紫外可见分光光度法ppt课件

光源透镜吸收池光栅光电二极管阵列检测器tu1800spc紫外可见分光光度计285新型分光光度计展示光度计photolabspektral适亍多种形状吸收池dr2700型便携式分光光度计便携性295分光光度法测量条件的选择1检测波长的选择丌易有其它物质干扰的较高的和宽的吸收峰处的波长302溶剂的选择及处理方法选择原则
分子能级的能量(各种能级能量总和)
或能量间隔各异，因此不同物质将
选择性地吸收不同波长或能量的外来
辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。
（P164-166:电子跃迁的种类）
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
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（2）定性分析方法：
♥与标准品、标准谱图对比
♥对比吸收光谱特征数据
♥对比吸收度的比值
第二章 紫外可见分光光度法在食品检
测中的应用
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第二章 紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
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精品资料
你怎么称呼老师？
如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是
否会认为老师的教学方法需要改进？
你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？
教师的教鞭
“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，
该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，
且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
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b. 多组分定量方法
由于吸光度具有加和性，因此可以在同一试样中
测定多个组份。
设试样中有两组份X 和Y，将其显色后，分别绘
制吸收曲线，会出现如图所示的三种情况：
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用

生色团：
最有用的紫外–可见光谱是由π→π* 和 n→π* 跃迁产生的。这两种跃迁均要求有 机物分子中含有不饱和基团。这类含有π键 的不饱和基团称为生色团。简单的生色团 由双键或叁键体系组成，如乙烯基、羰基、 亚硝基、偶氮基－N＝N－、乙炔基、腈基 －C≡N等。
助色团：
有一些含有n电子的基团(如-OH、-OR、NH2、-NHR、-X等)，它们本身没有生色功 能（不能吸收λ>200 nm的光），但当它们 与生色团相连时，就会发生 n–π共轭作用， 增强生色团的生色能力（吸收波长向长波 方向移动，且吸收强度增加），这样的基 团称为助色团。
电荷转移跃迁在跃迁选律上属于允许跃迁，其摩 尔吸收系数一般都较大（约104），适宜于微量金 属的检出和测定。
电荷转移跃迁在紫外区或可见光呈现荷移光谱， 荷移光谱的最大吸收波长及吸收强度与电荷转移 的难易程度有关。
例：Fe3+与SCN-形成血红色配合物，在490 nm处 有强吸收峰。其实质是发生了如下反应：
分为：光谱分析法和非光谱分析法。
光谱分析法是指在光（或其他能量）的作用下， 通过测量物质产生的发射光、吸收光或散射光的 波长和强度来进行分析的方法。 吸收光谱分析 发射光谱分析 分子光谱分析 原子光谱分析
在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立 起来的分析方法称为吸收光度法，主要有：
红外吸收光谱（IR）：分子振动光谱，吸收光波长 范围2.5～1000 μm ，主要用于有机化合物结构鉴定。
紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。
基本组成（续）
2、单色器
将光源发射的复合光分解成 单色光并可从中选出任一波 长单色光的光学系统。
色散元件是其核心部分，多采用棱镜或光栅。

第二章 紫外-可见分光光度法
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紫外-可见分光光度法
第一节 基本原理
一、紫外-可见吸收光谱（UV-VIS光谱）
• 起源：价电子能级跃迁 由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射，分
子中价电子（或外层电子）的能级跃迁而产生。 紫外光谱—又称为电子光谱—分子吸收光谱
问题1：为何UV-Vis光谱吸收带都比较宽??
pH值降低（加酸）→ E2、B带蓝移，ε减
pH值增大（加碱）→E2、B带红移，ε增大
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第二节 紫外可见分光光度计
• 仪器校正
1、波长校正
• 苯的吸收峰校正波长（紫外光区）。在25ml容量瓶内，滴入一滴苯(A.R.)， 用无水乙醇稀释至刻度，摇匀后，以无水乙醇为空白，在200～280nm间用 lcm石英池测定吸收度。 如下： 229.2 233.5 238.9 243.2 248.5 254.5 260.6 268.4
图8-4 (+)和(-)丁醇-2的ORD谱线
2）发色团(如羰基) R带：270 nm 。ORD曲线在此处越过零点，进入另一个相
区。形成的一个峰和一个谷组成的ORD谱线—Cotton效应谱线 正的Cotton效应：当波长由长波一端向短波一端移动时， ORD谱线由峰向谷变化 负的Cotton效应： ORD谱线由谷向峰变化 ORD谱线与零线相交点的波长称为λK
2.3.1 蛋白质的圆二色性
在蛋白质或多肽中，主要的光活性基团是肽链骨架中的肽键， 芳香氨基酸残基及二硫桥键。当平面圆偏振光通过这些光活性的 生色基团时，光活性中心对平面圆偏振光中的左、右圆偏振光的 吸收不相同，产生吸收差值。由于这种吸收差的存在， 造成了偏 振光矢量的振幅差，圆偏振光变成了椭圆偏振光，这就是蛋白质 的圆二色性。

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参比溶液、吸光度范围
参比溶液的选择
➢ 问题：邻二氮菲法测定水溶液中的铁离子含量应选择何种 参比溶液？
➢ 溶剂参比 ➢ 试剂参比 ➢ 试液参比 ➢ 褪色参比
吸光度范围
测量吸光度过高或过低，误差都很大， 一般适宜的吸光度范围是0.2～0.8。
➢ 问题：如果测定值过大或过小应如何处理？
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项目二 紫外-可见分光光度法
中山火炬职业技术学院 精细化工专业
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引入
项目2：用紫外-可见分光光度计对化妆品样品的维
生素C和铁含量进行分析评价
子项目1：用可见分光光度计对砷含量进行测定
子项目2：用紫外分光光度计对维生素C的含量的进 行测定
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教学内容
入射波长 显色剂用量 温度、时间 溶液酸度 溶剂
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显色剂用量
确定方法 配制一系列被测元素浓度相同不同显色剂用量的溶液，分别测其吸 光度，作A-CR曲线，找出曲线平台部分，选择一合适用量即可。
吸光度与显色剂浓度的关系曲线
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显色条件--溶液酸度
确定方法
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稳定性、干扰消除
稳定性实验 绘制A对t的曲线，选择吸光度平坦的部分确定最佳的显色时间。 干扰的消除
➢ 改变酸度、氧化剂、掩蔽剂消除； ➢ 改变入射波长； ➢ 改变合适的参比溶液。
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显色温度、溶剂选择
显色温度 ➢ 大多数显色反应是在常温下进行的，有些反应必须在较高温 度下。 ➢ 绘制工作曲线和进行样品测定时应该使溶液温度保持一致。