Sinerem标记大鼠骨髓基质细胞及移植后活体示踪研究

Sox9基因真核表达载体的构建及其诱导大鼠骨髓基质细胞定向分化为骨骺干细胞胡伟华;陈安民;郭风劲;李锋;黄晖;张伟凯【期刊名称】《中国矫形外科杂志》【年(卷),期】2009(17)12【摘要】[目的]从永生化骨骺干细胞中克隆Sox9基因并构建真核表达载体,并探讨Sox9诱导骨髓基质细胞向骨骺干细胞分化的可能性。

[方法]以RT-PCR方法获得Sox9全长,插入pGEM-TEasy克隆载体中,测序正确后与pEG-FP-IRES2表达载体酶切后连接,复合质粒以脂质体法转染骨髓基质细胞,观察转染效率,Sox9和FGFR-3的表达。

流式细胞术鉴定细胞表型,MTT法检测细胞增殖活性。

[结果]成功的完成了Sox9的扩增和表达载体的构建,重组载体转染骨髓基质细胞后能检测到Sox9、FGFR-3的表达,增殖活性与骨骺干细胞无异。

[结论]成功构建了Sox9真核表达载体,其能诱导骨髓基质细胞分化为骨骺干细胞并具有其特性。

【总页数】4页(P931-934)【关键词】骨骺干细胞;Sox9;骨髓基质细胞;转染【作者】胡伟华;陈安民;郭风劲;李锋;黄晖;张伟凯【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科【正文语种】中文【中图分类】R687【相关文献】1.人α-防御素-1(α-HNP-1)基因真核表达载体的构建及在大鼠骨髓间充质干细胞中的转染表达 [J], 陈华华;欧阳静萍;王保华;杨悦;郑汉巧2.携带人类GAD67基因真核表达载体的构建及转染骨髓基质细胞 [J], 谢三平;陈吉相;李慧;徐婧;黄园园3.人IL-1 Ra基因真核表达载体的构建及体外转染大鼠骨髓间充质干细胞 [J], 王刚;吕同德;哈小琴;常雅萍4.大鼠骨骺干细胞免疫纯化和Sox9基因真核表达载体的克隆构建 [J], 张伟凯;陈安民;郭风劲;黄晖;祁军5.Sox2基因真核表达载体的构建及转Sox2基因绵羊骨髓间充质干细胞系的建立[J], 刘怀禹;李浩天;苏小虎;孟凡华;刘春霞;张焱如;曹俊伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

颌骨放射性骨坏死（ｏｓｔｅｏｒａｄｉｏｎｅｃｒｏｓｉｓｏｆｔｈｅｊａｗｓ，ＯＲＮＪ）是头颈部恶性肿瘤放疗后严重的并发症。

研究认为放疗诱导的纤维萎缩机制在放射性颌骨坏死中起重要作用，放射线诱导的颌骨组织纤维化的机制包括电离辐射后骨组织内氧自由基产生，血管内皮细胞功能紊乱，炎症反应，微血管栓塞，纤维组织产生，最后可引起颌骨放射性骨坏死。

颌骨的纤维化涉及了细胞外基质的过度沉积和间质细胞转分化的过程[１，２]。

骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ）是一种前体细胞，具有分化为成骨细胞，骨细胞以及其他细胞的能力。

在放射性骨坏死的颌骨中，ＢＭＳＣｓ被诱导性的分化为肌成纤维细胞导致了纤维化的产生。

因此，研究ＢＭＳＣｓ的纤维分化的机制，对于颌骨骨坏死的机制研究具有重要意义。

ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡ）是一类短小的非编码ＲＮＡ，参与细胞的分化、增殖、凋亡、个体发育和机体代谢等生理过程[３]。

研究表明，心脏，肾脏，肝脏和皮肤的纤维化过程中，ｍｉＲ－２１表达均上调，作为组织纤维化的调节因子通过转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β）信号通路来调节组织的纤维化[４]。

ＭｉＲ－２１是否调控了ＢＭＳＣｓ向肌成纤维细胞分化的过程以及如何调控，还尚未明了。

本实验运用ＴＧＦ－β１诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化过程中ｍｉＲ－２１的表达变化以及在过程中的功能作用，对于理解颌骨纤维化的机制及治疗具有重要意义。

ｍｉＲ－２１调控ＴＧＦ－β１诱导的大鼠ＢＭＳＣｓ向肌成纤维细胞分化的机制研究*付水霆，代天国，刘忠龙，金淑芳，何悦**（上海交通大学医学院附属第九人民医院１．口腔颌面头颈肿瘤科；２．口腔颌面外科·上海市口腔医学重点实验室上海２０００１１）［摘要］目的：在细胞水平探索ｍｉＲ－２１在调控ＴＧＦ－β１诱导的大鼠骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化中的作用。

方法：全髓培养法培养原代大鼠骨髓间充质干细胞，培养至第三代时用ＴＧＦ－β１分组诱导培养，检测ＴＧＦ－β１对大鼠ＢＭＳＣｓ促纤维化的作用及该过程中不同浓度梯度ＴＧＦ－β１诱导以及不同时间段ｍｉＲ－２１的表达变化；通过转染ｍｉＲ－２１ｍｉｍｉｃｓ（高表达）不同时间点检测其对α－ＳＭＡ表达的影响。

珍骨胶囊诱导骨髓基质细胞向软骨分化研究发表时间：2015-04-29T10:59:58.527Z 来源：《医药前沿》2014年第34期供稿作者：郭逸尔1 李民2（通讯作者）林哲辉1 [导读] 珍骨胶囊组分次添加20％含药血清的软骨诱导培养液至10ml，细胞培养箱孵育，培养后1﹑2﹑3周进行实验。

郭逸尔1 李民2（通讯作者）林哲辉1(1.福建省漳州市中医院福建漳州 363000， 2.福建中医药大学附属康复医院福建福州 350003)【中图分类号】R68 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）34-0077-021.材料与方法1.1材料1.1.1试验药物珍骨胶囊系福建省名老中医章宝春经验方，该方是漳州市中医院内院内制剂，由淫羊藿、肉苁蓉、紫河车、党参、田七、两面针等六味药组成。

1.1.2动物清洁级4周龄SD大鼠40只，体重90～110g，雌雄各半。

1.1.3主要仪器 GBB16二氧化碳培养箱（上海力新实业有限公司）；SW-CJ-1F超净工作台（苏州安泰空气技术公司）；IX 70倒置式系统显微镜（太阳交易株式会社）；ELX800酶标仪（基因有限公司）。

1.1.4主要试剂 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM)（HyClone）；Filtered Bovine Serum (小牛血清)（HyClone）；Trypsin 1:250 (胰酶)（HyClone）；TGF－β3（Peprotech）；Dex﹑VitC（Sigma）；免疫组织化学染色MaxVision 试剂盒（福州迈新）；DAB显色试剂盒（福州迈新）。

1.2方法 BMSCs的取材﹑分离﹑原代﹑传代培养取体重90～110g的清洁级SD大鼠2只，取后腿双侧股骨，75％酒精浸泡3～5分钟。

弃去酒精，反复冲洗骨髓于15ml离心管中，离心10分钟，弃上清，吸取含15％小牛血清的DMEM培养液于离心管，接种于25ml细胞培养瓶，置37℃﹑5％CO2饱和湿度二氧化碳培养箱中培养。