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组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
组织切片制作及he染色流程Title: Organ Section Preparation and HE Staining ProcessTask: To create a document that details the process of organ section preparation and hematoxylin and eosin (HE) staining, with alternating English and Chinese paragraphs.Paragraph 1:The initial step in the organ section preparation process is to fix the tissue.This is done by immersing the tissue in a fixative solution, such as formalin, for a specific period of time.After fixation, the tissue is dehydrated by replacing the fixative with a series of increasing concentrations of alcohol.Dehydration is followed by clearing, where the tissue is immersed in a clearing agent, such as xylene or a xylene substitute.The final step before embedding is infiltration, where the tissue is immersed in a molten embedding medium, such as paraffin wax, until it is fully saturated.切片制作的第一步是固定组织。
1 组织切片1、剪取组织,10 %甲醛固定。
2、已经固定好的组织依次在70 %、80 %、90 %、95 %、95 %、100 %的乙醇溶液中浸泡15-20 min，3、再浸入乙醇和二甲苯（1:1）的混合溶液中15-20 min，然后浸入二甲苯直到透明，将透明的组织浸入石蜡和二甲苯（1:1）的混合溶液中浸泡1 h，用石蜡进行固定。
4、包埋、切片2组织切片HE染色染色结果：细胞核呈蓝色，细胞的细胞质呈粉红色。
步骤：1、组织切片用二甲苯脱蜡15 min，再次用二甲苯进行脱蜡15 min，2、浸入二甲苯和酒精混合溶液（1:1）3 min，依次浸入100%、95 %、90%、80%、70%、50%乙醇各2 min。
3、苏木素染色5 min, 自来水冲洗3 min, 1 %盐酸2 s，自来水冲洗2 min, 依次浸入50 %、70 %、80 %乙醇2 min,伊红浸泡5 s。
4、 95 %、100 %、100 %乙醇各2 min，最后连续2次二甲苯各15 min，封片。
3 组织切片免疫组化检测1、组织切片置于58 ℃烘箱内烤片20 min, 然后取出待冷却后，进行脱蜡。
2、连续2次二甲苯脱蜡各15 min，依次浸入100 %、95 %、80 %乙醇、蒸馏水各2 min。
3、高压抗原修：将3 L柠檬酸盐缓冲液注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。
切片置于切片架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖高压锅压阀。
当压力锅开始慢慢喷气时（加热5-6 min）计时1-2 min，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，蒸馏水冲洗，PBS洗，片子室温冷却20 min，再次PBS洗。
4、免疫组化具体方法参照SP试剂盒（福州迈新）：1、室温，正常非免疫动物血清封闭30 min；2、一抗4 ℃ 12 h；3、用PBS清洗两次，每次2 min；4、室温，内源性过氧化物酶阻断1 h；用PBS清洗三次，每次2 min；5、室温，生物素标记的二抗30 min；用PBS清洗三次，每次2 min；6、室温，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶30 min，7、DAB显色5 min，蒸馏水冲洗；8、Gill’s苏木素复染3 min；9、自来水流水冲洗5 min；依次95 %、100 %的乙醇脱水3 min；10、最后用二甲苯透明，封片，镜检，拍照。
HE染色（该方法对于肺组织较为适宜）
①新鲜组织取出后4%多聚甲醛固定48小时；
②浸入70%酒精中可保存15天;
③脱水（梯度）：70%乙醇1.5小时1次 80%乙醇30min 1次 95%乙醇
15min 2次 1000%乙醇10min 3次；
④透明：二甲苯透明2次（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min（之前是30min）
⑤浸蜡，包埋，烘片程序（56度）
石蜡Ⅰ浸润30min 石蜡Ⅱ浸润90min 石蜡Ⅲ浸润6h（2-4h）包埋
切片烘片
⑥ HE染色
1.脱蜡：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各10min；
2水化：无水乙醇5分钟2次 95%乙醇5分钟2次 70%乙醇五分钟1次，自来水轻晃几下置于蒸馏水中3-5分钟（可一直放于蒸馏水中）；
3苏木精染色5分钟---自来水轻晃1分钟至无苏木精-----1%盐酸酒精分化10秒（变为橙红色）---硫酸锂中返蓝（上下来回，可见切片返回蓝色，蒸馏水中静置3秒；
4.脱水：70%酒精20秒----95%酒精5分钟-----无水乙醇10分钟，95%酒精脱水时可以取出切片显微镜下观察染色效果）；
5透明：二甲苯透明5分钟2次；
6.封片：中性树胶，在二甲苯中取出切片趁二甲苯未干时封片，通风厨中进行后置于通风厨中晾干。
病理学技师讲课稿范文模板病理学技师讲课稿范文一、引言（500字）尊敬的各位同事、热爱病理学的学员们，大家好！我是XX医院的病理学技师XX，很荣幸能够有机会为大家讲解病理学知识。
病理学是医学的基础学科，它通过对疾病的病理变化进行研究，为临床医学提供重要的依据。
本次课程的目标是帮助大家更好地理解和应用病理学知识，为临床工作提供有力的支持。
接下来，我将为大家讲述病理学的基本概念、病理标本的制备与诊断、常见的病理学检查方法等内容。
二、病理学的基本概念（1000字）1. 病理学的定义和分类：病理学是研究细胞、组织、器官和机体发生病理变化及其病因、病理机制、临床表现和转归的学科。
病理学可分为常规病理学和专科病理学两大分类。
2. 病理标本的制备和处理：病理标本的制备需要遵循一系列严格的操作规范，包括标本采集、固定、切片、染色和封片等步骤。
这些步骤的正确执行对于获得准确的病理诊断非常重要。
3. 病理学的基本概念：病理学涉及的基本概念包括病理变化、病理过程、病理病变、病理诊断、病理分级和分期等。
这些概念的理解对于病理学的学习和应用至关重要。
三、病理标本的制备与诊断（1500字）1. 病理标本的采集和处理：病理标本的采集需要根据临床病情确定采集部位和方法，并采用无菌技术进行操作，以避免污染。
采集后的标本应立即放入足够的混合液中进行固定，以保持标本的形态和结构。
2. 病理标本的切片和染色：病理标本在固定后需进行切片，并经过染色处理，以便观察和诊断。
常见的染色方法包括血涂片染色、组织切片染色和免疫组化染色等。
3. 临床和病理诊断的关系：临床诊断是通过病史、体征和实验室检查等手段对患者进行诊断。
而病理诊断则是通过病理标本的观察和分析得出结论。
临床诊断和病理诊断互为补充，共同为疾病的诊断提供准确的依据。
四、常见的病理学检查方法（2000字）1. 常规组织学检查：常规组织学检查是病理学中最常见的检查方法之一，它通过对组织切片的染色和观察，来识别和描述组织病理变化及其性质和级别。
组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
病理科常规切片（HE切片）质虽PDCA管理循环案例示范病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。
一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。
过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。
但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。
目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。
数据收集：参照〈〈临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1）,对今年1-7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2）,总的优级率87.1%,优良率97.6%，总体达标。
表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准优质标准满分（分）质里缺K臼减分组织切面完整，内镜咬检、10组织稍不完整：减1〜3分；不完整：减穿刺标本切面数4〜10分；未达到规定面数：减5分切片薄（3〜5四），厚薄均匀10切片厚（细胞重叠），影响诊断：减6〜10分；厚薄不均匀：减3〜5分切片无刀痕、裂隙、颔痕10有刀痕、裂隙、颔痕，尚不影响诊断：减2分；有刀痕、裂隙、颔痕，影响诊断：减5分切片平坦，无皱褶、折叠10有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶折或折叠，影响诊断：各减5分切片无污染10有污染：减10分无气泡（切片与载玻片间/盖10有气泡：减3分；胶液外溢：减3分片与切片、载玻片问）,盖片周围无胶液外溢透明度好10透明度差：减1〜3分；组织结构模糊：减细胞核与细胞浆染色对比活105〜7分细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红（细胞浆）晰与蓝（细胞核）对比不活晰：减5分切片无松散，裱贴位置适当10切片松散：减5分；切片裱贴位置不当：减切片整洁，标签端正粘牢，105分切片小整洁：减3分；标签粘贴不牢：减3编号活晰分；编号不活晰：减4分合计100注：切片质量分级标准：？①甲级片：290分（优）；②乙级片：75〜89分（良）；③丙级片：60〜74分（基本合格）；④丁级片：<59分（不合格）表2 2012年1-7月常规切片质量抽查情况发现问题：今年1-7月常规切片质量总体达标，但6、7月份常规切片质量的优良率分别仅为90%、93.3% （见表2）,按照〈〈临床技术操作规范病理学分册》切片质量要求，6月份刚达标。
病理学技师讲课稿模板范文病理学技师讲课稿模板：病理学基础知识尊敬的各位同事，大家好！我是XX医院的病理学技师，今天非常荣幸能够为大家讲授有关病理学基础知识的课程。
病理学作为医学的基础学科，对于日常临床工作和研究具有重要的意义。
一、病理学的概念和作用病理学是研究人体疾病发生发展规律以及疾病与病变的本质和机制的学科。
它是临床诊断的基础，是评估疾病预后和制定治疗方案的重要依据。
通过病理学的研究，我们可以了解疾病的发生原因、发展过程和病理变化，进而开展有效的治疗和预防工作。
二、病理学的分类和内容病理学按研究对象的不同可以分为：常规病理学、细胞病理学和分子病理学。
1.常规病理学是研究组织和器官在形态、结构上的病理变化的学科。
常规病理学的内容包括常规组织学、病理生理学和病理化学。
2.细胞病理学是研究细胞和细胞器在形态、结构上的病理变化的学科。
细胞病理学的内容包括细胞学与组织胚胎学。
3.分子病理学是研究分子水平上的病理变化的学科。
分子病理学的内容包括基因组学、转录组学、蛋白质组学等。
三、病理学常用技术和仪器1.组织处理技术：包括固定、包埋、切片、染色等步骤。
固定是将组织或细胞的结构保持在活体状态的过程，常用的固定剂有福尔马林、生理盐水、酒精等。
包埋是将固定后的组织或细胞嵌入石蜡中，以便进行切片。
切片是将包埋后的组织或细胞切成薄片，常用的切片工具有旋转式切片机和冷冻切片机。
染色是为了突出组织或细胞的特定结构而进行的染色过程，常用的染色方法有苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色等。
2.显微镜：是病理学技师常用的仪器之一，主要用于观察组织或细胞的形态和结构。
常用的显微镜有光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜适用于观察常规组织学和细胞学的切片，电子显微镜适用于观察细胞器、亚细胞结构和微生物等微观物体。
3.免疫组化技术：是指利用特异性抗体与抗原相互作用，通过染色、荧光等方法来检测组织或细胞中特定蛋白质表达的技术。
常用的免疫组化技术包括免疫组织化学方法、免疫荧光法等。
组织病理切片以及HE染色
（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：
一、制作切片
1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋
组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔
点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片
石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色
1. 二甲苯脱蜡2×10 min；
2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；
3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；
4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；
5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；
6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏
水洗1min；
7. 伊红染色90s；
8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；
9. 无水乙醇10min；
10.二甲苯2×10 min；
11.中性树胶或加拿大树胶封片。
（三）实验结果：细胞核呈蓝色；细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。
钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。
（四）实验分析：HE染色时病理学中常用的一种诊断方法，通常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理学变化，从而做出病理学诊断。
