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酚硫酸法测定灵芝多糖的研究

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󰀁第5卷　第1期2006年3月 太原师范学院学报(自然科学版)JOURNALOFTAIYUANNORMALUNIVERSITY(NaturalScienceEdition)　Vol.5No.1　Mar.2006

酚硫酸法测定灵芝多糖的研究

宁慧青

(山西科伟通新技术发展有限公司,山西太原030006)

〔摘要〕　目的:从灵芝中提取多糖,并测定其含量.方法:灵芝多糖的提取一般方法为醇析沉淀法,本实验为找出该方法的最佳工艺条件,结果表明:灵芝多糖提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度85%,乙醇:料液为2∶1,pH为6.5.结果:用酚-硫酸比色法测定多糖的含量,测得灵芝多糖含量6.55%,平均回收率99.05%,RSD=1.02%(n=3).结论:该法操作简便,重现性好,实验结果令人满意.〔关键词〕　灵芝多糖;提取;含量测定〔文章编号〕　1672-2027(2006)01-0105-03　〔中图分类号〕　O655　〔文献标识码〕　A

多糖是醛糖和酮糖通过糖苷缩合而成的天然多聚体,广泛存在于高等植物、海藻和微生物中,是生物有机体基本组成成分,与维持生命的许多重要功能密切相关.近年来,多糖作为广谱免疫调节剂,引起了人们的

极大兴趣.灵芝多糖就是其中重要的一种.灵芝子实体多糖和发酵过程中产生的胞内和胞外多糖都是有效多

糖[1].现代医药学研究证明了灵芝所含的主要有效成分是高分子多糖体,而这种多糖体可以显著地促进抗体

产生和增强免疫功能[2].作为一种生物药物,灵芝多糖的生产一直被科学工作者关注.本实验运用醇析法提

取灵芝多糖,采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定,取得了令人满意的结果.方法灵敏度高,重现性

好、干扰小,显色稳定,可作为其质量控制的方法,同时为其进一步研究奠定了基础.本实验采用液体深沉发

酵方式获得灵芝发酵液以提取多糖,生产周期大大缩短,且生产成本也有降低,同时,处理过程也有所简化,有利于规模生产.

1　材料

1.1　试验菌种

灵芝菌种(山西农科院真菌实验室提供,经王云副教授鉴定).1.2　试验药品

无水葡萄糖,苯酚,硫酸,盐酸,四氯化碳,正丁醇等均为分析纯;乙醇为工业级食用酒精.

1.3　试验仪器

721分光光度计,电子天平,恒温干燥箱,恒温水浴锅,离心机.

2　方法

2.1　多糖浓度测定

苯酚——硫酸法,以葡萄糖为标准品.2.1.1　原理

苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖,多糖中的己糖,糖醛酸(或甲苯衍生物)起显色反应,己糖在490处(戊

糖在480处)有最大吸收,吸收值与糖浓度呈线性关系.

2.1.2　样品溶液的制备精密称取60℃干燥至恒重的灵芝菌种提取物0.2g,用85%乙醇15ml于60℃浸提30min,重复两

󰀁收稿日期:2005-11-03 作者简介:宁慧青(1969-),女,河北唐山人,山西科伟通新技术发展有限公司工程师,主要从事技术管理工作.次,以去除单糖、双糖、低聚糖等成分.将处理后的样品加蒸馏水再于沸水浴中提取1hr,取出冷却后定容至100ml备用.

2.1.3　标准曲线绘制

准确称取分析纯葡萄糖40mg,用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中,其糖浓度为40󰀁g/ml.分别吸取0,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8,2.0ml的糖溶液于预先洗干净的试管中,各补水到2ml,然后加入1

ml6%的苯酚溶液,振荡.再加入5ml浓硫酸(具体的加量见于表1),迅速振荡摇匀,置25℃水浴锅中恒温

30min,取出,于490nm下测定其光密度.以水做空白,后以多糖的微克数为横坐标,以光密度为纵坐标,绘

制标准曲线.2.1.4　样品中多糖含量的测定[3]

吸取样品液1.0ml,按上述步骤操作,测光密度,以标准曲线计算其多糖含量.表1　测定结果Table1　Resultofmesuration

编号0123456789标准葡萄糖00.40.60.81.01.21.41.61.82.0蒸馏水2.01.61.41.21.00.80.60.40.206%苯酚1.01.01.01.01.01.01.01.01.01.0浓硫酸5.05.05.05.05.05.05.05.05.05.0糖的微克数0162432404856647281光密度0.0570.1140.1700.2270.2640.2960.3700.4260.473

图1　不同浓度的OD值-标准曲线Fig.1　ODindifferentdetermination-standarlcurvy2.1.5　换算系数的测定精确量取供试样品溶液1ml,加水至

10ml,精确吸取1ml,照“标准曲线制备”项下

方法测定吸收度,从回归方程求出多糖供试液

中葡萄糖浓度C,按下式计算换算系数f=W/

CD,式中:W为样品多糖重量(󰀁g),C为多糖

液中葡萄糖的浓度(󰀁g/ml),D为多糖的稀释

倍数,测得f=1.9925.2.1.6　样品测定

分别精确称取样品0.200g、0.201g、

0.203g,按样品溶液制备的方法,定容到

250ml容量瓶中,摇匀.然后精确吸取样品液1ml按测定标准曲线同样方法测吸光度值,按

下式计算多糖含量:

多糖含量%=CDf/W×100%式中:C为样品溶液的葡萄糖的浓度(󰀁g/ml),D为样品溶液的稀释倍数,f为换算系数,W为样品的重

量(󰀁g),测得平均结果为6.55%,RSD=1.05%(n=3).

2.1.7　回收率的测定

精密量取D(+)葡萄糖对照品一定量,加入到一定量用85%乙醇处理过的已知试样中,按样品测定同样的方法进行测定,按测定标准曲线同样方法测其吸光度值,计算多糖含量,平均回收率为99.05%,RSD=1.02%(n=3).2.1.8　讨论1)酚硫酸法是利用单糖、多糖及它们的衍生物与苯酚-硫酸试剂反应生成橙黄色溶液[4],在490nm波

长有特征吸收,而进行含量测定的,此法操作简单,不需要水解,如果条件控制得当,灵敏度高,重现性、选择性、稳定性较好.106太原师范学院学报(自然科学版) 第5卷 2)为了消除单糖对测定的影响,本法在测定之前先用85%乙醇进行沉淀处理,实验表明,经该法沉淀

处理后,可测得多糖的含量.

2.2　胞外多糖提取工艺优化方法[5]

一般而言,胞外多糖的提取多为醇析沉淀法.本

实验根据现有的资料,本实验就乙醇浓度,乙醇与料

液体积比,pH三个因素利用正交试验法,对其进行

研究.因素水平表见表2.表2　影响灵芝多糖提取的因素水平表Table2　Effectryfactorfromgandermapolysaccharidesdrawn水平因素A乙醇浓度(%)BpHC乙醇:料液D误差项

1955.51∶1

2906.02∶13856.53∶1

3　结果与分析

3.1　胞外多糖提取工艺的优化结果本实验对试验结果进行极差分析,初步得出影响多糖提取的主次顺序为C>B>A,其中误差项较小,表

明试验还是比较成功的.结果表明,灵芝胞外多糖提取工艺的最佳组合为提取的醇浓为85%,pH为6.5,乙

醇:料液为2∶1(体积比).

3.2　其他影响多糖提取的因素3.2.1　提取次数的影响

经对比试验,第一次提取时提取率最高,达55%,但仍不完全,因此要进行二次提取.经两次提取,多糖

的得率可高达67%,而进行第三次提取,得率为69%.因此,可以认为第三次提取是没有必要的.本试验中,

只进行二次提取.3.2.2　是否浓缩对多糖提取的影响

资料表明,大多研究者都认为预先对发酵液进行浓缩会提高多糖提取效率.为了验证这个说法,我们进

行了实验.本实验用加热浓缩法进行浓缩,温度不超过90℃,否则多糖会变性.浓缩为原体积的1/3后进行醇析.结果表明,浓缩和不浓缩对多糖提取的影响是很显著的.本实验进行了几组对比试验,浓缩后的平均提

取率为64%,不浓缩时,提取率为58%.因此,我们认为,多糖提取时,要预先对发酵液进行浓缩.

参考文献:[1]　中国科学院新疆生物沙漠研究所,新疆药物植物志(第3册)[M].新疆:新疆人民出版社,1984[2]　中华本草编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999[3]　贡济宇.酚硫酸法测定灵芝多糖含量的实验研究[J].长春中医学院学报,2002,1(18):45[4]　王　云,王　洋.灵芝孢子粉免疫调节作用的研究[J].中国食用菌,2002,21(1):33-34[5]　林耀辉.灵芝GL8801液体发酵胞外多糖的提取和结构研究[M].福州大学学报,1997,(2):82-86TheResearchofGanodermaPolysaccharides'sDetermination

NingHuiqing(ShanxiKeweitongNew-Tech.DevelopmentCo.,Ltd,Taiyuan030006,China) 〔Abstract〕　DrawmanyPolysaccharidesfromGanodermaLucidum,determineitscontent.

Method:Theabstractiongeneralmethodofthepolysaccharideoftheglossyganodermaanalyses

andprecipitatethelaw,thisexperiment,inordertofindoutthebestprocessconditionsofthismethodforthealcohol,theresultshows:Thebestprocessconditionsthatthepolysaccharideof

theglossyganodermaisdrawnare:Density85%ofethanol,ethanol:Thematerialliquidis2:1,

pHis6.5.UsewaterproposealcohollawdrawGanodermaPolysaccharides,determinemanycontentofPolysaccharideswithphenol-sulphuricacidthancolorlaw.Result:Examine6.55%of

contentofPolysaccharides,99.05%ofrateofrecoveryonaverage,RSD=1.02%(n=3).

Conclusion:Thislawiseasyandsimpletohandle,thereappearingisgood,theexperimentalresult

issatisfactory.〔Keywords〕　Ganodermapolysaccharides;draw;determine107　第1期 宁慧青:酚硫酸法测定灵芝多糖的研究

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灵芝多糖含量检测条件及其提取工艺的优化

灵芝多糖含量检测条件及其提取工艺的优化

灵芝多糖含量检测条件及其提取工艺的优化

王新

【期刊名称】《安徽农业科学》

【年(卷),期】2007(035)014

【摘 要】优化了苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量的显色条件,并且通过单因素和正交试验确定了灵芝多糖的最佳提取工艺条件.结果表明:苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量的条件为最大吸收波长490 nm,显色时间20min,显色温度100℃;灵芝多糖的最佳提取工艺条件为提取温度80℃,提取时间2.5 h,液料比50ml/g,在此条件下灵芝多糖的提取率为2.58%.

【总页数】3页(P4281-4282,4285)

【作 者】王新

【作者单位】江苏大学食品与生物工程学院,江苏镇江,212013

【正文语种】中 文

【中图分类】O629.12

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预胶化淀粉对灵芝多糖测定的影响及消除方法的研究

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钱亮亮;庄海宁;周静

【期刊名称】《中国食品添加剂》

【年(卷),期】2017(000)004

【摘 要】目的 分析苯酚-硫酸法测定灵芝多糖时配方中的预胶化淀粉是否干扰结果并消除这种影响.方法 采用苯酚-硫酸比色法测定酶解预胶化淀粉前后灵芝多糖含量,并考察了该方法的精密度,重复性、稳定性和回收率.结果 灵芝多糖的测定结果会受到预胶化淀粉的干扰,经过酶解预胶化淀粉后,供试品a、b、c、d中灵芝多糖的含量分别为6.589％,4.993％,3.346％和1.654％.结论 通过酶解法可消除预胶化淀粉在灵芝多糖测定过程中的干扰,且该方法结果准确,实验方法可靠.

【总页数】5页(P95-99)

【作 者】钱亮亮;庄海宁;周静

【作者单位】连云港市产品质量监督检验中心,连云港222006;上海市农业科学院食用菌研究所,上海201403;连云港市产品质量监督检验中心,连云港222006

【正文语种】中 文

【中图分类】TS202.1;S567.3+1

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灵芝生长过程中灵芝多糖含量变化规律研究

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韦会平;李学刚;蒲盛才;刘正宇;刘燕琴

【期刊名称】《中医药学报》

【年(卷),期】2006(034)005

【摘 要】目的:对灵芝人工袋料栽培生长过程中灵芝多糖的含量变化情况进行跟踪测量,研究灵芝多糖在灵芝生长过程中的含量变化规律.方法:采用硫酸-苯酚法对不同生育时期的灵芝培养基和子实体样品中灵芝多糖的含量进行测定,比较不同生育时期灵芝多糖含量的变化规律.结果:在灵芝培养基中,随着灵芝菌丝的生长和成熟,灵芝多糖的含量逐步增加,直到开伞期达到最高值,从孢子弹射期后,灵芝多糖含量急剧下降.在灵芝子实体中,从灵芝现蕾开始,灵芝多糖含量逐步增加,到孢子弹射前达到最高值,孢子弹射后,含量急剧下降.从子实体和培养基中灵芝多糖含量的对比情况来看,在孢子弹射前,子实体中灵芝多糖含量远高于培养基;但在孢子弹射后,子实体和培养基中灵芝多糖含量均急剧下降,二者的灵芝多糖含量没有极显著差异.结论:在灵芝生产中,应该选择在开伞期后、孢子弹射前采收子实体为宜.这时采收的灵芝子实体产品灵芝多糖含量最高,品质最好.将灵芝采收后的培养基用于灵芝多糖的提取,进行合理的开发利用,可以大力提高灵芝生产的经济效益.

【总页数】3页(P10-12)

【作 者】韦会平;李学刚;蒲盛才;刘正宇;刘燕琴

【作者单位】西南大学药用资源化学研究所,四川,重庆,400715;药物种植研究所,四川,重庆,408435;药物种植研究所,四川,重庆,408435;西南大学药用资源化学研究所,四川,重庆,400715;西南大学药用资源化学研究所,四川,重庆,400715;西南大学药用资源化学研究所,四川,重庆,400715

【正文语种】中 文

【中图分类】R284.1

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灵芝多糖含量测定显色方法的研究

灵芝多糖含量测定显色方法的研究

黑龙江医药ＨｅｉＬｏｎｇＪｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ＶＯ１．１５　ＮＯ．５　２００２　２．３　对比试验　取４批果糖二磷酸钠注射液样品分别用中和法　和酶法对其进行含量测定（取平均值），测定结果见　表２。　表２样品测定结果（标示含量　ｎ＝３）　从上表中可以看出，以上两种含量测定的方法　无显著差异。　３讨论　３．１　果糖二磷酸钠可形成四种钠盐，在注射液中主　要以二钠盐形式存在，在正常工艺条件下，用中和法　测其含量与酶法对比并无明显差异，但与酶法相比，　中和法专属性差，由于ＦＤＰ注射液易水解，此法不　适用于返工生产过程中的中间体控制。　３．２采用中和法测定ＦＤＰ的含量，方法简便易行，　比较适用于生产过程中中间体含量的测定。　收稿日期：２００２—０３一】７　

灵芝多糖含量测定显色方法的研究　

范青青　薛淑秋　哈尔滨市医药公司（１５００１０）　哈尔滨市中药三厂　

摘要　目的　优选出了灵芝多糖含量测定时显色条件的组合。方法　通过正交试验优选出了　灵芝多糖含量测定时显色条件的组合。结果：灵芝多糖含量测定时显色条件的组合为Ａ。Ｂ。Ｃ　，即　５　苯酚１．６ｍｌ，硫酸７．５ｍｌ，反应时间２６分钟。　关键词灵芝多糖；正交试验　Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　Ｌｕｃｉｄｕｍ　Ｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　

Ｆａｎ　Ｑｉｎｇｑｉｎｇ，ｅｔ　ａ１．Ｈａｒｂｉｎ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｃｏｍｐａｎｙ（１５００１０）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　Ｌｕｃｉｄｕｍ　Ｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　Ｌｕｃｉｄｕｍ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｂｙ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｙｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｉｔ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｗｉｔｈ　５　ｐｈｅｎｏｌ　１．　６ｍｌ　Ａ３　ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ　ａｃｉｄ　７．５ｍｌ　Ｂ３　ａｎｄ　ｔｈｅ　２６　ｍｉｎｕｔｅｓ　Ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　Ｃ２　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｉｓ　ａｔ　ｉｔｓ　ｂｅｓｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　Ｌｕｃｉｄｕｍ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈ　ａｒｉｄｅ　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔｓ．