慢性不可预知性温和刺激对雄性大鼠生殖系统的影响

４４０　中国计划生育学杂志２０１５年７月第２３卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｆａｒｏ　Ｐｌａｎｎ，Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．７，Ｊｕｌｙ　２０１５　

●　基础研究　

慢性不可预知性温和刺激对雄性大鼠生殖系统的影响　

张　莹　王尚明　张　斌　王丽丽　石翠格　张树成　

国家卫生计生委科学技术研究所（北京，１０００８１）　

摘要　目的：研究慢性不可预知性温和刺激对雄性大鼠生殖系统的影响。方法：将ＳＤ雄性大鼠随机分为正常对照　

组和模型组。模型组大鼠每天给予多种低强度刺激，连续２８　ｄ，构建模型。称量大鼠体重、睾丸和附睾重量。取出附　

睾计数精子、观察精子活率。ＨＥ染色观察大鼠睾丸组织结构。结果：与正常对照组相比，模型大鼠体重、睾九重量、　附睾重量显著减少，精子活率显著下降，ａ、ｃ级精子所占比例明显下降；组织形态学与对照组相比，模型组大鼠睾丸组　

织受到明显损伤。结论：慢性不可预知性温和刺激可损伤雄性大鼠的生殖功能。　

关键词慢性不可预知性温和刺激；睾丸；附睾；精子计数；精子活率；大鼠　

ｄｏｉ：１０．３９６ＳＩ／Ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—８１８９．２０１５．０６　

Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｕｎｐｒｅｄｉｃｔａｂｌｅ　ｍｉｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ　ｏｎ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　ｍａｌｅ　ｒａｔｓ　ＺＨＡＮＧ　Ｙｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｓｈａｎｇｍｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｂｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｌｉｌｉ，ＳＨＩ　Ｃｕｉｇｅ，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈｕｃｈｅｎｇ　

Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｆａｍｉｌｙ　Ｐｌａｎｎｉｎｇ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８１　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＮＧ　Ｓｈｕｃｈｅｎｇ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｎｒｉｆｐ＠２６３．ｎｅｔ　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｕｎｐｒｅｄｉｃｔａｂｌｅ　ｍｉｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ（ＵＣＭＳ）ｏｎ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　

ｍａ［ｅ　ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＳＰＦ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ＵＣＭＳ　ｇｒｏｕｐ．Ｒａｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＵＣＭＳ　ｇｒｏｕｐ　

ｗｅｒｅ　ｇｉｖｅｎ　２８　ｄａｙｓ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｕｎｐｒｅｄｉｃｔａｂｌｅ　ｍｉｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｎｏｒｍａｌ　ｆｅｄ．Ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　

ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｅｓｔｉｓ　ａｎｄ　ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｐｅｒｍ，ｓｐｅｒｍ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｒｍ　ａｃ—　ｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ．ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｗａｓ　ｕｔｉｌｉｚｅｄ　ｆｏｒ　ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｒａｔ　ｔｅｓｔｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　

ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｅｓｔｉｓ　ａｎｄ　ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ＵＣＭＳ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｄｅ—　

ｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｓｐｅｒｍ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｇｒａｄｅ　ａ　ａｎｄ　Ｃ　ｓｐｅｒｍ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎ　ＵＣＭＳ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｅｓｔｉｓ　ｉｎ　ＵＣＭＳ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｄａｍａｇｅｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｃｈｒｏｎｉｃ　

ｕｎｐｒｅｄｉｃｔａｂｌｅ　ｍｉｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｈａｒｍｆｕｌ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｌｅ　ｒａｔｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｃｈｒｏｎｉｃ　ｕｎｐｒｅｄｉｃｔａｂｌｅ　ｍｉｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ；Ｔｅｓｔｉｓ；Ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ；Ｓｐｅｒｍ　ｃｏｕｎｔ；Ｓｐｅｒｍ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ；Ｒａｔ　

近年来，由于环境污染、电子辐射、心理影响等　

各种因素致使男性的生殖健康受到严重威胁口　］，男　

女因素导致的不育比例已由３：７上升到５：５。男　

性不育以精子数量减少、精液质量下降等问题最为　

常见，其直接导致人类生殖能力下降。许多临床研　

究表明，抑郁、焦虑等心理疾病可导致男性生育能力　

降低和性功能障碍　～。本研究应用慢性不可预知性　

温和应激（ＣＵＭＳ）抑郁模型，观察慢性不可预知性　

基金项目：国家重点基础研究发展计划（２０１０ＣＢ５３０４０３）；首都医科　大学神经生物学国家重点学科开放课题（ＣＭＵＮＥＵＲＯ一　２Ｏ１４０３）　收稿日期：２０１５－０４—１３修回日期：２０１５－０４—２０　通讯作者：ｎｒｉｆｐ＠２６３．ｎｅｔ　●　

温和刺激对大鼠性腺重量、精子数量和精液质量的　

影响，从而了解抑郁情绪与雄性大鼠生殖力的关联　

性。　

１材料与方法　

１．１实验动物　

清洁级ＳＤ雄性大鼠１４只，体重１８０～２２０　ｇ，　

由北京维通利华实验动物中心提供。ＳＰＦ级动物　

实验室恒温、恒湿、屏障环境饲养观察适应１周后，　

动物随机分为２组，即正常对照组（７只）和慢性不　

可预见性应激组（模型组，７只）。　

１．

２主要试剂和仪器　中国计划生育学杂志２Ｏ１５年７月第２３卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｆａｍ　Ｐｌａｎｎ，Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．７，Ｊｕｌｙ　２０１５　４４１　

ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液，Ｗｉｎｃｅｎｔ公司生产，批号　

３１９０８０一ｃｌ；显微镜，Ｏｌｙｍｐｕｓ公司，日本。　

１．３应激动物模型建立　

模型组大鼠单笼饲养，接受２８　ｄ各种未预知的　

刺激。参照Ｓｔａｔｈｉｓ［５］的方法，刺激因子包括：禁食　

（２４　ｈ）、禁水（２４　ｈ）、通宵照明剥夺睡眠加噪音、冰　

水游泳（４℃，５　ｍｉｎ）、夹尾（１　ｍｉｎ）、束缚（２　ｈ）、潮湿　

垫料加鼠笼倾斜。每天随机安排１种刺激，同种刺　

激不连续出现。　

１．４精子计数　

取出附睾计数精子，观察其活动度。精子分析　

方法为双侧附睾称重后，置于２　ｍｌ　ＤＭＥＭ培养液　

（３７℃预温）的小平皿中，用眼科剪剪碎，吸管吹打，　

于显微镜下观察计数　］。　

１．５病理学观察　

大鼠一侧睾丸使用多聚甲醛固定做常规病理学　切片、ＨＥ染色，显微镜观察睾丸组织病理学改变。　

１．６统计分析　

所有数据以均数±标准差（　±Ｓ）表示，采用　

ＳＰＳＳ　ｌ１．５软件分析，实验组与对照组比较采用ｔ检　

验，Ｐｄ０．０５表示差异有统计学意义。　

２结果　

２．１大鼠体重、睾丸、附睾质量变化　

由表１可见，大鼠接受２８　ｄ不同刺激后，体重、　

睾丸和附睾重量较正常对照组相比均显著降低（Ｐ　

ｄ０．０５）。　

２．２大鼠附睾精子计数和精子活动力变化　

由表２可见，与正常对照组相比，ＣＵＭＳ组大　

鼠精子活率、ａ级和Ｃ级精子所占比例下降（Ｐ＜　

０．０５），精子总数两组差异无统计学意义（Ｐ＞　

０．０５）。　

表１　两组大鼠体重、睾丸、附睾质量的变化比较（ｇ，５Ｃ±Ｓ）　

２．３大鼠睾丸组织形态的变化　

ＨＥ染色结果显示（图１），正常对照组大鼠睾丸　

组织曲细精管排列整齐，生精上皮基膜完整，可见精　

原细胞及不同发育阶段的精母细胞呈辐射状排列５　

～７层，层次清楚，排列整齐。曲细精管之间可见疏　

松的间质组织，富含血管及淋巴管（图１Ａ和１Ｂ）。　

模型组大鼠睾丸组织曲细精管明显萎缩，生精上皮　

萎缩，生精细胞层数减少，排列紊乱，显示睾丸组织　

受到明显损伤（图１Ｃ和１Ｄ）。　

３讨论　

随着现代生活节奏的加快，各种压力和不良心　理刺激因素日渐增多，不良生活环境及不定期的应　

激性事件频繁出现造成人们产生抑郁、焦虑等心理　

疾病。慢性不可预知性温和应激模型是复合型应激　

模型，最早于２０世纪８０年代由Ｋａｔｚ提出，其使用　

多种刺激方式，强度各异，每种刺激随机且不连续出　

现，保证了应激刺激的多变性和不可预测性，真实有　

效的模拟人们在现实生活中遭遇的各种负性刺激，　

从而可以建立一种接近于人类慢性社会心理应激所　

致抑郁症的动物模型，诱导大鼠产生实验性抑郁症　

状，具有很好的信度和效度。本研究首次在慢性不　

可预知性温和应激抑郁模型上研究慢性刺激对雄性　

大鼠生殖功能的影响。