ ｎ Ｓ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ａ ｄ ｆ ｌ— ｌｎ ｉ ｉｅ ｔｆ ａｉｎ ｗａ ４６ ｉ ｎｇ ｉ