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2020年湖北武汉科技大学微生物学考研真题及答案一、名词解释(共6小题，每小题5分，共30分)1、（5分）条件致死突变型2、（5分）裂解量3、（5分）气生菌丝4、（5分）Stickland反应5、（5分）加富培养基6、（5分）连续培养二、单项选择题(共10小题，每小题2分，共20分)1、（2分）温和性噬菌体基因组在溶源性细菌内可以以下列（）状态存在。
A、复制表达，产生子代病毒；B、自发或经诱导进入裂解循环；C、整合于宿主染色体形式；D、产生成熟的病毒颗粒；2、（2分）酵母菌和运动发酵单胞菌进行乙醇发酵的区别是（）。
A、糖酵解途径不同；B、发酵底物不同；C、丙酮酸生产乙醛的机制不同；D、乙醛生成乙醇的机制不同；3、（2分）大肠杆菌的F-菌株与Hfr菌株接合，其结果为（）。
A、重组频率低，F-菌株变为F+菌株；B、重组频率低，F-菌株变为Hfr菌株；C、重组频率高，F-菌株还是F-菌株；D、重组频率高，F-菌株变成F’菌株；4、（2分）细菌鞭毛的主要功能是（）。
A、传递遗传物质；B、附着；C、运动；D、致病性；5、（2分）大肠杆菌属于（）型的微生物。
A、化能无机自养；B、化能有机异养；C、光能无机自养；D、光能有机异养；6、（2分）根据林奈双命名法，Bacillussubtilis表示（）。
A、一个种名；B、第一个词为种名，第二个词为属名；C、第一个词为属名，第二个词为种名；D、第一个词为属名，第二个词为种的加词；7、（2分）常用的接种环灭菌方法是（）。
A、间歇灭菌；B、干热灭菌；C、高压蒸汽灭菌；D、火焰灭菌；8、（2分）卡尔文循环途径中CO2固定的受体是（）。
A、核酮糖-5-磷酸；B、核酮糖-1,5-二磷酸；C、3-磷酸甘油醛；D、3-磷酸甘油酸；9、（2分）代时为0.5h的细菌，其数量由103个增加到109个，需要（）h。
A、10；B、20；C、30；D、40；10、（2分）原核生物的基因调控主要发生在转录水平上，在负转录调控系统中，调节基因的产物是（），起着阻止结构基因转录的作用。
:微生物学是一门在细胞、分子或群体水平上研究微生物的形态构造、生理代谢、遗传变异、生态分布和分类进化等生命活动基本规律，并将其应用于工业发酵、医药卫生、生物工程和环境保护等实践领域的科学缺壁细菌在自然界长期进化中和实验室菌种的自发突变中都会产生少数缺细胞壁的种类，或是用人为的方法通过抑制新生细胞壁的合成或对现成细胞壁进行酶解而获得人工缺壁的细菌菌落即单个或聚集在一起的一团微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体真病毒是至少含有核酸和蛋白质两种组份的分子病原体亚病毒是凡在核酸和蛋白质两种成分中只含有其中之一病原体。
效价表示每毫升试样中所含有的具有侵染性的噬菌体粒子数温和噬菌体侵入相应宿主细胞后由于前者的基因组整合到后者的基因组上并随后者的复制而进行同步复制，因此温和噬菌体的这种侵入并不引起宿主细胞裂解，这就是溶源性。
溶源菌是一类能与温和噬菌体长期共存，一般不会出现有害影响的宿主细胞温和噬菌体是指不能完成复制循环具有溶源性不发生烈性裂解的噬菌体。
类病毒是一类只含有RNA一种成分，专心寄生在活细胞内的分子病源体。
拟病毒是指一类包裹在真病毒粒中的有缺陷的类病毒。
沅病毒是一类不含核酸的传染性蛋白质分子。
磷壁酸是G+细菌细胞壁结合在细胞壁上的一种酸性多糖，主要成分为甘油磷酸或核糖醇磷酸脂多糖是位于G-细菌细胞壁最外层的一层较厚的类脂多糖类物质，由类脂A、心多糖和O-特异侧链3部分组成。
生长：分个体生长和群体生长两类，个体生长指微生物细胞因同化作用超过异化作用的速度，造成原生质总量不断增长的现象；群体生长是指某一微生物群体中因个体的生长、繁殖而导致该群体的总重量、体积、个体浓度增长的现象繁殖：在各种细胞组份呈平衡增长的情况下，个体的体积或重量达到某一限度时，通过细胞分裂，引起个体数目增加的现象连续发酵：当微生物以单批培养的方式培养到指数期后期时一方面以一定速度连续流入新鲜培养基和通入无菌空气并立即搅拌均匀，另一方面利用溢流的方式以同样的流速不断流出培养物的培养方法。
武汉工程大学2020年硕士研究生入学考试《微生物与生物化学》考试大纲一、课程基本信息课程中文名称：微生物与生物化学课程英文名称：Microbiology and Biochemistry适用招生专业：微生物与生化药学教材：周德庆《微生物学教程》第三版，高等教育出版社,2011年王镜岩等主编《生物化学》第四版，高等教育出版社，2017年二、考试性质与要求本考试是全日制微生物与生化药学专业硕士研究生入学的专业考试。
要求考生在微生物方面比较系统地理解和掌握微生物学的基本概念、基本理论、基本实验技术，能运用所学知识分析和解释人类生产、生活过程中所发生的微生物相关的现象或事件，能综合运用所学的知识解决应用微生物相关的理论和技术问题；在生物化学方面比较系统地理解和掌握生物化学的基本概念和基本理论；掌握重要的生物化学研究技术；能综合运用所学的知识分析问题和解决问题；了解生物化学领域的引人瞩目的最新进展。
具体要求学生主要掌握以下几方面内容：微生物方面：掌握微生物细胞的结构与功能，病毒的结构与属性，微生物的营养、代谢、微生物的生长繁殖及其控制、微生物遗传、微生物的生态、感染与免疫的基本理论和基本知识。
生物化学方面：掌握生物大分子结构、理化性质、结构与功能的关系；掌握物质代谢的主要代谢途径、生物氧化与能量转换、代谢途径间的联系、信息传递及代谢调节；掌握中心法则所揭示的信息流向，理解重组DNA技术及最新进展中涉及的基本概念和原理。
三、考试内容微生物主要包括以下考试内容：（一）绪论1.了解微生物的类群、特点及其与人类的关系；2.了解微生物学的定义和分科；3.了解微生物学的发展简史和21世纪微生物学的发展趋势。
（二）原核微生物1.掌握原核微生物细胞细胞壁的结构、成分与革兰氏染色的关系；2.掌握细菌芽孢的结构与形成过程；3.掌握细菌荚膜、鞭毛的结构、功能与作用；4.了解原核微生物细胞的其它细胞结构；5.掌握细菌的繁殖和群体形态；6.了解原核微生物的分类与常见代表类群。
课程名称：工业微生物学课程编码：英文名称：Industrial Microbiology学时：54 学分：3适用专业：生物工程，制药工程，食品科学与工程，生物技术，食品质量与安全课程类别：必修课程性质：学科基础课先修课程：生物化学教材：《微生物学》路福平等，中国轻工业出版社，2019一、课程性质与任务工业微生物学是为生物工程、制药工程、食品科学与工程、食品质量与安全和生物技术专业开设的一门重要技术基础课。
通过本课程的学习，要求学生掌握微生物的基本知识，包括微生物的形态、结构、营养、生长、环境因素对微生物的影响、菌种选育、菌种保藏以及新陈代谢和遗传变异等；了解微生物在生物界中的地位、在自然界中的分布与作用、特别是在食品、发酵与制药工业中的实际应用等，为其它专业课的学习奠定良好基础。
虽然工业微生物学是我校生物工程，制药工程，食品科学与工程，食品质量与安全，生物技术专业重要的一门基础生物学课程，但因为学习时间有限，因而本课程不能详尽无遗地讲解微生物学的各个方面，在内容的选择和安排上要注意做到主次分明、概念清楚、由浅入深、理论联系实际，为提高教学质量与教学效果创造有利条件。
二、课程教学的基本要求工业微生物学是生物工程、制药工程、食品科学与工程、食品质量与安全和生物技术专业的一门重要技术基础课，以阐述微生物的形态结构与功能、微生物的营养、环境因素对微生物生长的影响以及微生物的遗传育种为主，同时适当介绍微生物的生态学、微生物的分类以及传染与免疫等知识。
考虑到学生已经在生物化学课中学过各种物质代谢的知识，所以在工业微生物学中不再讲解，只介绍微生物的产能方式如呼吸和发酵。
通过本课程的学习，要求学生掌握微生物的基本知识，包括微生物的形态、结构、营养、生长、环境因素对微生物的影响、菌种选育、菌种保藏以及新陈代谢和遗传变异等；了解微生物在生物界中的地位，在自然界中的分布与作用，特别是在食品、发酵与制药工业中的实际应用等，为其它专业课的学习奠定良好基础。
一、门户网站：1、中国微生物信息网络http://159.226.80.1/chinese/chinese.html2、中国微生物资源信息共享/sdinfo3、中国微生物信息网络/4、中国生态系统研究网络CERN /5、中国科学院生态环境研究中心/6、中国国家生物多样性信息交换所——微生物节点/7、中国生物多样性信息中心微生物学部分/cbic.shtml8、微生物学科特色门户中心/9、All the Virology on the WWW /~dmsander/garryfavweb.html二、研究机构：10、中国科学院微生物研究所/11、天津市工业微生物研究所/12、微生物研究站(Institute of Microbiology Research)/pylorus/index.asp13、辽宁省微生物科学研究院/14、广州市微生物研究所/F/03/default.asp15、浙江省微生物研究所（浙江天科高新技术发展有限公司）/16、广东省微生物研究所/newsamplebk/17、湖南省微生物研究所/18、军事医学科学院微生物流行病研究所/19、中国科学院遗传与发育生物学研究所/20、中国科学院武汉病毒研究所/index002.htm21、江苏省微生物研究所/docc/008.htm22、江西省科学院——微生物研究所/microbe.asp23、清华大学微生物实验室/24、台湾东吴微生物学系.tw/25、河北省科学院微生物研究所/site%5Fyjs/cpjs.htm26、辽宁省微生物研究所/server. ... uctInfo&of=view27、南阳微生物研究所/chanpin.htm三、菌种保藏机构：28、中国工业微生物菌种保藏中心/29、中国典型培养保藏中心/30、中国农业微生物菌种保藏管理中心/database/search.htm31、渗流所微生物菌种库/weishengwu/index2.htm32、广东省微生物研究所菌种保藏中心/四、数据库：33、中国微生物资源数据库/34、真菌物种数据库/species/speciesnew.htm35、全球生物物种数据库/36、检验医学网上资源库/edu/resource/graphic/index.asp37、中国经济真菌多媒体数据库http://159.226.80.1/ecofungi/fungimenu.shtml38、中国微生物菌种目录http://159.226.80.1/database/catalogsc.html39、细菌名称数据库/bacteria/bacteria.htm40、真菌新种数据库/newsp/index.html41、微生物物种编目数据库/species/speciesnew.htm42、西藏大型经济真菌/xzzj/fungi_xz.htm43、革兰氏阴性杆菌编码鉴定数据库http://159.226.80.1/database/gnb/gnb.shtml44、法国细菌名称数据库/srs71bin/cgi ... BSN_Bacterial_Names45、国际微生物菌种数据网络MSDN http://159.226.80.1/msdn.shtml46、国际核酸序列数据库/srs71bin/cgi-bin/wgetz?-page+top47、国际计算机用微生物性状编码系统http://159.226.80.1/RKC.html48、Virus Database Online .au/viruses/welcome.html49、E.coli database collection –ECDC .au/viruses/welcome.html50、Molecular Microbiology Jump Station /pages/micro.html51、WHO/TDR MALARIA DATABASE .au/MalDB-www/who.html52、HPV Sequence Database /五、学会：53、中国科学院典型培养物保藏委员会/54、中国科学院典型培养物委员会/55、中国微生物学会/index.php56、湖南省微生物学会/hsm/57、Society for General Microbiology /58、Microbiology @ Leicester /六、科普及教程：59、微生物的世界.tw/colony/60、中国科普博览——微生物馆/gb/lives/microbe/microbe_basic/61、微生物界/weishengwu/62、微生物大世界/jiaomu1.htm63、星光网——临床医学常见真菌图谱/partner/njczw/jltp/zj/zj.htm64、中教育新网——微生物学教程/Special/Subject/CZSW/SWTS/WSWXJC/65、上海第二医科大学微生物教研室/micro/66、武汉大学微生物学专题教学网站http://202.114.65.51/fzjx/wsw/main.htm67、华南师范大学微生物教学网站/life/teac ... icro/info_index.asp68、西北农林科技大学——微生物教学网站/courseware/wsw/yldh.htm69、天津医科大学——医学微生物学http://202.113.49.22/home.files/microbiology/xijunxue/index.htm70、微生物资源在线/71、中华基因网——微生物检验产品/ad/millipore/007.htm72、兽医微生物学/jiaowuchu/jingpinkecheng/weishwu/七、学术期刊：73、Microbiology /74、The Microbiology Network /75、Microbiology information resources and links /76、Microbiology Jobs and Information /dir/life_sciences/microbiology/77、EPA Microbiology /nerlcwww/78、Microbiology of Yahoo /science/biology/microbiology/79、American Society for Microbiology /80、Applied and Environmental Microbiology(full-text) /81、Clinical Microbiology Reviews(full-text) /82、International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology(full-text) /83、Journal of Clinical Microbiology(full-text) /84、Microbiology(full-text) /85、Microbiology and Molecular biology Reviews(full-text) /八、检验及仪器：86、农业部微生物肥料质量监督检验测试中心/biotestlab/87、微生物生化仪器(南京庚辰科学仪器公司)/web/fxyq/flyq/weishengwu.htm88、检验医学网/list.aspx?cid=1889、杭州微生物试剂有限公司/hangwei/90、上海恒奇仪器仪表有限公司/wswjc.htm91、化工仪器网—微生物自动分析仪/products/n ... lei=C&xiaolei=I九、专业论坛：92、labcn检验医学论坛——微生物论坛/bbs6/list.asp?boardid=18十、微生物应用：93、合肥恒星科技开发有限公司/index.htm94、保定市冀微生物技术有限公司/qyml/produser15954.html95、北京九隆升微生物资源开发有限公司/cpjs.htm96、广东环凯微生科技有限公司/showroom/97、北京金山川科技发展有限公司/index.html98、重庆绿环微生物工程有限公司/product.htm99、上海通微生物技术有限公司/pro2.asp?ID=5100、杭州优活微生物开发有限公司/shf.asp101、苏州市永安微生物控制材料厂/product.html102、深圳市国赛生物技术有限公司——微生物检测试剂/microbe_antibody_elisa.htm103、广东合瀛生物工程有限公司/104、中国微生物肥料联盟/105、全禾菌业/106、仪征诚信微生物制品厂/pro ... xwsw&thelevel=3。
《微生物学》课程标准1.课程说明课程编码：〔36067〕承担学院：生物化学工程学院制定〔〕制定日期〔2022年〕审核〔专业指导委员会〕审核日期〔2022年〕批准〔二级学院（部）院长〕批准日期〔2022年〕（1）课程性质：本门课程是药品生物技术专业的专业基础课，属于必修课（2）课程任务：主要针对微生物的分离培养、菌种选育及微生物发酵、微生物检测等岗位开设，主要任务是培养学生能够进行微生物的分离培养、菌种鉴定和选育、微生物发酵生产、管理及质量控制以及微生物检测等相关的操作能力。
（3）课程衔接：在课程设置上，前导课程有生物化学、普通生物学，后续课程有发酵技术、生物制药技术。
2.学习目标本课程的总体目标是：学生能够掌握微生物学的基本理论知识和基本技能。
能够进行微生物的分离培养、菌种鉴定和选育、微生物的生长计数和控制以及微生物检测等相关的操作能力。
使学生在微生物发酵、微生物检测等岗位利用所学知识与技能能够熟练操作，并能解决工作中所遇到的专业问题，以及在岗位上具有一定的创新能力。
进一步培养学生树立独立思考、吃苦耐劳、勤奋工作团结协作的意识以及诚实、守信的优秀品质，为今后的工作奠定良好的基础。
（1）知识目标：了解微生物与人类的关系及微生物与环境之间的关系。
了解微生物在自然界中的分布。
了解基因工程的操作过程。
熟悉微生物营养物质的运输掌握微生物的特点，形态构造，菌落特征、繁殖方式。
掌握微生物的营养及营养类型掌握微生物的生长规律、代谢、遗传变异等掌握微生物分离、培养、控制等的方法。
（2）能力目标能够熟练的进行微生物的染色操作，具有一定的菌种鉴定技能。
能够熟练的进行微生物分离、培养、计数操作。
掌握简单染色及革兰氏染色机制能够运用革兰氏染色方法进行菌种的鉴别能够恰当的选择消毒灭菌的方法，并能熟练的对微生物进行消毒灭菌操作。
具有一定的菌种选育能力。
（3）素质目标热爱社会主义祖国，拥护党的基本路线，具有坚定正确的政治方向；具有良好的职业道德、爱岗敬业、团结协作的精神；具有实事求是的作风、创新精神和创业能力；具有独立思考、自主学习的行为习惯具备获取、处理、传递、利用信息的能力。
生物学实验讲义课程组人员:缪礼鸿胡申才代江红周帼萍曾驰武汉工业学院生物与制药工程学院生物工程教研室录实验须知 (1)实验一普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 (2)实验二革兰氏染色法 (5)实验三细菌芽孢和荚膜染色法 (7)实验四放线菌、蓝细菌、藻类和原生动物的形态观察 (9)实验五霉菌的形态观察 (11)实验六酵母菌的形态观察、死活鉴别及大小测定 (12)实验七微生物的数量测定 (14)实验八玻璃器皿的洗涤、包扎、灭菌及无菌操作台的使用 (16)实验九培养基的制备与灭菌 (18)实验十芽孢杆菌的分离纯化及观察 (20)实验十一抗稻瘟霉的芽孢杆菌的分离筛选 (22)实验十二食品或水中大肠菌群的检测 (23)实验十三大肠杆菌生长曲线的测定 (27)实验十四细菌质粒的接合转移与检测 (28)实验十五微生物菌种保藏技术 (29)实验须知普通微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。
同时，通过实验，培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约、爱护公物的良好作风。
为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项：1．每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。
2．认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。
3．实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。
4．实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。
5．实验过程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。
如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。
必要时用灭火机。
6．使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。
对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。
7．每次实验完毕后，必须把所用仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3％来苏尔液或5％石炭酸液覆盖其上半小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。
凡带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在3％来苏尔液中进行消毒。
8．每次实验需进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于教师指定的地点进行培养。
实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。
9．每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，并连同思考题及时汇交教师批阅。
10．离实验室前应将手洗净，注意关闭门窗、灯、火、煤气等。
实验一普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色I普通光学显微镜一、目的要求1．熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能。
2．学习并掌握油镜的原理和使用方法。
二、实验原理微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜(16mm，10´)高倍物镜(4mm，40-45´)和油镜(1.8mm，95-100´)三种。
油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最大的。
使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。
这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n＝1.52，与玻璃基本相同。
当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。
如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样视野的照明度就减低了。
利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增加数值口径。
因为显微镜的放大效能由其数值孔径决定的。
所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示。
NA＝n．sinα式中NA=数值孔径；n＝介质折射率；α＝最大入射角的半数，即镜口角的半数。
因此，光线投射到物镜的角度愈大，显微镜的效能就愈大，该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。
同时，α的理论限度为900，sin900＝1，故以空气为介质时(n＝1)，数值孔径不能超过1，如以香柏油为介质时，则n增大，其数值孔径也随之增大。
显微镜的分辨力是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。
它与物镜的数值孔径成正比，与光波长度成反比。
因此，物镜的数值孔径愈大，光波波长越短，则显微镜的分辨力愈大，被检物体的细微结构也愈能明晰地区别出来。
因此，一个高的分辨力意味着一个小的可分辨距离，这两个因素是成反比关系的，通常有人把分辨力说成是多少微米或纳米，这实际上是把分辨力和最小分辨距离混淆起来了。
显微镜的分辨力是用可分辨的最小距离来表示的。
能辨别两点之间最小距离＝λ/2NA式中λ＝光波波长。
三、器材菌种：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)染色玻片标本，大肠杆菌(Escherichia coli)染色玻片标本。
仪器或其它用具：显微镜，显微镜灯，香柏油，二甲苯；四、操作步骤1．观察前的准备(1)置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约3—4cm。
镜检者姿势要端正，一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录，两眼必须同时睁开，以减少疲劳，亦可练习左右眼均能察。
(2)调节光源，对光时应避免直射光源，因直射光源影响物像的清晰，损坏光源装置和镜头，并刺激眼睛。
如阴暗天气，可用日光灯或显微镜灯照明。
调节光源时，先将光圈完全开放，升高聚光镜至与载物台同样高，否则使用油镜时光线较暗。
然后转下低倍镜观察光源强弱，调节反光镜，光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜。
在对光时，要使全视野内为均匀的明亮度。
凡检查染色标本时，光线应强；检查未染色标本时，光线不宜太强。
可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调节光线。
2．低倍镜观察检查的标本需先用低倍镜观察，因为低倍镜视野较大，易发现目标和确定检查的位置。
将金黄色葡萄球菌染色标本置镜台上，用标本夹夹住，移动推动器，使观察对象处在物镜正下方，转动粗调节器，使物镜降至距标本约0.5cm处，由目镜观察，此时可适当地缩小光圈，否则视野中只见光亮一片，难见到目的物，同时用粗调节器慢慢升起镜筒，直至物像出现后再用细调节器调节到物像清楚时为止，然后移动标本，认真观察标本各部位，找到合适的目的物，并将其移至视野中心，准备用高倍镜观察。
3．高倍镜观察将高倍镜转至正下方，在转换物镜时，需用眼睛在侧面观察，避免镜头与玻片相撞。
然后由目镜观察，并仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜，同时用粗调节器慢慢升起镜筒至物像出现后，再用细调节器调节至物像清晰为止，找到最适宜观察的部位后，将此部位移至视野中心，准备用油镜观察。
4．油镜观察(])用粗调节器将镜筒提起约2cm，将油镜转至正下方。
(2)在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。
(3)从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头几乎与标本相接，应特别注意不能压在标本巳更不可用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。
(4)从接目镜内观察，进一步调节光线，使光线明亮，再用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野出现物像为止，然后用细调节器校正焦距。
如油镜已离开油面而仍未见物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作至物像看清为止。
(5)用同样的方法观察枯草芽孢杆菌染色标本。
(6)观察完毕，上旋镜筒。
先用擦镜纸拭去镜头上的油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯(香柏油溶于二甲苯)擦去镜头上残留油迹，最后再用干净擦镜纸擦去残留的二甲苯。
切忌用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头。
用绸布擦净显微镜的金属部件。
(7)将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将接物镜转成八字形，再向下旋。
同时把聚光镜降下，以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。
六、实验报告1．结果绘出你在观察到的金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的状态，同时注明物镜放大倍数和总放大率。
2．思考题(1)在使用高倍镜和油镜进行调焦时，应将镜筒徐徐上升还是下降？为什么?答案：应徐徐上升，因为使用高倍镜和油境时所需要的焦距很短，分别为0.6mm和0.15mm，所以只有先让镜头接触玻片后徐徐上升，才容易观察到目标物，反之则还容易损坏镜头。
(2)用油镜观察时，为什么要在载玻片上滴加香柏油?答案：用油境观察时，滴加香柏油主要是为了增加了光的强度和提高分辨率。
(3)在明视野显微镜下，观察细菌形态时，你认为用染色标本好，还是用未染色的活标本好，为什么?答案：用染色标本为好，因为细菌在溶液中往往为无色透明状，跟水溶液背景不容易分辨开，而当染上与背景不同的颜色后则有利于观察。
II细菌的简单染色法一、目的要求1．学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。
2．巩固显微镜的使用方法。
二、基本原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。
在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，以常用碱性染料进行染色。
碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。
例如，美蓝(亚甲蓝)实际上是氯化亚甲蓝盐(缩写为MBC)，它可被电离成正、负离子，带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。
常用的碱性染料除美蓝外，还有结晶紫(crystal violet)、碱性复红(basic fuchsin)、番红(又称沙黄，safranine)等。
细菌体积小，较透明，如未经染色常不易识别，而经着色后，与背景形成鲜明的对比，使易于在显微镜下进行观察。
三、器材菌种：培养12-16h的枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichia coli）染色液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红染液、复红、乙醚酒精溶液、香柏油、无菌水器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。
四、操作步骤1．涂片取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理盐水于载玻片中央，无菌操作，分别挑取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌于二载玻片的水滴中(每一种菌制一片)，调匀并涂成薄膜。
注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。
2．干燥于室温中自然干燥。
3．固定涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。
但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。
4．染色放标本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色时间长短随不同染色液而定。
吕氏碱性美蓝染色液约染2—3分钟，石炭酸复红染色液约染1—2分钟。
5．水洗染色时间到后，用自来水冲洗，直至冲下之水无色时为止。
注意冲洗水流不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。
