Rb Gene Protein抗体试剂说明书APA111【产品名称】通用名称：Rb Gene Protein抗体试剂英文名称：Anti Human Rb Gene Protein MonoclonalAntibody【检测原理】本抗体试剂基于抗原抗体特异性结合原理，样品组织经过抗原修复后，暴露抗原决定簇的目标靶蛋白与一抗结合，形成抗原与一抗的复合物。
然后加入HRP酶标多聚物二抗与一抗结合，最后二抗上的HRP催化DAB显色液中的H2O2分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，使组织切片中抗原位点上出现棕色或棕褐色沉积物。
借助光学显微镜，通过观察颜色的变化以此判定目标抗原的表达情况。
【主要组成成分】Rb Gene Protein鼠源性单克隆抗体；缓冲液。
【储存条件及有效期】本产品2~8℃储存，有效期为12个月。
采用泡沫箱加冰袋密封的运输方式，时间不大于7天，开箱温度不超过30℃，产品性能无影响。
（使用时应即拿即用，使用后立即放回冰箱。
）【适用范围】适用于人工手动操作或全自动免疫组化染色机自动操作。
【样本要求】新鲜活检或10%中性福尔马林固定的病人组织，参照病理技术规范要求取材、固定（8-24小时为宜）、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。
建议组织切片厚度为3~5μm，室温下保存并于10天内完成实验检测以确保组织中抗原分布情况的良好重现。
【使用方法】1.准备工作：1)仪器设备：电磁炉，不锈钢高压锅，孵育盒，计时器，免疫组化笔，移液器，全自动免疫组化染色机，光学显微镜等；2)溶液配制：PBS溶液（7.2-7.6）、抗原修复液、DAB显色液等，各溶液的配制可参见相关说明书；3)反应温度：室温（18℃~37℃）；4)抗体工作液：浓缩型抗体建议稀释比例1：100-1：400（注：该稀释比例为建议参数，实际使用时会由于实验室差异而有所不同，建议客户在使用前对该浓缩抗体进行检测，以确定最佳稀释度。
）；2.操作步骤：2.1.用于全自动免疫组化染色机：1)在软件上按照推荐的染色方案设制相应的染色程序；2)将抗体工作液（浓缩液按推荐稀释比例稀释后）放至相应的机用一抗开放容器中；3)打印切片信息标签，并将贴好标签信息的载玻片载入染色机；4)准备好相关实验耗材，将实验所需试剂放至仪器对应位置，并确认所有试剂余量充足；5)点击开始，运行染色程序；详细实验操作步骤及要求请参照全自动免疫组化染色机操作手册。
临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical 2017 年第 4 卷第 8 期2017 Vol.4 No.81388免疫组化双染技术在肺及前列腺肿瘤活检组织中的应用石磊，朱绚丽，杨海生，陆欢，洪玉萍，张桃华，陈玲玲，官兵*（上海市第六人民医院金山分院，上海 201599）【摘要】目的 探讨免疫组化双染技术在肺及前列腺活检组织中的应用。
方法 采用Roche的双染试剂盒，对35例肺活检组织和29例前列腺活检组织进行免疫组化双染/三染。
结果 肺活检组织中，免疫组化双染与单染的符合率为95%（19/20），其中腺癌为80%（4/5），鳞癌为92.9%（13/14），腺鳞癌100%（1/1）；前列腺肿瘤活检组织中，免疫组化三染与单染的符合率为90%（18/20）。
结论 免疫组化双染技术能对肺和前列腺恶性肿瘤进行准确诊断，同时可解决活检组织量少的问题。
【关键词】免疫组化双染；活检；肺肿瘤；前列腺肿瘤【中图分类号】R361 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2017.08.1388.03Application of immunohistochemical double staining technique inbiopsy of lung and prostate tumorsSHI Lei, ZHU Xuan-li, YANG Hai-sheng, LU Huan, HONG Yu-ping, ZHANG Tao-hua, CHENLing-ling, GUAN Bing(Shanghai No.6 People's Hospital Jinshan Branch, Shanghai 201599, China)【Abstract】Objective To investigate the immunohistochemical double staining technique used in lung and prostate biopsy.Methods Roche double staining kit,35 cases of lung biopsy and 29 cases of prostate biopsy tissue by immunohistochemical double staining / three staining.Results Lung biopsy,immunohistochemistry double staining and staining with the rate of 95% (19/20),including 80% adenocarcinoma,squamous cell carcinoma (4/5) 92.9% (13/14),100% adenosquamous carcinoma (1/1); prostate tumor biopsy,immunohistochemical staining and three single staining with the rate of 90% (18/20).Conclusion Free The double staining technique can accurately diagnose the lung and prostate cancer,and can solve the problem of less biopsy【Key words】Immunohistochemical double stain;Biopsy;Lung tumour;Prostate tumour免疫组化双染技术在于解决组织量少或难以获取的活检小标本，不能同时进行多张切片染色的问题；也可以进行不同细胞群/亚群之间的比较（如T/B 淋巴细胞，CD5/ CD10，CD4/CD8，kappa/lambda）；更可以利用两种抗体同时在一张玻片上显示的特点，方便的对肿瘤良/恶性及浸润/非浸润鉴别诊断。
常规HE染色不同染色系统的评分分析近年来，随着科技的发展，我国常规病理诊断中HE染色技术得到不断的改良，滴染式染色方法的出现对传统浸染模式提出挑战，与此同时，对于步骤繁琐的浸染程序进行精简的改良浸染模式也应运而生。
我们从染色结果、染色均一性及有无交叉污染等方面，探讨3种染色体系的差异。
一、材料与方法1.材料收集北京协和医院2014年5—12月经4%中性缓冲甲醛液固定的手术标本10例，分别来源于皮肤、乳腺、胃、肠、肺、肝、肾、脑、淋巴结和甲状腺的常规病理组织。
本组病例的入选标准是（必须符合所有标准）：（1）病理学确诊为正常或肿瘤组织；（2）能够获得足够组织标本；（3）样本是外检诊断后剩余的组织样本；（4）样本采用4%中性甲醛固定液，且符合临床试验相关要求。
每例经石蜡包埋后，获得4 μm连续切片22张，分为11个染色单元，每个染色单元含10张不同组织来源的切片。
2.仪器及试剂VIP6全自动组织脱水机（购自日本樱花公司），RM2235轮转式石蜡切片机（购自德国徕卡公司），传统浸染法使用染色仪器为Autostainer XL自动染色机（购自德国徕卡公司），染色试剂为环保染色套液（北京九州柏林生物科技有限公司）；改良浸染法使用Coverstainer全自动HE染色封片机，染色试剂为机型推荐试剂（购自丹麦Dako公司）；滴染法使用Symphony全自动高清晰单独滴染式HE 染色平台，染色试剂为机型推荐试剂（购自瑞士Roche公司）。
其余试剂均为国产分析纯。
3.分组按照不同染色方法对染色切片分组，其中A 组为改良浸染法＋进行性染色，“浸泡”染色，在整个染色过程中所有试剂循环流动＋Mayer苏木精；B组使用传统浸染法＋退行性染色，“浸泡”染色，在整个染色过程中除水以外的所有试剂静止＋Harris苏木精；C组使用单张切片每次使用新鲜试剂的滴染法＋Harris苏木精。
根据机型选择推荐染色程序。
根据不同仪器推荐的最大染色切片负荷量，A 组切片染色数量为3 000张，B组为1 500张，C组为700张。
