量子点试剂盒说明书
- 格式:docx
- 大小:741.46 KB
- 文档页数:6
第1篇一、产品概述本试剂盒是针对多糖含量测定而设计的高效、便捷的检测工具。
适用于各类生物样本中多糖含量的定量分析,包括但不限于植物提取物、动物组织、微生物发酵液等。
本试剂盒采用酶联免疫吸附法(ELISA)原理,通过特异性抗体与多糖的结合,实现对多糖含量的精确测定。
二、产品组成1. 试剂盒- 多糖抗体- 标准品- 酶标抗体- 底物溶液- 洗涤缓冲液- 封闭液- 终止液2. 仪器- 酶标仪- 微量移液器- 恒温水浴箱- 试管3. 试剂- 酶标仪专用缓冲液- 酶标仪专用洗涤液三、使用方法1. 样本准备- 将待测样本按照说明书要求进行稀释。
- 确保样本无污染,避免酶标仪读取误差。
2. 加样- 在酶标板孔中加入50μl的标准品或样本稀释液。
- 在所有孔中加入50μl的多糖抗体。
3. 孵育- 将酶标板放入恒温水浴箱,37℃孵育1小时。
4. 洗涤- 使用酶标仪专用洗涤液,将酶标板充分洗涤3次。
5. 加酶标抗体- 在所有孔中加入50μl的酶标抗体。
- 37℃孵育1小时。
6. 洗涤- 使用酶标仪专用洗涤液,将酶标板充分洗涤3次。
7. 加底物溶液- 在所有孔中加入50μl的底物溶液。
- 避光孵育15分钟。
8. 终止- 在所有孔中加入50μl的终止液。
9. 检测- 使用酶标仪在450nm波长下检测各孔的吸光度(OD值)。
10. 数据分析- 将测得的OD值与标准曲线进行比较,计算多糖含量。
四、注意事项1. 试剂和仪器- 使用前请仔细阅读说明书,确保试剂和仪器符合使用要求。
- 使用酶标仪时,请按照仪器说明书进行操作。
2. 样本处理- 样本处理过程中,请确保无污染,避免影响检测结果。
- 样本稀释时,请使用适宜的稀释液,确保稀释倍数合理。
3. 操作步骤- 操作过程中,请严格按照说明书进行,避免人为误差。
- 注意操作环境,避免交叉污染。
4. 标准曲线- 标准曲线的绘制应使用新鲜标准品,并确保标准曲线线性良好。
5. 质量控制- 定期进行质量控制,确保试剂盒的准确性和可靠性。
Fluorometric Thiol Quantitation KitGreen FluorescenceCatalog Number MAK151Storage Temperature –20 ︒CTECHNICAL BULLETINProduct DescriptionThe Fluorometric Thiol Quantitation Kit provides an ultrasensitive assay to quantitate the thiol content of small molecules. The proprietary thiol sensor generates a strongly fluorescent adduct (λex = 490/λem = 520 nm) upon reacting with a thiol-containing compound. In addition, both absorption and emission spectra of the thiol adduct are pH-independent, making this assay kit highly robust. The kit can detect as little as 1 picomole of cysteine or glutathione (GSH) in a 100 μL assay volume (10 nM). The assay can be performed conveniently in either a 96 or 384 multiwell plate format. ComponentsThe kit is sufficient for 200 assays in 96 well plates. Thiol Detection Reagent 1 vl Catalog Number MAK151AAssay Buffer 25 mL Catalog Number MAK151BGSH Standard 1 vl Catalog Number MAK151CDMSO 0.2 mL Catalog Number MAK151D Reagents and Equipment Required but Not Provided.∙96 well flat-bottom plate – It is recommended to use black plates with clear bottoms for fluorometricassays.∙Fluorescence multiwell plate readerPrecautions and DisclaimerThis product is for R&D use only, not for drug, household, or other uses. Please consult the Safety Data Sheet for information regarding hazards and safe handling practices.Preparation InstructionsAllow reagents to come to room temperature before use. Briefly centrifuge vials before e ultrapure water for the preparation of reagents.Thiol Detection Reagent – Reconstitute with 100 μL of DMSO to generate a 100⨯ Thiol Detection Reagent stock solution. Mix well by pipetting, then aliquotand store at –20 ︒C.GSH Standard – Reconstitute with 200 μL of water to generate a 1 mM (1 nmole/μL) GSH Standard stock solution. Mix well by pipetting, then aliquot andstore at –20 ︒C. Use within 6 months ofreconstitution.Storage/StabilityThe kit is shipped under ambient conditions and storage at –20 ︒C, protected from light, is recommended.2ProcedureAll samples and standards should be run in duplicate. GSH Standards for Fluorometric DetectionDilute 30 μL of the 1 mM Standard with 970 μL of Assay Buffer to prepare a 30 μM standard solution. Further dilute the 30 μM standard solution by 3-fold serial dilutions with Assay Buffer. Add 50 μL of the diluted standard solutions into a 96 well plate, generating 0 (blank), 0.014, 0.04, 0.12, 0.37, 1.1, 3.3, and 10 μM standards. Diluted standards are not stable and should be used within 4 hours.Sample Preparation for 96 well PlateAdd 0–50 μL of sample to wells. Bring samples to a final volume of 50 μL with Assay Buffer.Note: For unknown samples, it is suggested to test several sample dilutions to ensure the readings are within the linear range of the standard curve.Assay Reaction for 96 well Plate1. Set up the Master Reaction Mix according to thescheme in Table 1. The Master Reaction Mix isenough for one plate, as 50 μL of the MasterReaction Mix is required for each reaction (well).Note: The Master Reaction Mix is not stable andbest used within 2 hours.Table 1.Master Reaction Mix2. Add 50 μL of the Master Reaction Mix to each ofthe wells. Mix well using a horizontal shaker or by pipetting, and incubate the reaction for10–60 minutes at room temperature. Protect theplate from light during the incubation.3. Measure the fluorescence intensity at λex = 490/λem = 535 nm. Assay Reaction for 384 well PlateRun assay as written for 96 well plate. Use 0–25 μL of sample or standard and 25 μL of the Master Reaction Mix per well.ResultsCalculationsThe background for the assay is the value obtained for the 0 (blank) GSH standard. Correct for the background by subtracting the blank value from all readings. Background values can be significant and must be subtracted from all readings.Use the values obtained from the appropriate GSH standards to plot a standard curve.Note: A new standard curve must be set up each time the assay is run.Using the corrected measurement, the concentration of thiol present in the samples may be determined from the standard curve.3KVG,LS,MF,MAM 02/18-1 2018 Sigma-Aldrich Co. LLC. All rights reserved. SIGMA-ALDRICH is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC, registered in the US and other countries. Sigma brand products are sold through Sigma-Aldrich, Inc. Purchaser must determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply. Please see product information on the Sigma-Aldrich website at and/or on the reverse side of the invoice or packing slip.。
成骨细胞矿化结节染色试剂盒(茜素红S 法)产品编号 产品名称包装 C0148S成骨细胞矿化结节染色试剂盒(茜素红S 法)50次产品简介:碧云天生产的成骨细胞矿化结节染色试剂盒(茜素红S 法) (Alizarin Red S Staining Kit for Osteogenesis),也称成骨检测试剂盒(Osteogenesis Assay Kit),是一种基于茜素红S 螯合钙离子(Ca 2+)生成橙红色复合物,以检测成骨细胞矿化结节的染色试剂盒。
人体和动物的骨组织在生命过程中不断地进行着重建,骨重建过程包括骨的分解吸收与新骨的形成。
破骨细胞(osteoclasts)负责骨分解与吸收,而成骨细胞(osteoblasts, OB)是骨形成的主要功能细胞,负责新骨形成。
在成骨分化过程中,其基本的生物学特征是骨基质合成、分泌、矿化及成熟。
成骨细胞首先合成I 型胶原(collagen-I, COL-I)、骨钙素(osteocalcin, OC)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)等胞外基质,并通过基质小泡释放钙离子和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)等酶类物质,钙离子在碱性磷酸酶作用下沉淀在胶原纤维丝上,完成基质矿化过程,最终形成骨组织。
I 型胶原从增殖期开始表达,基质合成期达巅峰;碱性磷酸酶是成骨细胞分化的早期标志物,骨基质合成期开始出现,矿化期达巅峰;骨钙素是成骨细胞分化成熟的标志,一般矿化早期开始表达,矿化结节成熟后达巅峰。
矿化结节是成骨细胞分化成熟的标志,同时也是成骨细胞行使成骨功能的主要形态学特征,观察成骨细胞的矿化结节是研究成骨细胞分化的常用技术方法之一。
茜素红S 染色是一种常用的染色方法,广泛用于成骨细胞分化、骨细胞或组织病理生理的研究。
茜素红S (Alizarin Red S, 简称ARS),别名茜素磺酸钠、茜素胭脂红,CAS 号为130-22-3,分子式为C 14H 7NaO 7S ,分子量为342.25。
sNPSHOT 试剂盒1. 关于试剂盒:一次最多检测10个SNP位点试剂盒包括对照模板和引物的Mix试剂,做对照反应。
2.产品简介需要备的东西:1)SNPshot Multiplex Ready reaction MIX2)模板和引物3)对照的Multiples Control DNA and Primer Mix 只提供对照模板和对照引物,用于做对照反应4)ddNTP 荧光标记颜色组合分三种包装备注:-20℃保存4 软件及其它材料要求1. GeneScan-120 LIZ Size Standard Recommended2. 3700 Data Collection version 1.1 (enabled with 3700 data collection 5-Dye Update File P/N4324208)3. SNP1_POP5 (凝胶)5 自备材料1)Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) 碱性磷酸酶2)PCR纯化试剂盒6 基本流程备注:PCR产物须纯化,0.01 to 0.4 pmol 模板(PCR产物纯化试剂盒)7 对照反应1)对照引物小片段来,片段越小,标记基团在分子量上占得比例就越大,所以与实际片段长度相差越大。
2)对照反应体系,如下表:备注:颠倒混匀,混匀后,迅速置于冰上。
如果常温20分钟以上,会导致背景加深。
3)实验样品多个引物混合后,推荐各引物终浓度0.2u M,注Snapshot MIX 引物设计为反应后,耗尽所有反应中的引物。
推荐各引物初始浓度为0.2u M。
如某一引物浓度特别低或特别高,应调整引物浓度。
在6引物组合中,引物浓度范围,0.05 u M 到1 u M ,是适宜的。
模板浓度一般不需调整。
4)反应体系SNaPshot Multiplex ready Reaction mix 冰上解冻。
注:依据引物及模板体积,适当调整水的体积。
人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)水平。
用纯化的人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5),再与HRP 标记的羊抗人抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)含量。
试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:18ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编:100176 北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编:100176电话:4006501950 传真:************-816电话:4006501950 传真:************-816AML1-ETO 荧光定量试剂盒使用说明书【产品名称】中文名:AML1-ETO 荧光定量试剂盒英文名:Leukemia related AML1-ETO fusion gene Fluorescent Quantitative PCR DetectionKit (FQ-PCR)【包装规格】 20人份/盒【用 途】本试剂盒适用于白血病AML1-ETO 融合基因定量检测,仅供科研使用,辅助临床诊断及治疗。
【储存条件】储存温度:-20℃。
避光保存。
【有 效 期】有效期:见试剂盒标签。
【原 理】本试剂盒使用荧光标记探针杂交方法,采用核酸扩增技术,对白血病BCR-ABL-190融合基因进行RNA 定量检测。
【试剂盒组分】1.2.未提供组分:淋巴细胞分离液、RPMI1640、生理盐水、离心管、PCR 反应管等耗材试剂。
3.本试剂盒中的参比品、阳性对照品和临界对照品均为克隆质粒DNA 。
4.不同批号试剂盒中的各组分不要交叉使用,以影响结果。
【适用仪器】ABI PRISM 系列Real Time PCR 仪; BIO-RAD iCycler Real Time PCR 仪; ROCHE LightCycler Real Time PCR 仪。
【样本要求】1. 本试剂盒适用于骨髓标本检测。
2. 骨髓2~3ml ,建议采用枸橼酸钠或EDTA 抗凝,不能使用肝素抗凝。
3. 建议采用进口无菌离心管及移液吸头,使用无RNase 的耗材和试剂。
北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编:100176 北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编:100176电话:4006501950 传真:************-816电话:4006501950 传真:************-816【检验方法】1.骨髓单个核细胞分离注意事项:a. 淋巴细胞分离液应置于4℃保存,使用前应从冰箱拿出待恢复至室温后使用。
Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒产品简介:碧云天生产的Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒(Calcein/PI Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kit ,或Calcein/PI Live/Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常便捷的基于Calcein-AM (钙黄绿素)和PI (碘化丙啶)双荧光染色法检测动物细胞死活的试剂盒。
本试剂盒使用便捷,荧光染色和检测仅需约30分钟。
本试剂盒染色30分钟后,就可进行后续的荧光显微镜拍照、流式分析或者荧光酶标仪定量等荧光检测和分析。
本试剂盒的原理是两种探针可分别检测细胞内酯酶活性和细胞膜完整性,从而反映细胞活性与细胞毒性。
其中Calcein AM 染色活细胞,呈现绿色荧光;而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色死细胞,呈现红色荧光。
本试剂盒用于检测动物细胞活性与细胞毒性效果参考图1。
图1. Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒用于HT-29(人结肠癌细胞)细胞活性与细胞毒性检测的效果图。
HT-29细胞(C6410)在明场视野下仔细观察可以看到有明显的坏死细胞(图A);绿色荧光标记的即为Calcein 染色的活细胞(图B),红色荧光标记的即为PI 染色的死细胞(图C);Calcein和PI 双染叠加(merge)后可以非常清晰地观察到活细胞和死细胞的荧光染色差别(图D)。
在本实验中,HT-29细胞经TSZ 处理4小时。
TSZ 为TNFα、SM-164和Z-V AD-FMK 组成的细胞程序性坏死诱导试剂(C1058)。
实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
Calcein AM (Calcein Acetoxymethyl Ester ,中文名称为钙黄绿素AM或钙黄绿素乙酰氧基甲酯),是一种可以对活细胞进行荧光染色的细胞染色试剂,Calcein AM 是在Calcein (钙黄绿素)的基础上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基团,加强了疏水性,因此能够很容易穿透细胞膜。
南京建成GPX试剂盒说明书一、产品简介南京建成GPX试剂盒是一种用于测定谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的试剂盒。
谷胱甘肽过氧化物酶是一种重要的抗氧化酶,在生物体内起到清除自由基的作用。
该试剂盒采用酶促反应原理,通过检测GPX酶催化反应的速率,反映样品中GPX活性的强弱。
二、试剂盒组成1.GPX试剂盒2.GPX标准品3.过氧化氢(H2O2)稀释液4.反应底物液5.转化液6.二恶吖啶试剂7.芳醛显色剂液8.脱氧胆酸液三、操作步骤步骤一:样品处理1.将待测样品离心收集沉淀,去除杂质;2.取适量样品,加入过氧化氢(H2O2)稀释液,混匀;3.将处理后的样品转移至离心管,进行离心提取。
步骤二:制备标准曲线1.取GPX标准品不同浓度的工作液,依次加入反应孔;2.使用空白对照孔作为空白对照;3.分别加入转化液和反应底物液,混匀。
步骤三:反应过程1.加入样品提取液和转化液,混匀;2.加入反应底物液,混匀;3.加入二恶吖啶试剂,混匀;4.加入芳醛显色剂液,混匀;5.加入脱氧胆酸液,混匀。
步骤四:测定吸光度使用酶标仪在450nm波长下测定样品、标准品和空白对照的吸光度值。
四、结果判读根据标准曲线,计算出样品中GPX活性的浓度,进行数据分析。
根据浓度值的高低,可以判断出样品中GPX活性的强弱。
五、注意事项1.试剂盒的各组分应在4℃保存,开封后应尽快使用;2.不同批次的试剂盒不能混合使用;3.操作前,必须严格按照说明书操作,确保实验的准确性;4.不同样品的处理方式可能不同,请参照具体样品类型的处理方法;5.操作过程中应佩戴实验手套,避免接触试剂;6.尽量避免阳光直射,保持试剂的保存质量。
六、故障排除1.若标准曲线呈线性上升趋势,则说明实验条件符合要求,结果可信;2.若标准曲线呈非线性趋势,则可能是试剂盒保存不当或过期,需更换新的试剂,重新进行实验;3.若实验结果不符合预期,可能是样品处理不当或操作过程中出错,请检查并重新进行实验。
精子细胞氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途精子细胞氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下,精子细胞中的活性氧族使发光物氧化降解并发光,在化学发光仪(Luminometer)的帮助下定量检测精子细胞活性氧族(过氧化氢)的生成和数量的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
适用于动物和人体精子细胞的活性氧族的检测。
可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学,以及发育生物学(男性不育)等的研究。
产品严格无菌,即到即用,操作简易,性能稳定,检测敏感。
技术背景超氧自由基阴离子(superoxide radical;O2-)、过氧化氢(hydrogen peroxide;H2O2)、羟自由基或氢氧基(hydroxyl radical;OH-)、过氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion;ONOO-)次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的产生和增多,甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。
鲁米诺(luminol),又称氨基邻苯二甲酰肼(luminol;3-aminophthalic hydrazide 5-amino-2,3-dihvdro- 1,4-phthalazinedione),是一种脂溶性的发光剂,氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光,具有460nm左右峰值的带状光谱,肉眼可观察到鲜明的紫蓝色。
荧光定量PCR基因表达检测试剂盒说明书(通用版)前言随着荧光定量PCR技术的成熟和荧光定量PCR仪的普及,用传统的半定量方法检测目的基因表达量的升高或者降低,已经远远不能满足当前科研的需要,针对当前研究的热点基因,闪晶生物及时地从美国biosuper公司引进不同物种、不同基因的荧光定量PCR检测试剂盒。
该试剂盒包含了目的基因和管家基因的引物、taqman探针(荧光探针)、反转录试剂、荧光定量PCR试剂、操作说明书等,用户只需将提好的RNA加入就可以进行荧光定量PCR实验,操作方便简单、适合多种荧光定量PCR仪,同时也避免了自己设计、合成引物探针的烦恼。
基本原理先用随机引物将RNA反转录成cDNA,然后设计特异性的引物和荧光探针(TaqMan探针),进行荧光定量PCR检测。
TaqMan探针是一种寡核苷酸探针,它设计为与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。
荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭剂则在3’末端。
当完整的探针与目标序列配对时,荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭剂接近而被淬灭,但在进行延伸反应时,qTaq聚合酶的5’外切酶活性将探针进行酶切,使得荧光基团与淬灭剂分离,荧光强度得到检测。
随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累,因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。
试剂盒规格25 次100次试剂盒组成序号 名称 25次 100次1 RT-buffer 325 ul 1300 ul2 Mix enzyme 50 ul 200 ul3 T-probe 25 ul 100 ul4 T-fluo-PCR buffer 650 ul 2600 ul5 I-probe 25 ul 100 ul6 I-fluo-PCR buffer 650 ul 2600 ul7 qTaq polymerase100 ul 400 ul8 DEPC-H2O 1支 1支9 说明书 1份 1份试剂说明:RT-buffer:含有dNTPs、oligo(N)等Mix enzyme:含有反转录酶、RNA酶抑制剂等T-probe:检测目的基因的荧光探针,5’端fam标记,3’端tamra标记T-fluo-PCR buffer:含有目的基因的特异性引物、dNTPs等I-probe:检测管家基因的荧光探针,5’端fam标记,3’端tamra标记I-fluo-PCR buffer: 含有管家基因的特异性引物、dNTPs等RNA的提取请参照Trizol说明书,本试剂盒不提供RNA提取试剂和操作流程。
量子点介绍
量子点(Quantum dot,QD)又称半导体纳米晶,呈近似球形,其三维尺寸在2-10nm范围内,具
有明显的量子效应。量子点一般由II-VI族元素(如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe、ZnS等)或III-V族元素
(无镉量子点,如InP、InAs等)等半导体材料构成,也可由两种或两种以上的半导体材料构成核/壳结构
(如常见的CdSe/ZnS核/壳结构量子点等)(图1)。近年来也涌现出多种新型材料量子点和制备方法。
量子点的物理、光学、电学特性远优于现有有机荧光染料(表1),具有灵敏度高、稳定性好、货架期长
等优势,是新一代荧光标记探针的最佳选择。量子点技术在2003年被Science杂志评为年度十大科学突
破之一。
图1,量子点组成、结构与荧光激发。
(Zhang and Wang 2012; Esteve-Turrillas and Abad-Fuentes 2013)
A,量子点结构示意图,由核、外壳以及表面有机功能层组成。B,粒径大小不同的量子
点紫外激发产生不同色彩的荧光。C,不同组成成分的量子点发射光谱范围,波长覆盖近紫
外到远红外。
表1,量子点相对于普通荧光标记物的优势及其在生物检测中的意义。
量子点作为标记探针尤其适用于高灵敏度、活体/在体长时间动态观察、多指标同时检测等应用领域,
如:
1)量子荧光效率高,摩尔消光度系数大,其荧光强度比现有最强的有机荧光材料光强强20倍以上,
适用于高灵敏度检测,结合高分辨荧光显微镜可实现单量子点示踪(图2);
图2,活细胞单量子点标记示踪。
(Michalet, Pinaud et al. 2005)
生物素-量子点(639nm发射)标记Hela细胞表达的亲和素-CD14受体融合蛋白。A,相差显微镜照片。B,
荧光显微镜照片。C,A和B图方框中单量子点的1000步运动轨迹(100ms/步)。D,示踪过程中量子点荧
光强度变化。结果表明单量子点标记物随时间变化表现出特有的闪烁效应。
2)具有很好的光稳定性,耐光漂白,适用于长时间稳定激发动态观察以及结果存档(图3);
图3,比较QD608与荧光染料Alexa 488的抗光漂白效应。(Medintz, Uyeda et al. 2005)
A,QD608(红色)和Alexa 488(绿色)分别标记细胞骨架和细胞核,随激发时间变化比较光漂白效应。B,
QD608或Alexa 488的荧光强度随时间的变化曲线。C,量子点用于人类上皮细胞荧光多色标记。细胞核:
QD655nm(青色);Ki-67蛋白:QD605nm(洋红);线粒体:QD525nm(橙色);微管:QD565nm(绿色);
微丝:QD705 nm(红色)。
3)荧光寿命长,有机荧光染料或生物样本背景荧光寿命一般仅为1-10纳秒,而量子点的荧光寿命可
持续10-100纳秒,通过时间分辨特性,可降低背景干扰,提高灵敏度。
4)发射波长因组成成分和粒径大小而异,易于制备经表面修饰后特性相似但发射波长不同的量子点
(图4);
5)宽泛且连续的吸收光谱,实现单一光源多色激发(图4);
6)发射光谱窄而对称,可减少多色激发过程中不同量子点之间的干扰(图4);
图4,组成成分和粒径大小不同的量子点吸收与发射光光谱。(Michalet, Pinaud et al. 2005)
A,量子点不同组成成分和粒径大小与发射光谱的关系。B,上图:四种不同量子点的吸收光谱图。下图:
488nm光源(蓝色直线)激发四种不同量子点的发射光谱图。
7)量子点具有较大的斯托克斯位移,易与斯托克斯位移较小的有机荧光染料和背景荧光相区分,可
通过调整激发光波长或使用滤光片,消除北京,提高灵敏度(图5)
图5,CdTe量子点与Cy3、Cy5的吸收、发射光谱及斯托克斯位移比较。(Resch-Genger, Grabolle et al.
2008)
A,不同粒径的CdTe量子点吸收和发射光谱。量子点斯托克斯位移大,吸收光谱重叠,发射光谱窄而对称。
B,Cy3和Cy5的吸收光谱和发射光谱。斯托克斯位移小,吸收与发射光谱部分重叠,发射光谱不对称红区
拖尾。
量子点材料在20世纪80年代分别由Alexey I. Ekimov在玻璃基质中,以及Louis E. Brus在胶体溶
液中合成,随后量子点表面配基化学修饰技术逐步完善。由于量子点相对于传统荧光染料具有诸多优点,
在1998年Alivisatos和Nie将量子点应用于生物分子标记,使用生物活性分子如抗体或抗原等连接在量
子点表面修配体的活性基团上,实现了量子点生物荧光染色,开创了量子点生物标记材料的应用研究。十
几年来,量子点在生物标记领域涌现越来越多的研究成果和应用实例(图6、7)。
图6,近年来与量子点相关的论文发表情况。(Esteve-Turrillas and Abad-Fuentes 2013)
图7,Web of Science数据库中量子点及量子点生物学相关论文发表情况。
目前,我们已实现了量子点的产业化生产,大大促进了量子点在生命科学相关领域的应用,如细胞免
疫荧光成像、流式细胞术、蛋白印迹、荧光免疫吸附分析等(图8)
图8,量子点标记物在科研领域中的应用。