万寿菊杀菌素水乳剂对尖孢镰刀菌侵染活性的影响

櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 ２４（１０）：３５１－３５９．［１６］向妙莲，付永琦，何永明，等．茉莉酸甲酯浸种对水稻幼苗白叶枯病抗性及抗氧化酶活性的影响［Ｊ］．中国水稻科学，２０１４，２８（４）：４１９－４２６．［１７］孙正祥，王瑞霞，周　邁，等．植物诱导抗病性研究进展［Ｊ］．中国植保导刊，２０１０，３０（１０）：１５－１７．［１８］王燕荣，王　永，李　杰，等．番茄早疫病病组织浸提液对番茄早疫病诱导抗性的研究［Ｊ］．内蒙古农业大学学报（自然科学版），２０２１，４２（１）：１６－２２．［１９］刘嘉方，王　永，云兴福．ＰＩＡＳ对番茄晚疫病的诱导抗性及叶片内酶活性的研究［Ｊ］．内蒙古农业大学学报（自然科学版），２０２１，４２（４）：１２－１９．［２０］高晓敏．西芹浸提液化感物质分离鉴定及其对黄瓜枯萎病诱导抗性的研究［Ｄ］．呼和浩特：内蒙古农业大学，２０１５．［２１］田菲菲．菜粉蝶提取物诱导黄瓜对炭疽病的抗性及其机理研究［Ｄ］．保定：河北农业大学，２００７．冯蓓蓓，邓业成，卢丹丹，等．广西地不容和地枫皮内生真菌对罗汉果土传病原真菌的抑制活性［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（１）：１２３－１２８．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．０１．０１８广西地不容和地枫皮内生真菌对罗汉果土传病原真菌的抑制活性冯蓓蓓，邓业成，卢丹丹，汤夏安，邓志勇，骆海玉（广西师范大学生命科学学院，广西桂林５４１００６） 摘要：为了探索更加科学环保的防治罗汉果土传病害的方法，采用平板对峙法测定了３株广西地不容内生真菌和４株地枫皮内生真菌对３种罗汉果病原真菌的抗菌活性，并采用菌丝生长速率法测定７株内生真菌的发酵产物不同萃取组分的抑菌活性。

结果表明，７株内生真菌都具有一定的抗菌活性。

６种植物内生真菌［除ＤＦＰ－Ｇ－５（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｇｌｏｂｏｓｕｍ）外］的发酵液乙酸乙酯萃取物对３种病原真菌的抑制活性较好，有效中浓度（ＥＣ５０）为０．１２０８～２．９１１７ｇ／Ｌ；这６种植物内生真菌的菌丝体甲醇提取物对３种病原真菌的抑制活性一般，ＥＣ５０为０．２７０８～９．１４１３ｇ／Ｌ；４种植物内生菌ＤＢＲ－５（Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａｓｐ．）、ＤＦＰ－Ｇ－５、ＤＦＰ－Ｇ－７（Ｆｕｓａｒｉｕｍｎｅｍａｔｏｐｈｉｌｕｍ）、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液萃余物对３种病原真菌的抑制活性一般，ＥＣ５０为１．４８８１～９．４３１３ｇ／Ｌ。

拜赖青霉活性产物的抗真菌作用研究张楠楠;白净;张礼文;徐玉泉;王惠国;冯宝民【摘要】采用平板对峙实验和生长速率法,筛选和测定拜赖青霉ACCC 30440对尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的抑制活性.结果表明,ACCC 30440的PDB发酵液和乙酸乙酯提取物均能够抑制尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的生长,含10％发酵液的培养基对尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的抑制率均达40％以上,含20％发酵液则可完全抑制这两株病原真菌的生长;ACCC30440的乙酸乙酯提取物对尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的半抑制浓度分别为518.63 μg/mL和443.42 μg/mL.说明拜赖青霉ACCC 30440菌株能够产生抑制植物病原真菌生长的活性物质.【期刊名称】《生物技术进展》【年(卷),期】2017(007)004【总页数】5页(P315-319)【关键词】拜赖青霉;尖孢镰刀菌;大丽轮枝菌;活性产物【作者】张楠楠;白净;张礼文;徐玉泉;王惠国;冯宝民【作者单位】大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;中国农业科学院生物技术研究所,北京100081;中国农业科学院生物技术研究所,北京100081;中国农业科学院生物技术研究所,北京100081;中国农业科学院生物技术研究所,北京100081;大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622【正文语种】中文植物病害是制约农作物高产稳产的重要因素之一，70%～80%的植物病害是由病原真菌侵染所致[1]，其中，能够引起植物枯萎病和黄萎病的尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)是世界性重要的土传病原真菌。

植物真菌病害不仅直接造成农作物产量下降与品质降低，而且部分病原真菌在侵染农作物过程中，可分泌产生多种有害的毒素与代谢物，极大威胁了农产品的安全性。

随着现代农业的发展及人类环境保护意识的提高，生物农药作为生物防治的重要内容，具有来源广、成本低、毒性低、易于降解和残留小等优点，成为开发农用抗生素的重要来源[2]。

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２３ꎬ３９(２):３２８￣３３５ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ邓㊀云ꎬ苏㊀妍ꎬ姚锦爱ꎬ等.一株木糖氧化无色杆菌的分离鉴定及其对小麦赤霉病的防治效果[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２３ꎬ３９(２):３２８￣３３５.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２３.０２.００４一株木糖氧化无色杆菌的分离鉴定及其对小麦赤霉病的防治效果邓㊀云１ꎬ㊀苏㊀妍１ꎬ㊀姚锦爱２ꎬ㊀田大刚３ꎬ㊀阮宏椿２ꎬ㊀肖㊀翔１ꎬ㊀刘㊀友１(１.福建省南平市农业科学研究所ꎬ福建南平３５４２００ꎻ２福建省农业科学院植物保护研究所ꎬ福建福州３５００１３ꎻ３.福建省农业科学院生物技术研究所ꎬ福建福州３５０００１)收稿日期:２０２２￣０４￣０７基金项目:福建省人民政府￣中国农业科学院农业高质量发展超越５５１１ 协同创新工程项目(ＸＴＣＸＧＣ２０２１０１７㊁ＸＴＣＸＧＣ２￣０２１０１１)ꎻ福建省农业科学院科技创新团队建设项目(ＳＴＴＴ２０２１￣２￣２)作者简介:邓㊀云(１９８１－)ꎬ女ꎬ江西临川人ꎬ硕士ꎬ高级农艺师ꎬ主要从事植物保护研究ꎮ(Ｔｅｌ)158****7971ꎻ(Ｅ￣ｍａｉｌ)２５３６２６６３＠ｑｑ.ｃｏｍ通讯作者:阮宏椿ꎬ(Tel)138****3259ꎻ(E￣mail)hcruan＠１２６.ｃｏｍ㊀㊀摘要:㊀为丰富小麦赤霉病病菌拮抗菌资源ꎬ寻找替代化学杀菌剂的生物防治方法ꎬ采用平板稀释涂布法从小麦赤霉病抗性鉴定圃土壤㊁小麦根部和周边植物根部分离拮抗细菌ꎬ明确其分类地位ꎬ并采用灌根和穗部喷施法测定其对小麦赤霉病防治效果ꎮ结果表明ꎬ本研究共分离获得１８株拮抗细菌ꎬ筛选出杀菌谱广㊁对小麦赤霉病病菌抑菌效果较好的拮抗菌Ｄ０９ꎻ其对小麦赤霉病禾谷镰刀菌抑制率达到６７ ９２％ꎮ根据形态特征㊁生理生化特性和分子鉴定ꎬ初步鉴定拮抗菌Ｄ０９为木糖氧化无色杆菌(Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ)ꎮ木糖氧化无色杆菌Ｄ０９发酵液灌根处理对小麦赤霉病的田间防治效果达到５０ ９３％ꎬ与常用杀菌剂氟硅唑穗部喷雾处理无显著性差异ꎮＤ０９发酵液灌根处理的小麦籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(ＤＯＮ)毒素含量低于苯甲嘧菌酯穗部喷雾处理ꎬ与氟硅唑穗部喷雾处理无显著性差异ꎬ玉米赤霉烯酮(ＺＥＮ)㊁雪腐镰刀菌烯醇(ＮＩＶ)２种毒素含量与戊唑多菌灵㊁苯甲嘧菌酯㊁氟硅唑穗部喷雾处理无显著性差异ꎮ综上ꎬ木糖氧化无色杆菌Ｄ０９对多种植物病原真菌具有广谱抗性ꎬ对小麦赤霉病有较好的防治效果ꎬ对ＤＯＮ㊁ＺＥＮ㊁ＮＩＶ３种毒素具有抑制作用ꎬ作为小麦赤霉病的生防材料ꎬ具有良好的开发应用前景ꎮ关键词:㊀无色杆菌ꎻ拮抗菌ꎻ小麦赤霉病中图分类号:㊀Ｓ４７６㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２３)０２￣０３２８￣０８ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓｓｔｒａｉｎａｎｄｉｔｓｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｏｎＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔＤＥＮＧＹｕｎ１ꎬ㊀ＳＵＹａｎ１ꎬ㊀ＹＡＯＪｉｎ￣ａｉ２ꎬ㊀ＴＩＡＮＤａ￣ｇａｎｇ３ꎬ㊀ＲＵＡＮＨｏｎｇ￣ｃｈｕｎ２ꎬ㊀ＸＩＡＯＸｉａｎｇ１ꎬ㊀ＬＩＵＹｏｕ１(１.ＮａｎｐｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＮａｎｐｉｎｇ３５４２００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬＦｕｊｉａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＦｕｚｈｏｕ３５００１３ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＦｕｊｉａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＦｕｚｈｏｕ３５０００１ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｅｎｒｉｃｈｔｈｅｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａａｇａｉｎｓｔＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔａｎｄｆｉｎｄａｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎ￣ｔｒｏｌｍｅｔｈｏｄｔｏｒｅｐｌａｃｅｃｈｅｍｉｃａｌｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓꎬａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｏｉｌｏｆｗｈｅａｔｓｃａｂｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｎｕｒｓｅｒｙꎬｗｈｅａｔｒｏｏｔｓａｎｄｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆｔｈｅｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇｐｌａｎｔｓｂｙｐｌａｔｅｄｉｌｕｔｉｏｎｃｏａｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄꎬａｎｄｔｈｅｉｒｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｔａｔｕｓｗａｓｃｌａｒｉｆｉｅｄ.ＴｈｅｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔａｇａｉｎｓｔＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｒｏｏｔｉｒｒｉｇａｔｉｏｎａｎｄｅａｒｓｐｒａｙｉｎｇ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄａｔｏｔａｌｏｆ１８ｓｔｒａｉｎｓｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬａｎｄｔｈｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍＤ０９ｗｉｔｈｂｒｏａｄｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｄｇｏｏｄａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｗｈｅａｔｓｃａｂｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔ.ＩｔｓｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅａｇａｉｎｓｔＦｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍｒｅａｃｈｅｄ６７ ９２％.Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉ￣ｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ￣ｔｉｃｓａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬｔｈｅＤ０９ｗａｓｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｉ￣ｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ.ＴｈｅｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｏｆＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓＤ０９ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎＦｕｓａｒｉ￣８２３ｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔｒｅａｃｈｅｄ５０ ９３％ꎬｗｈｉｃｈｗａｓｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｆｕｎｇｉｃｉｄｅｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅ.Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ(ＤＯＮ)ｔｏｘｉｎｉｎｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｄｗｈｅａｔｇｒａｉｎｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＤ０９ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｔｒｅａ￣ｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎꎬａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗｉｔｈｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ.Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ(ＺＥＮ)ａｎｄｎｉｖａｌｅｎｏｌ(ＮＩＶ)ｗｅｒｅｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｏｆｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ ｃａｒｂｅｎｄａ￣ｚｉｍꎬｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎꎬａｎｄｆｌｕｓｉｌａｚｏｌｅ.ＩｎｓｕｍｍａｒｙꎬＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓＤ０９ｈａｓｂｒｏａｄ￣ｓｐｅｃｔｒｕｍｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｖａｒｉｏｕｓｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉꎬｈａｓｇｏｏｄｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｏｎＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔꎬａｎｄｈａｓｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｎＤＯＮꎬＺＥＮａｎｄＮＩＶｔｏｘｉｎｓ.ＡｓａｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌｍａｔｅｒｉａｌｆｏｒＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔꎬＤ０９ｈａｓｇｏｏｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀ＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒꎻａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａꎻＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔ㊀㊀赤霉病(ＦＨＢ)是世界性病害ꎬ主要是由禾谷镰刀菌引起的一种严重影响禾谷类作物产量和品质的毁灭性病害[１]ꎮ小麦赤霉病广泛分布于中国温暖潮湿或半潮湿地区ꎬ多发于长江中下游冬麦区㊁川滇冬麦区及华南冬麦区ꎬ对小麦生产的危害甚大[２]ꎮ１９９３－２００１年ꎬ赤霉病给美国小麦和大麦生产造成的直接经济损失高达７.６７ˑ１０９美元[３]ꎮ赤霉病在带来产量损失的同时ꎬ引发小麦赤霉病的镰刀菌所产生的ＤＯＮ(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)㊁ＮＩＶ(雪腐镰刀菌烯醇)㊁ＺＥＮ(玉米赤霉烯酮)等真菌毒素在粮食中存在ꎬ会使得人类或动物食用后出现呕吐㊁怀孕母畜中毒后流产等症状[２]ꎮＤＯＮ㊁ＮＩＶ等毒素能影响真核细胞中蛋白质㊁ＤＮＡ㊁ＲＮＡ的合成以及线粒体功能㊁细胞分裂㊁膜功能等ꎬ从而对人和动物的健康与免疫产生抑制作用[４]ꎮ１９９８年ꎬ国际癌症机构公布的评估报告中ꎬＤＯＮ被列为第３类致癌物ꎬ与人类食管癌㊁ＩｇＡ肾病㊁胃癌和骨关节病有关[４]ꎮ小麦赤霉病的流行主要是由于稻桩或土壤中的腐殖质残留携带镰刀菌ꎬ在合适的气候环境下爆发引起的ꎮ土壤中如富含抑制禾谷镰刀菌的微生物ꎬ将有利于控制赤霉病的流行[５￣９]ꎮ使用化学杀菌剂是目前麦类生产中控制赤霉病的主要方法[１０]ꎬ但是长期使用化学农药一方面容易导致禾谷镰刀菌产生抗药性ꎬ另一方面还会带来农药残留㊁环境污染等问题ꎮ因此ꎬ筛选出具有抑制赤霉病病菌等多种病原真菌的广谱拮抗菌ꎬ研制微生物农药对促进和提升小麦生产具有现实意义ꎮ微生物农药具有易降解㊁无污染㊁无残留的特点ꎬ符合国家绿色生产的需求ꎬ已经在绿色农产品和有机农产品生产中得到应用[１１￣１３]ꎮ目前ꎬ微生物农药研究比较多的菌种为解淀粉芽孢杆菌㊁枯草芽孢杆菌㊁多黏类芽孢杆菌[１４￣１７]等ꎮ近年来ꎬ无色杆菌引起了众多研究人员的重视ꎮ无色杆菌一方面可以产生广谱抗生素ꎬ对欧文氏菌㊁白色念球菌㊁肺炎克雷伯菌等具有较强的抑菌活性[１８￣１９]ꎬ另一方面也可以分泌杀虫蛋白ꎬ对害虫生物防治同样具有良好的应用价值[２０]ꎮ此外ꎬ无色杆菌在环境保护中也有很好的应用价值ꎬ常用于土壤或废水中㊁农药残留㊁染料等有害物质的降解[２１￣２２]ꎮ本研究从福建省南平市农业科学研究所小麦赤霉病自然抗性鉴定圃中土壤㊁小麦植株根部及鉴定圃周边植物的根系中分离出具有广谱抑制真菌活性的菌株ꎬ根据形态特征观察㊁生理生化反应和系统发育树分析ꎬ鉴定其种属及分类地位ꎮ进一步通过田间试验测定其对小麦赤霉病的防治效果和对ＤＯＮ㊁ＺＥＮ㊁ＮＩＶ等毒素生成的抑制作用ꎬ为该菌株的开发应用提供理论依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀材料１.１.１㊀拮抗菌菌株和真菌菌株㊀拮抗菌菌株分离自福建省南平市农业科学研究所小麦赤霉病自然抗性鉴定圃表层下５~２０ｃｍ深度的土样㊁鉴定圃中供试小麦品种的根部及鉴定圃周围的植物根部ꎮ供试的１２株病原真菌菌株编号和具体来源见表１ꎮ１.１.２㊀供试的化学药剂㊀６０ ０％戊唑多菌灵水分散粒剂和３２ ５％苯甲嘧菌酯悬浮剂由河北冠龙农化有限公司生产ꎬ４０ ０％氟硅唑乳油由陕西标正作物科学有限公司生产ꎮ１.１.３㊀供试小麦品种㊀高感赤霉病的冬小麦扬辐麦４号ꎬ由江苏里下河地区农业科学研究所提供ꎮ１.１.４㊀培养基配制㊀ＮＡ(细菌)培养基:蛋白胨１０ｇ㊁牛肉膏３ｇ㊁ＮａＣｌ５ｇ㊁琼脂１５ｇꎬ定容至１０００ｍｌꎬｐＨ值７ ３ꎮＮＢ(细菌)培养液:蛋白胨１０ｇ㊁牛肉膏３ｇ㊁ＮａＣｌ５ｇ㊁定容至１０００ｍｌ㊁ｐＨ值７ ３ꎮＰＤＡ培养基(真菌或细菌):马铃薯２５０ｇ㊁葡萄糖２０ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁定容至１０００ｍｌꎮ红糖豆粉发酵液:红糖２３ ３ｇ㊁ＣａＣＯ３４ ９ｇ㊁豆粉１１ １ｇ㊁ＫＮＯ３８ ０ｇ㊁ＫＨ２ＰＯ４０ ５ｇ㊁Ｋ２ＨＰＯ４１ ２ｇ㊁ＭｇＳＯ４ ７Ｈ２Ｏ５ ０ｇ㊁ＮａＣｌ３ ０ｇ㊁定容至１０００ｍｌꎮ９２３邓㊀云等:一株木糖氧化无色杆菌的分离鉴定及其对小麦赤霉病的防治效果１.１.５㊀微生物菌液助剂配方㊀添加剂配方为湿润剂Ｄ４２５(烷基磺酸缩聚物)４ ８％ꎬ分散剂ＰＶＡ(聚乙烯醇)７ ２％ꎬ保护剂ＦＷＡ(荧光增白剂)０ １％ꎬ稳定剂ＣＭＣ￣Ｎａ(羧甲基纤维素钠)２ ０％[２３]ꎮ表１㊀供试的病原菌菌株及来源Ｔａｂｌｅ１㊀Ｔｅｓｔｅｄｐａｔｈｏｇｅｎｓｔｒａｉｎｓａｎｄｔｈｅｉｒｓｏｕｒｃｅｓ编号病原菌㊀㊀㊀㊀来源㊀㊀㊀㊀１香蕉枯萎病尖孢镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ.ｓｐ.ｃｕｂｅｎｓｅ)福建农林大学植物保护学院２水稻纹枯病立枯丝核菌(Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ)中国农业科学院植物保护研究所３玉米叶斑病平脐蠕孢(Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ)福建农林大学植物保护学院４芦笋颈枯病菌(Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓａｓｐａｒａｇｉ)福建省农业科学院植物保护研究所５黄瓜枯萎病菌[Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ(Ｓｃｈｌ.)Ｆ.ｓｐｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍＯｗｅｎ]福建农林大学植物保护学院６丝瓜枯萎镰刀菌[Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ(Ｓｃｈｌ.)Ｆ.]四川省农业科学院植物保护研究所７香蕉褐缘灰斑病菌(Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａｍｕｓｉｃｏｌａ)福建省农业科学院植物保护研究所８大豆根腐尖孢镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ)福建省农业科学院植物保护研究所９大豆炭疽病菌(Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｉ)福建省农业科学院植物保护研究所１０白菜菌核核盘菌(Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ)四川省农业科学院植物保护研究所１１小麦赤霉病禾谷镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ)福建省南平市农业科学研究所１２小麦赤霉病亚洲镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍａｓｉａｔｉｃｕｍ)福建省南平市农业科学研究所１.２㊀方法１.２.１㊀拮抗菌菌株的分离和纯化㊀土壤样品中的菌株采用稀释涂布平板法分离[２４]ꎬ植物根部内生菌采用表面消毒法进行分离[２５]ꎮ得到的拮抗菌菌株进行编号ꎬ２次单菌落划线纯化ꎬ纯化后的菌株采用甘油法保藏于－８０ħ冰箱ꎮ１.２.２㊀拮抗菌菌株的筛选及拮抗谱的测定㊀分离的菌株采用划线平板对峙法进行拮抗菌菌株筛选ꎮ选择表１中的１２个真菌作为靶标病原真菌ꎮ先挑取纯化后的细菌菌落在对应的ＰＤＡ或ＮＡ培养基上活化ꎬ挑取靶标病原真菌新鲜菌块接种到ＰＤＡ或ＮＡ培养基(直径６ｃｍ培养皿)的中央ꎬ再以靶标病原真菌菌株的菌丝块为中心ꎬ对拮抗细菌菌落画边长为４ｃｍ的正方形方框[２６]ꎬ以只接种靶标病原真菌作为对照ꎻ于２８ħ下培养５~７ｄꎬ观察生长情况ꎬ筛选出的拮抗效果好的菌株进行抑菌谱测定ꎬ测量抑菌带宽度和菌落直径ꎬ计算抑菌效果ꎮ１.２.３㊀拮抗菌的鉴定㊀菌落形态特征观察:纯化后的菌株用ＮＢ培养液培养２４ｈꎬ取１００μｌ菌液用无菌水稀释１０００倍ꎬ取１００μｌ均匀涂布于ＰＤＡ平板上ꎬ２８ħ恒温培养４８ｈꎬ观察单菌落的形态特征[２７]ꎮ菌体形态采用革兰氏染色法染色后ꎬ在１０００倍显微镜下用带刻度尺的载玻片进行观察ꎮ１６ＳｒＤＮＡ序列同源性鉴定:结合菌落特征和菌体形态对菌株进行初步分类ꎬ对菌株进行１６ＳｒＤＮＡ序列测定ꎬＤＮＡ提取由生工生物工程(上海)股份有限公司完成ꎮＰＣＲ所用的引物融合了Ｍｉｓｅｑ测序平台的Ｖ３￣Ｖ４通用引物８０５Ｒ(上游引物５ᶄ￣ＧＡＣＴＧ￣ＧＡＧＴＴＣＣＴＴＧＧＣＡＣＣＣＧＡＧＡＡＴＴＣＣＡ￣３ᶄꎬ下游引物５ᶄ￣ＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴＣＣ￣３ᶄ)和３４１Ｆ(上游引物５ᶄ￣ＣＣＣＴＡＣＡＣＧＡＣＧＣＴＣＴＴＣＣＧＡＴＣＴＧ￣３ᶄꎬ下游引物５ᶄ￣ＣＣＴＡＣＧＧＧＮＧＧＣＷＧＣＡＧ￣３ᶄ)ꎮＰＣＲ反应体系:２ˑＴａｑｍａｓｔｅｒＭｉｘ１５μｌꎬＢａｒ￣ＰＣＲｐｒｉｍｅｒＦ(１０μｍｏｌ/Ｌ)１μｌꎬＰｒｉｍｅｒＲ(１０μｍｏｌ/Ｌ)１μｌꎬＧｅ￣ｎｏｍｉｃＤＮＡ２０ｎｇꎬ加Ｈ２Ｏ至３０μｌꎮＰＣＲ扩增程序:９４ħ预变性５ｍｉｎꎻ９４ħ变性３０ｓꎬ５５ħ退火２０ｓꎬ７２ħ延伸３０ｓꎬ２５次循环ꎻ最后７２ħ延伸５ｍｉｎꎮＤＮＡ序列测定由生工生物工程(上海)股份有限公司完成ꎮ１６ＳｒＤＮＡ序列在核糖体数据库(ｈｔｔｐ://ｒｄｐ.ｃｍｅ.ｍｓｕ.ｅｄｕ/ｉｎｄｅｘ.ｊｓｐ)中进行ＢＬＡＳＴ比对ꎬ利用ＭＥＧＡ７软件构建系统发育进化树ꎮ生理生化测试:对具有生防潜力的菌株进一步开展Ｄ￣葡萄糖㊁Ｄ￣木糖㊁乳糖㊁蔗糖㊁纤维素利用及耐盐性㊁水解淀粉㊁甲基红试验㊁Ｖ￣Ｐ反应㊁Ｈ２Ｓ产生㊁纤维素利用㊁４２ħ生长㊁厌氧生长等生理生化指标测试ꎮ０３３江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第２期１.２.４㊀拮抗菌对小麦赤霉病田间防效及小麦籽粒毒素测定㊀拮抗菌对小麦赤霉病田间防效试验于２０２０－２０２１年度在福建省南平市农业科学研究所试验基地进行ꎮ该基地有全国冬小麦国家区试赤霉病自然抗性鉴定圃ꎬ赤霉病常年自然发生ꎬ无需接种赤霉病菌ꎮ冬小麦品种扬辐麦４号于１１月１６日播种ꎬ次年２月１１日始穗ꎬ２月１４日始花ꎮ试验设拮抗菌发酵液(按微生物菌液助剂配方配置)灌根㊁拮抗菌发酵液穗部喷雾㊁６０％戊唑多菌灵水分散粒剂穗部喷雾㊁３２ ５％苯甲嘧菌酯穗部喷雾㊁４０％氟硅唑穗部喷雾５个处理及清水穗部喷雾对照ꎮ施药前用平板血球计数法检测菌液的有效菌含量ꎬ穗部喷施发酵液有效成分含量为１.５ˑ１０１３ＣＦＵ/ｈｍ２ꎬ土壤灌根浇施有效成分含量３.０ˑ１０１３ＣＦＵ/ｈｍ２ꎮ灌根处理在小麦始穗期灌根１次ꎬ喷雾处理分别在始穗期㊁始花期和盛花期各喷施１次ꎬ每个小区２０ｍ２ꎬ３次重复ꎮ４月１５日小麦成熟后调查赤霉病发病情况ꎬ各处理选取病麦粒１ｋｇꎬ３次重复ꎬ委托中国农业科学院果树研究所对小麦籽粒的ＤＯＮ㊁ＺＥＮ㊁ＮＩＶ毒素含量进行检测ꎮ各处理防效的计算按下式进行:防效＝(清水对照下的病小穗率－处理下病小穗率)/清水对照下的病小穗率ˑ１００％１.２.５㊀数据处理和分析㊀采用ＩＢＭＳＰＳＳＳｔａｔｉｓｔｉｃｓ１９软件选择单因素方差分析㊁方差同质性检测和Ｗａｌｌｅｒ￣Ｄｕｎｃａｎ的选项进行数据处理分析ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀拮抗细菌的筛选本试验共分离出１８株拮抗菌菌株ꎬ１６ＳｒＤＮＡ序列测定均为细菌ꎬ１８株拮抗菌菌株对１２种病原真菌的抗菌谱结果见表２ꎮ其中ꎬ枯草芽孢杆菌(Ｄ０１)㊁多黏类芽孢杆菌(Ｄ０４㊁Ｄ１７)㊁木糖氧化无色杆菌(Ｄ０９㊁Ｄ１１)㊁越南伯克霍尔德氏菌属(Ｄ１２)㊁洋葱伯克霍尔德氏菌属(Ｄ１４)等７株菌株对小麦赤霉病等病原真菌表现出广谱拮抗效果ꎬ而菌株Ｄ０９木糖氧化无色杆菌的抑制作用明显高于其他６株菌菌株ꎮ此外ꎬ表２中有３株木糖氧化无色杆菌Ｄ０８㊁Ｄ０９和Ｄ１１ꎬ但３者却表现出不同的抑菌效果ꎮ表２㊀１８株拮抗菌的抑菌效果Ｔａｂｌｅ２㊀Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆ１８ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ序号菌属病原菌１２３４５６７８９１０１１１２Ｄ０１枯草芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ)＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｄ０２巨大芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ)－－－－－－－－－－－＋Ｄ０３嗜麦芽糖寡养单胞菌属(Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ)－－－－－－－－－－－－Ｄ０４多黏类芽孢杆菌(Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｐｏｌｙｍｙｘａ)＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｄ０５贝莱斯芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ)－－－－－－－－－－－－Ｄ０６栖稻假单胞菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｒｙｚｉｈａｂｉｔａｎｓ)－－－－－－－－－－－＋＋Ｄ０７苏云金芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ)－－－－－－－－－－－－Ｄ０８木糖氧化无色杆菌(Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ)－－－－＋－－－－－－－Ｄ０９木糖氧化无色杆菌(Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ)＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｄ１０阿氏肠杆菌属(Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｓｂｕｒｉａｅ)－－－－－－－－－－－－Ｄ１１木糖氧化无色杆菌(Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ)＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｄ１２越南伯克霍尔德氏菌属(Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓ)＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｄ１３库德里阿兹威毕赤酵母(Ｐｉｃｈｉａｋｕｄｒｉａｖｚｅｖｉｉ)－－－－－－－－－－－－Ｄ１４洋葱伯克霍尔德氏菌属(Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅｐａｃｉａ)＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｄ１５黏质沙雷氏菌属(Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ)－－＋－－－－－－－－－Ｄ１６蕈状芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｙｃｏｉｄｅｓ)－－－－＋－－－－－－＋Ｄ１７多黏类芽孢杆菌(Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｐｏｌｙｍｙｘａ)＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｄ１８黏质沙雷氏菌属(Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ)＋－－－－－－－－－－＋病原菌１~１２见表１ꎻ＋表示有拮抗作用ꎬ＋＋表示强拮抗作用ꎬ－表示弱拮抗作用ꎮ１３３邓㊀云等:一株木糖氧化无色杆菌的分离鉴定及其对小麦赤霉病的防治效果２.２㊀拮抗菌Ｄ０９的鉴定２.２.１㊀拮抗菌Ｄ０９的形态学观察㊀筛选出的广谱抗病原真菌的木糖氧化无色杆菌(Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙ￣ｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ)Ｄ０９为赤霉病鉴定圃周边生长多年的吊兰根系中分离ꎬ中国典型培养物保藏中心保藏号为Ｍ２０２１１００２ꎮ菌株在ＰＤＡ固体培养基上生长时ꎬ表面湿润㊁淡黄色㊁光滑㊁透明㊁微隆起㊁边缘较整齐㊁胶状㊁黏性强ꎻ革兰氏染色阴性ꎬ１０００倍显微镜下观察菌体短杆状(图１)ꎬ长度为２.０~４ ０μｍꎬ宽度为０.５~０ ９μｍꎮ图１㊀Ｄ０９菌群落(左)及菌体(右)形态(ˑ１０００)Ｆｉｇ.１㊀Ｄ０９ｃｏｌｏｎｙ(ｌｅｆｔ)ａｎｄｍｙｃｅｌｉａ(ｒｉｇｈｔ)ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ(ˑ１０００)２.２.２㊀拮抗菌Ｄ０９的的生理生化特性㊀拮抗菌Ｄ０９能利用Ｄ￣葡萄糖㊁Ｄ￣木糖㊁乳糖㊁蔗糖等多种碳源ꎬ产酸ꎬ能利用纤维素ꎬ明胶液化速度快ꎬ其他生理生化特征见表３ꎮ表３㊀菌株Ｄ０９的生理生化特性Ｔａｂｌｅ３㊀ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｓｔｒａｉｎＤ０９测试项目㊀㊀㊀㊀㊀生理生化特性耐盐性(５％)耐盐Ｄ￣葡萄糖利用Ｄ￣木糖利用乳糖利用蔗糖利用水解淀粉水解甲基红试验阴性Ｖ￣Ｐ反应阴性Ｈ２Ｓ产生不产生明胶液化液化柠檬酸钠不能利用纤维素利用４２ħ生长生长厌氧生长生长２.２.３㊀拮抗菌Ｄ０９的分子鉴定㊀拮抗菌Ｄ０９的系统进化树见图２ꎮ１６ＳｒＤＮＡ的碱基序列长度为１４６９ｂｐꎬ在ＧｅｎＢａｎｋ的登录号为ＣＰ０１２０４６.１ꎮ根据ＢＬＡＳＴ比对结果ꎬ并结合形态特征和生理生化特性ꎬ鉴定该菌株为木糖氧化无色杆菌(Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ)ꎮＮＰＤＹ２０Ｚ:Ｄ０９ꎮ图２㊀木糖氧化无色杆菌Ｄ０９的系统进化树Ｆｉｇ.２㊀ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓＤ０９２.３㊀木糖氧化无色杆菌Ｄ０９的抑菌谱木糖氧化无色杆菌Ｄ０９对１２种病原真菌的抑菌效果如图３所示ꎮＤ０９菌株对所有测试的病原真菌均有不同程度的拮抗作用ꎬ表现出广谱抗病原真菌的特性ꎮ其中ꎬ对水稻纹枯病立枯丝核菌㊁芦笋颈枯病菌㊁香蕉褐缘灰斑病菌和大豆炭疽病菌的抑制率均达到７０％以上(表４)ꎮ病原菌１~１２见表１ꎮ图３㊀Ｄ０９菌株对多种病原真菌的拮抗效果Ｆｉｇ.３㊀ＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｔｒａｉｎＤ０９ｏｎｖａｒｉｏｕｓｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ２３３江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第２期表４㊀木糖氧化无色杆菌Ｄ０９的抑菌谱Ｔａｂｌｅ４㊀ＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓＤ０９编号病原菌抑制率(％)１香蕉枯萎病尖孢镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ.ｓｐ.ｃｕｂｅｎｓｅ)５７.９２ｆ２水稻纹枯病立枯丝核菌(Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ)７４.１２ｂｃ３玉米叶斑病平脐蠕孢菌(Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ)５６.１７ｆ４芦笋颈枯病菌(Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓａｓｐａｒａｇｉ)７５.５６ｂ５黄瓜枯萎病菌[Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ(Ｓｃｈｌ.)Ｆ.ｓｐｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍＯｗｅｎ]６２.５５ｅ６丝瓜枯萎镰刀菌[Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ(Ｓｃｈｌ.)Ｆ.]６２.９４ｅ７香蕉褐缘灰斑病菌(Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａｍｕｓｉｃｏｌａ)７８.５４ａ８大豆根腐尖孢镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ)６３.５４ｅ９大豆炭疽病菌(Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｉ)７２.９１ｃ１０白菜菌核核盘菌(Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ)６９.２２ｄ１１小麦赤霉病禾谷镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ)６７.９２ｄ１２小麦赤霉病亚洲镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍａｓｉａｔｉｃｕｍ)５６.１６ｆ数据后不同小写字母表示差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎮ２.４㊀木糖氧化无色杆菌Ｄ０９对小麦赤霉病的田间防治效果㊀㊀不同处理对小麦赤霉病的田间防治效果如表５ꎮ除戊唑多菌灵和苯甲嘧菌酯处理下的赤霉病病穗率比喷清水对照有显著降低ꎬ其他处理病穗率均在９５ ００％以上ꎬ与对照无显著差异ꎮ而各处理下病小穗率均显著低于喷清水对照ꎻ木糖氧化无色杆菌Ｄ０９发酵液灌根处理和穗部喷雾处理后ꎬ病小穗率分别为１４ ４２％和２１ ４２％ꎬ比ＣＫ下降５０ ９３％和２７ １２％ꎻ其中Ｄ０９发酵液灌根处理病小穗率与苯甲嘧菌酯和氟硅唑穗部喷雾处理相当ꎮ化学药剂的防效大多在６０％以上ꎬ而木糖氧化无色杆菌Ｄ０９发酵液灌根处理和穗部喷雾处理的防效分别为５０ ９３％和２７ １２％ꎮ表５㊀木糖氧化无色杆菌Ｄ０９对小麦赤霉病的田间防治效果Ｔａｂｌｅ５㊀ＦｉｅｌｄｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓＤ０９ｏｎｗｈｅａｔｓｃａｂ处理㊀㊀㊀病穗率(％)病小穗率(％)防治效果(％)Ｄ０９发酵液灌根９７.５０ʃ２.５０ｃ１４.４２ʃ０.６３ｂ５０.９３Ｄ０９发酵液穗部喷雾９５.００ʃ２.５０ｃ２１.４２ʃ４.８２ｃ２７.１２戊唑多菌灵穗部喷雾５７.５０ʃ５.００ａ４.８６ʃ０.８４ａ８３.４６苯甲嘧菌酯穗部喷雾８０.００ʃ５.００ｂ６.５３ʃ１.４６ａｂ７７.７８氟硅唑穗部喷雾９７.５０ʃ２.５０ｃ１１.８１ʃ３.８０ｂ５９.８２清水穗部喷雾(ＣＫ)１００.００ʃ０ｃ２９.３９ʃ７.７４ｄ同列数据后不同小写字母表示处理间差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎮ２.５㊀木糖氧化无色杆菌Ｄ０９对小麦籽粒毒素含量的影响㊀㊀不同处理下小麦籽粒ＤＯＮ㊁ＺＥＮ㊁ＮＩＶ３种毒素含量检测结果如表６所示ꎮ木糖氧化无色杆菌Ｄ０９发酵液灌根处理小麦籽粒３种毒素的含量分别为０ ６２８ｍｇ/ｋｇ㊁０ ０１６ｍｇ/ｋｇ㊁１ ３０８ｍｇ/ｋｇꎬ穗部喷施Ｄ０９发酵液处理小麦籽粒３种毒素的含量分别为０ ８３６ｍｇ/ｋｇ㊁０ ０８０ｍｇ/ｋｇ㊁２ ６８８ｍｇ/ｋｇꎬ均显著低于喷清水对照ꎻＤ０９发酵液灌根处理小麦籽粒３种毒素的含量均低于穗部喷施Ｄ０９发酵液处理ꎻＤ０９发酵液灌根处理小麦籽粒ＤＯＮ毒素含量低于苯甲嘧菌酯穗部喷雾处理ꎬ与氟硅唑穗部喷雾处理相当ꎻＤ０９发酵液灌根处理小麦籽粒ＺＥＮ㊁ＮＩＶ毒素含量与戊唑多菌灵穗部喷雾㊁苯甲嘧菌酯穗部喷雾㊁氟硅唑穗部喷雾处理相当ꎮ表６㊀木糖氧化无色杆菌Ｄ０９对小麦籽粒毒素含量的影响Ｔａｂｌｅ６㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＡｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓＤ０９ｏｎｔｏｘｉｎｃｏｎ￣ｔｅｎｔｉｎｗｈｅａｔｇｒａｉｎｓ处理㊀㊀㊀ＤＯＮ(ｍｇ/ｋｇ)ＺＥＮ(ｍｇ/ｋｇ)ＮＩＶ(ｍｇ/ｋｇ)Ｄ０９发酵液灌根０.６２８ʃ０.０３８ｂ０.０１６ʃ０.００２ａ１.３０８ʃ０.０８３ａｂＤ０９发酵液穗部喷雾０.８３６ʃ０.０１７ｃ０.０８０ʃ０.０１９ａ２.６８８ʃ０.９３８ｂ戊唑多菌灵穗部喷雾０.２３０ʃ０.０１７ａ０.０２８ʃ０.００５ａ０.７０８ʃ０.１９４ａ苯甲嘧菌酯穗部喷雾１.２０２ʃ０.０８０ｄ０.０８６ʃ０.０２２ａ１.６３ʃ０.１０１ａｂ氟硅唑穗部喷雾０.５２８ʃ０.０２８ｂ０.０２６ʃ０.００９ａ１.２９４ʃ０.０３４ａ清水穗部喷雾(ＣＫ)１.４２０ʃ０.１２２ｄ０.６６０ʃ０.０８５ｂ４.５８０ʃ１.００７ｃＤＯＮ:脱氧雪腐镰刀菌烯醇ꎻＺＥＮ:玉米赤霉烯酮ꎻＮＩＶ:雪腐镰刀菌烯醇ꎮ同列数据后不同小写字母表示处理间差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎮ３㊀讨论３.１㊀无色杆菌属抑菌功能属性的发现目前ꎬ国内外对无色杆菌研究主要在于其抑菌活性及降解农药残留㊁染料等功能方面[２８￣３６]ꎬ本研究在筛选鉴定木糖氧化无色杆菌菌株Ｄ０９的基础上ꎬ进一步分析了菌株Ｄ０９对小麦赤霉病的田间防治效果及小麦籽粒毒素含量的影响ꎬ为无色杆菌的农业应用进行了初步尝试ꎮ木糖氧化无色杆菌菌株Ｄ０９已申请国家发明专利(申请号:２０２１１１０４２１２４２)ꎮ３.２㊀微生物农药防治效果低于化学农药的探讨本研究结果表明ꎬ木糖氧化无色杆菌Ｄ０９发酵液灌根处理ꎬ虽然病穗率与清水对照差异不大ꎬ但病小穗率和防效与常用化学药剂苯甲嘧菌酯穗部喷３３３邓㊀云等:一株木糖氧化无色杆菌的分离鉴定及其对小麦赤霉病的防治效果雾㊁氟硅唑穗部喷雾等处理相当ꎬ而Ｄ０９发酵液穗部喷雾处理虽然防治效果只有２７.１２％ꎬ但病小穗率亦显著低于清水对照ꎬ说明木糖氧化无色杆菌Ｄ０９能有效抑制赤霉病病菌在穗部的扩散ꎮ总体来说ꎬ木糖氧化无色杆菌Ｄ０９发酵液处理的防效不及化学杀菌剂ꎬ这与拮抗菌的作用机制及其对环境的敏感性有关ꎮ研究中Ｄ０９灌根处理和穗部喷雾处理之间在病小穗率和防效上亦有一定差异ꎬ这说明不同施用方式对拮抗菌在田间的定殖有较大影响ꎮ木糖氧化无色杆菌Ｄ０９在田间定殖情况及其与化学杀菌剂复配使用方法还需要进一步研究ꎮ３.３㊀菌株Ｄ０９对小麦籽粒毒素含量的探讨本研究结果显示微生物农药或化学药剂对毒素的抑制效果和对赤霉病的防治效果不完全同步ꎮ如苯甲嘧菌酯穗部喷雾处理对赤霉病的控制效果高于Ｄ０９发酵液灌根ꎬ防效达７７.７８％ꎬ但小麦籽粒３种毒素含量却高于Ｄ０９发酵液灌根处理ꎮＭａｇａｎ等研究结果表明ꎬ嘧菌酯降低了小麦赤霉病的发病率ꎬ但其处理过的小麦籽粒ＤＯＮ毒素含量较高ꎬ可能与嘧菌酯使用导致毒素累积有关[３７]ꎻ本研究中嘧菌酯处理后ＤＯＮ等毒素含量虽比对照有所减少ꎬ但和其他药剂相比ꎬ嘧菌酯对毒素的产生和累积的抑制效果较低ꎮＤ０９发酵液处理对小麦籽粒ＤＯＮ㊁ＺＥＮ㊁ＮＩＶ３种毒素含量的控制机理还需进一步研究ꎮ致谢:㊀衷心感谢葛桂梅㊁黄继平㊁洪红升等同事对该试验给予的无私帮助!参考文献:[１]㊀ＢＡＩＧＨ.ＳＨＡＮＥＲＧ.ＭａｎａｇｅｍｅｎｔａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｗｈｅａｔａｎｄｂａｒｌｅｙｔｏＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔ[Ｊ].ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｈｙｔｏｐａ￣ｔｈｏｌｏｇｙꎬ２００４ꎬ４２(１):１３５￣１６１.[２]㊀邓㊀云.一株拮抗性多黏类芽孢杆菌的鉴定及其不同施用方法对小麦赤霉病的防效[Ｊ].福建农林大学学报(自然科学版)ꎬ２０２２ꎬ５１(１):２１￣２６.[３]㊀ＢＡＩＧＨꎬＳＵＺＱꎬＣＡＩＪ.ＷｈｅａｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＦｕｓａｒｉｕｍｈｅａｄｂｌｉｇｈｔ[Ｊ].ＣａｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ４０(３):３３６￣３４６.[４]㊀ＲＯＣＨＡＯꎬＡＮＳＡＲＩＫꎬＤＯＯＨＡＮＦＭ.Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｒｉｃｈｏｔｈｅｓｅｎｅｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｏｎｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｃｅｌｌ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＦｏｏｄＡｄｄｉｔＣｏｎｔａｍꎬ２００５ꎬ２２:３６９￣３７８.[５]㊀ＥＲＩＫＳＥＮＧＳꎬＡＬＥＸＡＮＤＥＲＪ.Ｆｕｓａｒｉｕｍｔｏｘｉｎｓｉｎｃｅｒｅａｌｓ￣ａｒｉｓｋａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ[Ｊ].ＴｅｍａＮｏｒｄꎬ１９９８ꎬ５０２:７￣４４.[６]㊀周雪婷.粮食中ＤＯＮ的危害分析及快速测定方法研究进展[Ｊ].分析检测ꎬ２０１９ꎬ１０(５１):１６９￣１７２.[７]㊀ＲＡＭＯＳＡꎬＳＡＮＣＨＩＳＶꎬＭＡＲÍＮＳ.Ｔｈｅｐｒｅｈｉｓｔｏｒｙｏｆｍｙｃｏｔｏｘ￣ｉｎｓ:Ｒｅｌａｔｅｄｃａｓｅｓｆｒｏｍａｎｃｉｅｎｔｔｉｍｅｓｔｏｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎｓ.[Ｊ].ＷｏｒｌｄＭｙｃｏｔｏｘｉｎꎬ２０１１(４):１０１￣１１２.[８]㊀李正辉ꎬ向晶晶ꎬ陈婧鸿ꎬ等.小麦赤霉病拮抗菌的分离与鉴定[Ｊ].麦类作物学报ꎬ２００７ꎬ２７(１):１４９￣１５２.[９]㊀韩青梅ꎬ曹丽华.小麦赤霉病的生物防治研究进展[Ｊ].麦类作物学报ꎬ２００３ꎬ２３(３):１２８￣１３１.[１０]成丽霞ꎬ彭㊀兵ꎬ李天金ꎬ等.一株具有广谱抗真菌活性细菌菌株的分离鉴定及拮抗物的理化特性[Ｊ].微生物学通报ꎬ２００９ꎬ３６(３):３６５￣３７０.[１１]ＳＴＵＲＺＡＶꎬＣＨＲＩＳＴＩＥＢＲꎬＮＯＷＡＫＪ.Ｂａｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ:Ｐｏ￣ｔｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅｓｙｓｔｅｍｓｏｆｃｒｏｐｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０００ꎬ１９(１):１￣３０. 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扌直逖碌妇2021,47(3):288-293Plant Protection2种生物源杀菌剂对白术根腐病的防效唐涛，王帆帆，郭杰，段媛媛，郭晓亮，林先明"，游景茂"(湖北省农业科学院中药材研究所，恩施445000)摘要利用室內毒力测定法测定了白术角担菌对12种生物源杀菌剂的敏感性，同时开展田间试验测定了7种生物源杀菌剂对白术根腐病的防治效果。

结果表明：0.5%小檗碱水剂、0.3%丁子香酚可溶性液剂、1%蛇床子素水乳剂、3%中生菌素可湿性粉剂、0.5%大黄素甲醚水剂、80%大蒜素乳油和0.5%苦参碱水剂对角担菌的菌丝生长抑制率相对较高，其EC50均小于100mg/L。

在离体白术根茎上,0.5%小檗碱水剂、0.3%丁子香酚可溶性液剂和1%蛇床子素水乳剂对白术根腐病的保护和治疗作用较好，均在80%左右。

田间试验结果表明：末次施药10d和20d 后，0.5%小檗碱水剂、0.3%丁子香酚可溶性液剂和1%蛇床子素水乳剂对白术根腐病的防治效果均在70%。

各生物药剂处理对白术生长无显著影响，无明显药害。

关键词白术；根腐病；生物源杀菌剂；角担菌；防效中图分类号：S482.28文献标识码：B DOI：10.16688/j.zwbh.2020098Control effect of12kinds of biological fungicides on the root rot ofAtractylod.es macrocephalaTANG Tao,WANG Fanfan,GUO Jie,DUAN Yuanyuan,GUO Xiaoliang,LIN Xianming*,YOU Jingmao* (Institute of Chinese Herbal Medicines,Hubei Academy of Agricultural Science,Enshi445000,China.)Abstract Sensitivity of Ceratobasidium sp.to12kinds of biological fungicides was measured in the laboratory, and control effects of seven biological fungicides on root rot of Atractylodss macrocephala were investigated by field experiment.The results showed that berberine0.5%AS,eugenol0.3% SL,cnidiadin1% EW, zhongshengmycin3%WP,physcion0.5%AS,garlicin80%EC and matrine0.5%AS could effectively inhibit the growth of Ceratobasidium sp.,with the EC50values of le ss than100mg/L.The preventive efficacy and curativee f icacyofberberine05%AS$eugenol03%SLandcnidiadin1%EW wasaround80%@Fieldtrial demonstratedthatberberine05%AS$eugenol03%SLandcnidiadin1%EW had be t er control e f ect10d and 20dafterthefinalfungicidesapplication$withthee f icacyofaround70%@Thebiologicalfungicideshadno significanteffectonthegrowthof ABmacrocephala andnoobviousphytotoxicityon ABmacrocephala@Key words Atractylodes macrocephala%root rot；biological fungicide；Ceratobasidium sp.；control effect白术Atractylodes macrocephata Koidz.为菊科苍术属植物，分布在我国江苏、湖北、安徽、浙江、江西、湖南、四川以及福建等地区:1]o白术的干燥根茎是大宗常用中药材之一，在多种古方中常见，具有燥湿利水、健脾益气、止汗、抗肿瘤、抗炎和安胎功效囚&湖北省恩施土家族苗族自治州是白术的主产区，有悠久的种植历史，种植规模逐年扩大囚。