大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色

病理标本观察实验报告总结一、实验目的本次实验的目的是通过对病理标本的观察，了解病理学基本概念和常见疾病的病理变化，以及掌握常用病理标本处理技术。

二、实验过程1. 病理标本制备：将小鼠肝脏、心脏、肾脏等器官取出，用生理盐水清洗后固定在10%中性缓冲福尔马林溶液中。

2. 石蜡包埋：将固定好的组织标本经过甲醇梯度脱水后，用乙醇和苯并加入适量的石蜡进行包埋处理。

3. 切片染色：将包埋好的标本切成5μm厚度的切片，然后进行染色处理。

其中常用的染色方法有HE染色、Masson染色等。

三、实验结果1. 小鼠肝脏切片观察：肝细胞排列紧密，中央静脉周围有明显血窦。

HE染色显示肝细胞核大而圆，胞浆呈深粉红色。

Masson染色显示纤维化程度较轻。

2. 小鼠心脏切片观察：心肌细胞排列整齐，有明显的纵横交错的纤维。

HE染色显示心肌细胞核圆形，胞浆呈深粉红色。

Masson染色显示心肌纤维化程度较轻。

3. 小鼠肾脏切片观察：肾小球内有明显毛细血管丛，肾小管排列整齐。

HE染色显示肾小球内有明显的Bowman囊和肾小管，核呈圆形或椭圆形。

Masson染色显示肾小球内无明显纤维化。

四、实验分析通过对病理标本的观察，我们可以发现不同器官在组织结构上存在差异。

例如，肝脏中央静脉周围有血窦，而心脏和肾脏则不存在这种结构。

同时，在不同染色方法下，我们也可以观察到不同的病理变化。

例如，在Masson染色下，我们可以看到组织中是否存在明显的纤维化。

五、实验总结通过本次实验，我们了解了病理学基本概念和常见疾病的病理变化，掌握了常用病理标本处理技术。

同时，我们也发现了不同器官在组织结构上的差异以及不同染色方法下观察到的病理变化。

这对于我们进一步深入学习病理学知识具有重要意义。

石蜡切片和HE染色详细步骤石蜡切片和HE染色方法与步骤1(取材颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织(或其他组织)。

切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。

取下所需要的肝组织，切成一小块2,3mm厚。

注意事项:(1)取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

(2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

2(固定将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30,50min。

注意事项:(1)一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。

(2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。

(3)固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

(4)材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。

标签上注明固定液、材料来源、日期等。

标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。

3. 脱水50%酒精?70%酒精?80%酒精?95%酒精?100%酒精?100%酒精。

每级0.5h。

注意事项:(1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

(2)在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

(3)在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

(4)在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

(5)如需过夜，应停留在70%酒精中。

(6)脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象4. 透明1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) ?纯二甲苯(1.5h) ?纯二甲苯(1.5h)。

组织切片操作流程(肝脏切片)---本文旨在介绍肝脏切片的操作流程，为科研人员提供参考。

肝脏切片是一种常见的组织切片技术，在研究肝脏病变、疾病机制等方面具有重要意义。

以下是肝脏切片的操作流程。

准备工作1. 样本采集：从实验动物或患者中获得肝脏样本。

确保样本新鲜且符合研究要求。

2. 样本固定：将肝脏样本放入10%中性缓冲福尔马林中进行固定。

固定时间一般为24小时，可根据需求适当延长。

3. 脱水：将固定的肝脏样本进行脱水处理，依次放入浓度递增的乙醇中（例如70%、80%、90%、95%、100%），每次脱水时间约为1小时。

切片操作1. 组织包埋：将脱水的肝脏样本置于熔点为60摄氏度左右的石蜡中，温度控制在55-60摄氏度，使其充分浸渍石蜡。

2. 石蜡固化：将包埋的肝脏样本在冷却台上冷却，使石蜡固化。

3. 切片：使用旋转式切片机将石蜡固化的肝脏样本切割成薄片，常见厚度为3-5微米。

4. 切片传送：用切片刷将切好的肝脏切片均匀地传送到预涂玻片上。

5. 干燥：将玻片置于60摄氏度的烤箱中进行干燥，通常需要2-3小时，直至切片完全贴附于玻片上。

6. 染色：根据需要进行染色处理，在肝脏切片上滴加适当染色剂，如血液学染色剂、免疫组织化学染色剂等。

7. 盖片：将已染色的肝脏切片背面朝上覆盖玻片盖片，确保切片封装完整。

8. 固定：使用适当的固定剂（如蜡胶）将玻片和盖片固定在一起。

存储和保存1. 标记：在玻片上标记样本信息，如标本编号、日期等。

2. 包装：使用专用的玻片包装袋将肝脏切片包装好，避免切片受损。

3. 存储：将包装好的肝脏切片存放在冷藏箱中，温度控制在4摄氏度左右，确保切片的保存时间。

4. 归档：按照项目或实验的顺序对肝脏切片进行归档，便于后续查找和分析。

以上是组织切片操作流程(肝脏切片)的详细步骤。

在进行实际操作时，请严格按照实验室的安全规范操作，并根据具体实验要求适当调整流程。

希望本文对您的科研工作有所帮助。

HE染色（石蜡、冰冻切片）
HE染色（冰冻切片）
1、固定：甲醇，3min，震荡；
2、清洗：蒸馏水，5min，3次，震荡；
3、染核：苏木素，5min，摇晃数次；
4、冲洗：自来水，反复数次；
5、分化：1%盐酸酒精，10次，上下数次，肉眼观组织呈粉红色；
6、反蓝：自来水，30min，切片由粉红色转为蓝色；
7、清洗：蒸馏水，上下数次；
8、染胞浆：0.5%伊红，3min；
9、冲洗：自来水，至干净；
10、脱水：70%、80%、90%、95%、100%I、100%II酒精，每个梯度1min左右；
11、透明：二甲苯I、II，2min；
12、封片。

HE染色（石蜡切片）
1、脱蜡：二甲苯I 15min，二甲苯II 15min，二甲苯III 15min；
2、脱苯：100%I酒精5min，100%II酒精5min；
3、水化：95%、90%、80%、70%酒精，各3min，再蒸馏水清洗1min；
4、染核：苏木素，5min，摇晃数次；
5、冲洗：自来水，反复数次；
6、分化：1%盐酸酒精，10次，上下数次，肉眼观组织呈粉红色；
7、反蓝：自来水，30min，切片由粉红色转为蓝色；
8、清洗：蒸馏水，上下数次；
9、染胞浆：0.5%伊红，3min；
10、冲洗：自来水，至干净；
11、脱水：70%、80%、90%、95%、100%I、100%II酒精，每个梯度1min左右；
12、透明：二甲苯I、II，2min；
13、封片。

组织切片制作及he染色流程Title: Organ Section Preparation and HE Staining ProcessTask: To create a document that details the process of organ section preparation and hematoxylin and eosin (HE) staining, with alternating English and Chinese paragraphs.Paragraph 1:The initial step in the organ section preparation process is to fix the tissue.This is done by immersing the tissue in a fixative solution, such as formalin, for a specific period of time.After fixation, the tissue is dehydrated by replacing the fixative with a series of increasing concentrations of alcohol.Dehydration is followed by clearing, where the tissue is immersed in a clearing agent, such as xylene or a xylene substitute.The final step before embedding is infiltration, where the tissue is immersed in a molten embedding medium, such as paraffin wax, until it is fully saturated.切片制作的第一步是固定组织。

实验日期：2023年4月10日实验目的：通过观察正常肝脏切片，了解肝脏的解剖结构、组织学特征以及肝小叶的组成，并学习肝脏的基本功能。

实验材料：1. 正常肝脏组织样本2. 切片机3. HE染色试剂盒4. 显微镜5. 图像采集系统实验方法：1. 样本处理：取新鲜正常肝脏组织样本，去除脂肪和结缔组织，用生理盐水清洗，并用刀片切成约2mm厚的组织块。

2. 切片制作：将组织块固定于切片机上，使用切片机将组织块切成连续切片，厚度约为5μm。

3. 染色：将切片放入染色缸中，按照HE染色试剂盒说明书进行染色，包括苏木精染色、盐酸酒精分化、伊红染色和酒精脱水等步骤。

4. 显微镜观察：将染色后的切片用显微镜观察，使用10倍和40倍物镜观察肝小叶的组成、肝细胞的结构和肝内胆管等。

实验结果：1. 肝小叶结构：正常肝脏切片显示肝小叶呈多角棱柱体，由中央静脉、肝索和肝窦组成。

肝索由肝细胞构成，呈放射状排列，中央静脉位于肝小叶中央。

2. 肝细胞结构：肝细胞呈多边形，具有明显的细胞核和丰富的细胞质。

细胞质中可见丰富的线粒体、内质网和高尔基体等细胞器。

3. 肝内胆管：肝内胆管呈细长的管状结构，与肝细胞相连，负责分泌胆汁。

4. 肝血窦：肝血窦是肝细胞与血液之间的通道，血液中的氧气、营养物质和代谢废物通过肝血窦与肝细胞进行交换。

讨论：1. 正常肝脏切片显示的肝小叶结构是肝脏的基本功能单位，由肝细胞、肝血窦和中央静脉组成。

肝细胞是肝脏的主要细胞类型，具有代谢、解毒、储存和分泌等功能。

2. 肝细胞内的细胞器，如线粒体、内质网和高尔基体，对于肝细胞的代谢和功能至关重要。

线粒体是细胞的能量工厂，内质网负责蛋白质的合成和修饰，高尔基体则参与蛋白质的分泌和转运。

3. 肝内胆管在肝脏的胆汁分泌和排泄中起着重要作用。

胆汁是肝脏分泌的一种消化液，含有胆盐、胆固醇、胆色素等成分，有助于脂肪的消化和吸收。

4. 肝血窦是肝细胞与血液之间的界面，负责物质交换。

组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。

（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。

2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。

脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。

组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。

在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。

组织染色后也要进行透明。

最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。

组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。

用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。

为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。

一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。

组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。

这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。

石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。

用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。

但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。

3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。

切片厚度一般为3-5μm。

切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。

也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。

二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。

病理片HE染色步骤病理片HE染色步骤：烤片80度半小时(1)二甲苯（Ⅰ）5min(2)二甲苯（Ⅱ）5 min(3)二甲苯（III）5min(4)100%乙醇（Ⅰ）2min(5)90%乙醇（Ⅱ） 2 min(6)80%乙醇（III）2min(7)70%乙醇（IV）2 min(8) 流水冲洗5min(9) 苏木精液染色5 min(10) 流水稍洗去苏木精液1-3 s(11) 1%盐酸乙醇1-3 s(12)流水过洗至返蓝(13) 0.5%伊红液染色1-3 min(14) 蒸馏水稍洗1-2 s(15) 80%乙醇稍洗1-2 s(16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s(17) 100%乙醇（Ⅱ）3-5 s(18) 二甲苯（Ⅰ）2 min(19) 二甲苯（Ⅱ）2 min(20) 二甲苯（Ⅲ）2 min(21) 中性树胶封固* 冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30 s（2）水洗1～2 s（3）苏木精液染色（60℃）30～60 s（4）流水洗去苏木精液5～10 s（5）1%盐酸乙醇1～3 s（6）稍水洗1～2 s（7）促蓝液返蓝（8）流水冲洗15～30 s（9）0.5%曙红液染色30～60 s（10）蒸馏水洗1～2 s（11）80%乙醇1～2 s（12）95%乙醇1～2 s（13）无水乙醇1～2 s（14）石炭酸二甲苯2～3 s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s（17）中性树胶封固。

H-E染色评定标准：（1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；（2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。

He染色切片制作（各动物、全过程、操作要点、注意事项）石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml） 1000 200 100重铬酸钾（mg） 63 120 100蒸馏水（ml） 200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水 2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林 100ml蒸馏水 900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液 10ml蒸馏水 90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水 100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。