金属硫蛋白检测方法研究进展

鸡全蛋粉中金属硫蛋白检测方法的研究张根生;岳晓霞;王芮;常虹【摘要】使用5,5'-二硫硝基苯甲酸(DTNB)比色法来测定鸡全蛋粉中的金属硫蛋白含量,采用酸水解的方法对样品进行前处理,通过单因素和正交试验确定最优条件为:水解时间24h,盐酸浓度6 mol/L,质量体积比1∶20 g/mL,水解温度130℃,在此条件下,水解度为55.28％,金属硫蛋白含量为0.4821 mg/g.在前处理后对检测方法的反应条件及试剂配制条件进行优化,最终选用pH为4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制Ellman试剂,反应最佳pH为7.2.得到的线性回归方程为Y=0.019x+ 0.027,R2=0.999,呈良好的线性关系.加标回收率在75.83％～88.15％,相对标准偏差为3.10％,该方法具有较好的重现性和准确度和精密度,方法检测限为7.57 μg/g,本方法可以用于样品中金属硫蛋白(MTs)的快速检测.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)019【总页数】6页(P214-219)【关键词】比色法;鸡全蛋粉;金属硫蛋白;快速检测【作者】张根生;岳晓霞;王芮;常虹【作者单位】哈尔滨商业大学,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨150076【正文语种】中文【中图分类】TS207.3金属硫蛋白(MTs)是广泛存在于生物体中,具有低分子质量、富含半胱氨酸(20%～30%)、缺乏芳香族氨基酸的一类金属结合蛋白质[1-4]。

金属硫蛋白可以调节生物体内微量元素浓度,对人体内重金属有解毒的作用,除此之外,金属硫蛋白对激素的调节、细胞代谢的调节、细胞分化和增殖的控制、紫外(UV)诱导反应以及清除自由基都有重要作用[5-7]。

兔肝金属硫蛋白提取工艺研究党蕊叶1齐凡2蒋志武1 王开锋1 权清转1权启俊3赵淑琳1（1.陕西省动物研究所, 陕西西安710032；2.陕西省科学院，陕西西安，3.陕西同腾生物科技有限公司, 陕西省澄城715200）摘要：伊拉兔子经ZnSO4腹部皮下注射，诱导其肝脏合成锌金属硫蛋白，将肝脏加入溶剂经研磨、加热、分离制成金属硫蛋白提取液。

本文系统的研究了提取液Tris-HCl的浓度、pH和稀乙醇对金属硫蛋白提取率的影响，并用正交试验法对加热的时间和温度进行了筛选，为金属硫蛋白的提取研究提供资料。

实验结果表明：提取液的浓度和pH值对金属硫蛋白的提取效果影响较大，稀乙醇对金属硫蛋白的提取影响不大，大于30%的乙醇溶液导致金属硫蛋白提取率下降。

实验的最佳提取条件为：Tris-HCl的浓度范围0.01 mol/L～0.02 mol/L，pH范围8.0~8.6，热处理的条件为：加热温度78-80℃，加热时间5-8分钟。

关键词:金属硫蛋白、提取工艺、提取液中图分类号：Q503金属硫蛋白（metallothionein,简称MT）是1957年由Margoshes和Valee[1]首次从马的肾脏中分离出来并命名的，它是一类富含半胱氨酸且能被金属离子诱导的低分子金属结合蛋白质。

经过四十多年来的研究，人们对金属硫蛋白的认识已越来越深，实验表明：金属硫蛋白具有解除重金属毒性和抗辐射、消除自由基、修复受损组织等功效[2,3]，现已被广泛用于医药、保健品及化妆品添加剂等领域中[4,5]。

哺乳动物金的属硫蛋白分子量约有6500道尔顿，是由60-62个氨基酸组成的单链蛋白质，其中约有20个半胱氨酸残基，不含芳香族氨基酸和组氨酸，氨基酸末端N-乙酰蛋氨酸，羧基末端均为丙氨酸，多数排列为cys-X-cys结构，数量是7个，与结合的金属含量一致。

无金属结合的金属硫蛋白称为硫蛋白(thionein)，结构呈无序状态，当与金属离子结合后折叠成有序结构[6,7]。

金属硫蛋白对皮肤癌发生抵抗作用及机制的研究武月婷;时佳宏;潘奇正;王元;侯宝莲;任淑萍【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2016(032)003【摘要】目的：建立HaCaT细胞UVB损伤模型，给予硫酸锌刺激，探讨其对细胞损伤的拮抗作用及机制。

方法：细胞分为正常组、加锌组、紫外线组、加锌紫外线组，照射前24 h给予硫酸锌处理，UVB照射后继续培养，确定硫酸锌给药浓度和UVB辐射时间，Western blot法检测细胞凋亡情况，免疫细胞化学方法检测金属硫蛋白和NF－κB／p65的表达情况。

结果：紫外线组细胞内Bax／Bcl－2比值高于正常组和加锌紫外线组；紫外线组、加锌组细胞内MT表达水平均高于正常组，加锌紫外线组细胞MT表达水平高于紫外线组；紫外线组细胞内NF－κB／p65表达水平高于正常组和加锌紫外线组细胞。

结论：硫酸锌能够通过细胞内金属硫蛋白的表达，缓解UVB诱发HaCaT细胞凋亡的发生。

【总页数】5页(P340-344)【作者】武月婷;时佳宏;潘奇正;王元;侯宝莲;任淑萍【作者单位】吉林大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室，长春 130021;吉林大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室，长春 130021;吉林大学中日联谊医院，长春 130000;吉林大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室，长春 130021;吉林大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室，长春 130021;吉林大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室，长春 130021【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.中波紫外线与皮肤鳞状细胞癌发生机制研究进展 [J], 李艳茹;王晓彦2.去势抵抗性前列腺癌发生发展机制及治疗现状 [J], 周发友; 张书贤3.胰岛素抵抗及雌激素促进子宫内膜癌发生发展的机制研究 [J], 徐慧;张晶波;刘建维;李妍雨;张蓓4.胰岛素抵抗及雌激素促进子宫内膜癌发生发展的机制研究 [J], 徐慧;张晶波;刘建维;李妍雨;张蓓5.小檗碱改善多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠子宫组织局部胰岛素抵抗的作用机制研究 [J], 李慕白;王婷婷;张多加;吴效科;张明明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

ＭＴ ｒ ｍ ｅ ｖ ｓｏ ｉｅ ｓ ｅ ｌｎ ｓ Ｔｈ ｂ ｏ ｂ ｎ ｅ ｗｓ ｅ ｒ ｂ ｌ ｅ ｒ ａ ｅ ｆｅ ｒ ａ ｍｅ ｔｏ ｅ ｖｎ ｔ ｌ． ｆｏ １ ａ ｅ ｆｍａｚ ｅ ｄ ｉｇ ． ｅ ａ ｓ ｒ ａ ｃ ａ ｒ ｍａ ｋ ｅ ｙ ｄ ｃ ｅ ｓ ｄ ａｔ ｒｔｅ ｔ ｎ ｆｒ ｍｏ ｉｇ ｍｅａ ｓ Ｗ ｈ ｎ ａ ｌ ｚ ｄ ｂ ＤＳ—ＰＡＧＥ， ｉ ｇ ｅ ｂ ｎ ｅ ｒ ｔ ｌ ｃ ｌ ｒｗｅｇ ｆ１ ｅ ｎａｙ ｅ ｙ Ｓ ａ ｓｎ ｌ ａ ｄ ｎ ａ ｈｅ ｍｏｅ ｕ ａ ｉｈｔｏ ４ＫＤａ ｗａ ｏ ｎ Ｔｈ ｓ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ・ ｓｆ ｕ ｄ． ｉ ｅ ｕ ｔ ｕｇ ｇ ｓｅ ｈａ ｈｅ ｅ ｔａ ｉｎ ｏ ｉｅ ｃ ｎ ａｎ ｄ ＭＴ． ｅ ｔｄ ｔ ｔｔ ｘ ｒ ｔｏ ｆｍａｚ ｏ ｔｉ ｅ Ｋｅ ｒ ｓ： ｔｌｏｈ ｏ ｅｎ； ｌ ｎ ； ｉｅ； ｘ ｒ ｃ ｉｎ ｙ ｗｏ ｄ Ｍｅａ ｌｔ ｉ ｎ ｉ ｐ ａ ｔ ｍａｚ ｅ ｔａ ｔｏ
因此对 Ｍ Ｔ的研究 已经 成 为热点 领 域 。相 比于动 物 ＭＴ 植 物 中 ＭＴ的研 究 起 步 较 晚 ， 多 方 面研 究 也 不 ， 很
十分深 入 。在植 物 ＭＴ提取 方法 的基 础 上 ， 索 了一种 制备 植 物金 属硫 蛋 白的方 法 ， 成 功地 在 玉米 中提 摸 并
取 了 ＭＴ并 进 行 了鉴定 。
玉米 郑单 ９ 子浸 种后 放 于 白瓷盘 中 ２ ８种 ５℃下 水培 发芽 生长 ， 长 出 ２～ 待 ４片 叶子 时 ， 取 叶片 １～ 称 ２ ｇ并用 剪刀 剪碎 ； 入 １ Ｌ０ １ｍ ｌ Ｈ８６的 ｓ ， 加 ０ｍ ． ｏ ｐ ． —ＨＣ 缓 冲液 ， 电 动玻 璃 匀 浆 器 在 冰浴 条 件 下充 分 １ 用

ＭＴ Ｉ＞ Ｍ Ｔ Ⅱ ＞ Ｍ Ｔ Ｉ ， Ｔ Ⅱ ， ８ 其中含 ２ 个半胱氨酸 、 ０ 无芳香
族氨基酸和组氨酸；） ３ 金属含量高 ， ｍ ｌ ６ 每 ｏ 含 个金
收稿 日期 ：０ １Ｏ 一５ ２ ０ 一１ｌ 基叠项 目ｔ 国家 自然科学基垒研 究项 目（ ９ ７ ６ ２ ３ ９０ ４ ）
（ＮＳ 中也含 有 丰富 的 ＭＴ ， 脑 内特 异 的 ＭＴ 同 Ｃ ） ｓ而 工 型 ＭＴ Ⅲ的发 现 ， 明其 可能具 有 重 要 的神经 生 表
６ 个氨基酸为谷氨酸和丙氨酸 。因此 ， ＭＴⅢ除与其
它 ＭＴ ｓ一样在 ４ ～４ １ ７位氨 基酸残 基上形 成 一个 螺
环外， 还在 ５ 位残基处形成另一个螺环 ， ５ 两个螺环 分别位于结合金属簇的两侧面 ；） ８ ２ 含 个谷氨酸残 基 ， ＭＴⅢ呈酸性 ， 使 丽其它 ＭＴ 均为碱性 。另外 ， ｓ
审校者 程义通、 事压学科学院卫生学环境 医学研究所， 授。 军 教 博士生导师 ， 主要从事营养与脑功能 维生素和微量元素改善中枢神 经应激 适应能力的研究。
维普资讯
・２ ・
星 匡堂匡堂地理分册 ２０ 年 ３ ０２ 月第 ２ 卷第 １ ３ 期
等） 和半胱氨酸的低分子量蛋 白质 ， 广泛存在于细 菌 、 菌 、 物和 真核生物 中 有 关 ＭＴ 真 植 ｓ的结构 、 功
能等已进行 了大量的研究， 尤其是其结合和释放金 属离子 ， 维护锌铜离子的平衡 ， 保护细胞免于氧化反 应， 清除重金属等方面的作用已得到确证 。 然而尽管
ＭＴ的发现迄今 已有 ４ Ｏ年， 但有关脑内 ＭＴ 的研 ｓ 究起步较晚 。 近年随着新技术的应用研 究的不断探 入， 又有 一些新 的发现。现 已证 实 中枢 神经系统

特征有 关 系 ， 现分述 如下 ： ２ １ ＭＴ在肿 瘤组 织 中的表达情 况 ． 肿 瘤 组织 中 ＭＴ 的过 度 表 达在 近 几 年 中开始 被
人们广 泛关 注 ， 人们 已经 在食 管 鳞状 细 胞 癌［ ］脑 胶 ５ 、
质瘤 、 肠 癌Ｅ９、 腺 癌 Ⅲ］ 喉 癌 ］ 子 宫 内膜 大 ｓ３ 乳 ， 、 、
１ ＭＴ 的 基 本 特 性 及 生 物 学 功 能
的是①清 除体 内 自由基 ， 防止机体 衰老［ ， ３ ②参与 体 内 ］ 微 量元 素代谢 合解 除重金 属 的毒性 ③增 强机体各 种不 良状态 的适应 能力④ 调控 机体生 长发育 和细胞代 谢 。
２ ＭＴ 与肿瘤 的关 系 在 哺乳 动物 中 ＭＴ 的合 成 主 要在 肝脏 ， 次 在骨 其
ＭＴ家族 包 括 ４个 异 构 体 ： 一 ＭＴ １、 一 ＭＴ 工、 －Ｉ ＭＴ
Ⅲ和 ＭＴ Ⅳ 。ＭＴ 工至少包 括 ６ 亚 型 ， 一 一 个 它主要 存 在
癌［ 多 种癌 症 中发 现 ＭＴ 呈 高 水平 。孙 雪 飞等 ［ １等 。 ５ ］ 检测 ＭＴ在食 管鳞癌 中的阳性表 达率 为 ７ ． ， ０ ６ 明显 高于正 常食 管黏膜 上皮 。许海雄 等［ 运 用免疫组 化 方 ７
质瘤 中有较 高 的表 达 。另 有 学 者［ 在 大 肠癌 组 织 中 ８ 也检测 到 ＭＴ 在 癌组 织 中 的表 达 远 远 高 于 正 常肠 黏 膜组织 。国外 学 者 Ｐ ｓｕ ｚｗｓ ｉ ａｔ ｓｅ ｋ＿ １ 等发 现 ＭＴ在 喉 癌组 的表 达于对 照组 比较 Ｐ ． ０ ， ＜０ ０ １ 在恶性程 度较 低 的肿 瘤 中 明 显 增 高 ， 与 预 后 无 明 显关 系 。Ｍｅｌｇ 但 ｅ — ｕ

金属硫蛋白(MT)分离纯化技术进展王　翔1,张大成1,李　婷1,王　玮1,任宏伟2,韩铁钢2,俞梅敏2 (11北京大学微电子学系,北京100871;21北京大学生命科学学院,北京100871)E2mail:wxiang@摘要:较全面地总结了近几年来金属硫蛋白最常见的分离纯化方法,并较详细地介绍了磁法分离纯化、芯片检测等新技术。

关键词:金属硫蛋白;分离纯化;蛋白质芯片中图分类号:R318　文献标识码:A　文章编号:167124776(2003)07/0820335203 Development of the purif ication for metallothionein(MT)WAN G Xiang1,ZHAN G Da2cheng1,L I Ting1,WAN G Wei1,Ren Hong2wei2,Han Tie2gang2,Yu Mei2min2(1.Instit ute of Microelect ronics,Peki ng U niversity,Beiji ng100871,Chi na;2.School of L if e Science,Peki ng U niversity,Beiji ng100871,Chi na)Abstract:Several purification methods of metallothionein(M T)used at present have been listed and compared.A new method of magnetic purification and protein chip analyze has also been in2 troduced.K ey w ords:metallothionein;purification;protein chip1　引　言金属硫蛋白(Metallothionein,M T)是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白。

ｏ ｘ ｏ ｅ ｏ １ ０ ｍｇ ｋ ｏ ａ ｅ ｏ ｃ ｎ ｏ ｓ Ｔｈ ｓ ｅ ｕ ｔ ｕ ｇ ｓｅ ａ ｆ ｅ ｐ ｓ ｄ ｔ ０ ０ ／ ｇ Ｃｄ ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｔ ｏ ｔ ｌ ． ｅ ｅ ｒ ｓ ｌ ｓ ｇ ｅ ｔ ｄ ｔ ｔ ＭＴ ｙ ｂ ｐ ｌ ｄ ａ ｌｃ ｌ ｒ ｓ ｈ ｍａ ｅ ａ ｐ ｉ ａ ｍｏ ｅ ｕ ａ ｅ ｓ ｒ ｂ ｏ ｒ ｅ ｒ ｖ ｄ ａ ｌ ｒ ｉｇ ｓｇ ｓｆ ｒｔ ｅｓ ｅ ｓｏ ｄ ｅ ｐ ｓ ｅｉ ｔ ｒ ． ｉ ｍａ ｋ ｒｐ ｏ ｉ ｅｅ ｒ ｗａ ｎ ｎ ｉ ｓ ｆＣ ｘ ｏ ｕ ｆ ｕ ｅ ｙ ｎ ｏ ｈ ｔ ｒ ｎ ｕ Ｋ ｅ ｒ ｓ ｍｅ ａｌ ｔ ｉ ｎ ｉ ｅ ｒ ｗｏ ： ｑ ａ ｔ ａ ｉ ｅｒ ａ － ｍｅＰ ｙ ｗｏ ｄ ： ｔ ｌ ｈ ｏ ｅｎ； ａ ｔ ｏ ｈ ｒ ｍ ｕ ｎ ｉ ｔ ｌ ｉ ＣＲ： ｃ ｄ ｉ ｍ： ｍｏ ｅ ｕ ａ ｉ ｍａ ｋ ｒ ｔ ｖ ｅ ｔ ａｍ ｕ ｌｃ ｌ ｂｏ ｒｅ ｒ
中国环境科学
２ １，１８：１７ － ３ ２ ０ ３ （） ３７ １８ １
Ｃ ｉａ ｎ ｉ ｎ ｎａ Ｓ ｉ ｃ ｈｎ Ｅ ｖｒ ｍｅｔｌ ｃｅ ｅ ｏ ｎ
蚯蚓金属硫 蛋 白定量 Ｐ Ｒ检测方法及其分子诊 断 Ｃ
陈 春 ， ，周启星 （． － １ 南开大学环境科学与工程学院， 环境污染过程与基准教育部重点实验室， 天津市城市生态环
ｄ ｓ－ｅ ｅ ｄｎ ｄｔ －ｅｅ ｄｎ ｎ ｅ． ｈ ｉｈ ｓ （６８ｆｌ） － ｇ ｌ ｉｎｌ ｅ ｗａ ｕ ｄｉ ｆｔ ａａｔ ８ ｏｅｄｐ ｎ ｅｔ ｍｅｄｐ ｎ ｅ ｔ ｎｒＴ ｅｈｇ ｅｔ ３ ．－ ｄ ｕ ｒ ｕａ ｏ ｖ ｌ ｓ ｎ Ｅ．ｅｉ ｆ ｒ ｄ ｎ ａ ｉ ｍａ ｏ ｐ ｅ ｔ ｅ ｆ ｏ ｎ ｄ ｅ２

金属硫蛋白与肿瘤关系的研究进展作者：王昭彭冬王席杨威柳忠玉来源：《科技视界》 2014年第20期王昭彭冬王席杨威柳忠玉（长江大学生命科学学院，湖北荆州 434025）【摘要】金属硫蛋白（metallothionein，MT）是一类普遍存在于生物体内的富含半胱氨酸、相对分子质量较低的金属结合蛋白。

MT 在不同类型恶性肿瘤中的表达情况及其作用机制存在差异。

本文主要针对金属硫蛋白在实体瘤和血液肿瘤中的关系进行综述。

【关键词】金属硫蛋白；血液肿瘤；实体瘤金属硫蛋白（metallothionein，MT）具有高诱导特性和多种生物学功能，参与纤维化疾病、神经退行性疾病及肿瘤的发生发展。

MT 的表达与肿瘤诊断之间的关系是临床医学研究的焦点。

MT与实体瘤的关系已经得到了广泛研究，而MT在血液肿瘤中研究相对较少，本文主要针对金属硫蛋白在实体瘤和血液肿瘤中的作用进行综述。

1 金属硫蛋白与实体瘤的关系1.1 MT异常表达于实体瘤各种组织中MT的异常表达主要表现在多种肿瘤中发现MT呈高水平表达，包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌。

但并非所有肿瘤中MT过量表达，MT-I 、 MT-II在肝癌、胃癌、大肠癌、中枢神经恶性肿瘤、甲状腺瘤表达下调[1]。

MT在肿瘤组织中的上调或下调可能成为疾病诊断的筛选标准。

1.2 MT基因表达可作为某些实体瘤的诊断和预后指标MT的过度表达可能预示肿瘤的早期，MT作为免疫组化标志物用于多种肿瘤的诊断，包括乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤等 [1]。

同时，MT也可作为血清肿瘤标记物用于肿瘤诊断，Kruseova等[2]利用差分脉冲伏安法检测多种儿童实体瘤患者血清中的MT，结果显示患者的MT表达量显著高于对照。

同时，MT表达与肿瘤分级/ 分期相关，MT过量表达促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和肿瘤形成，检测MT表达可用于鉴别胃肠道间质瘤、甲状腺瘤、前列腺癌、卵巢癌[3]等的恶性程度。

此外，MT与恶性肿瘤的预后相关。

个游离 的巯基（Ｓ 基 因以及 由它们组成 的多个巯 基簇 ， ．Ｈ） 使 其具有非常重要的功能。近年来 ， ＭＴ对 脏器纤维 化和肿瘤 疾病发生与凋亡调控 的密切关 系成为 医药卫生领域 研究 的 热点问题 ， 有可能成为新 的创新药物 防治 的靶点 。
关 键 词 ： 属 硫 蛋 白 ； 能 ； 器 纤 维 化 ； 瘤 ； 质 金 属 蛋 白 金 功 脏 肿 基 酶 ； 氧 化 抗 １ 金 属 硫 蛋 白的基 本 功 能
丧失的一类 疾病 。人 体组 织 中 Ｍ Ｔ含量 最 多的是 肝脏 ， ＭＴ 主要通过抗氧化作用 ， 保护肝细胞 ， 促进肝 细胞生长修复 ， 抑
凋亡调控 的密切联 系成 为 医药研究 领域 的热 点 问题 ， 提示
Ｍ Ｔ有 可 能 成 为新 的创 新 药 物 防治 的关 键 靶 点 。 ２ ＭＴ 与 重 要脏 器 纤 维 化 的关 系 ２ １ ＭＴ 与肝 纤 维 化 ．
（ ＭＭＰ ） Ｅ Ｍ有广泛 的降解作用 ， ｓ对 Ｃ 是肝脏防止纤维化的一
内 防御 系统 ， 终 发挥 抗 肝 纤 维 化 的作 用 。 最
文 献标 识 码 ： 文 章 编 号 ：０ １—１７ （ ００ ０ ０２ ０ Ａ １０ ９ ８ ２ １ ）６— ８ １— ４
摘要： 金属 硫蛋 白（ ｅ ｌ ｔｉ ｅｎ Ｍ 为富含巯 基 ， ｍ ｔ ｌｈｏ ｉ， Ｔ） ａｏ ｎ 能螯 合 大量 的金属离子的蛋 白。ＭＴ广泛存在人体 、 动物、 植物以及
维 化 。连 续 ８ｗ 后 ， 生 型 小 鼠 开 始 形 成 不 可 逆 的 肝 纤 维 ｋ 野
１５ ９ ７年 Ｍａ ｏｈｓ Ｖ ｌ ｅ ｒ ｓｅ 和 ａｌ 在研 究金属生 物学作用 时 ， ｇ ｅ
从 。 中首 次 分 离 出一 种 新 的 蛋 白 质 ， 含 有 丰 富 的 巯 基 ， 肾脏 它

亚 型 的 ＭＴ 郑 军 恒 、 刚 等 人 （ ９ ９ 发 现 用 直 接 Ｅ ＩＡ 。 茹 １９ ） ＬＳ
方 法 可 检 测较 纯 的样 品 ， 争 型 Ｅ ＩＡ方 法可 测 定 较 粗 的 竞 ＬＳ
１ ０Ｄ ， 中哺乳 动 物 的 ＭＴ分子 量 为 ６ ０－ ０ ａ分 ３８０ ａ其 ０７ ０Ｄ 。 ０ ０
子 中不含 芳香 族氨 基酸 ， 没有 ２ ０ ｍ 的吸收 峰 ， 不 同金 属 ８ｎ 与 结合 产 生不 同特 征吸收 峰 ， 掉金 属后 ， 蛋 白在 １０ ｍ 处 脱 硫 ９ｎ 有一明 显 的肽键 吸收峰 。 ＭＴ 的金 属 具有 动 力学 不 稳定 性 ， 基 具 有 亲核 性 ， 巯 决
定 了 ＭＴ 易与 某 些 亲 电物 质特 别 是 某些 自 由基 相互 作 用 。
法 ， 灵 敏 度 达 ５Ｏ ｇ ｍＬｓ Ｖ ｎ等 发 现 抗 体 的 特 异 性 与 其 ．ｎ ／ Ｉ。 ａ ￣ ＭＴ 所 含 的 金 属离 子 种 类 有 关 ， 建 立 的 Ｅ ＩＡ可 检 测 出 所 ＬＳ ６ｐ ０ ｇ的人 胎 肝 ＭＴＩ 还 有 学 者 通 过 合 成 体 建 立 Ｅ ＩＡ来 检 测 不 同 免 ＬＳ
超过 ２ １ ．ｎ ／ ． ００ ｇｍＬ， ＭＴ量如 此 低微 ， 多 方法 均 无法 满足 很
检 测要 求 ， 免疫 法 具 有 灵敏 、 异 的优 点 。 特 故近 年 来 学 者 们
尝试 建 立放 射 免疫 分 析 法 （ Ｉ Ｉ Ａ） 和 酶 联 免 疫 吸 附 法 Ｌ （ ＬＳ ， Ｅ ＩＡ） 以用 于 ＭＴ的定 量检 测 。 ２１１ 放 射 免疫 分 析 法 （ＬＡ） １７ ．． ＩＩ 。９ ９年 ， ｌｅ等 首 先 建 立 Ｍａｉ ｌ ＩＩ 用来检测大 鼠 ＭＴ 随后 Ｍｕｄ ｒ ＬＡ， 。 ｌｅ 等于 １９ 年 。 ９ ０ 利用人 ＭＴ （ 有注 明 ＭＴ 的亚 型 ） 立测 定 人 体液 ＭＴ含 量 的 ＩＩ 没 建 ＬＡ。

金属硫蛋白调控及重金属解毒功能研究进展
金属硫蛋白（MTs）是一类小分子蛋白质，富含半胱氨酸、甲硫氨酸等硫含量高的氨基酸残基，能够与多种金属离子结合形成不稳定的金属硫蛋白络合物。

MTs在维持生理代谢、调节细胞生长发育和应激响应等方面具有重要作用。

近年来，随着重金属污染日益严重，MTs在重金属解毒和耐受机制中的研究受到越来越多的关注。

MTs能与金属离子结合形成不稳定的金属硫蛋白络合物，使之失活，从而减少金属离
子的毒性。

MTs主要以靶向语言参与重金属清除，即MTs可结合、清除多种金属离子（如镉离子、铅离子等）。

其次，MTs不仅能够与金属离子结合，还可以与多种细胞因子结合，从而调节细胞内环境，提高细胞抗氧化能力。

此外，MTs还能激活多种内源性抗氧化酵素，
增强细胞的自我修复能力，从而降低细胞受重金属损伤的程度。

MTs在不同物种中的表达量和类型、组织分布和功能等具有很大差异。

比如，在鱼类中，MTs主要存在于肝脏和肌肉中，能够对重金属的损伤进行有效的修复；在哺乳动物中，MTs主要存在于肝、肾和胰腺等组织中，可以对重金属进行清除，同时也参与机体的代谢
过程和免疫调节等。

因此，研究不同物种中MTs的表达和功能，对深入理解MTs参与重金
属解毒和机体代谢调节的机制具有重要意义。

目前，MTs在生态毒理学、环境监测和保护等领域的应用日益广泛。

例如，利用MTs
作为生物监测指标可以评估环境中重金属的污染程度及其对生态系统的影响；利用MTs生
物传感器可以实现对环境中重金属污染的实时监测；利用MTs在生物修复技术中配合菌株
或其他植物等生物体可以有效地减轻重金属对环境的污染。

亚砷酸钠对体外培养淋巴细胞金属硫蛋白含量及其基因表达的影响的开题报告一、研究背景及意义亚砷酸钠（Sodium arsenite）是一种常见的环境污染物，也是一种强致癌剂，被广泛用于电镀、农药等领域。

亚砷酸钠可通过改变细胞的信号转导和基因表达来引发细胞的毒性和致癌性。

其中，金属硫蛋白（metallothionein，MT）是一类富含半胱氨酸的小分子蛋白，可以通过捕捉重金属离子并参与自由基清除、抗氧化等生理过程。

其在细胞内也发挥着重要的调控作用。

因此，探究亚砷酸钠对淋巴细胞MT含量及其基因表达的影响，有助于揭示亚砷酸钠致毒机制及细胞毒性的变化。

二、研究内容及方法本研究将采用体外培养的人淋巴细胞模型，通过不同浓度（0、1、5、10、20 μmol/L）的亚砷酸钠处理，研究其对细胞MT含量和MT相关基因表达的影响。

具体研究内容包括以下几个方面：1. 检测MT含量：利用反应活性差异和亲和力强的金属检测MT含量，包括色谱分离-火焰花原子吸收光谱法（HPLC-FAAS）、靶标质谱法等。

2. 检测MT相关基因表达：通过荧光定量PCR技术检测MT基因、PPARδ等相关基因的表达情况。

3. 数据统计与分析：利用图表、统计分析软件（如SPSS等）对MT 含量和MT相关基因表达数据进行统计、分析和绘图。

三、预期结果及意义通过实验数据的统计与分析，预计可以得到如下结论：1. 亚砷酸钠处理对淋巴细胞MT含量有剂量依赖性的抑制作用，而且抑制效应呈时间依赖性；2. 亚砷酸钠处理对淋巴细胞MT相关基因表达也有剂量依赖性的抑制作用，表明亚砷酸钠可通过基因调控机制影响细胞内MT含量。

我们同时期望本研究的结果能够在深入探究亚砷酸钠的毒性分子机制、评估生态环境风险、制订环境污染控制政策等方面提供有价值的参考。

金属硫蛋白（Metallothionein，MT)综述报告王吉目录一、MT的主要生理功能……………………………………(一)重金属的去除解毒功能…………………………………(二)自由基的清除功能………………………………………(三)抗肿瘤功能………………………………………………二、金属硫蛋白提取工艺…………………………………(一)MT的诱导…………………………………………………(二)MT的提取与分离纯化……………………………………(三)MT的检测方法……………………………………………三、MT的应用………………………………………………四、MT的研究展望…………………………………………金属硫蛋白（Metallothionein，MT）——综述报告王吉摘要：金属硫蛋白(metallothionein，MT)是一种广泛存在于生物界、低分子量、高金属含量、功能独特的蛋白质。

目前，对MT的研究已涉及农业、医药、生物化学、分子生物学、环境科学、卫生毒理学、食品科学、营养学、保健科学和方法学等领域，其特殊的理化性质与结构及独特的生物学功能在疾病的发生、发展、诊断及发病机制探讨中显示了重要作用。

关键词：金属硫蛋白MT，医学，环保，动物养殖前言：金属硫蛋白(metallothionein，MT) ，化学名为金属硫组氨酸三甲基内盐，是一类广泛存在于生物中的低分子质量(2 ～7kD)、富含半胱氨酸(20%～30%)、不含组氨酸和芳香族氨基酸的一类金属结合蛋白质。

MT能被金属、细胞因子、荷尔蒙、细胞毒性药物、有机化学药物和应激等诱导。

自1957年Margoshoes等首次报道从马肾中分离得到Cd-MT以来，MT成为基础和应用科学的热点之一，也是我国“863 ”重大攻关课题和“火炬”计划之一，我国在MT 的研究和应用方面已经在国际上占有重要一席。

但目前，人们对金属硫蛋白在生物学上的功能的认识远远不够，还有待进一步研究。

临床实验证明，MT具有调节生物体内微量元素浓度以及对重金属的解毒作用，此外它对激素、细胞代谢的调节，细胞分化和增殖的控制以及参与紫外(UV)诱导反应和清除自由基都有重要作用。