QuEChERS前处理—高效液相色谱仪检测多种蔬菜水果中10种氨基甲酸醋农药残留

植物保护学　现代农业科技２０１４年第ｌ３期　

ＱｕＥＣｈＥＲＳ前处理一高效液相色谱仪检测多种蔬菜水果中　１０种氨基甲酸酯农药残留　

黎小鹏李拥军　刘红梅李盛安苏岱雄　（广东省中山市农产品质量监督检验所，广东中山５２８４００）　摘要探讨运用简便高效的前处理方－ＱｕＥＣｈＥＲＳ，使用高效液相色谱一柱后衍生荧光法分别测定普通蔬菜水果中１０种氨基甲酸　酯多类农药的含量。结果表明：１０种农药的检出限为Ｏ．０ｏ８—０．０１０ｍｇ￣ｋｇ，加标回收率在９１．２％一１０２．Ｏ％，相对标准偏差为０．９８％～４．９０％。此方　法选择性强，有机溶剂用量少，准确可靠、准确度和精密度好，比较适合只配备液相色谱仪的基层实验室用于普通蔬菜水果中常用农药多　残留快速检测。　关键词蔬菜水果农药残留检测；ＱｕＥＣｈＥＲＳ；拟除虫菊酯；有机磷；氨基甲酸酯　中图分类号Ｊ６５３　文献标识码Ａ　文章编号１００７—５７３９（２０１４）１３—０１３８—０３　Ｔｈｅ　Ｍｕｌｔｉ－ｒｅｓｉｄｕｅｓ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　１０　Ｃａｒｂａｍａｔｅ　Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ　ｉｎ　Ｆｒｕｉｔｓ　ａｎｄ　Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ　ｗｉｔｈ　ＱｕＥＣｈＥＲＳ　ｂｙ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ＬＩ　Ｘｉａｏ－ｐｅｎｇ　ＬＩ　Ｙｏｎｇ－ｊａｎ　ＬＩＥ　Ｈｏｎｇ－ｍｅｉ　Ｌｉ　Ｓｈｅｎｇ—ａｎ　ＳＵ　Ｄａｉ－ｘｉｏｎｇ　（Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ＆Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＡｇｎｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｉｎ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２８４００）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ＱｕＥＣｈＥＲＳ　ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｐｒｅ－ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉ—ｒｅｓｉｄｕｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　１０　ｃａｒｂａｍａｔｅ　ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ　ｉｎ　ｃｏｍｍｏｎ　ｆｒｕｉｔｓ　ａｎｄ　ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｐｌｏｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌｉｍｉｔｓ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．００８－０．０１０　ｍｇ　ｇ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｓｐｉｋｅｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｒａｎｇｅｄ　ｆｒｏｍ　９１－２％ｔｏ　１０２．０％ｗｉｔｈ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｏ．９８％－４．９０％．Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　Ｃｕｒｖｅｓ　ｆｏｒ　１０　ｃａｒｂａｍａｔｅ　ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ　ａｌｌ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｗｉｔｈ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　Ｏ．９９９　２－０．９９９＆Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｐ＇ｐｌｉｃａｂｌｅ　ｔｏ　ａ　ｗｉｄｅ　ｒａｎｇｅ，ｗｉｔｈ　ｌｅｓｓ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ，ｒｅｌｉａｂｌｅ，　ｇｏｏｄ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ａｎｄ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｗｉｔｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｔｏ　ｃａｒｒｙ　ｏｕｔ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｉｎ　ｃｏｍｍｏｎ　ｆｒｕｉｔｓ　ａｎｄ　ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆｍｕｈｉｐｌｅｐｅｓｔｉｃｉｄｅ　ｒｅｓｉｄｕｅｓｉｎｆｒｕｉｔｓ　ａｎｄｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ；ＱｕＥＣｈＥＲＳ；ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ；ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ；ｃａｒｂａｍａｔｅ　目前在蔬菜中较为普遍使用的农药残留快速检测法　因其只能针对有机磷和氨基甲酸酯类农药，且检出限高、假　阳性多，无法对超标标本进行定性定量。因此，许多基层实　验室逐步开始购置气相色谱仪和液相色谱仪，其中检测氨基　甲酸酯类农药一般按农业部ＮＹ，Ｉｖ７６１—２００８【　１的方法处理，　但该方法的前处理步骤多、耗时长，有机溶剂的用量大。近　年来，国内外许多学者运用美国农业部Ａｎａｓｔａｓｓｉａｄａｓ．Ｍ　ｒ２１等　在２００３年提出的ＱｕＥＣｈＥＲＳ（ｑｕｉｃｋ，ｅａｓｙ，ｃｈｅａｐ，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ，　ｒｕｇｇｅｄ，ａｎｄ　ｓａｆｅ）前处理方法，使用气质联用仪或液质联用　仪进行检测，取得了很多成果［３－９］，ＱｕＥＣｈＥＲＳ前处理的特点　是步骤少、操作简易、快速有效。但由于质谱仪价格昂贵，操　作专业化程度高，较难在基层实验室推广。为此，本文探讨　建立运用ＱｕＥＣｈＥＲＳ前处理，使用高效液相色谱仪进行氨　基甲酸酯类农药残留的快速检测。　１材料与方法　１．１试验材料　在中山市的农场采集有代表性的蔬菜、水果，包括菜　心、莴苣、豇豆、青瓜、火龙果和草莓６种各２个样本。样品　制备按ＧＢ／Ｔ　８８５５新鲜水果和蔬菜的取样方法进行。　甲醇、乙腈均为色谱纯；试验用水为ＭｉＵｉ—Ｑ高纯水；　ＱｕＥＣｈＥＲＳ萃取试剂包（安捷伦公司，部件号５９８２—５６５０ＣＨ），　内含硫酸镁４　ｇ、氯化钠１　ｇ、柠檬酸钠１　ｇ、三水合二柠檬酸　二钠０．５　ｇ；１５　ｍＬ分散固相萃取净化离心管（安捷伦公司，部　件号５９８２—５６５６ＣＨ），内含ＰＳＡ（乙二胺一Ｎ丙基硅烷）０．１５　ｇ、　硫酸镁０．９　ｇ；１０种农药标准品，购自农业部环境质量监督　作者简介黎小鹏（１９６５一），女，广东中山人，工程师，从事农产品质量　安全工作。　通讯作者　收稿日期２０１４一Ｏ６一Ｏ３　１３８　检验测试中心。标准品用甲醇配置质量浓度均为１０　ｍｇ／Ｌ的　混合标准溶液，贮存在一４　ｑＣ冰箱中，有效期３个月，试验中　用甲醇配成０．０２、０．０５、０．１０、０．２０、０．５０、１．００　ｍｇ／Ｌ混合标准　溶液作为工作液。试验使用的仪器：ＩＫＡ匀浆机、涡旋混合　器、台式高速冷冻离心机（德国Ｓｉｇｍａ）；自动氮吹浓缩仪（美国　Ｏｒｇａｎｏｍａｌｉｏｎ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ公司产品），Ｗａｔｅｒｓ　２６９５高效液相色　谱仪，配Ｗａｔｅｒｓ　２４７５荧光检测器和柱后衍生装置：Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ　柱后衍生系统。　１．２试验方法　、　１．２．１样品处理。样品的制备：抽取各类样品，将可食部分　切碎，充分混匀放入食物调理机粉碎，制成待测样，分装，　在一２０～１６℃保存，备用。样品的提取和净化：①提取：将上述　制备好的样品解冻，准确称取１０．Ｏ０　ｇ于５０　ｍＬ离心管中　（尽量保持样品温度不超过室温），加乙睛１０．０　ｍＬ（提前置于　一４℃冰箱１～２　ｈ甚至隔夜），匀浆，加入ＱｕＥＣｈＥＲＳ萃取试　剂包（安捷伦部件号５９８２—５６５０ＣＨ），迅速混合均匀（此时硫　酸镁在吸水的同时产生放热），涡旋１　ｍｉｎ，振荡提取１　ｍｉｎ，　５℃下４　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ。②净化：取上清液６．００　ｍＬ　至１５　ｍＬ分散固相萃取净化离心管（安捷伦部件号５９８２—　５６５６ＣＨ）中。涡旋混合１　ｍｉｎ，８　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｒａｉｎ，取上清　液２．００　ｍＬ氮吹近干，１．００　ｍＬ甲醇定容并混匀，过０．２　Ｉｘｍ　滤膜后上机检测。　１．２．２仪器条件。高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ　２６９５）：配Ｗａｔｅｒｓ　２４７５荧光检测器和柱后衍生装置；Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ柱后衍生系统，　Ｃ１８柱（４．６　ｍｍｘ２５　ｃｍｘ５　Ｉｘｍ），柱温４０℃，流速１　ｍＬ／ｍｉｎ，　流动相梯度设定见表１。荧光检侧器（激发波长３３０　ｎｍ，发　射波长４６５　ｎｍ）。柱后衍生条件：反应单元的温度，８０　ｏＣ；　０．０５　ｍｏ１／Ｌ氧氧化钠溶液，流速：０．３　ｍＬ／ｍｉｎ；

ＯＰＡ试剂，流　黎小鹏等：ＱｕＥＣｈＥＲＳ前处理一高效液相色谱仪检测多种蔬菜水果中１０种氨基甲酸酯农药残留　速：０．３　ｍＬ／ｍｉｎ。　表ｌ流动相梯度设定　

２结果与分析　２．１标准曲线回归方程、相关系数与方法检出限　取浓度分别为０．０２、０．０５、０．１０、０．２０、０．５０、１．００　ｍｇ／Ｌ混　合标准溶液作为工作液，使用高效液相色谱仪按上述仪器　条件采集测定．结果１Ｏ种氨基甲酸酯农药在３８　ｍｉｎ完全分　离，响应良好（图１）。　以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标分别进行线性　回归处理。１０种氨基甲酸酯农药在线性范围０．０２～１．００　ｍｇ／Ｌ　内有良好的线性关系，相关系数在０．９９９　２～０．９９９　８．以３倍　基线噪声所对应的标准品浓度（ｍｇ／Ｌ）为仪器的最低检出限，　得出１０种农药的方法检出限分别为０．００８～０．０１０　ｍｇ／ｋｇ，检　出限远低出国家标准的限量值㈣．各项试验数据见表２。　ｌ２０　１００　８０　簧６０　蓑４０　２Ｏ　０　。　ｏｏ　２　昌　罱昌　高罱瓮导　吣　｝ｆｍｉｎ　图１　１Ｏ种氨基甲酸酯农药色谱　２．２回收率和方法精密度　试验采用在已检测不含目标化合物的空白样品中加　标的方法进行回收率和方法精密度测试。取６种蔬菜、水果　的空白样品进行加标，分别添加混合标准物使样品含量为　０．０５、０．１０、０．５０　ｍｇ／ｋｇ的３个水平浓度，每个浓度检测３次．　结果见表３。从表３可以看出，３个添加浓度水平下ｌ０种氨　基甲酸酯类农药的回收率为９１．２％～１０２．０％，相对标准偏差　为０．９８％－４．９０％。　表２　１０种氨基甲酸酯农药的标准曲线回归方程、相关系数与方法检出限　

表３　ｌ０种氨基甲酸酯农药的加标回收率和方法精密度　检测结果　：　ｇ　塑　Ｑ．　Ｑ　ｇ　：　Ｑ　ｇ　农药名称　回收率　ＲＳＤ　回收率　ＲＳＤ　回收率　ＲＳＤ　％　％　％　％　％　％　

２．３　２种前处理条件下的结果比较　６种蔬菜、水果的空白样品，添加混合标准物使样品含　量为０．１０　ｍｇ／ｋｇ，分别按ＱｕＥＣｈＥＲＳ方法以及ＮＹＴ７６１—２００８　蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类　农药多残留的测定”进行前处理，再用高效液相色谱仪进行　检测．试验结果见表４。ＮＹＴ７６１—２００８的前处理简述如下：　①提取：称取制备好的样品２５．０　ｇ。加入５０．００　ｍＬ乙腈，匀　浆，过滤，滤液收集到装有５～７　ｇ氯化钠的具塞量筒中。剧烈　振荡，静置３０　ｍｉｎ；吸ｌ０．００　ｍＬ乙腈溶液到试管中，氮吹近　干，加入２．０　ｍＬ甲醇＋二氯甲烷（１＋９９）。②净化：氨基柱固　相萃取（ＳＰＥ）：将氨基柱条件化后，加入上述待净化液，用　４．０　ｍＬ甲醇＋二氯甲烷（１＋９９）分２次洗脱，收集洗脱液，氮　吹近干，２．５　ｍＬ甲醇定容并混匀，过０．２　Ｉｘｍ滤膜后上机检测。　表４　２种前处理条件下１０种氨基甲酸酯农药加标回收　率和方法精密检测结果　

从表４可以看出，２种前处理方法都能满足蔬菜、水果　中１Ｏ种氨基甲酸酯农药的检测要求。从提取的步骤看。２种　方法均使用乙腈提取，ＮＹＴ７６１—２００８仅使用氯化钠除水并　起盐析作用，而ＱｕＥＣｈＥＲＳ方法增加除水效果更佳的硫酸　镁，增加柠檬酸盐缓冲系统，对于酸碱敏感的农药具有更好　的分离效果，提取效率较高『ｌｌ　。从净化效果看，ＮＹ１ｖ７６１—　２００８使用氨基柱固相萃取，净化效果理想；ＱｕＥＣｈＥＲＳ使用　ＰＳＡ和硫酸镁，能有效吸附蔬菜水果中的脂肪酸，其他如糖　类、甾醇、维生素和色素也有一定的吸附效果。男外，基于氨