水稻愈伤组织的诱导[开题报告]

提高水稻愈伤组织再生频率的研究
水稻愈伤组织再生技术是一种常用的遗传转化技术，可用于基因工程及育种研究。

然而，水稻愈伤组织再生频率不稳定，成为限制其广泛应用的主要因素。

因此，研究提高水稻愈伤组织再生频率的方法对于促进水稻遗传转化技术的发展具有重要意义。

以下是一些可能有效的方法：
1.培养基优化：选择适宜的植物激素和营养物质组成，可以显著提高水稻愈伤组织的再生率。

2.制备高效再生诱导剂：添加适量的有机溶剂和蔗糖等成分，可以增强愈伤组织的再生能力。

3.细胞超微结构改变：通过电刺激、质膜通透剂等方法，改变细胞超微结构，使愈伤组织再生能力得到提高。

4.分子水平调控：通过细胞进程和信号途径的调控，可提高愈伤组织再生频率。

例如，通过转化适宜的基因，如MYB、PjLOX3和OsARF19等，可以显著提升水稻愈伤组织再生率。

总的来说，提高水稻愈伤组织再生频率的研究需要多种方法的综合应用，通过不同层次的调控，从整体上提高水稻愈伤组织再生能力，以推动水稻基因工程和育种研究的进展。

摘要水稻成熟种子具有细胞全能性。

本实验以错误!未找到引用源。

+2,4-D为基本培养基，添加NAA和6-BA为分化培养基，对水稻种子材料进行体外培养，诱导形成愈伤组织，并进行分化。

在培养基中添加一定量的激素给种子形成愈伤组织提供动力。

结果表明，在合适的培养条件下愈伤组织的分化程度很高，但培养基因素或光照条件使得褐化现象严重。

关键词水稻成熟种子组织培养愈伤组织诱导分化激素1前言细胞工程是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。

其常用技术手段有植物组织培养，植物体细胞杂交、动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。

根据细胞类型的不同，可以把细胞工程分为植物细胞工程和动物细胞工程两大类。

本实验主要综述细胞工程中植物细胞工程的植物组织培养这一技术手段。

植物组织培养技术的应用范围包括快速繁殖、培育无病毒植物，通过大规模的植物细胞培养来生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等。

植物组织培养，诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织在分化形成植物体。

在植物组织培养中，由于植物细胞具有全能性，即植物的体细胞具有母体植株全部遗传信息并会发育成为完整的个体。

因而，每一个植物细胞可以像胚胎细胞一样，经离体培养再生成为植株。

随着细胞工程技术的不断发展，植物细胞和组织培养这一细胞工程技术也无例外地得到发展，目前已在许多植物上，特别是在农林生产实践中得到了广泛应用。

尤其在林木优良品种和无性系的快速繁殖方面进展较快。

本实验旨在利用NAA和6-BA的组合调控来诱导水稻成熟种子的愈伤组织，加深对外植体消毒、接种的无菌操作技术，学习外植体愈伤组织诱导的方法。

- 1 - 水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究 以《水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究》为标题，本文旨在展示水稻愈伤组织液体增殖技术在其他作物上的可行性。随着日益增长的消费需求，农业技术的研发和进步已成为现今一个不容忽视的话题。水稻作为世界上最古老的粮食作物之一，其营养丰富，在全球的消费中占据重要的地位。在过去几十年里，水稻品种的遗传改良已经取得了巨大成功，使水稻成为全球粮食种植最受欢迎的作物之一。 但是，现有的水稻品种仍然受到传统育种技术的限制，因此，研究者们开始寻求新的技术来改善水稻的产量和质量。其中最重要的技术之一就是水稻愈伤组织液体增殖技术，它可以大大提高水稻的发芽率，更快地产生株系和新品种，从而更有效地满足现代人们的消费需求。 在本文中，我们将介绍水稻愈伤组织液体增殖技术的过程和方法，并详细介绍它在水稻发芽率，育种和遗传改良中的作用。首先，我们将简要介绍水稻愈伤组织液体增殖技术的基本原理，以及它在产量和品质的改善方面的价值。其次，我们将对水稻愈伤组织液体增殖育种技术的实验和应用进行深入的研究和分析，并详细描述了这项技术的实际效果。最后，本文将考虑水稻愈伤组织液体增殖技术在未来水稻种植中的可能性和潜力，以满足日益增长的消费需求。 总之，本文主要介绍了水稻愈伤组织液体增殖技术的基本原理，并介绍了它在水稻育种和遗传改良中的有效性和实际应用。未来的研究将主要集中在评估水稻愈伤组织液体增殖技术在种植技术中的可 - 2 -

行性，以及它是否能够满足消费者对营养价值和品质的不断提高的要求。 随着科技的进步，水稻愈伤组织液体增殖技术已经取得了令人瞩目的成果。它既可以改善水稻育种和遗传改良，提高水稻发芽率，又能够促进水稻种植的可行性，从而更有效地满足生产者和消费者的需求。希望本文能够为水稻愈伤组织液体增殖技术的研究和应用提供一些有益的指导，并促进水稻种子品质和产量的提高，为我们的消费者提供更高质量的口感体验。

水稻的遗传转化1）种子消毒：用75%乙醇浸泡去皮的水稻种子1min（剧烈摇动），再用2.5%的次氯酸钠分别处理两次，每次15min，然后用无菌水冲洗3-5次后均匀铺于诱导培养基上，不宜过多，一个培养皿大概14-20粒。

2）水稻愈伤组织的诱导和继代培养：消毒好的成熟种子在诱导培养基上28℃暗培养25-28天。

待愈伤组织长至合适大小，在培养基中来回剧烈摇动几次，使一些小块愈伤从大的组织块上脱离，从中挑选光滑、淡黄色、较硬、大小在2-3mm的胚性愈伤，均匀铺放在继代愈伤培养基上，28℃避光培养7-8天，即可用于农杆菌转化。

3）农杆菌介导的水稻愈伤组织转化及共培养：刮取已活化3天的农杆菌，放入液体共培养培养基中，用力打散，置摇床摇培0.5-2h，使得菌液的OD600在0.1-0.15（0.125最宜）之间。

将挑选的愈伤组织小粒放入已加农杆菌的液体培养基中，轻轻摇动几次，放置15-20min。

倒去菌液，用无菌滤纸吸干均匀的铺在已加滤纸的共培养基中。

愈伤在共培养培养基中22℃条件下暗培养3天。

4）转化愈伤组织的选择培养：共培养后的愈伤先用灭菌水洗涤三次，后用含头孢500mg/L的灭菌水浸泡30min，期间轻轻摇动，之后用滤纸吸干，均匀铺放在选择培养基上，28℃暗培养10天，之后进行第二次筛选，挑选淡黄色、生长状态良好的愈伤，均匀铺放在含潮霉素和头孢的选择培养基中，28℃暗培养15天。

5）愈伤组织的分化培养：挑选黄色、圆形的愈伤组织，均匀铺放在预分化培养基上，28℃暗培养7天。

之后挑选生长状态良好、淡黄色的胚性愈伤，放入分化培养基上，28℃光照培养30-60天左右，直至转基因小苗长出。

中间每隔25天左右将愈伤转移到新鲜的分化培养基上。

6）水稻的壮苗培养与移栽：将长出的小苗去掉周围的愈伤，在无菌条件下转移到1/2MS的壮苗培养基中，使根部浅插入培养基中，28℃光照培养（14h光/10h暗）。

当苗长至瓶口、约10cm以上时，打开瓶口所覆塑料膜，瓶内加入约1/3 的水，使苗暴露于空中炼化培养。

一、实验目的1. 熟悉植物组织培养的基本原理和操作技术；2. 掌握植物愈伤组织的诱导、增殖和分化方法；3. 学习植物组织培养在植物育种和繁殖中的应用。

二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过离体培养的方法，使植物细胞脱分化、再分化，最终形成完整植株的过程。

实验中，我们主要研究植物愈伤组织的诱导、增殖和分化。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：水稻、胡萝卜、绿豆芽等植物材料；2. 实验仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、移液器、培养皿、培养箱等；3. 实验试剂：MS培养基、植物激素、无菌水、消毒剂等。

四、实验方法1. 植物材料处理（1）水稻：选取新鲜水稻叶片，用无菌水冲洗干净，放入75%酒精中浸泡30秒，然后用无菌水冲洗3次，再用0.1%氯化汞溶液消毒5分钟，最后用无菌水冲洗5次。

（2）胡萝卜：选取新鲜胡萝卜根，用无菌水冲洗干净，切成1cm×1cm×1cm的小块，用无菌水冲洗3次，再用75%酒精消毒30秒，然后用无菌水冲洗5次。

（3）绿豆芽：选取新鲜绿豆芽，用无菌水冲洗干净，放入75%酒精中浸泡30秒，然后用无菌水冲洗3次，再用0.1%氯化汞溶液消毒5分钟，最后用无菌水冲洗5次。

2. 愈伤组织诱导将处理好的植物材料接种到MS培养基中，置于培养箱中培养。

观察愈伤组织的形成情况，记录愈伤组织的颜色、质地、生长速度等特征。

3. 愈伤组织增殖将诱导出的愈伤组织切割成小块，接种到增殖培养基中。

观察愈伤组织的增殖情况，记录增殖倍数、生长速度等特征。

4. 愈伤组织分化将增殖后的愈伤组织切割成小块，接种到分化培养基中。

观察愈伤组织的分化情况，记录分化出的根、茎、叶等器官的数量和生长情况。

五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导（1）水稻：在诱导培养基中，水稻叶片愈伤组织形成较快，愈伤组织颜色为白色，质地较松软。

（2）胡萝卜：在诱导培养基中，胡萝卜愈伤组织形成较慢，愈伤组织颜色为黄色，质地较硬。

水稻转基因一、实验目的1.学习水稻组织培养的方法2.学习水稻转基因的方法二、实验原理目的基因克隆到双元载体中，双元载体转入农杆菌，然后携带双元载体的农杆菌侵染水稻愈伤组织，通过T-DNA插入，把我们的目的基因整合到水稻染色体上。

历史：农杆菌感染受伤的植物产生冠瘿瘤病，发现是由Ti质粒引起，同时做杂交，发现只有T-DNA（transferred DNA）这一部分被整合到植物染色体上了。

三、试验步骤：一、水稻愈伤组织的诱导（一）以水稻幼胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻未成熟种子（灌浆期），按以下步骤消毒：1）用自来水冲洗种子，去掉浮起的瘪谷；2）将种子放入250ml无菌烧杯中(种子数量约占1/3体积)，用200ml 70%酒精消毒2分钟；（在操净工作台上进行无菌操作）3）加入250ml 25%次氯酸钠（NaClO）溶液，同时加数滴吐温-20，浸泡90分钟；4）倒去NaClO溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍。

2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）用镊子夹住种子，在无菌滤纸上用钢钩挤出幼胚，置入诱导培养基中；2）操作完毕后封好培养皿(一般保鲜膜)，在暗处适温下（25-28℃）培养5天；3）继代培养。

用镊子剥下胚性愈伤组织（去掉芽及膜状物），置入继代培养基中（凸起面向上），暗处适温下（25-28℃）培养3天。

（二）以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）将种子放入100ml无菌烧杯中，倒入70%酒精消毒2分钟；2）倒去酒精，加入100ml 20%次氯酸钠（NaClO）溶液，浸泡30分钟；3) 倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍，最后一遍浸泡30分钟。

2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置入成就胚诱导培养基中，每皿12－14颗；2）操作完毕用封口膜（Micropore TM Surgical Tape）封好培养皿，在28℃光照培养箱，培养3周；3）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然分裂的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状），置入继代培养基中，在28℃光照培养箱，继代培养1周。

水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究水稻作为全球最重要的粮食作物之一，在提高粮食产量和提高粮食质量等方面发挥着重要作用。

其中，水稻愈伤组织增殖培养技术是提高水稻品质和产量的重要手段。

本文旨在以水稻愈伤组织液体增殖培养技术为研究对象，探讨其发展状况和应用前景。

水稻愈伤组织增殖培养技术是一种细胞分子生物学方法，是农艺学中植物传粉、植物驯化、植物色素调控、植物基因转移、植物基因组学等方面的重要技术。

水稻愈伤组织增殖培养技术将细胞分离、孢子分级、水稻愈伤组织液体增殖等整合到一起，可以为水稻的基因育种提供可靠的技术支持，实现植物的繁殖效果。

水稻愈伤组织增殖培养技术是基于水稻新品种建立过程中愈伤组织增殖培养技术发展出来的，在水稻品种建设中发挥着不可替代的作用。

水稻愈伤组织增殖培养技术可以有效地在短时间内增加水稻植株的多样性，保证新基因的保留，并且可以有效地实现水稻植株的生长，改善品质和产量等特性。

除此之外，水稻愈伤组织增殖培养技术还可以用于研究与水稻用途有关的诸如产量和品质、耐季节性和病抗性等性状。

水稻愈伤组织增殖培养技术可以有效实现基因突变，还可以用于研究特定基因在植物发育、形态、营养及生理作用上的影响，为研究调控水稻心叶色素的机理提供有力的技术平台。

水稻愈伤组织增殖培养技术的发展为水稻品种改良和新品种选育提供了可靠的技术支撑，有助于改善水稻的品质和效率，提高生产效率和粮食质量，有利于改善水稻的稳定性和耐旱性，促进水稻高产栽培。

今天，随着转基因技术等新技术的出现，水稻愈伤组织增殖培养技术可以与其他技术相结合，形成更加完善的水稻品种建设新体系，更加有效的推动水稻品种改良。

比如，水稻愈伤组织增殖培养技术可以与微小叶色素叶弁转化技术相结合，实现调控水稻叶色素含量，改善水稻品质，提高水稻产量。

总之，水稻愈伤组织增殖培养技术是水稻品种改良和新品种选育的重要技术，为优化水稻品种构建贡献了重要力量，在今后水稻育种工作中具有重要作用。

稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织的影响摘要:以生产上大面积推广的杂交水稻恢复系蜀恢527和西南科技大学自育优质高产杂交水稻恢复系“2330”为材料，研究目前四川地区的稻瘟优势菌株稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织诱导､生长和分化的影响。

结果表明，在优势稻瘟菌株A2中，随着稻瘟菌粗毒素浓度的提高，水稻愈伤组织的诱导率和分化能力显著降低，“2330”的最低诱导率为16.7%，蜀恢527只有12.5%;愈伤组织的致死率随毒素浓度的提高而增加，其最高致死率达到100%。

在混合毒素培养基中粗毒素浓度为30%的处理选择效率较合适，但是增加毒素浓度可以进一步提高选择效果和提高得到抗性突变苗的几率。

关键词:水稻;稻瘟菌粗毒素;愈伤组织;抗性筛选稻瘟菌是半知菌类丛梗孢科梨孢属的一种真菌，它们侵染水稻叶片并产生α-毗吮羧酸(Picoliinic acid)､稻瘟菌素(Piricularin)､稻瘟醇(Pyriculd)､细交链菌酮酸(Tenuazonic acid)､糖肽类物质(Gly copeptide)等毒素，导致稻瘟病的发生。

稻瘟病是水稻的三大病害之一。

全世界80余个国家均有发生[1]，在我国南北稻区每年均有不同程度的发生，流行年份重病地区一般减产10%~20%，重的达40%~50%，局部田块甚至颗粒无收[2]。

因此，水稻抗稻瘟品种的选育和利用是防治稻瘟病最经济､最有效､最直接的措施。

而利用稻瘟病菌培养液提取粗毒素作为选择压，在细胞水平上通过组织培养途径对水稻抗瘟性进行细胞突变体筛选[3-5]，并把生物技术与常规育种技术相结合培育新的抗病品种的方法，程序简便､快捷，而且不涉及安全性问题，是抗病育种的一种新方法。

本文采用自行分离的稻瘟菌并提取的稻瘟菌粗毒素为选择压，研究其对水稻愈伤组织的影响，旨在为进行抗稻瘟病菌突变体的筛选和选育出适合四川地区的水稻抗病品种提供依据。

稻瘟菌激发子诱导水稻蛋白的差异表达研究的开题报告题目：稻瘟菌激发子诱导水稻蛋白的差异表达研究摘要：稻瘟菌是危害水稻生产的重要病原菌之一，而水稻抗病基础研究中，蛋白质组学研究在发挥着越来越重要的作用。

本研究旨在通过稻瘟菌激发子诱导水稻蛋白的差异表达研究，探究水稻与稻瘟菌互作的生理和分子机理，为水稻抗病育种提供基础理论支持。

介绍：水稻（Oryza sativa）是世界上主要的粮食作物之一，然而稻瘟病（blast disease）是危害水稻生产的重要病害之一，给全球水稻的栽培和安全带来了巨大的威胁。

稻瘟菌（Magnaporthe oryzae）对水稻的感染在病害发生期间产生大量的代谢产物、蛋白质和其他生物分子，从而导致水稻的细胞病理学变化和生理生化反应。

从蛋白质组学的角度来研究水稻在感染稻瘟菌过程中的基因表达调控和蛋白质的功能变化，可以为探究水稻与稻瘟菌互作的分子机理和抗病育种提供关键的信息。

方法：本研究将采用稻瘟菌激发子刺激水稻叶片，利用蛋白质组学技术（比如二维凝胶电泳和质谱分析）检测水稻叶片在稻瘟菌诱导下的蛋白质差异表达情况，寻找与水稻防御反应相关的蛋白质，探究水稻在抵御稻瘟菌感染过程中的分子机理。

同时，利用生物信息学方法分析差异表达蛋白质的功能和富集通路，为研究提供更加详细的信息和启示。

预期结果：通过本研究，我们预期可以筛选出一些蛋白质，它们在稻瘟菌诱导下的差异表达可能与水稻抵御稻瘟菌的感染有关。

这些差异表达蛋白质的发现将为探究水稻与稻瘟菌互作的分子机理提供重要的线索，并为水稻抗病育种提供基础理论支持。

结论：本研究旨在通过使用蛋白质组学技术，研究稻瘟菌激发子诱导水稻蛋白差异表达的情况，以期从分子水平探究水稻抵御稻瘟菌的机理，为水稻抗病育种提供理论支持和指导。

粳型水稻遗传转化体系的研究的开题报告一、选题背景：粳型水稻是我国主要的作物之一，但由于其遗传特性的复杂性和传统育种的限制，往往无法满足人们对于高产、抗性等方面的需求。

因此，利用现代生物技术手段，通过遗传转化技术对粳型水稻进行改良成为一个研究热点。

本项目旨在建立一个较为完善的粳型水稻遗传转化体系，并对其进行相关的基础研究。

二、研究目的：1. 建立粳型水稻遗传转化技术体系；2. 掌握利用外源DNA转化粳型水稻的方法，为今后水稻基因克隆和遗传改良打下基础；3. 研究粳型水稻转化后的遗传稳定性，为下一步培育水稻组织培养系统和纯化转化体系奠定基础。

三、研究内容：1. 粳型水稻愈伤组织的培养优化；2. 利用农杆菌介导的植物遗传转化技术，将外源DNA导入粳型水稻愈伤组织；3. 采用PCR技术对转化后的粳型水稻进行基因检测；4. 对转化后的水稻植株进行观察和分析，验证转化体系的可靠性和稳定性。

四、研究意义：1. 建立一个适用于粳型水稻的遗传转化体系，为我国水稻遗传改良和生产提供技术支撑；2. 提高人们对于粳型水稻遗传特性的认识，推动水稻基因组学领域的发展；3. 探索粳型水稻的遗传规律和基因功能，为粳型水稻的后续研究提供基础数据。

五、研究方法：1. 利用精细的组织培养技术，筛选适合遗传转化的愈伤组织；2. 利用农杆菌的介导技术将目标基因导入粳型水稻愈伤组织；3. PCR扩增和基因测序技术对转化后的水稻进行体系建立和基因识别；4. 在对转化体系稳定性的验证中，采取随机抽样的方式进行评估和分析。

六、预计研究难点：1. 细胞外源DNA导入后的整合几率和效率低；2. 在遗传转化体系构建和质谱分析中的技术难点；3. 转化体系的可靠性和稳定性难以确保。

七、研究计划：1. 建立粳型水稻愈伤组织的培养体系，整合不同的培养基和生长条件；2. 构建转化体系并进行转化实验，利用PCR技术鉴定基因型；3. 通过基因测序和Blackwell分析等方法，对基因搜索和定位；4. 加强对体系可靠性和稳定性的验证，对分析结果进行分析和总结。

实验二愈伤组织诱导及观察一.实验目的通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。

使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。

二.实验内容（一）、实验原理植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。

组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。

植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。

愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。

在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。

愈伤组织的形成从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。

起动期是指细胞准备进行分裂的时期。

用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。

起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。

机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。

在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。

旱稻成熟胚愈伤组织诱导的影响因素作者：李朝炜刘颖朱昀刘青贾慧敏来源：《江苏农业科学》2015年第02期摘要：以旱稻品种鲲旱1号的种子为材料，研究了不同培养基成分及不同浓度的激素对愈伤组织诱导效率的影响。

结果表明，NB培养基较MS培养基更加有利于旱稻愈伤组织的诱导和继代培养；当2，4-D浓度为2 mg/L时的愈伤组织出愈率最高；添加脯氨酸不利于鲲旱1号愈伤组织的形成和生长；选用麦芽糖作为碳源可明显提高愈伤组织的诱导率。

关键词：旱稻；愈伤组织；成熟胚；诱导中图分类号： Q943.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0052-03收稿日期：2014-03-17基金项目：国家转基因生物新品种培育科技重大专项（编号：2011ZX08001-003）。

作者简介：李朝炜（1979—），女，河北衡水人，博士，讲师，从事植物基因工程与分子生物学研究。

Tel：（0311）81668495；E-mail：lizhaowei79@。

旱稻是适于在旱地种植的栽培稻，属于水稻的变异型，栽培历史悠久，可追溯至数千年前，目前在世界范围内种植面积大约占到稻米总种植面积的12%。

旱稻具有耐瘠、耐旱、适应性广的特点，在目前我国水资源短缺及耕地面积不断减少的严峻形势下具有明显的发展优势。

干旱缺水已成为制约我国粮食生产的关键性因素[1]，我国人均占有水资源量只有世界人均占有量的四分之一。

水稻作为我国重要的粮食作物，其用水量巨大，加之现有选育和推广的栽培稻品种普遍存在不抗旱的不足，因而水资源短缺已经成为严重影响水稻产量的原因之一。

在此形势之下，加快选育旱稻新品种，能够节约大量农业用水，扩大稻谷种植面积，增加粮食产出渠道，提高农业生产的经济效益[2]。

大力发展旱稻品种选育，获得抗逆、优质、高产的旱稻品种，既可以克服干旱对农业生产的危害，又为培育优质的稻类新品种提供重要的基础。

通过基因工程的方法对其进行改良是目前的研究热点[3-8]。

不同基因型对寒地粳稻成熟胚愈伤组织诱导及绿苗分化的影响刘文萍;刘建新;南相日【摘要】水稻成熟胚培养是基因工程和细胞工程等研究的基础.以30个不同基因型的寒地粳稻成熟胚为材料,研究了其在相同条件下的培养特性,分析了不同粳稻间愈伤组织诱导率和绿苗分化率的差异以及与培养力之间的关系.结果表明:诱导率最高为83.5％,最低为1.3％.分化率最高为64.0％,最低为0.不同基因型间诱导率及绿苗分化率差异明显;培养力与诱导率呈显著正相关,与绿苗分化率呈极显著正相关,诱导率和绿苗分化率之间无绝对相关性;培养力聚类分析表明,供试基因型被聚为不同的类群,第三类群中有5个基因型来自相同亲本组合.【期刊名称】《北方水稻》【年(卷),期】2015(045)004【总页数】4页(P14-17)【关键词】粳稻;成熟胚;愈伤组织;绿苗分化【作者】刘文萍;刘建新;南相日【作者单位】黑龙江省农业科学院生物技术研究所,哈尔滨 150086;黑龙江省作物与家畜分子育种重点实验室,哈尔滨150086;黑龙江省农业科学院生物技术研究所,哈尔滨 150086;黑龙江省作物与家畜分子育种重点实验室,哈尔滨150086;黑龙江省农业科学院生物技术研究所,哈尔滨 150086;黑龙江省作物与家畜分子育种重点实验室,哈尔滨150086【正文语种】中文【中图分类】S511.035.3水稻是世界上重要的粮食作物，种植面积广，需求量大，是黑龙江省栽培的五大粮食作物之一。

通过品种改良不断提高寒地粳稻的产量和品质，是促进当地粮食生产发展的重要途径。

利用生物技术方法培育优质、高产、抗逆的水稻新品种，也是寒地粳稻育种的发展方向［1］。

水稻成熟胚培养有取材容易，不受季节和地理环境限制，接种操作方便，不易染菌等优点，因而在体细胞培养、遗传转化等品种改良中被广泛采用［2］。

有关水稻成熟胚培养的研究已有许多报道［1］［3－6］，但大多都是利用单一品种对外源激素敏感性差异的原理，研究对应的培养方法，所涉及的基因型较少，缺乏普遍性，而真正以生产上主栽品种为研究对象的尚不多见。

水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究林艺【摘要】以MS培养基为基本培养基,采用液体培养的方式,通过调节2,4-D,6-BA 及蔗糖浓度,对粳稻南农4007愈伤组织的增殖进行了初步研究.结果表明:2,4-D浓度在0.0～4.0mg/L时对水稻愈伤组织的增殖和生长有一定的影响, 6-BA浓度在0.2～3.2mg/L、蔗糖浓度在10～50g/L时对愈伤组织增殖生长差异不显著,但当2,4-D为2.0mg/L、6-BA为0.8mg/L,蔗糖为20g/L时,其愈伤组织不论从生长状态,还是增殖速度上都较好且褐化程度相对较轻.适合粳稻南农4007愈伤组织液体增殖培养的基本配方为MS+NAA0.5mg/L+2,4-D2.0mg/L+水解络蛋白1g/L+蔗糖20g/L+6-BA0.8mg/L.【期刊名称】《安徽农学通报》【年(卷),期】2010(016)011【总页数】4页(P60-62,88)【关键词】水稻;愈伤组织;增殖;液体培养【作者】林艺【作者单位】宿州市农业科学研究所科技管理科,安徽宿州,234000【正文语种】中文【中图分类】S511水稻是生长于沼泽地带由普通野生稻逐渐驯化演变的一种栽培稻，栽培稻属禾本科稻属植物，全球目前稻属植物有20多个种[1]。

水稻是我国乃至全世界的主要粮食作物之一，特别是许多发展中国家人民赖以生存的重要作物[2]。

为了创造新的种质资源，组织培养及基因工程技术被广泛用于水稻育种研究，并取得显著成果[3]。

1965年，Nishi等[4]用稻根的愈伤组织分化出水稻植株，以后又有很多学者进行了相关研究[5－6]。

现代生物技术育种的过程中，愈伤组织经常作为外源基因的受体，因此愈伤组织质量的好坏及其分化植株能力的高低，直接影响着水稻基因工程的进展，也影响着水稻种质资源的创新。

组织培养这一现代生物技术手段，大体包括两大培养方式即固体培养及液体培养，在科研及工厂化生产上根据其需要及研究成本来选择不同的培养方式。

中国海洋大学实验报告姓名：马宁专业年级：生命基地班2009级学号： 040212009020 课程：细胞工程实验题目：植物愈伤组织诱导实验一.实验目的掌握植物愈伤组织诱导的原理和方法。

二.实验原理1、植物组织培养：无菌条件下，培养植物的组织、器官以至单个细胞，使其分裂、增殖和分化发育成一完整植株的过程。

植物的组织在人工培养条件下，脱分化形成愈伤组织，愈伤组织又再分化根和芽等组织和器官。

2、植物激素控制器官分化理论。

3、超净工作台工作原理本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速）→不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境。

三.主要仪器试剂每人：培养瓶（内含培养基）1个、100mL去离子水1瓶、100mL空试剂瓶1个；两人：超净台胡萝卜无菌器皿、用具的准备：用酒精擦拭盘子、解剖刀及镊子，灼烧后冷却。

四.实验操作步骤植物愈伤组织诱导（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。

（2）将植物体用自来水冲洗后，用流水冲洗片刻后洗净，切段（5cm左右）。

先在70%酒精中浸泡数秒。

（3）将材料放入已灭菌的100 ml烧杯中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。

（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10-15分钟。

（5）弃次氯酸钠浸泡液，用无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。

（6）将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中或灭菌过的培养皿中，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱，取皮层部分，切成0.5cm3的小块。

弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。

（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。

（8）在培养瓶下部的培养基高度位置作记号。

水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究近年来，随着科学技术的发展，水稻已经成为全球粮食的主要来源之一。

在水稻研究中，伤口愈合是最重要的课题。

鉴于此，本文旨在通过概述当前水稻愈伤组织液体增殖培养的研究进展，提出水稻愈伤组织对于研究和改良水稻品种具有重要意义。

一、水稻愈伤分化特点及愈伤组织液体增殖特性水稻愈伤特点指的是水稻愈伤的生物学特征。

水稻愈伤分化通常分为三个阶段：初期愈合阶段、肿胀期和成熟期。

在初期愈合阶段，整个植株会出现大量的细胞分裂现象，导致细胞的增殖。

当伤口进入肿胀期时，细胞会开始重新形成组织，包括基质和细胞间蛋白等。

最后，细胞将开始凝固，并形成重建组织，从而形成伤口终末状态。

水稻愈伤组织液体增殖是指当水稻愈伤组织放入混合培养液中，细胞会在混合液中迅速增殖，形成一层粘性的固定生物膜(BFAM)，并迅速形成一个完整的植株体。

二、水稻愈伤组织液体增殖技术水稻愈伤组织液体增殖的技术在近些年来发展迅速，基本上可以分为三种技术：液体培养法、水稻愈伤组织培养管理技术和利用薄层液体培养技术改良水稻品种。

首先，液体培养法是指将植物细胞悬浮液放入混合液中，然后将植物细胞分散悬浮，利用液体培养的方法进行培养。

在液体培养的过程中，植物细胞会在适宜的环境条件下快速增殖，从而获得更多的细胞。

其次，水稻愈伤组织培养管理技术是指在研究室里，将水稻愈伤组织放入培养基中，然后在贴膜室内，调整贴膜室环境温度，湿度等参数，提供最佳气候条件，以促进水稻愈伤组织的增殖，进而改良水稻品种。

最后，利用薄层液体培养技术改良水稻品种是指将调配好的培养液放入培养皿中，在适宜的环境条件下，利用薄层液体培养技术，通过不断培养，改良水稻品种，使育种更容易实现。

三、结论水稻愈伤组织液体增殖培养是目前研究水稻愈伤特性的有效技术之一，可以用来改良水稻品种。

伴随着相关技术的不断发展，水稻愈伤组织液体增殖培养技术将成为促进水稻品种改良的重要手段。

第三章-愈伤组织诱导第三章愈伤组织的诱导与培养第一节愈伤组织的诱导与继代培养愈伤组织（callus）: 在培养基上，由外植体经脱分化和细胞分裂形成的一团无序生长的薄壁细胞。

大部分外植体细胞须经脱分化形成愈伤，才能再分化成完整植株，只有茎尖等少数细胞只恢复为分生状态但不分裂，直接再分化。

愈伤组织的诱导与分化是植物组培的基本环节。

一、愈伤组织的诱导及其形态特征1、愈伤组织的诱导1）起动期/诱导期（initiation/induction stage, Induction of growth）外植体细胞在外源激素作用下，经脱分化而恢复分裂状态，开始形成愈伤。

细胞外观无明显变化，代谢旺盛，合成加强，为分裂做准备。

持续十几小时~几天。

2）分裂期（divition stage/phase）：外植体切口边缘膨大，外层细胞迅速分裂，体积变小，具分生细胞的特征，细胞数速增。

3）形成期（formation stage/Differentiation phase）：外植体表层细胞分裂减缓，内部细胞开始分裂，大量细胞形成瘤状/泡状或片状结构。

若不及时继代，将分化出拟分生组织瘤状物和维管组织，又称分化期。

2. 愈伤组织的形态特征质地：松脆易碎的颗粒状；紧密坚实的结块状；水渍或浆糊状。

颜色：白色或淡黄色；淡绿色或绿色；黄色至褐色。

一般，淡黄或淡绿/绿色松脆（近圆形）或致密的颗粒状愈伤再生能力较强，白色/灰白色或黄褐色、浆糊状或紧实（香蕉形）的愈伤再生能力差。

3. 影响愈伤诱导的关键因素愈伤的形成是外植体、培养基和培养条件诸因素互作的结果。

迄今，几乎从各种外植体诱导形成愈伤。

其关键主要不在于外植体，而是培养基，尤其是激素的种类和浓度。

生长素为愈伤诱导和增殖所必需，细胞分裂素视外植体来源而异。

二、愈伤组织的继代培养继代培养（subculture）：将原有培养物转移到新鲜培养基上继续培养的过程称为~。

愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于营养枯竭，水分散失，代谢物积累，致使其生长缓慢甚至停止，须进行继代培养。