LC-MS数据分析方法
质谱数据结果分析方法：
MS数据一般都会有如下几个特征参数：PSM、Peptide、Unique Peptides、Protein，PSM是拿数据库里的多肽和质谱图进行比对，并输出最高分数值的多肽作为一个PSM，PSM值越高，则表明可信度相对越高；Peptide和Unique Peptides则代表了肽段的特异性，一般Unique Peptides和Peptides的数值越接近，则代表肽段的特异性相对越好；而Protein代表了这些Peptides综合分析所归属的蛋白，数值越小则表明Peptides所代表的的蛋白特异性相对越好。
为了得到相对确信可靠的分子进行后续的验证实验，就要综合考虑以上几个参数，同时还要照顾分子本身的定位、功能等。
共振瑞利散射法测定药物及生物样品中的头孢硫脒摘要：建立了测定痕量头孢硫脒的共振瑞利散射法。
在NaOH介质中，甲基紫（MEV）与头孢硫脒（CEFA）反应生成的配合物使体系的共振瑞利散射（RRS）显著增强，并出现新的RRS光谱，最大共振瑞利散射峰位于338 nm，CEFA的质量浓度在0.094～0.47 mg/L范围内与共振瑞利散射强度（AIRRS）呈线性关系，检出限（3Sb/S）为0.068 mg/L。
该法用于人体血液、尿液及市售头孢硫脒药物中头孢硫脒含量的测定，回收率为98.9%～102%，测定值的相对标准偏差为1.2%～1.4%。
关键词：头孢硫脒；共振瑞利散射；甲基紫头孢硫脒是我国自行研制并应用于临床的第一代头孢菌素类抗生素，对革兰阳性菌作用较强，尤其对葡萄球菌和肠球菌具有很强的抗菌活性。
临床上主要用于治疗敏感菌引起的呼吸系统、肝胆系统、五官、尿路感染、心内膜炎和败血症等。
目前，头孢硫脒的测定方法主要是高效液相色谱法，也有荧光法的报道。
高效液相色谱法虽不受试样的挥发性和热稳定性的影响，有较高的检测灵敏度，但由于分析时间较长不适于急检的需要，因此研究简便、易行、灵敏的检测头孢硫脒的分析方法有着较重要的意义。
本工研究了头孢硫脒（结构式见图1）与甲基紫反应的共振瑞利散射光谱，建立了检测头孢硫脒的甲基紫共振瑞利散射法，迄今未见文献报道。
方法用于实际药物及生物样品中头孢硫脒含量的测定，结果满意。
l 实验部分1.1 仪器与试剂F-2500型荧光分光光度计（日本日立），测定狭缝5.O nm；pHS-3C精密酸度计（上海虹益仪器仪表有限公司）。
头孢硫脒（CEFA，重庆药检所提供）标准溶液：47.26 mg/L，冰箱4℃保存，用时稀释10倍。
甲基紫（MEV，上海标本模型厂）溶液：1.0×10-4Hiol/L。
NaOH 溶液：0.20 mol/L。
Tris-HC1缓冲溶液：pH 3.0～9.8的系列缓冲溶液。
液相色谱法对牛、猪肌肉和肾脏中头孢噻呋残留量旳测定研究头孢噻呋(ceftiofur)是第一种动物专用旳头孢菌素类抗生素，重要用于生畜呼吸道疾病旳治疗。
如果兽药不合理使用，会导致动物性食品药物残留超标，长期食用可引起细菌耐药性，导致人体微生物环境紊乱和失调。
头孢噻呋在体内迅速代谢为脱呋喃甲酸头孢噻呋(desfuroylecefliofur，DFC)和呋喃甲酸(furoic acid)，其中DFC为标志性残留物。
目前，欧盟和加拿大等某些发达国家规定头孢噻呋及其代谢物在动物组织中旳最大残留限量(MRL)：肌肉1 000 g／kg、肾6 000 g／kg。
头孢噻呋残留量旳检测措施有微生物检测法、免疫分析法和液相色谱法。
微生物法样品解决简朴、回收率较高，但不易筛选到特别敏感旳菌株，缺少特异性，并且多数分析周期较长。
免疫分析法敏捷度高，特异性比微生物法强，适合于大量样品旳迅速筛选。
液相色谱法(HPLC)是已报道用于头孢噻呋残留检测最常用旳检测措施。
液相色谱一质谱法(LC—MS)可用于残留确证分析，但所用仪器规定高、价格昂贵。
本文采用HPLC／UV法测定牛、猪肌肉和肾脏中旳头孢噻呋有关残留量。
与Jacobson等不同，采用多种固相萃取柱净化样品，虽然增长了操作环节，但大大消除了样品基体对被测物旳影响，检出限更低，且措施旳回收率和精密度均较好。
1 实验部分1．1 仪器与试剂海能LC7000高效液相色谱系统，LC7011泵体，LC7020紫外一可见光检测器，LC7050自动进样器，配HanonClarity色谱软件。
AutoSPE固相萃取装置。
C18 固相萃取柱(500 mg，Va6an公司)，使用前用4 mL甲醇和5 mL 0．025 mol／L磷酸缓冲液淋洗活化。
SAX固相萃取柱(500 mg，Vafian 公司)，使用前依次用2 mL甲醇、2 mL甲醇一0．1 mol／L氯化钠(体积比25：75)和2 mL水淋洗活化。
药品中降解产物及杂质的分析1．抗胃溃疡新药奥美拉唑(omeprazole)降解产物及杂质的分析样品制备：酸解用10 mol/L HCl加入到奥美拉唑溶液(0.2 mg/mL，10 mmol/L NaBr（pH 9.2）和乙腈(3:1)混合液)中，5 min后加入10 mol/L NaOH中和溶液。
碱解用10 mol/L NaOH加入到奥美拉唑溶液(0.2 mg/mL)中，15 min 后加入10 mol/L HCl中和溶液。
LC：流动相A为乙腈，流动相B为1.5 mmol/L 磷酸二氢钠，7.9 mmol/L磷酸氢钠，pH 7.75；梯度为25% —25% A 20 min，25% — 60% A 25 min，60% — 60% A 28 min，60% — 25% A 28.01 min，25% — 25% A 35 min；流速为0.8 mL/min；色谱柱为Zorbax Extend C18 4.6 mm×150 mm；Agilent 1100自动进样器和二元泵。
MS：4000 Q TRAP® LC-MS/MS，+ve ESI，LightSight™软件、Analyst® 1.4.1软件和ACD/SpecManager V 9.13软件。
LightSight™软件自动鉴定复杂基质中的未知降解物：图145. LightSight™软件自动处理LC-MS/MS数据奥美拉唑酸解和碱解后鉴定的主要降解物和推测结构如下：图146. 降解产物可能的化学结构本实验中使用了磷酸盐缓冲溶液作为流动相，由于AB公司久经考验的“气帘接口”的优异性能，尽管有大量磷酸盐固体在Turbo V™离子源表面析出，但是分析灵敏度并没有受到明显影响。
比如，连续采集数据8 h后，m/z 298 XIC的第1次进样的图谱和8 h后的图谱的比较，峰的强度（面积和高度）基本保持稳定，充分说明AB公司4000 Q Trap®的抗污染能力非常好。
