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组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
组织切片制作及he染色流程Title: Organ Section Preparation and HE Staining ProcessTask: To create a document that details the process of organ section preparation and hematoxylin and eosin (HE) staining, with alternating English and Chinese paragraphs.Paragraph 1:The initial step in the organ section preparation process is to fix the tissue.This is done by immersing the tissue in a fixative solution, such as formalin, for a specific period of time.After fixation, the tissue is dehydrated by replacing the fixative with a series of increasing concentrations of alcohol.Dehydration is followed by clearing, where the tissue is immersed in a clearing agent, such as xylene or a xylene substitute.The final step before embedding is infiltration, where the tissue is immersed in a molten embedding medium, such as paraffin wax, until it is fully saturated.切片制作的第一步是固定组织。
1 组织切片1、剪取组织,10 %甲醛固定。
2、已经固定好的组织依次在70 %、80 %、90 %、95 %、95 %、100 %的乙醇溶液中浸泡15-20 min，3、再浸入乙醇和二甲苯（1:1）的混合溶液中15-20 min，然后浸入二甲苯直到透明，将透明的组织浸入石蜡和二甲苯（1:1）的混合溶液中浸泡1 h，用石蜡进行固定。
4、包埋、切片2组织切片HE染色染色结果：细胞核呈蓝色，细胞的细胞质呈粉红色。
步骤：1、组织切片用二甲苯脱蜡15 min，再次用二甲苯进行脱蜡15 min，2、浸入二甲苯和酒精混合溶液（1:1）3 min，依次浸入100%、95 %、90%、80%、70%、50%乙醇各2 min。
3、苏木素染色5 min, 自来水冲洗3 min, 1 %盐酸2 s，自来水冲洗2 min, 依次浸入50 %、70 %、80 %乙醇2 min,伊红浸泡5 s。
4、 95 %、100 %、100 %乙醇各2 min，最后连续2次二甲苯各15 min，封片。
3 组织切片免疫组化检测1、组织切片置于58 ℃烘箱内烤片20 min, 然后取出待冷却后，进行脱蜡。
2、连续2次二甲苯脱蜡各15 min，依次浸入100 %、95 %、80 %乙醇、蒸馏水各2 min。
3、高压抗原修：将3 L柠檬酸盐缓冲液注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。
切片置于切片架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖高压锅压阀。
当压力锅开始慢慢喷气时（加热5-6 min）计时1-2 min，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，蒸馏水冲洗，PBS洗，片子室温冷却20 min，再次PBS洗。
4、免疫组化具体方法参照SP试剂盒（福州迈新）：1、室温，正常非免疫动物血清封闭30 min；2、一抗4 ℃ 12 h；3、用PBS清洗两次，每次2 min；4、室温，内源性过氧化物酶阻断1 h；用PBS清洗三次，每次2 min；5、室温，生物素标记的二抗30 min；用PBS清洗三次，每次2 min；6、室温，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶30 min，7、DAB显色5 min，蒸馏水冲洗；8、Gill’s苏木素复染3 min；9、自来水流水冲洗5 min；依次95 %、100 %的乙醇脱水3 min；10、最后用二甲苯透明，封片，镜检，拍照。
HE染色（该方法对于肺组织较为适宜）
①新鲜组织取出后4%多聚甲醛固定48小时；
②浸入70%酒精中可保存15天;
③脱水（梯度）：70%乙醇1.5小时1次 80%乙醇30min 1次 95%乙醇
15min 2次 1000%乙醇10min 3次；
④透明：二甲苯透明2次（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min（之前是30min）
⑤浸蜡，包埋，烘片程序（56度）
石蜡Ⅰ浸润30min 石蜡Ⅱ浸润90min 石蜡Ⅲ浸润6h（2-4h）包埋
切片烘片
⑥ HE染色
1.脱蜡：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各10min；
2水化：无水乙醇5分钟2次 95%乙醇5分钟2次 70%乙醇五分钟1次，自来水轻晃几下置于蒸馏水中3-5分钟（可一直放于蒸馏水中）；
3苏木精染色5分钟---自来水轻晃1分钟至无苏木精-----1%盐酸酒精分化10秒（变为橙红色）---硫酸锂中返蓝（上下来回，可见切片返回蓝色，蒸馏水中静置3秒；
4.脱水：70%酒精20秒----95%酒精5分钟-----无水乙醇10分钟，95%酒精脱水时可以取出切片显微镜下观察染色效果）；
5透明：二甲苯透明5分钟2次；
6.封片：中性树胶，在二甲苯中取出切片趁二甲苯未干时封片，通风厨中进行后置于通风厨中晾干。
病理学技师讲课稿范文模板病理学技师讲课稿范文一、引言（500字）尊敬的各位同事、热爱病理学的学员们，大家好！我是XX医院的病理学技师XX，很荣幸能够有机会为大家讲解病理学知识。
病理学是医学的基础学科，它通过对疾病的病理变化进行研究，为临床医学提供重要的依据。
本次课程的目标是帮助大家更好地理解和应用病理学知识，为临床工作提供有力的支持。
接下来，我将为大家讲述病理学的基本概念、病理标本的制备与诊断、常见的病理学检查方法等内容。
二、病理学的基本概念（1000字）1. 病理学的定义和分类：病理学是研究细胞、组织、器官和机体发生病理变化及其病因、病理机制、临床表现和转归的学科。
病理学可分为常规病理学和专科病理学两大分类。
2. 病理标本的制备和处理：病理标本的制备需要遵循一系列严格的操作规范，包括标本采集、固定、切片、染色和封片等步骤。
这些步骤的正确执行对于获得准确的病理诊断非常重要。
3. 病理学的基本概念：病理学涉及的基本概念包括病理变化、病理过程、病理病变、病理诊断、病理分级和分期等。
这些概念的理解对于病理学的学习和应用至关重要。
三、病理标本的制备与诊断（1500字）1. 病理标本的采集和处理：病理标本的采集需要根据临床病情确定采集部位和方法，并采用无菌技术进行操作，以避免污染。
采集后的标本应立即放入足够的混合液中进行固定，以保持标本的形态和结构。
2. 病理标本的切片和染色：病理标本在固定后需进行切片，并经过染色处理，以便观察和诊断。
常见的染色方法包括血涂片染色、组织切片染色和免疫组化染色等。
3. 临床和病理诊断的关系：临床诊断是通过病史、体征和实验室检查等手段对患者进行诊断。
而病理诊断则是通过病理标本的观察和分析得出结论。
临床诊断和病理诊断互为补充，共同为疾病的诊断提供准确的依据。
四、常见的病理学检查方法（2000字）1. 常规组织学检查：常规组织学检查是病理学中最常见的检查方法之一，它通过对组织切片的染色和观察，来识别和描述组织病理变化及其性质和级别。
组织病理切片以及HE染色
（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：
一、制作切片
1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋
组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔
点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片
石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色
1. 二甲苯脱蜡2×10 min；
2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；
3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；
4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；
5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；
6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏
水洗1min；
7. 伊红染色90s；
8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；
9. 无水乙醇10min；
10.二甲苯2×10 min；
11.中性树胶或加拿大树胶封片。
（三）实验结果：细胞核呈蓝色；细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。
钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。
（四）实验分析：HE染色时病理学中常用的一种诊断方法，通常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理学变化，从而做出病理学诊断。
