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AＫＴA蛋白纯化系统操作ＡKＴA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLＯREＲ、AKTA PＩLＯT、AKTA PＵRIFIER等多种型号的设备.以下以AKTA ＥＸPLORER为例简单介绍AＫTＡ蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AＫTA.AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起(Fig １).它们是:FIG 1、ＡＫTＡＥXＰLORＥR主机•Pump—900 为双通道高效梯度泵系列.在AKTAexpｌorer １00,流速范围０.0１-1０0 mｌ/ｍin,压力高达１0 Mpａ（泵名为Ｐ-901).在AＫTA eｘplｏre10，流速范围0。
０0１-10 ml/min，压力高达２5 Mpa（泵名为P—903)。
• Moｎitor ＵＶ—900，同时监控１90－70０ nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外—可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分ＡＫTＡPURＩＦＩER机型,尚有UPＣ-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长，安装滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换。
)• Ｍoniｔor pH/C－９00,在线电导和pH 监测的组合监测器。
Ｆｉｇ２、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTＡEXＰLＯREＲ系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig ２)。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由ＵNIＣORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU9５０进行控制。
２、一般操作2。
1 开机按位于底部平台前左侧的ＯＮ／OＦF 按钮，打开色谱系统,然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。
AKTA全自动层析仪（AKTA Purifier）操作规程1.开机打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮不闪烁），双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2.准备流动相和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45 um的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈，甲醇），需在使用前用低频超声唾弃10 min。
3.清洗管道及装柱3.1首先将A1管道放入平衡液或banding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elutionbuffer中，再system control窗口点击manual → pump → pump wash basic，选中A1，B1管道为ON，点击execute。
泵清洗程序会自动运行至结束。
3.2选择manual → pump → flow rate，输入流速为1 mL/min，点击insert；选择manual →alarm＆mon → alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），点击insert，点击execute。
将进样阀的1号位管道接入柱子的柱头（用几滴管道中流出的液体润湿，防止空气进入），稍微拧紧后将柱子下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连接管道（可用柱子中流出的液体润湿接头，防止空气进入）。
4.手动运行4.1平衡柱子平衡好了（观察电导COND及pH的数值曲线走稳了），此时将紫外调零：选择manual → alarm＆mon → autozero，点击execute，就准备上样了。
4.2上样4.2.1用样品环上样：将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍），不要取下注射器，选择manual →flowpath → injectionValve → inject，点击execute。
4.2.2用样品泵上样（AKTA explorer系统）：将样品置于Sample Valve 1号位（可以选8个不同的位置），点击manual → pump → Direct Load_960输入进样流速和体积，点击execute。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
1、使用前，根据自己所要分离蛋白的性质确定所需的分离柱及缓冲液，打开计算机及仪器，但不要急于打开软件，等计算机与仪器连接再打开软件，此过程大约需要3-5分钟。
2、将纯水先抽滤脱气（使用≤0.45μm的滤膜），然后选择流路连到机器上，先洗泵，然后给机器一个流速和压力。
选择的最高压力须小于柱子所能承受的压力极限。
3、将柱子连接到仪器上，接柱子时，须等进液管中的液体出来，将柱子的一头与进液管通过接头连接，先不要拧的太紧，等液体从柱子的另一头流出，再用接头将其与出液管相连拧紧，再将进液管端拧紧，这样防止柱子中进入气泡，影响分离效果。
4、柱子接上后，换上配好的缓冲液（须抽滤脱气）用缓冲液平衡至仪器的各条基线都平后，再上样。
5、上样时，必须通过滤膜过滤（0.22μm），具体上样体积视样品浓度而定，采用不同的上样环上样。
6、仪器使用完毕，切记要用纯水清洗泵和柱子，洗柱直至各条基线都平为止，防止盐和粒子结晶于泵和柱子使机器报废。
若长期不用，再用20%的乙醇清洗系统和柱子,防止泵和柱子生长微生物（这一步非常重要）。
7、仪器的PH计每隔一段时间（一个月）须校准一次。
紫外流动池也需定期清洗（三个月）。
生物技术中心仪器管理人：李红兵
2006年10月15日。
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
