龙葵生物碱诱导HeLa细胞凋亡的研究
- 格式：pdf
- 大小：349.31 KB
- 文档页数：4
司。
碱 （ｏａ ｉｅ 等 ， 含皂 甙等 成 分 。生 物 碱类 化 合 物 ｓ ｌｎｎ ） 也 大 多都 能诱 导肿 瘤 细 胞 凋 亡 ， 胞 凋 亡 与肿 瘤 的发 细 生 密切 相关 ， 瘤 的 发 生可 能 是 由 于细 胞 凋亡 的通 肿 路 受 阻造成 的口 ］ 。一些研 究 报 道表 明 ， 葵 的 醇 提 龙 物 能够 抑制 乳 腺 癌 的 生 长并 能诱 导 细 胞 凋 亡［ ， ３ 其 ］ 中的澳 洲茄 边碱有 明显 的抗 肿 瘤 作用 ［ 。龙 葵制 剂 ４ ］
更 多 的 细 胞 出现 凋 亡 而 实现 的 。 关 键 词 ： 葵 生 物 碱 ； ＴＴ； 龙 Ｍ ＴＵＮＥＬ染 色 ； ＮＡ； 变 型 Ｐ ３ Ｈｅ ＰＣ 突 ５ ； Ｌａ细 胞
中图分类号 ：２５ Ｒ ８
文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （０ ０ ０ —０ １０ １０—０ ８ ２ １ ） ８０ ５ —４
培 养 ２ ， 入 不 同 浓 度 （ ０ ５ 、 ０ 、 ０ 、 ０ 、 ４ｈ 加 １ 、 ０ １０ ２ ０ ４０
癌、 卵巢 癌药 物作 用 机 制 研 究 已经 展 开 ； 食 道 癌 、 对 膀 胱癌 抑制 机 制 的研 究 已有 报 道 ［ ， 龙 葵 生 物 碱 ５但 ］ 对 宫颈癌 的治疗作 用 国 内外 尚未 见相 关 报道 。 本试 验将 分离 提取 的龙葵 生 物 碱作 用 于人 宫 颈 癌 细胞株 （ Ｌ ） 进 行 体 外 培 养 试 验 ， 察 药 物 对 Ｈｅ ａ ， 观
摘
要 ： ＭＴＴ 法观 察 龙葵 生 物碱 的体 外抗 肿瘤 作 用 ， ＴＵＮＥ 用 用 Ｌ染 色法检 测龙 葵 生物碱 对 Ｈｅ ａ细 Ｌ
胞 凋亡 的影 响 ， 用免 疫细胞化 学方 法研 究 龙 葵 生物 碱 对 Ｈｅ ａ细胞 Ｐ ＮＡ 和 突 变型 Ｐ ３蛋 白表 达 的 影 响 。 Ｌ Ｃ ５ 浓度 为 １０ｕ ／ ￣８ ０／ ／ ０ ｇ ｍＬ ０ ￣ ｍＬ的龙 葵 生物碱 对 Ｈｅ ａ细胞 的 生 长均 表 现 出一定 的 抑制 作 用 ； ＵＮＥ ｇ Ｌ Ｔ Ｌ染
中药 龙 葵 （ ｏａ ｕ ｎ ｇ ｕ Ｌ） 茄科 植 物， 全 草含 多种 甾体 生 物 碱 ， 括 澳 洲 其 包
茄边 碱 （ｏａ ｒ ｉｅ 、 洲茄 碱 （ｏａｏ ｉｅ 、 葵 ｓｌ ｍａｇｎ ） 澳 ｓｌｓｎｎ ） 龙
国医学 科学 院 。
动物 医学 进展 。０ ０ ３ （ ） ５ —４ ２ １ ， １ ８ ： １５
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｃｎ ｏｇ ｅ ｓｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄｉｉ ｅ
龙 葵 生 物 碱 诱 导 Ｈｅ ａ细胞 凋 亡 的研 究 Ｌ
贾艳 菊 ， 代 玲 张 ， 灿。
（ ． 北 经 贸大 学 生 物 科 学 与 工 程 学 院 ， 北 石 家 庄 ０ ０ ６ ；． 台 医 学 高 等 专 科 学 校 基 础 部 ， １河 河 ５０ １ ２邢 河北 邢 台 ０ ４ ０ ； ５ ０ ０ ３ 青 岛 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 ， 东 青 岛 ２ ６０ ） ． 山 ６ １９
设 ３个平 行孔 ， 分混匀 后 ， 充 继续 培养 ４ 。每 孔加 ８ｈ
入 ＭＴ ０ｕ （ ／ Ｐ Ｓ ， Ｔ ２ Ｌ ５ｇ Ｌ， Ｂ ） 继续 培养 ４ｈ后 ， 孔 每
１１３ 主要试 剂 超 级无支原体 胎牛血 清、 — ． ． ＲＰ ＭＩ６ Ｏ 青 霉 素 、 霉 素 、 蛋 白酶 购 于 Ｇ ｂ ｏ公 １４ 、 链 胰 ｉｃ 司； ＭＴＴ 为 Ｓｇ ｉｍａ公 司 产 品 ； 鼠抗 人 单 克 隆 抗 体 Ｐ ３ Ｐ ＮＡ， 抗 鼠单 克 隆抗 体 ＩＧ ＨＲ ５ 、Ｃ 羊 ｇ — Ｐ为 Ｓ ｎａ ａ ｔ Ｃ ｕ 公 司产 品 ； ＵＮＥ ｒｚ Ｔ Ｌ染色 试 剂盒 购于 Ｒ ｃ ｅ ｏ ｈ 公
色结果提 示 ４ ０￣ ／ ０ ｇ ｍＬ的龙 葵 生物 碱 处理 Ｈｅ ａ细胞 ４ Ｌ ８ ｈ后 ， 能够诱 导 更 多 的细胞 出现 凋亡 ； 疫 细胞化 免
学分析 结果 显示 ，０ ｇ ｍＬ的龙 葵生 物碱 处理 Ｈｅ ａ细胞 ４ ４ ０ｕ ／ Ｌ ８ｈ后 ， 会使 Ｈｅ ａ细胞 中 Ｐ ＮＡ 蛋 白和 突 变 Ｌ Ｃ 型 Ｐ ３蛋 白表 达量 显 著下调 。结果表 明 ， 葵 生 物碱 在 体 外 具显 著抗 宫颈 癌 活性 ， ５ 龙 其作 用机 制是 通 过 诱 导
对无 转移 恶性 葡 萄胎 、 术 切除 放疗 、 手 化疗 后 绒 毛膜
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 细胞 培 养 人 宫 颈 癌 Ｈｅ ａ细 胞 株 ， ． ． Ｌ 以含
１ ０ｍＬ Ｌ胎 牛血 清 、 ０ ／ １万单 位青 霉 素 、 ０ ／ １ ０ｍｇ Ｌ链 霉 素 的 Ｒ ＭＩ６ ０培 养 基 ， ３ ℃ 、 ０ ｍＬ Ｌ 的 Ｐ １４ 在 ７ ５ ／ Ｃ 条 件 下培 养 。５ ｇ Ｌ胰 酶 与 １ｇ Ｌ Ｅ Ａ 等 体 Ｏ２ ／ ／ ＤＴ 积混合 消化 细胞 ， 日传 代 １次 。 隔 １ ２ ２ 细胞存 活率 参 照 文献 Ｅ － 绍方 法 进 行 。 ．． ７介 １ 细胞 接 种 于 ９ ６孔培 养 板 ， 孔 接细 胞 １ ０Ｘ １ 。 每 ． ０个
该 细 胞 株 增 殖 的 影 响 ， 进 一 步 探 讨 龙 葵 生 物 碱 抑 并
制 细胞增 殖 的作 用 机 制 ， 进 一 步 开 发 利 用 龙 葵 提 为
８ ０ｐ ／ ） ０ ｇ ｍＬ 的药 物 １ Ｌ（ ＲＰ １ ４ ０ 以 ＭＩ６ ０培 养 液 稀
供理 论依 据 。
释 ） 对 照组 加 入 同 体 积 的 ＲＰ １ ４ 养 液 ， 组 ， ＭＩ ６ ０培 每
碱 （ｏａ ｉｅ 等 ， 含皂 甙等 成 分 。生 物 碱类 化 合 物 ｓ ｌｎｎ ） 也 大 多都 能诱 导肿 瘤 细 胞 凋 亡 ， 胞 凋 亡 与肿 瘤 的发 细 生 密切 相关 ， 瘤 的 发 生可 能 是 由 于细 胞 凋亡 的通 肿 路 受 阻造成 的口 ］ 。一些研 究 报 道表 明 ， 葵 的 醇 提 龙 物 能够 抑制 乳 腺 癌 的 生 长并 能诱 导 细 胞 凋 亡［ ， ３ 其 ］ 中的澳 洲茄 边碱有 明显 的抗 肿 瘤 作用 ［ 。龙 葵制 剂 ４ ］
更 多 的 细 胞 出现 凋 亡 而 实现 的 。 关 键 词 ： 葵 生 物 碱 ； ＴＴ； 龙 Ｍ ＴＵＮＥＬ染 色 ； ＮＡ； 变 型 Ｐ ３ Ｈｅ ＰＣ 突 ５ ； Ｌａ细 胞
中图分类号 ：２５ Ｒ ８
文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （０ ０ ０ —０ １０ １０—０ ８ ２ １ ） ８０ ５ —４
培 养 ２ ， 入 不 同 浓 度 （ ０ ５ 、 ０ 、 ０ 、 ０ 、 ４ｈ 加 １ 、 ０ １０ ２ ０ ４０
癌、 卵巢 癌药 物作 用 机 制 研 究 已经 展 开 ； 食 道 癌 、 对 膀 胱癌 抑制 机 制 的研 究 已有 报 道 ［ ， 龙 葵 生 物 碱 ５但 ］ 对 宫颈癌 的治疗作 用 国 内外 尚未 见相 关 报道 。 本试 验将 分离 提取 的龙葵 生 物 碱作 用 于人 宫 颈 癌 细胞株 （ Ｌ ） 进 行 体 外 培 养 试 验 ， 察 药 物 对 Ｈｅ ａ ， 观
摘
要 ： ＭＴＴ 法观 察 龙葵 生 物碱 的体 外抗 肿瘤 作 用 ， ＴＵＮＥ 用 用 Ｌ染 色法检 测龙 葵 生物碱 对 Ｈｅ ａ细 Ｌ
胞 凋亡 的影 响 ， 用免 疫细胞化 学方 法研 究 龙 葵 生物 碱 对 Ｈｅ ａ细胞 Ｐ ＮＡ 和 突 变型 Ｐ ３蛋 白表 达 的 影 响 。 Ｌ Ｃ ５ 浓度 为 １０ｕ ／ ￣８ ０／ ／ ０ ｇ ｍＬ ０ ￣ ｍＬ的龙 葵 生物碱 对 Ｈｅ ａ细胞 的 生 长均 表 现 出一定 的 抑制 作 用 ； ＵＮＥ ｇ Ｌ Ｔ Ｌ染
中药 龙 葵 （ ｏａ ｕ ｎ ｇ ｕ Ｌ） 茄科 植 物， 全 草含 多种 甾体 生 物 碱 ， 括 澳 洲 其 包
茄边 碱 （ｏａ ｒ ｉｅ 、 洲茄 碱 （ｏａｏ ｉｅ 、 葵 ｓｌ ｍａｇｎ ） 澳 ｓｌｓｎｎ ） 龙
国医学 科学 院 。
动物 医学 进展 。０ ０ ３ （ ） ５ —４ ２ １ ， １ ８ ： １５
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｃｎ ｏｇ ｅ ｓｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄｉｉ ｅ
龙 葵 生 物 碱 诱 导 Ｈｅ ａ细胞 凋 亡 的研 究 Ｌ
贾艳 菊 ， 代 玲 张 ， 灿。
（ ． 北 经 贸大 学 生 物 科 学 与 工 程 学 院 ， 北 石 家 庄 ０ ０ ６ ；． 台 医 学 高 等 专 科 学 校 基 础 部 ， １河 河 ５０ １ ２邢 河北 邢 台 ０ ４ ０ ； ５ ０ ０ ３ 青 岛 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 ， 东 青 岛 ２ ６０ ） ． 山 ６ １９
设 ３个平 行孔 ， 分混匀 后 ， 充 继续 培养 ４ 。每 孔加 ８ｈ
入 ＭＴ ０ｕ （ ／ Ｐ Ｓ ， Ｔ ２ Ｌ ５ｇ Ｌ， Ｂ ） 继续 培养 ４ｈ后 ， 孔 每
１１３ 主要试 剂 超 级无支原体 胎牛血 清、 — ． ． ＲＰ ＭＩ６ Ｏ 青 霉 素 、 霉 素 、 蛋 白酶 购 于 Ｇ ｂ ｏ公 １４ 、 链 胰 ｉｃ 司； ＭＴＴ 为 Ｓｇ ｉｍａ公 司 产 品 ； 鼠抗 人 单 克 隆 抗 体 Ｐ ３ Ｐ ＮＡ， 抗 鼠单 克 隆抗 体 ＩＧ ＨＲ ５ 、Ｃ 羊 ｇ — Ｐ为 Ｓ ｎａ ａ ｔ Ｃ ｕ 公 司产 品 ； ＵＮＥ ｒｚ Ｔ Ｌ染色 试 剂盒 购于 Ｒ ｃ ｅ ｏ ｈ 公
色结果提 示 ４ ０￣ ／ ０ ｇ ｍＬ的龙 葵 生物 碱 处理 Ｈｅ ａ细胞 ４ Ｌ ８ ｈ后 ， 能够诱 导 更 多 的细胞 出现 凋亡 ； 疫 细胞化 免
学分析 结果 显示 ，０ ｇ ｍＬ的龙 葵生 物碱 处理 Ｈｅ ａ细胞 ４ ４ ０ｕ ／ Ｌ ８ｈ后 ， 会使 Ｈｅ ａ细胞 中 Ｐ ＮＡ 蛋 白和 突 变 Ｌ Ｃ 型 Ｐ ３蛋 白表 达量 显 著下调 。结果表 明 ， 葵 生 物碱 在 体 外 具显 著抗 宫颈 癌 活性 ， ５ 龙 其作 用机 制是 通 过 诱 导
对无 转移 恶性 葡 萄胎 、 术 切除 放疗 、 手 化疗 后 绒 毛膜
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 细胞 培 养 人 宫 颈 癌 Ｈｅ ａ细 胞 株 ， ． ． Ｌ 以含
１ ０ｍＬ Ｌ胎 牛血 清 、 ０ ／ １万单 位青 霉 素 、 ０ ／ １ ０ｍｇ Ｌ链 霉 素 的 Ｒ ＭＩ６ ０培 养 基 ， ３ ℃ 、 ０ ｍＬ Ｌ 的 Ｐ １４ 在 ７ ５ ／ Ｃ 条 件 下培 养 。５ ｇ Ｌ胰 酶 与 １ｇ Ｌ Ｅ Ａ 等 体 Ｏ２ ／ ／ ＤＴ 积混合 消化 细胞 ， 日传 代 １次 。 隔 １ ２ ２ 细胞存 活率 参 照 文献 Ｅ － 绍方 法 进 行 。 ．． ７介 １ 细胞 接 种 于 ９ ６孔培 养 板 ， 孔 接细 胞 １ ０Ｘ １ 。 每 ． ０个
该 细 胞 株 增 殖 的 影 响 ， 进 一 步 探 讨 龙 葵 生 物 碱 抑 并
制 细胞增 殖 的作 用 机 制 ， 进 一 步 开 发 利 用 龙 葵 提 为
８ ０ｐ ／ ） ０ ｇ ｍＬ 的药 物 １ Ｌ（ ＲＰ １ ４ ０ 以 ＭＩ６ ０培 养 液 稀
供理 论依 据 。
释 ） 对 照组 加 入 同 体 积 的 ＲＰ １ ４ 养 液 ， 组 ， ＭＩ ６ ０培 每
