玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响

文章编号:100829926(2006)01-0030-03 中图分类号:R965.1 文献标识码:A

玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响①

尚雁君②,李医明③,蒋山好③,朱大元③,魏善建,焦炳华,黄才国

(②中国人民解放军第二军医大学　基础医学部生物化学和分子生物学教研室　上海　200433;③中科院上海药物研究所　上海　201203)

摘　要:目的　探讨玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响及可能的作用机理。方法　从玄参根中分离提取苯丙素苷成分Acteoside,采用次黄嘌呤造成小鼠高尿酸血症,观察Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响,并进一步从体外观察Acteoside对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。结果　Acteoside能显著降低高尿酸血症小鼠体内的尿酸水平,体外实验显示其对黄嘌呤氧化酶有明显的抑制作用,IC50为12.25μg・ml-1。结论　玄参中Acteoside在小鼠高尿酸血症中的降尿酸作用可能与其抑制黄嘌呤氧化酶作用有关。关键词:玄参;Acteoside;黄嘌呤氧化酶;高尿酸血症

TheEffectofPhenypropanoidGlycosidesActeosideofScrophularianingpoensison

mousehyperuricemia①

SHANGYan2Jun②,LIYi2Ming③,JIANGSan2Hao③,ZHUDa2Yuan③,WEIShan2JianJIAOBin2Hua,HUANGCai2Guo(②DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,CollegeofBasicMedicalSciences,SecondMilitaryMedicalUni2

versity,Shanghai　200433　China)

(③ShanghaiInstituteofMateriaMedica,Shanghai　201203　China)

ABSTRACT:AimTostudytheeffectofacteosideofScrophularianingpoensisonthemousehyperuricemiainvivoand

itspossiblemechanisms.MethodsActeosidewasextractedfromrootsofScrophularianingpoensis.Amousehyper2

uricemiamodelwasestablishedbyusinghypoxanthineandtheeffectofacteosideonhyperuricemiainmousewasobserved

beforetheinhibitioneffectofacteosideonxanthineoxidaseinvitrowasfurtherstudied.ResultsActeosidecouldreduce

thelevelofuricacidinhyperuricemiamiceandsignificantlyinhibitthexanthineoxdiaseinvitro(IC50is12.25μg・

ml-1).ConclusionThepreventionandcurativeeffectofacteosidefromScrophularianingpoensisisrelatedtoitsinhibi2

tionofxanthineoxdiase.

KEYWORDS:Scrophularianingpoensis;Acteoside;Xanthineoxidase;Hyperuricemia

痛风是一种临床综合征,系遗传性和(或)获得

性引起的尿酸排泄减少和(或)嘌呤代谢障碍,临床

表现为高尿酸血症及尿酸盐结晶沉淀所致的特征性

急性关节炎。痛风的临床治疗主要有抑制尿酸生

成,促进尿酸排泄和抗炎镇痛[1]。别嘌呤醇是唯一

临床上使用的黄嘌呤氧化酶抑制剂,但别嘌呤醇有

较为严重的不良反应如:肝炎、超敏变态反应等一定

程度上限制了其安全使用,从天然植物中寻找抗痛

风和高尿酸血症的药物具有一定的现实意义。本研

究是在玄参的化学成分研究的基础上,进一步探讨

玄参中的苯丙素苷成分Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响以及可能的作用机理。

1　材料

1.1　动物　昆明种小鼠,♂,体重(19±1)g,[第二军医大学实验动物中心,动物合格证号:SCXK(沪

2002-0006)使用前在实验室1周适应环境。在整个实验过程中自由饮水、进食]。

1.2　仪器和试剂　HITACHI276002020全自动生化分析装置(日本日立公司);CECIL22021分光光度计

(日本日立公司);次黄嘌呤(上海国药集团化学试剂有限公司);Xanthine(黄嘌呤),Allopurinol(别嘌呤・03・　解放军药学学报　第22卷第1期 玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响 尚雁君

①②作者简介:尚雁君(1980-),女,山东济南人,在读硕士研究生。研究方向:从天然植物和海洋微生物中筛选治疗痛风的活性物质。Tel:(021)25070305-8020;E-mail:syjsmmu@163.com 通讯作者:黄才国(1965-),男,浙江象山人,硕士,副教授。研究方向:天然药物。Tel:(021)25070305-8020基金项目:国家自然科学基金课题,NO.29632050醇),NitroBlueBtetrazolium(四唑硝基氮蓝),Car2

boxymethyl2cellulosesodiumsalt(羧甲基纤维素钠)(均为Sigma产品);XanthineOxidase(黄嘌呤氧化酶)(购

自Roche公司)。

2　方法

2.1　玄参中苯丙素苷的分离提取　利用大孔吸附树脂SephadexLH20柱,以及硅胶柱层析的方法,从

玄参根中分得4个苯丙素苷成分:Angroside(Ⅰ);

Cistanoside(Ⅱ),Acteoside(Ⅲ),Decaffeoylacteoside(Ⅳ),其中化合物Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ为首次从玄参中分离[2],经过预实验,采用Acteoside进行药理实验。

2.2　别嘌呤醇和次黄嘌呤溶液的配制　精密称取别嘌呤醇及次黄嘌呤。分别用pH7.28mmol・L-1的

PBS和0.8%CNC2Na配制成混悬液,其浓度分别为

0.1、40mg・ml-1。

2.3　高尿酸血症模型的建立　参照文献[3],选用次黄嘌呤为造模试剂,增高血清尿酸水平造成小鼠高

尿酸血症模型。

2.4　实验分组和给药　将小鼠随机进行分组,每组

10只,正常实验分为5组,即生理氯化钠溶液组,

Acteoside高、中、低剂量组及别嘌呤醇阳性对照组。模型实验分为6组,即生理氯化钠溶液组,高尿酸血

症空白组、Acteoside高、中、低剂量组及别嘌呤醇阳

性对照组。开始时生理氯化钠溶液组和高尿酸血症

空白组均按25ml・kg-1剂量ig生理氯化钠溶液,连

续3d,高尿酸血症空白组在取血样前1h用次黄嘌

呤按1000mg・kg-1剂量ip。正常实验和模型实验中

Acteoside高、中、低剂量组和别嘌呤醇组ig给药,qd,连续3d,Acteoside高、中、低剂量分别为50、100、

150mg・kg-1,别嘌呤醇剂量为2mg・kg-1,于末次给药1h后模型组同上ip次黄嘌呤,1h后从小鼠的眼

眶后静脉丛采血,血样在室温下自然凝血1h,待测。

2.5　血清尿酸水平的测定　用全自动生化分析装置直接测定。

2.6　黄嘌呤氧化酶活性的测定　利用尿酸生成法测定氧化酶的活性[4]1mmol・L-1黄嘌呤溶液中加入

不同浓度的样品或阳性对照别嘌呤醇(10μg・ml-1),加入0.1U・ml-1黄嘌呤氧化酶,

反应体系中加入焦磷酸钠缓冲液(80mmol・L-1、pH值8.5)至终体积

1ml,反应以加入黄嘌呤氧化酶为开始,37℃反应

5min,全自动生化分析仪测定尿酸生成量,以5min的尿酸生成量作为反应速度。

2.7　统计与处理　结果以󰁡x±s表示,进行两均数的比较。

3　结果

3.1　Acteoside对正常小鼠血清尿酸水平的影响　结果见表1,Acteoside和别嘌呤醇对正常小鼠血清

尿酸水平没有显著影响。表1　Acteoside对正常小鼠血清尿酸水平的影响(󰁡x±s,n=10)Tab1　Effectofacteosideontheserumuricacidlevelofnomalmouse(󰁡x±s,n=10)

组别剂量(mg・kg-1)血清尿酸值(mmol・ml-1)生理氯化钠溶液组…0.068±0.012Acteoside500.064±0.0111000.058±0.0141500.054±0.008别嘌呤醇20.056±0.010

3.2　Acteoside对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响　在此实验条件下,高尿酸血症模型空白组中血清

尿酸水平与生理氯化钠溶液相比明显升高(P<0.

01),与高尿酸血症的空白组相比,Acteoside高、中剂量组非常显著地降低高尿酸血症小鼠尿酸水平(P<0.01,P<0.05),结果见表2。表2　Acteoside对次黄嘌呤造成的小鼠高尿酸血症模型的影响(󰁡x±s,n=10)Tab2　Effectofacteosideonthemousehyperuricemiamodeestablishedbyusinghypoxathine(󰁡x±s,n=10)

组别剂量(mg・kg-1)血清尿酸值(mmol・ml-1)生理氯化钠溶液组…0.063±0.013高尿酸血症空白组…0.872±0.180Acteoside500.783±0.2301000.658±0.192b1500.528±0.136c别嘌呤醇20.147±0.082c 注:与高尿酸血症空白组比较,bP<0.05,cP<0.013.3　Acteoside对黄嘌呤氧化酶活性的影响　从图1可以看出,Acteoside是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制

剂,IC50为12.25μg・ml-1,结果见图2。

图1　Acteoside对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的Linweaver2Burk曲线Fig1　Lineweaver2Burkcurveofinhibitioneffectofacteosideonxathineoxidase・13・　解放军药学学报　2006年2月　第22卷　第1期 PharmJChinPLA　Vol22　No1　Feb2006