HPLC 仪器验证方案

中国国际制药股份有限公司
WATERS2695高效液相色谱仪验证方案

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检验仪器OQ&PQ文件
WATERS2695高效液相色谱仪验证
验证或使用设备
设备名称：高效液相色谱仪 出厂编号：
设备型号： 2695型 设备/计量编号：
设备厂商：美国WATERS公司 使用部门：质量检验部
配套设备：打印机、微机工作站
计划开始实施日期 计划完成日期
WATERS2695高效液相色谱仪验证方案审批
部门/姓名 签名 日期
验证小组负责人

相关/接收部门确认
人

负责部门经理审批

相关部门经理审批
质量保证部审批
管理者代表审批 ----------
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文件编号：
注：以上人员签字后方可实施本草案
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WATERS2695高效液相色谱仪验证方案
WATERS2695高效液相色谱仪验证方案目录

1.0再确认目的
2.0再确认项目及结果
2.1 仪器各单元开机性能确认

2.2 四元泵的确认
2.2.1 泵流量的确认
2.2.2 梯度准确度的确认

2.3自动进样器确认
2.3.1进样器精密度的确认
2.3.2进样器线性的确认

2.4检测器确认
2.4.1波长准确度测试
2.4.2 检测器线性的确认
2.4.3 最小检测浓度的确认

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WATERS2695高效液相色谱仪验证方案
WATERS2695
高效液相色谱仪再确认方案

1.0再确认目的
通过验证来确认此台仪器各项性能是否符合要求。
2.0再确认项目
2.1仪器各单元开机性能确认
项目 开关功能键
泵及进样器 打开电源开关，泵及进样器进行自检，并显示置主画面。

检测器 打开电源开关，检测器灯打开，并进行自检约6min，氘灯在三个内置波长257、521、656处的校准，若偏差小于±1nm，自检通过，若大于1nm，出现自检
错误提示。
2.2 四元泵的确认
2.2.1 泵流量的确认
2.2.1.1 测试条件：

流动相：超纯水 色谱柱：4.6mm×250mm

温度：室温
2.2.1.2 测试方法：
启动仪器，以水为流动相，待压力稳定后，在流动相出口处用称重过的10ml容量瓶收集流动相，
同时用秒表计时，收集5分钟流出的流动相，精密称定，每个流速测定3次，记录测试温度，按下式
计算流量设定值误差Ss和流量稳定性误差SR。
%100)(SSmSFFFS
%100)(minmaxmRFFFS
式中：Fm——Fm=（W2－W1）/（ρ·t），流量实测值，ml/min；
W2——容量瓶＋流动相的质量，g；
W1——容量瓶的质量，g；
ρ
——试验温度下水的密度，g/ml；

t ——收集流动相的时间，min；
m
F
——同一组测量值的算术平均值，ml/min；

F
s——流量设定值，ml/min；

F
max
——同一组测量中流量最大值，ml/min；

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F
min
——同一组测量中流量最小值，ml/min。

2.2.1.3 测试标准：
F
s（ml/min） 0.500 1.000 1.500

允许误差
Ss 5% 3% 3%
SR 3% 2% 2%
2.2.2 梯度准确度的确认
2.2.2.1测试条件：
流动相：0.3%丙酮-水 检测波长：254nm
流速：1.000ml/min 柱温：30℃
2.2.2.2 测试方法：
按下表设置梯度洗脱程序，以两通代替色谱柱连接管路，先用超纯水冲洗系统，待基线平稳后
开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。测定三次，取各梯度级高度的平均值，由曲线图测量100%B
（C）梯度级平均高度计算各梯级实际体积%，每个梯级的理论体积%和实际体积%之差即为梯度准
确度，以最大差值为梯度准确度误差。
梯度洗脱表
时间 A通道（C通道）：超纯水 B通道（D通道）：0.3%丙酮水溶液
0.00min 100% 0%
3.00min 100% 0%
6.00min 0% 100%
9.00min 0% 100%
9.01min 20% 80%
12.00min 20% 80%
12.01min 40% 60%
15.00min 40% 60%
15.01min 60% 40%
18.00min 60% 40%
18.01min 80% 20%
21.00min 80% 20%
21.01min 100% 0%
24min 100% 0%

2.2.2.3 测试标准：梯度准确度误差≤±1%
2.3 自动进样器的确认
2.3.1 进样器精密度的确认
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2.3.1.1 测试条件：

流动相：乙腈-水（20:80） 对照品：25µg/ml咖啡因对照溶液

色谱柱：C18色谱柱 检测波长：273nm
进样量：10µl 流速：1.000ml/min
柱温：40℃
2.3.1.2 测试方法：
对照品置于进样瓶中，共进样6针，记录峰面积，求6针RSD。
2.3.1.3 测试标准：RSD≤1.5%
2.3.2 进样器线性的确认
2.3.2.1 测试条件：
流动相：乙腈-水（20:80） 对照品：25µg/ml咖啡因对照溶液

色谱柱：C18色谱柱 检测波长：273nm
进样量：（1、5、10、15、20）µl 流速：1.000ml/min
柱温：40℃
2.3.2.2 测试方法：
对照品置于进样瓶中，不同进样量各进一针，记录峰面积，求进样浓度与峰面积的相关系数。
2.3.2.3 测试标准：相关系数r≥0.999
2.4 检测器的确认
2.4.1波长准确度测试

以水流过流通池时作一空白扫描，然后，以手动方式将咖啡因标样5)用水稀释10倍后注入流通池，
扫描200nm～300nm范围内的紫外吸收图谱。记录咖啡因最大吸收和最小吸收处的波长，其205nm处的最
大吸收波长与205nm比较，其273nm处的最大吸收波长与273nm比较， 最小吸收波长与245nm比较，
三波长处的差值|△λ|均应≤2nm。

波长检查表（表 35）
选择波长（nm） 205 (max.) 245 (min.) 273(max.)
实测波长（nm）
误差（nm）
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2.4.2 检测器线性的确认
2.4.2.1测试条件：
流动相：乙腈-水（20:80） 对照品：（5、10、25、50、100）µg/ml咖啡因对照溶液

色谱柱：C18色谱柱 检测波长：273nm
进样量：10µl 流速：1.000ml/min
柱温：40℃
2.4.2.2 测试方法：
5个浓度对照品置于不同进样瓶中，各进一针，记录峰面积，求样品浓度与峰面积的相关系数。
2.4.4.3 测试标准：相关系数r≥0.999
2.4.3 最小检测浓度的确认
2.4.3.1 测试条件：
流动相：乙腈-水（20:80） 对照品：1×10-7/ml咖啡因对照溶液
色谱柱：C18色谱柱 检测波长：273nm
进样量： 5µl 流速1.000ml/min
柱温：40℃
2.4.3.2 测试方法：
以流动相冲洗系统至基线平稳，进样，记录色谱图，由色谱图峰高及基线噪音，按下式计算最小
检测浓度C
L

H
CNCdL•2

式中：CL——最小检测浓度，g/ml；
Nd——基线噪音峰高，mAU；
C——标准溶液浓度，g/ml；
H——标准溶液色谱峰高，mAU。
2.4.3.3 测试标准：≤1×10-7 g/ml咖啡因溶液
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