正交实验法研究三七皂甙的超声提取
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昆明师范高等专科学校学报 2005,27(4):1~2 CN53-1131/G4 ISSN1008-7958
JournalofKunmingTeachersCollege
收稿日期:2005-11-22
基金项目:国家(863)高技术研究发展计划资助项目(2003AA2Z2021);云南省教育厅科学研究基金资助项目(04Y667C)作者简介:马银海(1964—),男,云南昆明人,副教授,主要从事药物化学教学研究;韦建荣(1964—),男,云南建水人,高级工程师,主要从事药物分析研究.
正交实验法研究三七皂甙的超声提取马银海1,韦建荣2(1.昆明师范高等专科学校化学系,云南昆明 650031;2.云南白药集团,云南昆明 650032)
摘要:在超声波作用下,用乙醇浸提,从三七中提取三七皂甙.以提取产量和三七皂甙含量为评价指标,利用正交实验L
9(34)筛选出最佳工艺条件为:超声提取温度45℃,超声时间30min,提取次数2次,乙醇体积分数
85%.
按优选的最佳工艺实验5次,精制三七皂甙平均收率达到1613%,为常规浸提法的2倍,Rg1相对标准偏差(RSD)为21
84%,R
1相对标准偏差为2199%.
关键词:三七;超声提取;三七皂甙;正交实验法中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008-7958(2005)04-0001-02
StudyontheUltrasonicWaveExtractionaboutNotoginsengbytheThogonalMAYin2hai1,WEIJian2rong2(1.DepartmentofChemistry,KunmingTeachersCollege,YunnanKunming650031,China;
2.YunnanBaiyaoUnitedCorporation,YunnanKunming650032,China)
Abstract:Undertheoperationoftheultrasonicwaveextraction,thesaponinsfromPanaxnotoginsengwasexteact2edintheethanol.Accordingtotheoutputofextractionandthecontentofsaponins,theoptimalextractiontechnicswasgainedbythethogonaldesignL9(34).Theresultrespectivelywas45℃,30min,2timesand85%ethanol.Totesting5timesintermoftheoptimalextractiontechnics,thetheaveragerecoveriesofrefinesaponinswas16.3%,whichwas2timesthanconventionalmethod,meanwhilerelativestandarddeviationsofRg1andR1wasrespectivelywas2.84%and2.99%.Keywords:Panaxnotoginseng;theultrasonicwaveextraction;thesaponins;thethogonaldesign
三七为五加科(Araliaceae)植物三七(Panax
notoginseng(Burk)F・H・chen)的干燥根,是我国传
统中药,其功能为止血散瘀,消肿止痛,主要成分为四环三萜皂甙[1].近20年来的研究结果表明,三七
在血液系统、神经系统、免疫系统、代谢系统、心血管系统,以及抗炎、抗衰老、抗肿瘤等方面具有广泛的药理作用[2].本文采用正交实验法探讨了三七的超
声提取中不同体积分数的乙醇、超声时间、超声提取温度、提取次数对三七皂甙提取率的影响,拟筛选出三七超声提取的最佳方案.
1 仪器及材料仪器:超声提取仪,Agilent1100Series高效液相色谱仪,旋转蒸发器.
材料:三七粗粉(云南天紫红饮片厂提供).
2 实验方法2.1 正交实验设计以提取产量和三七皂甙含量为指标,以影响超声波提取技术的4个主要因素进行L
9(34)正交实
验,实验安排见表1.
表1 超声提取正交实验表L
9(34)
水平因素A:乙醇体积分数/%B:提取时间/minC:提取温度/℃D:提取次数/次165303012754545238560603
2.2 提取物的制备按照正交实验设计9组实验,分别称取三七粗粉10010g9份,至于锥形瓶中,按表1选择的因素和水平超声提取,得提取液后放冷过滤,滤液减压浓缩蒸干,备用.
2.3 提取物中三七皂甙(R1+Rg1)质量分数的测定2.3.1 色谱条件Agilent1100Series高效液相色谱仪,HPLC(3D)化学工作站,YWG-C8(250mm×4166mm,10μm)色谱柱;流动相:乙腈-水(17∶83),流速110mL・min-1,柱温40℃,检测波长203nm.2.3.2 线性关系考察精密吸取人参皂苷Rg1对照品715mg置5mL的量瓶中,以甲醇配制成质量浓度为每1mL含115mg溶液.精密吸取各014,018,112,116,210mL,置2mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,其质量浓度为013,016,019,112,115g/L,作为对照品溶液.各进样20μL,连续进样3次,以进样量/μg为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制工作曲线,回归方程为Y=436863+119933C(r=019998),线性范围在6~30μg呈良好的线性关系.2.3.3 稳定性试验取样品配制后每隔0,1,2,3,4,5,6,8h进行测定,结果表明,8h中峰面积值无大变化,其平均值为3284948,RSD为1186%.2.3.4 精密度试验精密吸取同批样品溶液重复进样5次,测定平均峰面积积分值为3353083,结果RSD为0198%(n=5).
2.3.5 重现性考察对同一批样品,平行提取5份,测定三七皂甙的平均质量分数为19164%,Rg1相对标准偏差(RSD)为2184%,R1相对标准偏差为2199%.
3 实验结果3.1 正交实验结果L9(34)正交实验中各因素和水平之间的9种组合方式、每组实验的结果及分析见表2—表5.
表2 以三七皂甙质量分数为指标编号ABCD
R1质量分数/%Rg1质量分数/%R1+Rg1质量分数/%
111112172171071917921222218417175201593133321731710419176421232188181012018952231310519109221146231231211819922120731323128201652319383213313020145231759332131502114624196K160115641616517466188
K265124661476614366173
K372162661936518464140
R12147213201692148
从表3和表5方差分析可见,只有乙醇体积分数对提取率有显著性差异(P<0105),而其他因素对各考核指标均达不到显著性影响的程度.
从表2和表4极差R比较可知,影响三七皂甙含量的因素主次顺序为A>D>B>C,最佳因素排列为A
3B3C2D1;
影响提取产物产量因素主次为
D>C>B>A,最佳因素排列为A3B2C2D3.其中,A为影响三七皂甙含量的主要因素,D为影响三七总皂甙含量的次要因素.充分考虑B,C因素为影响三七皂甙含量的非主要因素,且为了在生产中节省时间、降低成本,确定最佳提取工艺为A
3B2C2D2.
表3 方差分析来源离差平方和自由度方差F值P值A26.2082213.1041282.75400.00352B1.006020.503010.85300.08437C0.092720.04631.00000.50000D1.289120.644513.90770.06708误差0.092720.0463
合计28.59598
表4 以提取产量为指标编号ABCD产量/g
111111411212222616313332910421232917522311113623122416731322119832132317932213818K16917651762145412
K26516611685117311
K37414821462128214
R818201822192812
表5 方差分析来源离差平方和自由度方差F值P值A12.926726.46331.00000.50000B80.9267240.46336.26040.13773C115.5267257.76338.93710.10063D137.6600268.830010.64930.08584误差12.926726.4633
合计347.04008
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2 昆明师范高等专科学校学报 2005年12月