大鼠肝硬化

中华中医药学刊健脾益肝方对肝硬化大鼠AQP8的影响欧志穗1，刘友章1，陈裕杲2（1．广州中医药大学第一附属医院二内科，广东广州510405；2．广州中医药大学，广东广州510405）摘要：目的：观察健脾益肝方对肝硬化模型大鼠肝组织水通道蛋白AQP8表达的影响。

方法：将90只Wist-ar 大鼠随机分为空白对照组、模型组、健脾益肝方高、中、低剂量组及秋水仙碱组，运用CCL4法造肝硬化模型，并对肝脏组织作AQP8PCR 定量及Western Blotting 检测。

结果：模型组AQP8蛋白含量及平均光密度值和积分光密度值均很低，与空白组相比有极显著差异（P ＜0．01）；经过治疗后健脾益肝方可以使AQP8蛋白含量及平均光密度值和积分光密度值均升高，其中疗效与中药使用剂量正相关，健脾益肝方低剂量组与模型组相比有显著差异（P ＜0．05），而健脾益肝方中剂量组及高剂量组与模型组相比具有极显著差异（P ＜0．01）；秋水仙碱组与模型组比较没有显著差异（P ＞0．05）。

结论：健脾益肝方对AQP8蛋白的升高作用是治疗肝硬化的靶点之一。

关键词：健脾益肝方；肝硬化；水通道蛋白AQP8中图分类号：R285．5文献标识码：A 文章编号：1673－7717（2011）07－1513－03Effect of Jianpiyigan Prescription on the AQP 8of Cirrhotic RatsOU Zhi-sui 1，LIU You-zhang 1，CHEN Yu-gao 2（1．First Affiliated Hospital of Guangzhou Chinese Medical University ，Guangzhou 510405，Guangdong ，China ；2．Guangzhou Chinese Medical University ，Guangzhou 510405，Guangdong ，China ）Abstract ：Objective ：The study aims to observe if JianPIYIGan prescription can improve the expression of the AQP8ofliver to experimental rats through TCM treatment．Method ：The animal experiment consists of ninety Wistar rats which are divided into the blank group （group A ），the mould group and the group treating with JianPiYiGan prescription with high ，medium and low dosages and the group treating with colchicines．Make the model group with CCL4，and check their liv-ers＇AQP8PCR and Western Blotting．Results ：The AQP8quality of blank group has remarkable differences with the model group （P ＜0．01）．The marks of AQP8rise tremendously after treating by JianPiYiGan decoction ，the effects among them in positive correlation with the dosage use of the TCM．There are significant difference between low dosage of Jian-PiYiGan decoction group and the blank group （P ＜0．05），and significant difference between high dosage group between medium dosage group （P ＜0．01）．Minor difference exists between colchicines group and the blank group．（P ＞0．05）．Conclusion ：The therapeutic results that increase the quantity of AQP8by JianPiYiGan prescription could be the new tar-get of treating LC．Key words ：JianPiYiGan decoction ，hepatocirrhosis ，water channel protein AQP8收稿日期：2011－02－06基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）资助项目（2005CB523502）作者简介：欧志穗（1978－），男，广东广州人，硕士，研究方向：中医脾胃病、神经肌肉病及疑难病。

・１０４６・　现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１４　Ａｐｔ，２３（１０）　经皮下注射ＣＣＩ４结合饮用乙醇致大鼠　肝硬化模型的研究　朱建忠　，刘　冀　，王国明　，隋月林　，刘建辉　，王　娟　，刘志金　，石葛明　（１．沧州医学高等专科学校，河北沧州０６１０００；２．河北医科大学，河北石家庄０５００１７）　

［摘要］　目的　本实验通过对大鼠经皮下注射ＣＣ１　结合饮用乙醇制作肝硬化模型，观　察肝脏显微结构、超微结构及血清学指标的变化，以期为今后更有效地研究肝硬化提供依据。　方法健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠模型组、对照组各ｌＯ只，模型组大鼠经皮下注射ＣＣ１　结合饮用　乙醇１４周，应用ＨＥ染色和电镜技术观察肝脏显微结构和超微结构变化并对血液进行血清　学指标ＬＮ、Ｃ１Ｖ、ＰＣ　ｍ、ＨＡ的检测。结果　与对照组相比，模型组显微及超微结构出现了肝　硬化的表现，血清学指标提示肝纤维化明显。讨论　对大鼠经皮下注射ＣＣ１　结合饮用乙醇　可以成功制作肝硬化模型。　［关键词］　肝硬化；大鼠；模型；ＣＣＬ　；乙醇　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—８８４９．２０１４．１０．００８　［中图分类号］　Ｒ一３３２　［文献标识码］　Ａ　［文章编号］　１００８—８８４９（２０１４）１０—１０４６—０３　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＣＩ４　ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｄｒｉｎｋｉｎｇ　ｅｔｈｏｎａｌ　Ｚｈｕ　Ｊｉａｎｚｈｏｎｇ　，Ｌｉｕ　ｊｉ　，Ｗａｎｇ　Ｇｕｏｍｉｎｇ　，Ｓｕｉ　Ｙｕｅｌｉｎ　，Ｌｉｕ　Ｊｉａｎｈｕｉ　，Ｗａｎｇ　Ｊｕａｎ　，Ｌｉｕ　Ｚｈｉｊｉｎ　，Ｓｈｉ　Ｇｅｍｉｎｇ　（１．Ｃａｎｇｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃａｎｇｚｈｏｕ　０６１０００，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５００１７，Ｈｅ—　ｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｉｔ　ｉｓ　ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｕｈｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｓｅｒｏｌｏｇｉｃ　ｉｎｄｅｘ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＣ１４　ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｄｒｉｎｋｉｎｇ　ｅｔｈｏｎａｌ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｅｖｉｄｅｎｃｅｓ　ｆｏｒ　ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｍｏｒｅ　ｅｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ　ｆｕｔｕｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｍａｌｅ　Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎ—　ｔｏ　ｍｏｄｅｌ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝１　０）．Ｗｉｔｈｉｎ　１　４　ｗｅｅｋｓ，ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＣＣ１　ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｄｒｉｎｋｉｎｇ　ｅｔｈｏｎａ１．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｕｈｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｆ　ｅ—　ｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＬＮ，Ｃ　ＩＶ，ＰＣⅢ，ＨＡ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｕｈｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｆｏｕｎｄ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ａｌｓｏ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｃａｎ　ｂｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｅｓｔａｂ—　ｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＣ１４　ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｄｒｉｎｋｉｎｇ　ｅｔｈｏｎａ１．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ；ｒａｔｓ；ｍｏｄｅｌ；ｃａｒｂｏｎ　ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ；ｅｔｈｏｎａｌ　

材料与方法一、实验材料1．实验动物：成龄雄性Wistar大鼠90只，体重200-250g，购于山西医科大学实验动物中心。

2．主要试剂及仪器：四氯化碳（CCL4）由天津化学试剂厂生产，40%CCL4用中性植物油配制。

血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦由北京诺华制药有限公司惠赠，心得安由山西临汾云鹏药业有限公司生产。

血清谷丙转氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）试剂盒购于北京北化康临床试剂有限公司；总胆红素（TBIL）试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

血清透明质酸（hyaluronic acid，HA）、Ⅲ型前胶原（procollagen type Ⅲ，PC Ⅲ）放射免疫试剂盒购于上海海军医学研究所。

α-SMA免役组化试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。

门静脉压力（PVP）、平均动脉压（MAP）、心率（HR）使用MS-2000型二道生理记录仪测定。

图像分析仪为四川川大智胜软件股份有限公司生产的Mias-2000型图像分析系统。

722分光光度计由上海第三分析仪器厂生产。

SN-697全自动双探头放射免疫r计数器由上海核所日环光电仪器有限公司生产。

二、实验方法1．模型制作及分组：90只动物按随机原则取18只作为正常对照组，普通饮食。

72只大鼠采用复合因素法[14-15]制肝硬化PHT模型，以单纯玉米面作为饲料（前两周为80%玉米面，20%猪油），并混入0.5%胆固醇，10%酒精为唯一饮料，首次按0.5ml/100g体重皮下注射CCL4，后每隔3日按0.3ml/100g体重注射40%CCL4，共42天。

制模期间死亡9只，余63只按随机分配的原则分为4组：模型组18只、治疗组（心得安组，缬沙坦组，缬沙坦联合心得安组，每组15只）45只。

于实验第42天，从模型组和正常对照组各随机取8只测PVP、MAP及HR，取肝右叶组织行HE染色光镜下观察，证实肝硬化PHT模型形成。

治疗组于第42天模型形成后予以药物治疗，药物剂量及用法分别为：心得安：22.5mg/kg， 2次/日，灌胃；[16]缬沙坦：20mg/kg，1次/日，灌胃。

华中医学杂志２００８年第３２卷第２期　・　１１３・　・论著・经验・　高效液相色谱用于肝硬化大鼠肠道通透性的测定△　（４３００３０武汉）　华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科　覃慧敏　吴春明　李洪涛李国军　宋建新　

【摘要】目的建立通过双糖吸收试验评价肝硬化大鼠肠道通透性的高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）。方法建立四氯化碳　诱导大鼠肝硬化模型。采用ＨＰＬＣ检测３０例正常大鼠和３０例肝硬化大鼠尿液标本中甘露醇和乳果糖排出率比值。以ＮＨ２　柱（４．６　ｍｍＸ２５０　ｒｎｒｎＸ　５　ｉｎｒｎ，Ｗａｒｔｅｒｓ）为色谱柱；柱温为室温；流动相为乙腈：水７０：３０（Ｖ／Ｖ）；流速为１．０　ｍｌ／ｍｉｎ；进样量为　２０　ｌ。示差折光检测器（ＲＩＤ　２０００）。结果在上述色谱条件下，尿样中甘露醇和乳果糖能得到良好基线分离，甘露醇和乳果　糖的出峰时问分别为６．７２１　ｒａｉｎ和９．２４２　ｒａｉｎ。该法检测甘露醇和乳果糖的线性范围分别为５～１　０００　Ｆｇ／ｍｌ、２．５￣５００　Ｆｇ／　ｍｌ。甘露醇的加样回收率在９２．７　～９８．０　，乳果糖的加样回收率在９１．３　～９７．４　。肝硬化大鼠肠道通透性（乳果糖／甘露　醇比值：０．０３５７８±０．０１２４５）显著高于正常大鼠（０．０２５６３±０．００８７１）。结论ＨＰＬＣ检测肠道通透性具有准确性高、重复性　好、简便灵敏等特点，可用于肝硬化大鼠肠道通透性的测定和监测。　【关键词】高效液相色谱；肝硬化；肠道通透性；乳果糖；甘露醇　

Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｉｎ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｕｓｉｎｇＨＰＬＧ．Ｑ１ＮＧＨｕｉｍｉｎｇ，肌，Ｃｈｕｎｍｉｎｇ，ＳＯＮＧＪｉａｎｘｉｎｇ　ｅｔａ１．　Ｐ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｔｏｎｇｊ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏｎｇｊｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００３０　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｗｏ－ｓｕｇａｒ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｗｉｔｈ　ａ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｌｉｖｅｒ－ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗａｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｃａｒｂｏｎ　ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ．　Ｔｈｉｒｔｙ　ｕｒｉｎｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｆｔｅｒ　ｔｅｓｔ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ，　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｏｎ　ａ　ＮＨ２　ｃｏｌｕｍｎ　ｏｆ　ＨＰＬＣ　ｗｉｔｈ　ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ　ｉｎｄｅｘ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ２０００．Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｃｏｌｕｒｌｌｎ：ａｍｂｉｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．　Ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ：ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０（７０／３０，ｖ／Ｖ）．Ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ：１．０　ｍｌ／ｍｉｒＬ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ：２０　Ｆ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ＣＯｎｄｉ—　ｔｉｏｎｓ。ｔｈｅ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｍａｎｎｉｔｏｌ　ａｎｄ　ｌａｃｔｕｌｏｓｅ　ｗｅｒｅ　６．２７１　ｍｉｎ，９．２４２　ｍｉｎ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｒａｇｅｄ　ｆｒｏｍ　９２．７　ｔｏ　９８．０　ｆｏｒ　ｍａｎｎｉｔｏｌ　ａｎｄ　９１．３　～９７．４　ｆｏｒ　ｌａｃｔｕｌｏｓｅ．Ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｒｉｓｅ　ｉｎ　８　ｈｏｕｒ　ｕｒｉｎａｒｙ　Ｌ／Ｍ　ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏｓ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ（０．０３５７８±０．【）１２４５）ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｏ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌ（０．０２５６３±０．００８７１）（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｌ／Ｍ　ｒａｔｉｏ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｉｓ　ｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ａｎｄ　ｍａｙ　ｂｅ　ａ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｅ—　ｖａｌｕａｔｅ　ａｎｄ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；Ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ；Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ；Ｌａｃｔｕｌｏｓｅ；Ｍａｎｎｉｔｏｌ　

肝硬化基础上大鼠肝癌模型的建立【摘要】目的：探讨建立一种肝硬化基础上大鼠肝癌模型的方法. 方法：60只雄性SD大鼠随机分为两组，对照组和实验组，按60 mL/L CCl4和100 mL/L食用白酒的方法诱导肝癌模型. 观察两组大鼠不同时期质量变化，死亡率，肝假小叶形成率及肝癌结节发生率. 结果：诱导16 wk后，对照组大鼠质量明显增加，无死亡，无肝硬化，无肝癌形成. 实验组大鼠在实验过程中质量增长缓慢，2 wk后假小叶形成率90%，继续诱导4 wk后癌结节形成率40%. 实验过程中大鼠的死亡率为10%. 结论：CCl4和食用白酒可成功诱导大鼠肝硬化模型，延长诱导时间可产生一定数量的肝癌模型.【关键词】肝硬化; 肝肿瘤; 动物模型; 四氯化碳0引言肝硬化基础上的肝癌在我国发病率比较高，也是一种常见及重要的死亡原因.建立一个类似于人类肝硬化基础上肝癌的动物模型是深入研究肝癌的不可缺少的环节.本实验我们通过腹部皮下注射CCl4并用100 mL/L食用白酒代替饮用水复制大鼠肝硬化模型，通过延长造模时间，来探讨建立一种理想的肝硬化基础上的肝癌动物模型的方法.1材料和方法1.1材料纯系SD雄性大鼠60只，体质量180~220 g，购自第四军医大学实验动物中心，按清洁级标准饲养，普通颗粒饲料喂养. 四氯化碳(分析纯)购自宁波市江东化学试剂厂(批号：9406661). 橄榄油购自上海卫辉化学试剂厂(批号：930112). TD型电子天平（余姚市金诺天平有限公司）由第四军医大学动物实验中心提供.显微镜（Olympus）由西安市铁路中心医院病理科提供.1.2方法将实验动物随机分成2组，每组30只.对照组：按3 μL/g体质量给予橄榄油溶液腹壁皮下注射，2次/wk，普通饲料加清水喂养; 实验组大鼠按3 μL/g 体质量给予600 mL/L CCl4橄榄油溶液腹壁皮下注射，100 mL/L食用白酒溶液作为饮用水，普通颗粒饲料喂养16 wk.监测实验期间大鼠体质量变化、活动及对外界的反应情况，同时记录大鼠死亡情况及死亡时间. 在造模的第4，8，12，和16 wk观察两组大鼠肝脏的大体及病理组织变化.统计学处理: 采用t检验， P<0.05认为差异有统计学意义.2结果2.1大体观察对照组大鼠毛发有光泽，精神状态好，活动多，食欲佳，对外界刺激反应灵敏，实验组大鼠毛发凌乱，无光泽，食欲差，精神萎靡，活动少，对外界刺激反应慢. 对照组大鼠体质量显著增加，实验组大鼠实验过程中体质量增加缓慢，尤以前期增长更为缓慢. 第12周时，实验组大鼠体重与对照组大鼠体质重相比差异有统计学意义［(286±12) g vs (398±16) g， P<0.01］. 实验过程中对照组大鼠无死亡，实验组大鼠的死亡率为10%.2.2肝脏组织学改变对照组大鼠肝脏红润，镜下细胞大小一致，细胞排列呈条索状，以中央静脉为中心呈放射状，肝窦无狭窄，小叶及汇管区无炎细胞浸润，表面光滑无结节，实验组大鼠诱导4 wk可见肝细胞变性、坏死，8 wk可见部分肝细胞变性和坏死，坏死以小叶周围显著，汇管区少量炎症细胞浸润及纤维组织增生，12 wk可见肝内广泛假小叶形成，假小叶内可见纤维再分隔现象，现时伴有明显的肝细胞再生结节，16 wk癌变肝组织可见癌巢形成，癌细胞具有多形性和明显异型性呈多角型，核大，核仁明显，并可见多核巨细胞（图1）.3讨论CCl4是最为常用的肝脏毒素，最早、最广泛用于实验性肝纤维化研究［1-2］，其诱导慢性肝损伤的机理是：在肝细胞内质网中，CCl4通过肝微粒体细胞色素氧化酶激活后，产生自由基CCl3及Cl. 还可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原，肝细胞从合成分泌Ⅲ型胶原变为合成分泌I型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化. 乙醇法诱导慢性肝损伤的机制是：乙醇进入肝细胞线粒体三羧酸循环，脂肪酸氧化减少而合成增加，甘油三酯和脂肪酸在肝内蓄积导致肝细胞脂肪变.肝脏持续的炎症反应激活kupffer细胞，同时乙醇还可以直接损伤血管内皮，甚至发展为肝硬化.此外，乙醇可增强CCl4对肝细胞的毒性作用，因此CCl4与乙醇联合应用可促进肝硬化的形成.金峰等［3］将SD大鼠分为两组，实验组给予浓度逐渐增加的CCl4，并用食用白酒代替医用乙醇溶液，对照组给予单纯CCl4，结果发现实验组9 wk内死亡率为7．5％，对照组为17．5％；镜下假小叶形成率实验组为90．0％，对照组为75．0％，并认为适度提高CCl4的浓度并采用食用白酒代替医用乙醇溶液诱导大鼠肝硬化模型的死亡率低，成模率高. 本实验在此研究基础上，我们采用600 mL/L CCl4联合100mL/L乙醇方法诱导肝硬化，结果发现实验组12 wk内大鼠死亡率为10%，假小叶形成率为90%，并在此基础上继续给予相同条件诱导4 wk，结果发现部分大鼠癌结节形成，形成率为40%. 实验表明基于传统的肝硬化造模方法，通过延长造模时间可以对大鼠的肝脏持续产生损伤，这种损伤到一定程度可诱发癌变的发生，产生一定数量的肝癌模型.综上所述，本实验成功地制备了大鼠肝硬化基础上的肝癌模型，并在显微镜下观察到了大鼠的肝硬化结节形成及镜下癌结节、癌细胞形成，为以后研究肝癌打下了基础.参考文献［1］韩德五，马学慧，赵元昌. 肝硬化动物模型的研究［J］. 山西医药杂志，1979， 4(1)：1-6.［2］Chae HB， Jang LC， Park SM， et al. An experimental model of hepatic fibrosis induced by alcohol and CC14: Can the lipopolysaccharide prevent liver injury induced by alcohol and CC14［J］? Taehan Kan Hakhoe Chi， 2002， 8(2):173-178.［3］金峰，衰芳，薛建设，等. 四氯化碳综合法诱导大鼠肝硬化模型方法的探讨［J］. 福建医药杂志，2003，25(5)：127-128.。

中西医结合肝病杂志２０１２年第２２卷第５期　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－０２６４．２０１２．０５．０１３　黄芪汤对肝硬化大鼠肝脏卵圆细胞肝向分化的作用　

朱　英　刘　平　１．大连医科大学附属第一医院（辽宁大连，１１６０１１）　２．上海中医药大学　

摘要　目的：研究黄芪汤对肝硬化大鼠肝脏卵圆细胞肝向分化的作用机制。方法：应用二甲基亚硝胺制备大鼠　肝硬化模型，用黄芪汤治疗，进行肝功能、肝脏病理学检测；应用共聚焦免疫荧光技术检测肝脏卵圆细胞与肝细胞及　胆管细胞共定位染色。结果：黄芪汤能显著降低模型大鼠血清ＡＳＴ、ＴＢｉｌ水平和肝组织Ｈｙｐ含量，减少肝组织０【一ＳＭＡ　的表达，在模型大鼠肝纤维化逆转过程中，黄芪汤可使Ｔｈｙ１．１与ＣＫ１９共定位细胞数量显著增加，使肝脏卵圆细胞　（ＨＯＣ）表型和功能发生改变。结论：黄芪汤通过诱导肝脏卵圆细胞肝向分化作用来促进肝硬化逆转。　关键词黄芪汤；肝硬化；卵圆细胞，肝脏；大鼠　

Ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｏｖａｌ　ｃｅｌｌｓ（ＨｏＣｓ）ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ｔｏ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔ　ＺＨＵ　ＹＩＡＮ　，ⅡＵ　ＰＩＮＧｚ　．　１．Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＤａｌｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．（Ｄａｌｉａｎ　Ｌｉａｏｎｉｎｇ，１１６０１１）Ｃｈｉｎａ；　

２．Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｏｖａｌ　ｃｅｌｌｓ（ＨＯＣｓ）ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ｔｏ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｍｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ，ｗａｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｓｔｒａｇａ－　ｌｕｓ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｉｒ　ｌｉｖｅｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ＨＯＣｓ　ａｎｄ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｂｉｌｅ　ｄｕｃｔ　ｃｅｌｌｓ　ｅｏｌｏｅａｌｉｚｅｄ　ｓｔａｉ—　ｎｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｏｎｆｏｅａｌ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｕｒｓｅ　ｏｆ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｒｅｖｅｒｓｉｏｎ，ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｓｉｇｎｉｆｉ－　ｅａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ＡＳＴ，ＴＢｉｌ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　Ｈｙｐ　ｃｏｎｔｅｎｔ，ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　０【一ＳＭＡ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ，ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｃａｎ　ａｌｓｏ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｃｏ－ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｃｅｌｌ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　Ｔｈｙ１．１　ａｎｄ　ＣＫ１９　ｓｉｇｎｉｆｃａｎｔｌｙ，ｍａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ＨＯＣｓ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｃｈａｎｇｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｒｅｖｅｒｓａｌ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＯＣｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ—　ｔｉｎｇ　ｔｏ　ｌｉｖｅｒ．　Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ　ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ；ｈｅｐａｔｉｃ　ｏｖａｌ　ｃｅｌｌ；ｌｉｖｅｒ；ｒａｔ