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鸡γ-干扰素基因的克隆与序列分析

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第２７卷第４期　２００６年１０月　华南农业大学学报　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｖ０１．２７．Ｎｏ．４　０ｃｔ．２ｏｏ６　

鸡　一干扰素基因的克隆与序列分析　

敖艳华，任　涛，孔令辰　

（农业部养禽与禽病防治重点开放实验室，华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２）　

摘要：为了研究鸡　．干扰素（ＣｈＩＦＮ．　）基因的功能并进一步探究其在控制家禽传染病方面的应用，根据ＧｅｎＢａｎｋ已　

发表的ＣｈＩＦＮ一　ｃＤＮＡ基因序列自行设计引物，应用反转录．聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术从伴刀豆球蛋白Ａ（ｃｏ－　ｎＡ）刺激培养鸡脾淋巴细胞中提取的总ＲＮＡ中扩增得到ＣｈＩＦＮ－　，然后连接到ｐＭＤ１８－Ｔ载体上并转化到Ｔｏｐｌ０感　

受态细胞中，获得阳性重组质粒并进行正确性序列测序．核甘酸序列结果表明，试验得到了长为５１３　ｂｐ的ＣｈＩＦＮ－　

基因，与原鸡（Ｇｕｌｌｕｓ）ＩＦＮ一　的同源性可高达１００％，其含有１个４９５　ｂｐ的开放性阅读框架，编码１６４个氨基酸，推测　

其成熟蛋白的相对分子质量约为１８　０００．　

关键词：鸡　－干扰素；克隆；序列分析　

中图分类号：￥８５２．４　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１—４１１Ｘ（２００６）０４－００８６—０４　

Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－　ｆｒｏｍ　Ｃｈｉｃｋｅｎ　Ｓｐｌｅｅｎ　Ｃｅｌｌｓ　

ＡＯ　Ｙａｎ—ｈｕａ，ＲＥＮ　Ｔａｏ，ＫＯＮＧ　Ｌｉｎｇ—ｃｈｅｎ　

（Ｋｅｙ　Ｌａｂ　ｏｆ　Ｐｏｕｌｔｒｙ　Ｆｅｅｄｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，　

ＣｏＨｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ａ　ｃ．Ｕｎｉｖ．，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０６４２，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ一　（ＣｈＩＦＮ一　），ａ　ｐａｉｒ　ｏｆ　

ｐｒｉｍｅｒｓ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｔｏ　ＣｈＩＦＮ一　ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｎｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｋｎｏｗｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｇｅｎ—　

Ｂａｎｋ，ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ａｍｐｌｉｆｙ　ＣｈＩＦＮ一　ｃＤＮＡ　ｂｙ　ＲＴ—ＰＣＲ　ｆｒｏｍ　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｏｆ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｓｐｌｅｅｎ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ—　

ｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＣｏｎＡ．ＲＴ—ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｗａｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎｔｏ　ｐＭＤ１８一Ｔ　ｖｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉ—　

ｆｌｅｄ　ｂｙ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ＣｈＩＦＮ一　

ｇｅｎｅ　ｗａｓ　５１３　ｂｐ　ｉｎ　ｌｅｎｇｔｈ，ｗｉｔｈ　ａ　４９５　ｂｐ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｆ　１６４　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｅｓ．　

Ｉｔ　ｗａｓ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｔｈａｔ　ＣｈＩＦＮ一　ｃａｎ　ｐｒｏｄｕｃｅｓ　ａ　ｍａｔｕｒｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｏｆ　ａｐｐｒｏｘｉ—　

ｍａｔｅｌｙ　１８　０００．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｈｉｃｋｅｎ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ一　；ｃｌｏｎｅ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　

禽类细胞因子包括淋巴细胞因子（１ｙｍｐｈｏ—　

ｋｉｎｅｓ）、单核因子（ｍｏｎｏｋｉｎｅｓ）以及干扰素（ＩＦＮ）等，　

它们对动物机体的免疫应答，对疾病的发生发展具　

有十分重要的作用．其中禽类干扰素具有相对的种　

属特异性，也具有微弱的抗原性，它按照抗原特异性　

可分为Ｉ型和Ⅱ型２类，Ｉ型包括ＩＦＮ—Ｏｔ、ＩＦＮ—Ｂ等，　

Ⅱ型又称免疫干扰素即ＩＦＮ一　，其中对ＩＦＮ一　的研　

究很广泛，包括抗微生物的免疫性作用　Ｊ、通过融合　

作为ＤＮＡ疫苗佐剂　，甚至某些疾病的治疗例如结　

核　等．目前人的干扰素基因已相继克隆和表达，　并在临床上得到相应的应用　Ｊ．在我国，尤其是对　

猪干扰素的研究比较深人，猪干扰素　、Ｂ、　基因的　

分子克隆与序列分析已获得成功　Ｊ．与之相比，禽　

类干扰素分子水平的研究起步较晚，１９９５年Ｓｃｈｕｌ￣　

等　８圳报道了鸭Ｉ型ＩＦＮ基因及ＩＦＮ一　基因，夏青　

等¨　、吴光志等¨　分别报道了北京鸭Ｉ型及Ⅱ型　

ＩＦＮ基因，为进行北京鸭干扰素生物制品的研究、从而　

为更好地促进养鸭业提供了坚实的理论基础．近几　

年，程坚等¨　对鸡的　一干扰素也进行了较深人的研　

究．参考众多学者的研究，本试验采用ＲＴ＿ＰＣＲ技术，　

收稿日期：２００５．１１．０９　

作者简介：敖艳华（１９７９一），女，硕士研究生；通讯作者：任涛（１９６８一）男，副教授，博士，Ｅ－ｍａｉｌ：ｒｅｎｔａｏ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ａｎ　

基金项目：广东省科技计划项目（２００４Ｂ２０２０１０３０）

　维普资讯 http://www.cqvip.com 维普资讯 http://www.cqvip.com 华南农业大学学报　第２７卷　

切，出现２条带，一条长度为５１３　ｂｐ，另一条长度约　

为２．７　ｋｂ，与预期的结果完全相符合（图２）．　

Ｍ：ｗｉｄｅ　ｒａｎｇｅ　ｍａｒｋｅｒ；Ｉ：重组质粒双酶切；２：空载体单酶切　Ｍ：ｗｉｄｅ　ｒａｎｇｅｍａｒｋｅｒ；Ｉ：ｄｅｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈＥｃｏＰｄ　ａｎｄ　ＳａｌＩ；２：ＰＵＣ　ｄｉ—　ｇｅｓｔｅｄ　ｗｉｔｉｔ　ＥｃｏＲＩ　

图２重组质粒双酶切鉴定结果　

Ｆｉｇ．２　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｌａｓｍｉｄｓ　ｂｙ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　

ｍｓｔｒｉｃａｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｄｅａｓｅ　

３讨论　Ｐｅｒｃｅｎｔ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　２．３测序结果与序列分析　

通过序列测定得到长５１３　ｂｐ的基因，含有１个　

长为４９５　ｂｐ的完整开放性阅读框架，共编码１６４个　

氨基酸，与ＮＣＢＩ　ＧｅｎＢａｎｋ上登载的编号为　

ＡＦ４２４７４４的原鸡ＩＦＮ．　的同源性为１００％．分析同　

源性较高的前１Ｏ个可以看出，前面８个序列均为原　

鸡ＩＦＮ．　，而同源性最低的则为鹤类ＩＦＮ．　编号为　

ＡＪ００１６７８（图３、４）．　

Ｎｕｃｌｅｏｔｉ如ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ（Ｘ　１００）　图３　ＣｈＩＦＮ一　基因的系统发育树　

Ｆｉｇ．３　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｏｆ　ＣｈｌＦＮ－＾ｒ　

１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０　１１　１　■■　０　００廿　９６　８　④　９７　０　９９　８　９９．６　９９　８　９９　８　９ｇ．８　ｇ９　４　１　２　０．０曩■　９６　８　９５　６　９７　０　９９．８　９９　６　９９　８　９９　８　９９．８　ｇ９　４　２　

３　３．１　３．１　＿９５．８　９３．５　９６．６　９６．４　９６．６　９６．６　９６．６　９６．４　３　４　４　４　４　４　４　４　■一　９２　１　９５　４　ｇ５．２　ｇ５．４　９５　４　９５　４　ｇ４　７　４　

５　２　９　２．９　６　１　７．４　■■　９７　２　９７、０　９７．２　９７　２　９７．２　ｇ６　８　５　６　０　２　０　２　３　３　４　６　２　７　Ｉ　９９　８　１　００．Ｏ　１　００　０　１　０Ｏ　Ｏ　９９　６　６　７　０．４　０　４　３　５　４　８　２．ｇ　０．２　■■　９９．８　９９　８　９９．８　ｇ９　４　７　８　０．２　０　２　３．３　４．６　２　７　０．０　０　２　Ｉ　１　００　０　１　００．０　９９．６　８　

９　０　２　０　２　３．３　４．６　２．７　０．０　０　２　１３．０　＿　：１００．０　９９　６　９　１０　０．２　０　２　３　３　４　６　２　７　０　０　口２　０　０　１３．０曩●　９９　６　１０　１１　０．６　０．６　３　５　５　０　３．１　０　４　０．６　０．４　０．４　０　４　■一　１１　

１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０　１１　

图４　ＣｈＩＦＮ一　基因的核苷酸序列的同源性比较分析　

Ｆｉｇ．４　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ　ｆｏｒ　Ｃｈ／ＦＮ－＾ｒ　

大量的临床试验表明，禽干扰素具有高效、广谱　

的抗病毒作用，可以抑制多种禽类疾病相关病毒的　

繁殖，例如时秀梅等¨　应用兽用干扰素诱生剂（由　

黄芪、灵芝、党参等提炼制成）对人工感染ＩＢＤＶ和　

ＩＬ１　的雏鸡进行了防治试验，结果表明该药对ＩＢＤ　

和ＩＬＴ具有较好的防治效果；Ｓｃｈｕｈｚ等　使用鸭重　

组Ｉ型干扰素抗新城疫、禽流感和水泡性口炎病毒，　

有一定的作用，其中对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗　

效果尤其显著，１５　ｄ内ＩＦＮ可抑制鸭乙型肝炎病毒　

在肝细胞中繁殖．有报道说它还具有某些抗寄生虫　

活性　和免疫调节功能ｌＬ１引，而且ＩＦＮ．　在各类干扰　素中免疫调节功能最强¨　．因此，研究ＩＦＮ．　的意　

义就显得非常重大．目前已经证明在真核细胞中表　

达的鸡重组ＩＦＮ一　蛋白活性与天然鸡ＩＦＮ一　相似，同　

样具有抗病毒和免疫调节作用，而且重组鸡ＩＦＮ．　

具有佐剂效应　’Ｊ．同时发现鸡ＩＦＮ．　与Ｈ５亚型禽　

流感病毒等许多抗原联合应用具有免疫增强作用，　

可以提高鸡细胞免疫的水平¨引．　

本研究直接从鸡脾脏淋巴细胞中提取ｍＲＮＡ，　

并利用ＲＴ—ＰＣＲ成功地扩增和克隆了鸡的ＩＦＮ一　基　

因．分析表明与ＮＣＢＩ　ＧｅｎＢａｎｋ上登载的编号为　

ＡＦ４２４７４４的原鸡ＩＦＮ．　的序列完全一致．所克隆的　

基因为今后进一步体外表达鸡ＩＦＮ．　蛋白并深入研　

究其功能奠定了基础，并且使研究和开发鸡的ＩＦＮ．　∞　∞　啪　一哪　Ｍ一　ｗ　肌　～～一一一一一一一一一　∞∞∞　∞如∞　如∞　如　加　７　

一～一一一～一一一一一一Ａ　Ａ　Ａ　＿《Ａ　Ｎ　Ｕ　Ｘ　Ａ

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牛干扰素-γ基因的克隆与真核表达载体的构建

牛干扰素-γ基因的克隆与真核表达载体的构建

第２２卷　第１期　２０１０年　２月　黑龙江八一农垦大学学报　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ｂａｙｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２２（１）：５３　５７　Ｆｅｂ．２０１０　

文章编号：１００２—２０９０（２０１０）０１—００５３—０５　

牛干扰素一　基因的克隆与真核表达载体的构建　

宋佰芬。李迎春，邹珊，崔玉东　

（黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆１６３３１９）　

摘要：根据Ｇｅｎｅｂａｎｋ中已发表的ＩＮＦ一＾ｙ蛋白ｃＤＮＡ序列保守区设计一对特异性引物，应用ＲＴ—ＰＣＲ技术从Ｃｏｎ　Ａ活化的　牛外周血单核细胞中扩增到编码牛ＩＮＦ一＾ｙ蛋白基因，其大小为５１０　ｂｐ左右。将该基因克隆到ｐＭＤ１８－Ｔ载体中，测序结果与　Ｇｅｎｅｂａｎｋ上发表的ＩＮＦ一　基因序列进行比较，其同源性为９９．８％。将该基因从重组ｐＭＤ１８Ｔ—ＩＦＮ质粒中克隆到表达载体　ｐｃＤＮＡ３．１（＋）质粒中，构建真核表达重组质粒，经酶切和ＰＣＲ鉴定后表明构建的重组质粒为阳性。　

关键词：干扰素一　；真核表达；载体构建　

中图分类号：Ｑ７８５　文献标识码：Ａ　

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｖｅｃｔｏｒ　ｏｆ　Ｃｏｗ　ＩＮＦ－ｖＧｅｎｅ　

Ｓｏｎｇ　Ｂａｉｆｅｎ，Ｌｉ　Ｙｉｎｇｃｈｕｎ，Ｚｏｕ　Ｓｈａｎ，Ｃｕｉ　Ｙｕｄｏｎｇ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ｂａｙｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ　１６３３１９）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩＮＦ一￣／ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｇｅｎｅｂａｎｋ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｓｉｔｅｓ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｐｃＤＮＡ３．１（＋），ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｐｆｉｍｅ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｔｏ　ＩＮＦ一￣ｇｅｎｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｗｅｒｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｐＭＤ１８一Ｔ　ｖｅｃｔｏｒ．Ａｆｔｅｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｐｃＤＮＡ３．１（＋）．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｌａｓｍｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｎａｍｅｄ　ｐｃＤＮＡ３．１（＋）－ＩＮＦ　ａｆｔｅｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｌａｓｍｉｄｓ　ｐｃＤＮＡ３．１（＋）一ＩＮＦ　ｗｅｒｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．　

鸡自介素-18与鸡α-干扰素融合蛋白克隆及其原核表达载体的构建

鸡自介素-18与鸡α-干扰素融合蛋白克隆及其原核表达载体的构建

磷　南畜牧兽鏖　２０１３年（第３４卷）第７期　鸡自介素一１　８与鸡０（一干扰素　融合蛋白克隆及其原核表达载体的构建　项黎丽’，杨红星　（１．河南省济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源４５９０００；　２．郑州新天吴集团郑州新天吴生物科技有限公司）　摘要：为了研制新型细胞因子制剂，将鸡白细胞介素１８（ＣｈｌＬ一１８）基因和鸡Ｏｒ．一干扰素（ＣｈｌＦＮ一　）基因通　过多肽氨基酸接头ｆＬｉｎｋｅｒ）连接在一起构成ｍＣｈＩＬ一１８／ｍＣｈｌＦＮ一　融合蛋白基因，并构建原核重组表达载体，以期　表达具有生物学活性的融合蛋白。以ｍＣｈＩＬ一１８　ｃＤＮＡ与ｍＣｈｌＦＮ—ｃｔＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ及ＰＣＲ重叠延伸技　术（ＳＯＥ）得到ｍＣｈｌＬ一１８／ｍＣｈＩＦＮ一　融合ＤＮＡ。将回收的ＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ—ＴＥａｓｖ载体，并对其进行了测序。　测序结果表明获得了阅读框完整、连接部位正确的ｍＣｈｌＬ一１８／ｍＣｈｌＦＮ—ＯＬ融合分子ＤＮＡ。将所克隆的目的片断　亚克隆到原核表达载体ｐＱＥ３０，构建重组质粒ｐＱＥ３０一ｍＣｈｌＬ一１８／ｍＣｈＩＦＮ一仪。ｐＱＥ３０一ｍＣｈｌＬ一１８／ｍＣｈＩＦＮ—ｄ的　成功构建为研制开发新一代的多功能、多靶点的细胞因子制剂奠定了基础。　关键词：鸡白细胞介素１８；鸡干扰素；串连表达；重叠延伸技术（ＳＯＥ）；原核表达载体　中图分类号：￥８５９　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００４～５０９０（２０１３）０７—００１　１－０５　白细胞介素１８又称ＩＦＮ一＾ｙ诱导因子　】，具有多种生物　的增殖　】，因此ＩＬ一１８在抗肿瘤、抗病原微生物、抗超敏反　学功能。它能刺激Ｔｈ１等细胞产生ＩＦＮ一＾ｙ、ＧＭ—ＣＳＦ、ＩＬ一２　应、抗自身免疫性糖尿病、抗类风湿性关节炎等方面有着　等细胞因子　～１，增强Ｆａｓ介导的细胞毒作用　】，促进Ｔ细胞　潜在的应用前景　。ＩＬ一１８在结构上与ＩＬ一１很相似，但两　表３　１０种药物的药敏试验结果　

新城疫病毒贵州不同鸡源分离株F基因的克隆与序列分析

新城疫病毒贵州不同鸡源分离株F基因的克隆与序列分析

贵州畜牧兽医　２００８年　第３２卷　第３期　１３　

汪德生　。伍祥龙　文明　－。　

（１．贵州大学动物科学学院贵阳　周碧君　工王文亮　温贵兰　－　

５５００２５　２．贵州大学动物疫病研究所）　

摘要应用ＰＣＲ技术扩增ＮＤＶ贵州不同鸡源分离株，包括肉鸡源Ｐ１株与ＢＹ株、蛋鸡源Ｈ２株与Ｆｗ株、七彩山鸡源Ｎ９８株和　越南斗鸡源ＤＱ株的Ｆ蛋白基因，将该基因片段分别进行克隆和测序，并与国内外ＮＤＶ参考株的对应序列进行比较分析。结果表　明：６株ＮＤＶ贵州不同鸡源分离株的Ｆ基因长度均为１　６６２　ｂｐ，编码５５３个氨基酸；分离株间核苷酸同源性为８６．９％一９９．７％，氨　基酸同源性为９１．Ｏ％一９９．３％；与国内外ＮＤＶ代表株（ＬａＳｏｔａ株、Ｂ１株、Ｆ４８Ｅ９株、ＣＨ２０００株和ＴＷ２０００株）的核苷酸同源性为　８４．Ｏ％一９８．９％，氨基酸同源性为８７．２％一９８．６％；经系统发育进化树分析，ＤＱ株、Ｎ９８株、Ｐ１株和Ｈ２株为基因ＶｌＩｄ型，而ＢＹ株　和Ｆｗ株为基因Ｉｘ型。这些结果提示贵州省不同鸡群间存在相同ＮＤＶ毒株感染的可能性，不同年份间ＮＤＶ毒株发生基因型改　变，而近年来贵州省流行的ＮＤ疫情主要是由ＮＤＶ基因ＶＩＩ型引起。　关键词新城疫病毒Ｆ基因序列分析基因型贵州　

新城疫病毒（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）是副粘病毒　

科腮腺炎病毒属成员，能导致多种禽类发生严重的呼吸系　

统和神经系统疾病，对养禽业危害极大。ＮＤＶ基因组为单　

股负链ＲＮＡ，可编码６种结构蛋白，即ＮＰ、Ｐ、Ｍ、Ｆ、ＨＮ和Ｌ　

蛋白，其中Ｆ蛋白是ＮＤＶ最重要的功能性糖蛋白，决定着　

ＮＤＶ的毒力强弱并在ＮＤＶ致病过程中发挥重要作用…。　

国内外学者利用ＮＤＶ　Ｆ蛋白基因绘制系统进化树进行　ＮＤＶ的分子进化研究，结果表明ＮＤＶ的遗传变异与ＮＤＶ　

的传播和流行有着密不可分的关系Ｅ２　』。从１９９３－－２００６　

年，本实验室先后从发病的肉鸡、蛋鸡、七彩山鸡和越南斗　鸡等不同鸡群中分离出ＮＤＶ毒株，并采用传统方法进行了　

鸡IFN-γ基因重组蛋白复性条件的优化及生物活性鉴定

鸡IFN-γ基因重组蛋白复性条件的优化及生物活性鉴定

动物医学进展。２０１２，３３（３）：５２—５７　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　

鸡ＩＦＮ一　基因重组蛋白　

复性条件的优化及生物活性鉴定　

刘鼎阔　，王立红　，徐大为　，杨爱华。，王建春。，秦　操　，张　勇¨　

（１．鼎正动物药业（天津）有限公司，天津３００４０２；２．天津农学院，天津３００４０２；　３．天津市动物疫病预防与控制中心，天津３００４０２；４．新乡市红旗区职业高级中学，河南新乡４５３２００）　

摘　要：为提高鸡ＩＦＮ一７基因重组蛋白的复性效率，用１８种不同的复性缓冲液对在大肠埃希菌中表达　

的ｃＩＦＮ一７进行复性处理，通过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析、考马斯亮蓝定量、对鸡胚成纤维细胞以及对鸡胚的保护试　验检测复性产物的得率和生物学活性。结果表明，去污剂和疏水剂能保证蛋白的复性得率和复性效率，重组　

表达产物得率可高达９４．７　；氧化还原电势是ｃＩＦＮ一７成功复性的关键，有生物学活性的复性产物的复性液　中均存在氧化还原对ＧＳＳＧ／ＧＳＨ；经去污剂处理后再复性的产物对细胞保护的有效浓度显著低于直接复性　的蛋白。　关键词：重组鸡７干扰素；复性条件；生物学活性　

中图分类号：Ｑ７８４　文献标识码：Ａ　文章编号：１００７—５０３８（２０１２）０３—００５２—０６　

ＩＦＮ一７属于Ⅱ型干扰素，又称免疫干扰素，是在　特定诱生剂的作用下由多种细胞产生的具有高度生　物活性的可溶性糖蛋白，是一种重要的细胞因子［１］。　

ＩＦＮ一７在抵抗哺乳类和鸟类病原侵染中具有重要的　作用，对肿瘤　］、细菌口］、病毒　以及寄生虫＿５　等具　

有多重抵抗作用。目前研究已证实鸡ＩＦＮ一７对流感　病毒、新城疫病毒　］、马立克病病毒　及鸡劳氏肉　

瘤病毒Ｌ１。。等具有较好的抑制作用，它不仅参与机体　

对病原侵害的保护性应答，还可通过细胞的信号通　

路广泛参与包括调节机体主要组织相容性复合物Ⅱ　

（ＭＨＣ　１Ｉ）成熟、抗原递呈等在内的免疫调节，是机　体内重要的免疫增强剂ｌ＿１　。