当前位置：文档之家 › Bio-rad_Gene_Pulser_Xcell电穿孔系统操作说明

Bio-rad_Gene_Pulser_Xcell电穿孔系统操作说明

  • 格式：pdf
  • 大小：334.59 KB
  • 文档页数：10

Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统
一 Gene Pulser Xcell电穿孔系统介绍
电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化，Gene Pulser Xcell可以
提供2种波型，即指数波和方波。

1.Exponential Decay Wave（指数波）
所谓指数波的方式，就是将已经充电到指定电压的电容进行快速的放电，放电
的方式是以指数的形式进行的（如下面的slide显示）。该种方式的电穿孔取决于
2个参数，电场强度(kV/cm)和时间常数(ms)。在实验过程中，采用具体的电击杯
调整电压即可调整不同的电场强度。此外，电容和电阻的具体值也可以在Gene
Pulser Xcell的界面上进行设置。
• 电容器充电到预定的电压(V0)放电后，即向样品释放脉冲，细胞表面的电
压随时间按指数方式下降的
• 电容器的电压值达到峰值释放脉冲后迅速的衰减
• 电场强度 E (V/cm) 是用来描述电击杯外界电场环境的一个参数（E=V/d
）
• 脉冲时间是一般用时间常数来进行衡量 (~37% of V0，V
0

/e)

• 脉冲的时间是由电阻和电容的大小所决定的
备注：PC module作用
PC（Parallel Capacitor）模块的本质就是在放电回路中，在样品上并联一套电阻。
在放电回路中设置PC模块的目的：如果实验样品具有很高的电阻值，那么脉冲
就需要维持相当长的时间，这样对细胞是会有损伤的，长时间的电场作用会导致
细胞的裂解。并联了PC模块后对样品而言电击是的电压并没有变化，但是PC
模块起到了分流的作用，可以使得脉冲的时间常数大大减小，可有效的维持细胞
的活性。并联了PC模块后，时间常数取决于该模块的电阻，电阻越小，那么放
电的时间也就越短。

2. Square Wave（方波）
对于某些细胞而言，采用指数波进行实验特别容易导致细胞的死亡。对于这种细
胞而言，采用方波的形式来进行电穿孔既可以进行有效的转染，又可以很好的保
护细胞，维持细胞的活性。方波的形式通常用以下的参数来进行描述：电压、脉
冲时间、脉冲次数和脉冲间的间隔时间。上述所有的参数都可以在Gene Pulser
Xcell的操作界面上方便的设置。在实验结束后，Gene Pulser Xcell还可以显示实
验中这些参数的具体值。
方波的本质和指数波是一样的，区别在于电压还没有下降为0的时候，电容器的
放电已经被截止了。所有的方波都会有电压的细微下降，以其始的电压值的百分
比计算。一般下降率不超过5%。
• 电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波，其时间常数远大于脉冲
时间
• 脉冲时间就是细胞被放电的时间
• 脉冲是可以被反复释放的，在低压回路最多可以重复10次，在高压回路
最多可以重复2次
• 脉冲的间隔时间就是指2个脉冲间的时间
• 脉冲下降是指终止电压和起始电压值之间的差值

电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波，但是采用不同电压的回路会形
成不同的方波脉冲。
采用方波的工作原理是：对电容器进行充电后，释放脉冲到细胞上维持所需的时
间，在进行第二次脉冲前需要对电容器进行重新充电。那么脉冲间的间隔就取决
于电容器充电需要的时间和具体的电压，也就是说在设置脉冲间的时间时，其值
不能小于电容器充电所需的时间。
采用低压回路时，那么就需要采用CE模块，该模块的设置是可调的，所以其脉
冲时间和脉冲间的间隔是可调的，比高压电路要灵活、方便很多
高电压回路:
一次充电，一次脉冲。在下一次脉冲前，电容器需要重新充电
最多只能进行2次脉冲，脉冲时间为0.05 – 5msec，脉冲间隔为5-30sec
低电压回路:
该电路是可调的，因此可一次充电，进行多次的脉冲
最多可进行10次脉冲，脉冲时间为0.05-100msec，脉冲间隔为 0.1 – 10 sec

二 使用方法：
系统部件：
主界面

1. Exponential protocol
在该选项下，用户可设置指数波的脉冲条件
程序显示：

HOME
< 6. Last pulse
7. Optimize
8. Data management
9. Measurements
10. User preferences

HOME
1. Exponential protocol
2. Time constant protocol
3. Square wave protocol
4. Pre-set protocols
> 5. User protocols

结果显示：
2. Time constant protocol
时间常数确定的指数波形式，在该选项下，用户可设置具体的时间常数及其他条
件来进行指数波的脉冲条件
程序显示：

结果显示：
3. Square wave protocol
在该选项下，用户可设置方波的脉冲条件
程序显示：

结果显示：
4. Pre-set protocols
在该选项下，仪器本身预存了一些经过优化的电穿孔条件，针对的样品包括细菌、
真菌及哺乳动物细胞等
5. User protocols：
在该选项下，最多可储存144个用户自己的程序，采用12x12的形式，即12个
人，每人可储存12个自己的程序
6. Last pulse：
在该选项下，用户可记录最后一次脉冲的条件，并使用该条件进行电穿孔实验
即使关机后，GPX还是可以调出仪器最后一次电穿孔的条件，并利用该程序进
行实验。方便实验室最常用程序的使用

7. Optimize：
可用于方便的优化实验条件，可连续的对脉冲条件中的电压某一个参数进行优化
该功能可在指数波、方波、特定时间常数的指数波模式下使用

8. Data management
数据管理
• 可以调出之前的100个实验程序
• 显示每个程序的设置条件和结果
9. Measurements：
仪器的测量功能，用户可预测样品电阻、校正仪器内部电阻等参数
• 该功能使用户可以在日常的工作中经常对GPX CE模块电路中的电容器
进行校正，确保实验的精确，具体的步骤如下：
– 断开ShockPod电击槽
– 连接CE模块
– 按下操作面板上的小数点按键
• 在电击前预测样品的电阻
– 在实验前，在电击杯里加入样品后放入ShockPod电击槽内，在
Resistance Measurement的菜单下按下“回车键”

10. User Preferences：
在该选项下，用户可调节诸如LCD屏幕亮度、时钟等参数

三 电弧保护
• 在电击杯中出现电阻特别小的区域时，就会形成短路，产生电弧。样品缓
冲液中的离子成分就会造成电弧现象
• 只要上述电阻突然变小的情况被检测到，那么电流就不会经过样品
• 电弧保护就是在存在短路的情况下，使电流不经过样品，确保样品不受强
电流的损伤
• 如果样品量很少的话，那么产生的热量会使得样品蒸发
• 如果由于样品的低电阻而产生电弧，那么GPX会给出提示，并不能提供
脉冲

合集下载

Bio-Rad半干转印系统操作规程（Trans-BlotSD型）

Bio-Rad半干转印系统操作规程（Trans-BlotSD型）

Bio-Rad半干转印系统操作规程（Trans-BlotSD型）
Bio-Rad 半干转印系统操作规程（Trans-Blot SD 型）
□操作规程
n 准备好转印缓冲液（参看说明书，不同样品缓冲配方不同），把凝胶在缓冲中平衡20-60分钟
n 剪好合适尺寸的转印膜，在缓冲中浸5-10分钟
n 剪好合适尺寸的滤纸（2张增厚滤纸或4张厚滤纸或6张薄滤纸）用缓冲液浸湿
n 在阳极平板上根据图中顺序做好转印三明治，注意不能有气泡n 装好阴极平板，合上安全盖
n 接上合适的电泳仪开始转印。

注意电极连接（正对正，负对负）,根据不同的蛋白摸索最合适的转印条件。

常规推荐：小胶用10 V 30 minutes 或15 V 15 minutes；大胶用25 V 30 minutes 或15 V 60 minutes；注意大胶不要超过 25 V电压和 3 mA/cm2电流，小胶电流不要超过 5.5 mA/cm2
n 7. 关闭电泳仪，打开安全盖和阴极电极，取出转印膜
注：对于一些用酸性缓冲液的转印，需把凝胶放在膜上，其他同上。

CFX 荧光定量PCR仪操作指南(Bio-rad)【范本模板】

CFX 荧光定量PCR仪操作指南(Bio-rad)【范本模板】

CFX96 实时荧光定量PCR仪操作流程及注意事项开始运行仪器打开电脑打开定量PCR仪底座开关启动CFX Manager软件放置样品将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。

注意，必须带一次性塑料手套，不要让手指接触到反应管表面。

将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。

设置程序，运行实验定量PCR软件操作基本步骤为:a. 设置热循环程序文件（Protocol Tab） b。

设置反应板文件（Plate Tab）. C。

点击“Start Run”键，运行程序热循环程序文件（Protocol Tab）设置指南:点击Edit （编辑）或 Create New（创建新程序）.反应板设置文件（Plate Tab）设置指南：选择本次实验所要使用的荧光染料种类；单击样品类型；如要某些反应孔第一荧光染料对应的样品类型为标准品（Standard），点击“Dilution Series”键可设置其标准品浓度及稀释倍数。

点击“Start Run”键。

单击open lid（打开热盖）或Close lid（关闭热盖)放置样品；单击Start Run，保存文件，开始运行程序。

结果分析PCR反应结束后，软件会自动计算标准曲线和Ct值等。

如需进行表达量分析、等位基因分析等，在软件窗口选择相应分析功能.点击右上方的“Report”键，还可输出结果报告单关闭运行仪器实验结束后取出反应管，顺序关闭CFX Manager软件、定量PCR仪电源，关闭电脑.注意！CFX仪器上盖部分为全自动控制,在通电状态，严禁任何人为干涉上盖开启或关闭的行为，此类行为会导致上盖故障，危及仪器使用.CFX Manager软件操作快速指南实验操作程序设置图 1显示实验设置窗口中一个预览的程序.点击Create New，打开程序编辑器创建一个新的程序。

点击Select Existing，通过浏览器加载一个程序或对其进行编辑。

质粒电转操作规程

质粒电转操作规程

质粒电转操作规程1.目的：制订武汉翰雄生物技术有限公司质粒电转操作规程以便规范开展质粒电转实验，获得准确、可靠的实验结果。

2.依据：文献参考与根据实验条件探索。

3.范围：适用于武汉翰雄生物技术有限公司质粒电转的操作指导。

4.职责：参与质粒电转的实验人员对此规程的实施负责。

5.内容：5.1 设备及主要试剂5.1.1 设备：5.1.1.1 Gene Pulser Xcell 厂家：Bio-Rad 序列号：617BR110565.1.1.2 Gene Pulser Cuvette 厂家：Bio-Rad 货号：165-2088 规格：4mm5.1.1.3 移液枪20-200ul 厂家：大龙（国产）编号：YE3K0173665.1.1.4 移液枪100-1000ul 厂家：大龙（国产）编号：YE3K0145215.1.1.5 STRIPETTE移液管厂家：CORNING COSTAR 规格：5ml5.1.1.6 1.5ml EP管厂家：AXYGEN 编号：311-08-0515.1.1.7 25cm2 Cell Culture Flask 厂家：CORNING COSTAR 货号：4306395.1.1.8 Acrodisc Syringe Filters 厂家：Pall Corporation 批号：12491302 规格：直径25mm0.2μm5.1.1.9 超净工作台5.1.2 试剂：无水乙醇（0.2μm过滤）批号：210608013M乙酸钠（0.2μm过滤）批号：2106050470%乙醇（0.2μm过滤）批号：20170111灭菌注射用水厂家：裕松源药业批号：2016060102 规格：5ml质粒(以pcEFGP为例)溶液批号：20161222 浓度：416ug/ml 体积：1ml CHO-K1细胞批号：20170111 密度：2.1x10^6/ml 体积：5mlCD OptiCHO培养基厂家：Gibco REF：12681-011 Lot.：17898655.2 实验过程(以质粒pcEFGP电转为例)5.2.1 质粒pcEFGP的准备：5.2.1.1 取已提取好的质粒pcEFGP溶液（20161222，416ug/ml,1ml）分装至2只EP管中，500ul/管。

CFX 荧光定量PCR仪操作指南(Bio-rad)

CFX 荧光定量PCR仪操作指南(Bio-rad)

CＦX96 实时荧光定量PCR仪操作流程及注意事项开始运行仪器打开电脑打开定量PCR仪底座开关启动CFX Maｎager软件放置样品将PCＲ反应体系加入到0.2mｌ低缘八联管,盖上管盖;或加入低缘96孔板,用光学级封膜封好、注意,必须带一次性塑料手套,不要让手指接触到反应管表面。

将反应管按顺序放入仪器得加热孔中。

设置程序,运行实验定量PCR软件操作基本步骤为:ａ、设置热循环程序文件(Ｐrotocoｌ Taｂ) ｂ。

设置反应板文件(Plate Ｔab)。

C。

点击“ＳtarｔＲun”键,运行程序热循环程序文件(Pｒotｏｃol Taｂ)设置指南:点击Ediｔ(编辑)或 Creatｅ New(创建新程序)。

反应板设置文件(Platｅ Tａb)设置指南:选择本次实验所要使用得荧光染料种类;单击样品类型;如要某些反应孔第一荧光染料对应得样品类型为标准品(Ｓtanｄard),点击“DilｕｔioｎＳeｒiｅs”键可设置其标准品浓度及稀释倍数。

点击“Ｓtａrt Ｒｕｎ”键、单击opeｎlid(打开热盖)或Close ｌid(关闭热盖)放置样品;单击Staｒt Ｒun,保存文件,开始运行程序。

结果分析PCR反应结束后,软件会自动计算标准曲线与Ct值等、如需进行表达量分析、等位基因分析等, 在软件窗口选择相应分析功能。

点击右上方得“Report"键,还可输出结果报告单关闭运行仪器实验结束后取出反应管,顺序关闭CFX Manａger软件、定量PCＲ仪电源,关闭电脑。

注意!CFＸ仪器上盖部分为全自动控制,在通电状态,严禁任何人为干涉上盖开启或关闭得行为,此类行为会导致上盖故障,危及仪器使用。

ＣFＸＭanａger软件操作快速指南实验操作程序设置图 1显示实验设置窗口中一个预览得程序。

点击CreatｅNew,打开程序编辑器创建一个新得程序、点击Selｅct Exisｔing,通过浏览器加载一个程序或对其进行编辑。