NBF考研辅导班与生技论坛联合免费辅导生物化学计划
首先感谢NBF辅导班的赞助此次讲课的全部费用。请大家注意一点这个生物化学辅导班与NBF推出的农学生物化学辅导班不一样。本课程主要以王镜岩的第三版和第四版进行讲解。
本次辅导班限招500人
报班条件：
1、您需要每月汇报一次学习进度；
2、您需要在学校内张贴一次NBF考研海报(免费快递)；
3、您需要在你的博客，微博，校内，腾讯空间等等（任选1个）推广NBF课程信息，如发布一个“我参加了NBF的免费辅导”之类的信息均可
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解答讲义问题：
本辅导班不提供讲义。因为很多人都不需要讲义，如果很多人需要讲义试情况可以印刷纸质的。
在线辅导形式：
在知识宝库考研社区和生技论坛同时开着在线答疑解决问题。本着有问必答形式给大家最大的帮助。
2.结构功能蛋白质可以作为生物体的结构成分。在高等动物里，胶原是主要的细胞外结构蛋白，参与结缔组织和骨骼作为身体的支架，占蛋白总量的1/4。细胞里的片层结构，如细胞膜、线粒体、叶绿体和内质网等都是由不溶性蛋白与脂类组成的。动物的毛发和指甲都是由角蛋白构成的。
3.运输功能脊椎动物红细胞中的血红蛋白和无脊椎动物体内的血蓝蛋白在呼吸过程中起着运输氧气的作用。血液中的载脂蛋白可运输脂肪，转铁蛋白可转运铁。一些脂溶性激素的运输也需要蛋白，如甲状腺素要与甲状腺素结合球蛋白结合才能在血液中运输。
4.贮存功能某些蛋白质的作用是贮存氨基酸作为生物体的养料和胚胎或幼儿生长发育的原料。此类蛋白质包括蛋类中的卵清蛋白、奶类中的酪蛋白和小麦种子中的麦醇溶蛋白等。
肝脏中的铁蛋白可将血液中多余的铁储存起来，供缺铁时使用。
5.运动功能肌肉中的肌球蛋白和肌动蛋白是运动系统的必要成分，它们构象的改变引起肌肉的收缩，带动机体运动。细菌中的鞭毛蛋白有类似的作用，它的收缩引起鞭毛的摆动，从而使细菌在水中游动。
6.防御功能高等动物的免疫反应是机体的一种防御机能，它主要也是通过蛋白质（抗体）来实现的。凝血与纤溶系统的蛋白因子、溶菌酶、干扰素等，也担负着防御和保护功能。
7.调节功能某些激素、一切激素受体和许多其他调节因子都是蛋白质。
8.信息传递功能生物体内的信息传递过程也离不开蛋白质。例如，视觉信息的传递有视紫红质参与，感受味道需要味觉蛋白。视杆细胞中的视紫红质，只需1个光子即可被激发，
1.按照R 基的化学结构分类
（1）R 为脂肪烃的氨基酸（5 种）：Gly、Ala、Val、Leu、Ile
A. R 基为中性烷基（Gly 为H ），对分子酸碱性影响很小，几乎有相同的等电点（6 .0）
B. 从Gly 至Ile，R 基团疏水性增加，Ile 是这20 种3氨基酸中脂溶性最强的之一（除Phe 2.5、Trp3.4 、Tyr 2.3 以外）
C.一般位于在蛋白质内部，侧链不被修饰
（2）R 中含有羟基的氨基酸（2 种）：Ser 和Thr
A. Ser 的-OH 基是极性基团，易与其它基团形成氢键，具有重要的生理意义，在大多数酶的活性中心都发现有Ser 残基
B. Thr 中的-OH 是仲醇，具有亲水性，但形成氢键的能力较弱，在酶的活性中心很少出现
（3）R 中含硫的氨基酸（2 种）：Cys、Met
A. Cys（半胱氨酸）R 中含巯基-SH 两个Cys 的-SH 氧化生成二硫键，生成胱氨酸。Cys -SH+ Cys -SH ——Cys-S-S- Cys ，二硫键利于蛋白质结构的稳定
B. Met 中含有甲硫基（-S-CH3 ）在生物合成中是一种重要的甲基供体
（4）R 中含有acidic group 的氨基酸（2 种）：Asp、Glu Asp 侧链羧基pKa（β-COOH）为3.86；Glu 侧链羧基pKa（γ-COOH）为4.25 它们在生理条件下带有负电荷
（5）R 中含有酰胺基团的氨基酸（2 种）：Asn、Gln
易发生氨基转移反应，转氨基反应在生物合成和代谢中有重要意义。
（6）R 中含氨基的氨基酸（2 种）：Basic amino acids，Lys、Arg
A. Lys 的R 侧链上含有一个氨基，pKa 为10.53，生理条件下Lys 侧链带有一个正电荷。此外，它的侧链有4 个C，柔性较大，使侧链氨基的反应活性增大
B. Arg 是碱性最强的氨基酸，pKa 为12.48，生理条件下完全质子化
（7）R 中含有芳香基的氨基酸（2 种）：Phe、Tyr
都具有共轭π电子体系，易与其它缺电子体系或π电子体系形成电荷转移复合物( charge-transfer complex)，在分子相互识别过程中具有重要作用。
这2 种氨基酸在紫外区有特征吸收峰。
（8）R 为杂环的氨基酸（3 种）：Trp 、His、Pro
A. 在280nm，Trp 吸收最强，Tyr 次之，Phe 最弱
B. His 的咪唑环pKa 在游离氨基酸中和在多肽链中不同，前者pKa 为6.00，后者为
7.35，它是20 种氨基酸中侧链pKa 值最接近生理pH 值的一种，在接近中性pH 时，可离解平衡，具有缓冲能力
C. Pro 是唯一的一种环状结构的氨基酸，它的α-亚氨基是环的一部分，因此具有特殊的刚性结构。多肽链中，Pro 残基所在的位置必然发生骨架方向的变化，它在蛋白质空间结构中具有极重要的作用。
2. 按照R 基的极性可以分为4 类
（1）非极性氨基酸Nonpolar amino acids（8 种）
Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Met、Pro，在水中溶解度较小，在维持蛋白质的三维结构中起着重要作用。
（2）不带电荷的极性氨基酸Polar, uncharged amino acids（7 种）
Ser、Thr、Tyr、Cys、Asn、Gln 、Gly，这类氨基酸的侧链都能与水形成氢键，因此很容易溶于水。
（3）带负电荷的氨基酸（酸性氨基酸）Acidic amino acids（2 种）：Glu 和Asp
（4）带正电荷的氨基酸（碱性氨基酸）Basic acids（3 种）Arg、Lys、His 非极性氨基酸一般位于蛋白质的疏水核心，带电荷的氨基酸和极性氨基酸位于蛋白质表面。酶的活性中心：His、Ser
二、肽peptide
（一）肽和肽键的结构
一个氨基酸的α羧基和另一个氨基酸的α氨基脱水缩合而成的化合物。其中的氨基酸单
位称氨基酸残基。
肽键：氨基酸间脱水后形成的酰氨键。两个氨基酸形成的肽——二肽。少于10 个氨基酸
的肽——寡肽。多于10 个氨基酸的肽——多肽。
肽键的结构特点：（1）酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基之间的共振作用，形成共振杂化体，稳定性高。
（2）肽键具有部分双键性质，不能自由旋转，具有平面性，６个原子几乎处在同一平面内（酰氨平面）。
（3）肽键亚氨基在pH 0-14 内不解离
（4）肽链中的肽键一般是反式构型，而Pro 的肽键可能出现顺、反两种构型
（二）肽的重要性质
1. 旋光性：一般短肽的比旋光度等于其各个氨基酸的旋光度的总和
2. 肽的酸碱性质
在pH 0―14 范围内，肽键中的亚氨基不解离。肽的酸碱性质主要取决于Ｎ端α－ＮＨ2
和Ｃ端α－COOH 以及侧链Ｒ上可解离的基团。在长肽或protein 中，可解离的基团主要是side groups（侧基）。
3. 肽的化学反应
肽的α-羧基，α-氨基和侧链R 基上的活性基团都能发生与游离氨基酸相似的反应。凡是有肽键结构的化合物都会发生双缩脲反应，且可用于定性、定量分析。
双缩脲反应是peptide 和protein 特有的反应，游离氨基酸无此反应。CuSO4 与双缩脲反应，生成紫红色或蓝紫色复合物。
（三）天然存在的活性肽
活性肽：生物体内有很强生物活性的寡肽或多肽
1. 谷胱甘肽Glu—Cys—Gly
在细胞内参与氧化还原过程，清除内源性过氧化物和自由基。维护protein 活性中心的巯基处于还原状态。
2GSH ——GS—SG
H2O2 + 2GSH ——2H2O + GS—SG
2. 短杆菌肽（抗生素）
由短杆菌产生的10 肽环，抗菌。
L-Orn—L-Leu—D-Phe—L-Pro—L-Val—L-Orn—L-Leu—D-Phe—L-Pro—L-Va
Orn－鸟氨酸
3. 脑啡肽（5 肽，具有镇痛作用，已发现几十种。）
Met---脑啡肽： Tyr—Gly—Gly—Phe—Met
Leu---脑啡肽： Tyr—Gly—Gly—Phe—Leu
Leu---脑啡肽，既有镇痛作用又不会象吗啡那样使人上瘾。
4. 生物体内寡肽的来源：
（1）合成蛋白质的剪切、修饰
（2）酶专一性逐步合成（如谷胱甘肽）
（3）动物肠道可吸收寡肽
三、Sequence primary structure（一级结构序列，共价结构）
一级结构意义：protein 一级结构（序列）中含有形成高级结构全部必需的信息，一级结构决定高级结构及功能。
推断：氨基酸序列（一级结构）——空间结构
预测：空间结构（高级结构）——功能
蛋白质测序步骤
（一）protein 测序的一般步骤
1. 测定protein 分子中多肽链的数目
2. 拆分protein 分子中的多肽链
3. 测定多肽链的氨基酸组成
4. 断裂链内二硫键
5. 分析多肽链的N 末端和C 末端
6. 多肽链部分裂解成肽段
7. 测定各个肽段的氨基酸顺序
8 . 确定肽段在多肽链中的顺序
9 . 确定多肽链中二硫键的位置
（二）protein 测序的基本策略
对于一个纯protein，理想的方法是从N 端直接测至C 端，目前只能测60 个N 端氨基
酸。
1. 直接法（测protein 的序列）
两种以上特异性裂解法：
N C
A 法裂解A1 A2 A3 A4
B 法裂解B1 B2 B3 B4
2. 间接法（测定核酸序列，推断氨基酸序列）
（三）测序前的准备工作
1. protein 的纯度及均一性鉴定
要求：纯度97%以上，均一
两种以上纯度鉴定方法才可靠
⑴聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)要求一条带
⑵DNS-Cl（二甲氨基萘磺酰氯）测N 端氨基酸
2. 测定分子量
用于估算氨基酸残基数n = M/110
方法：SDS-PAGE、凝胶过滤法、沉降系数法、渗透压法
3. 确定亚基种类及数目
⑴拆离四级结构：SDS-PAGE 测亚基分子量， 8mol/L 尿素，SDS
⑵拆离二硫键
过甲酸氧化—S—S— + HCOOOH →— SO3H 或β巯基乙醇还原
举例：血红蛋白(α2β2)
分子量：M 拆亚基：M1、M2 两条电泳带拆二硫键：M1 、M2 两条电泳带
分子量关系： M = 2M1 + 2M2
4. 测定氨基酸组成
酸水解、碱水解
确定肽链中各种氨基酸出现的频率，便于选择裂解方法及试剂
5. 端基分析
①N 端分析
DNS-Cl 法：黄绿色荧光，灵敏度高，薄层层析，方法简便
DNFB 法：Sanger 试剂，DNP-多肽，酸水解，黄色DNP-氨基酸，液相色谱等
PITC 法：Edman 法，逐步切下，无色PTH-氨基酸，液相色谱分析
②C 端分析
A．肼解法
H2N-A-B-C-D-COOH
无水肼NH2NH2，100℃，5-10h
A-NHNH2、B-NHNH2、C-NHNH2、D-COOH 氨基酸的酰肼，用苯甲醛沉淀，C 端在上清中，Gln、Asn、Cys、Arg 不能用此方法
B．羧肽酶法（Pro 不能用此方法）
羧肽酶A：除Pro、Arg、Lys 外的所有C 端氨基酸
羧肽酶B：只水解Arg、Lys
（四）肽链的部分裂解和肽段的分离纯化
1. 化学裂解法
①溴化氰—Met—X—产率85%
②亚碘酰基苯甲酸—Trp—X—产率70-100%
③NTCB（2-硝基-5-硫氰苯甲酸）—X—Cys—
④羟胺NH2OH —Asn—Gly—约150 个_______氨基酸出现一次
2.酶法裂解
①胰蛋白酶Lys—X (X ≠ Pro)，Arg—X__②胰凝乳蛋白酶Tyr—X (X ≠ Pro) Trp—X，Phe—X
③胃蛋白酶
Phe(Trp、Tyr、Leu)—Phe(Trp、Tyr、Leu)
③Glu 蛋白酶Glu—X
④Arg 蛋白酶Arg—X
⑤Lys 蛋白酶X—Lys
⑥Pro 蛋白酶Pro—X
3.肽段的分离纯化
①电泳法ＳＤＳ－ＰＡＧＥ根据分子量大小分离
②离子交换层析法（DEAE—Cellulose、DEAE—Sephadex）：根据肽段的电荷特性分离
③反相ＨＰＬＣ法：根据肽段的极性分离
④凝胶过滤根据分子量大小分离
4. 肽段纯度鉴定
分离得到的每一个肽段，需分别鉴定纯度。常用ＤＮＳ－Cl 法
要求：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单带、ＨＰＬＣ单峰、Ｎ端单一
（五）肽段的序列测定及肽链的拼接
1. Edman 法：一次水解一个Ｎ端氨基酸
（1）耦联PITC ＋ H２N—A-B-C-D pH8-9，40℃
——PTC—A-B-C-D
（2）裂解PTC—A-B-C-D + TFA 无水三氟乙醇
——ATZ—A + H2N—B-C-D
（3）转化ATZ—A —— PTH—A
PTC 肽：苯氨基硫甲酰肽ATZ：噻唑啉酮苯胺（-氨基酸）
PTH：苯乙内酰硫脲（-氨基酸）
2. DNS-Edman 法
用DNS 法测N 末端，用Edman 法提供（n-1）肽段
Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｄ－Ｅ肽
3. 有色Edman 法
荧光基团或有色试剂标记的PITC 试剂
4.自动序列分析仪测序
仪器原理：Edman 法，可测60－70 肽
1967 液相测序仪，自旋反应器，适于大肽段
1971 固相测序仪，表面接有丙氨基的微孔玻璃球，可耦连肽段的Ｃ端1981 气相测序仪，用Polybrene 反应器（聚阳离子）四级铵盐聚合物
液相：5nmol 20-40 肽97%
气相：5pmol 60 肽98%
5. 肽段拼接成肽链
16 肽，N 端H，Ｃ端Ｓ
Ａ法裂解：ONS PS EOVE RLA HOWT
Ｂ法裂解：SEO WTON VERL APS HO
重叠法确定序列：HOWTONSEOVERLAPS
（六）二硫键、酰胺及其它修饰基团的确定
1. 二硫键的确定（双向电泳法）碘乙酰胺封闭-SH 胃蛋白酶酶解protein 第一向电泳：过甲酸氧化—S—S—生成-SO3H
第二向电泳：分离出含二硫键的两条短肽，测序。
与拼接出的肽链比较，定出二硫键的位置。
2. 酰胺的确定
Asp—Asn、Glu—Gln
酶解肽链，产生含单个Asx 或Glx 的肽，用电泳法确定是Asp 还是Asn
举例：Leu-Glx-Pro-Val 肽在pH=6.0 时，电荷量是Leu+ Pro0 Val-
此肽除Glx 外，净电荷为0，可根据此肽的电泳行为确定是Glu 或是Gln 3. 糖、脂、磷酸基团位置的确定
糖类通过Asn、Ser 与protein 连接，-N-糖苷-0-糖苷
脂类：Ser、Thr、Cys
磷酸：Ser、Thr、His
经验性序列：Lys(Arg)-Ser-Asn-Ser(PO4)，Arg-Thr-Leu-Ser(PO4)
Lys(Arg) –Ala-Ser(PO4)
氨基用叔丁氧甲酰基（BOC）保护
C 端→ N 端
挂接→去保护→中和→缩合→（去保护→中和→缩合）n →多肽__第三节蛋白质的高级结构一、蛋白质的二级结构和纤维状蛋白质
（一）肽链的构象（conformation）
多肽链上α-碳原子都参与形成单键，一个多肽主链可能有无限多种构象。
已知一个蛋白质的多肽链在生物体内只有一种或很少几种稳定构象，这种构象称天然构象。天然构象蛋白质具有生物活性，主链上的单键不能自由旋转。
1. 肽链的二面角（dihedral angle）
α碳原子连接的两个键（α-N1 和α-C2）是单键，能自由旋转。
绕α—N1 键旋转的角度为Φ绕α—C2 键旋转的角度称Ψ
当Φ的旋转键Cα-N1 两侧的N1-C1 和Cα-C2 呈顺式时，规定Φ=0°。
当Ψ的旋转键Cα-C2 两侧的Cα-N1 和C2-N2 呈顺式时，规定Ψ=0°。
从Cα向N1 看，顺时针旋转Cα-N1 键形成的Φ角为正值，反之为负值。
从Cα向C2 看，顺时针旋转Cα- C2 键形成的Ψ角为正值，反之为负值。
2. 多肽链折叠的空间限制
Φ和Ψ同时为0 的构象实际不存在。
二面角（Φ、Ψ）所决定的构象能否存在，主要取决于两个相邻肽单位中非键合原子间的接近有无阻碍。Cα上的R 基的大小与带电性影响Φ和Ψ。
蛋白质中非键合原子间的最小接触距离。
拉氏构象图：Ramachandran 根据蛋白质中非键合原子（non-covelently-bonded atom）间的最
小接触距离，确定了哪些二面角（Φ、Ψ）所确定的两个相邻肽单位的构象是允许的，哪些是不允许的，并且以Φ为横坐标，以Ψ为纵坐标在坐标图上标出，该坐标图称拉氏构象图。
⑴实线封闭区域（一般允许区）：非键合原子间的距离大于一般允许距离，此区域内任何二面角确定的构象都是允许的，且构象稳定。
⑵虚线封闭区域（最大允许区）：非键合原子间的距离介于最小允许距离和一般允许距离之间，立体化学允许但构象不够稳定。
⑶虚线外区域（不允许区）：该区域内任何二面角确定的肽链构象非键合原子间距离小于最小允许距离。
（二）二级结构的基本类型：
驱使蛋白质折叠的主要动力－熵效应主要有两点：第一暴露在溶剂中的疏水基团降低至最少程度。第二要保持处于伸展状态的多肽链和周围水分子间形成的氢键相互作用的有利能量状态。
1. α螺旋（α-helix）
（1）特征：多肽主链按右手或左手方向盘绕，形成右手螺旋或左手螺旋，相邻的螺圈之间形成链内氢键，构成螺旋的每个Cα都有相同的二面角Φ、Ψ。
①二面角Φ= -57°,Ψ= - 48°，右手螺旋；
②每圈3.6 个氨基酸残基，高度0.54nm；
③每个残基绕轴旋转100°，沿轴上升0.15nm；
④氨基酸残基侧链向外；
⑤相邻螺圈之间形成链内氢链，氢键的取向几乎与中心轴平行；肽键上N-H 氢与它后面（N
端）第四个残基上的C=0 氧间形成氢键
典型的α螺旋用3.613表示，3.6 表示每圈螺旋包括3.6 个残基，13 表示氢键封闭的环包括13 个原子。封闭环原子数3n+4（n=1、2、.....）
（2）R 侧链对α-螺旋稳定性的影响
R 侧链的大小和电荷决定了α-螺旋的稳定性
①多肽链上连续出现带同种电荷的氨基酸残基，不能形成稳定的α-螺旋,如多聚Lys、多聚Glu
② Gly 的Φ角和Ψ角可取较大范围，在肽中连续存在时，不易形成α-螺旋
③ R 基大不易形成α-螺旋，例如Ile
④ R 基较小，且不带电荷的氨基酸利于α-螺旋的形成,如多聚Phe，在pH7 的水溶液中自发卷曲成α-螺旋
⑤ Pro 中止α-螺旋
（3）pH 对α-螺旋的影响多聚L-Glu 和多聚L-Lys
（4）右手α-螺旋与左手α-螺旋
右手螺旋比左手螺旋稳定
蛋白质中的α-螺旋几乎都是右手。但也有例外，在嗜热菌蛋白酶中有很短的一段左手
α-螺旋，由Asp-Asn-Gly-Gly（226-229）组成（φ+64°、Ψ+42°）。
（5）α-螺旋结构的旋光性
由于α-螺旋结构是一种不对称的分子结构，因而具有旋光性。
①. α碳原子的不对称性
②. 构象本身的不对称性
天然α-螺旋能引起偏振光右旋
α-螺旋的比旋不等于构成其本身的氨基酸比旋的加和，而无规卷曲的短肽链比旋则等于
所有氨基酸比旋的加和。
2. β-pleated sheet（β折叠）
两条或多条伸展的多肽链侧向聚集，相邻肽链主链上的NH 和C=0 之间形成氢链。
β-折叠中所有的肽链都形成链间氢键，侧链R 基交替地分布在片层平面的两侧。Parallel：β-折叠肽链的N 端在同一侧。φ=-119°，Ψ=+113°
Antiparallel：肽链的极性颠倒，N 端间隔相同。φ=-139°，Ψ=+135°
纤维状蛋白质中，β-折叠主要是反平行式，球状蛋白质中两种方式都存在。
在纤维状蛋白质的β-折叠中，氢键主要是在肽链之间形成；而在球状蛋白质中，β-折叠既可在不同肽链间形成，也可在同一肽链的不同部分之间形成。
3.β-turn（β-回折（reverse turn）、β-弯曲（β-bend））
肽链出现的180°回折，由第一个氨基酸残基的C=O 与第四个氨基酸残基的N-H 间形成
氢键。
β转角的特征：A. 4 个连续的氨基酸残基组成；B. 主链骨架180°折叠
C. 第一个氨基酸残基的C=O 与第四个氨基酸残基的N-H 形成氢键
D. C1α与C4α之间距离小于0.7nm
E. 多数由亲水氨基酸残基组成
4.无规卷曲
没有规律的多肽链主链骨架构象，往往与生物活性有关。
α-螺旋、β-折叠在拉氏构象图上有固定的位置，而无规卷曲的φ、Ψ二面角可存在于所
有允许区域内。
三、超二级结构（super-secondary structure）
由若干个相邻的二级结构单元（α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规卷曲）组合在一起，
形成有规则的二级结构组合体。
1. 复绕α-螺旋（αα结构）
由两股或三股右手α-螺旋彼此缠绕形成的左手旋，存在于α-角蛋白、肌球蛋白、原肌球蛋白和纤维蛋白原中。
2. βxβ结构两个平行式的β-折叠通过一段连接链（x 结构）连接而形成的超二级结构。
①βcβ x 为无规卷曲
②βαβ x 为α-螺旋，最常见的是βαβαβ，存在于苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶中
3.β曲折（β-meander）
由三条（以上）相邻的反平行式的β-折叠链通过紧凑的β-转角连接而形成的超二级结构。
4. 回形拓扑结构（希腊钥匙）
5. β-折叠桶
多条β-折叠构成的β-折叠层，卷成一个筒状结构，筒上β折叠可以是平行的或反平行的，一般由5-15 条β-折叠股组成。
超氧化物歧化酶的β-折叠筒由8 条β-折叠股组成。筒中心由疏水氨基酸残基组成。
6.α-螺旋-β转角-α-螺旋
两个α-螺旋通过一个β转角连接在一起。λ噬菌体的λ阻遏蛋白含此结构。
四、纤维状蛋白质
轴比大于10，含大量的α-螺旋或β-折叠片，整个分子呈纤维状，广泛分布于动物体内，占脊椎动物体内蛋白质总量的50%以上，起支架和保护作用。
1.角蛋白
源于外胚层细胞，包括皮肤及皮肤的衍生物，可分成α角蛋白和β角蛋白。
（1）α角蛋白（毛发）
主要由α-螺旋组成，三股右手α-螺旋向左缠绕形成原纤维，原纤维排列成“9+2”的电
缆式结构称微纤维，成百根微纤维结合成大纤维。Cys 含量较高，结构稳定性由二硫键保证。α-角蛋白在湿热条件下可伸展转变成β-构象。
（2）β-角蛋白（丝心蛋白）
以β-折叠结构为主。反平行式β-折叠片的堆积，链间主要以氢键结合，层间主要靠范
德华力维系。富含Gly、Ala、Ser。
2. 胶原蛋白
3. 弹性蛋白
4. 肌球蛋白、肌动蛋白和微管蛋白
一、蛋白质的酸碱性质
可解离基团主要是侧链基团，少数N 端-NH2 和C 端-COOH。
1. 蛋白质的等电点
等电点与蛋白质中所含的酸性氨基酸、碱性氨基酸的比例有关。
在等电点条件下，蛋白质的电导性、溶解度和粘度最小。
2. 蛋白质的电泳分离
聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE（荷质比不同）
SDS-PAGE（荷质比相同，分子量不同）
3. 离子交换层析分离蛋白质
与氨基酸分离原理相似
二、胶体性质与蛋白质的沉淀
蛋白质分子直径1-100nm，在水溶液是中具有胶体性质（布朗运动，丁达尔现象，不能
通过半透膜）。
透析：将含小分子杂质的蛋白质放入透析袋，置水中，小分子杂质不断从袋中出来，大
分子蛋白质仍留在袋中。
蛋白质的溶解度取决于氨基酸侧链基团的极性，离子化基团的数量。
1.稳定蛋白质胶体溶液的主要因素
A.蛋白质表面极性基团形成水化膜
B.非等电状态时，同种电荷的互相排斥
2. 沉淀蛋白质的方法
A.盐析法
高浓度的中性盐[（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl]，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀
B.有机溶剂沉淀法：破坏水化膜，降低介电常数
C.重金属盐沉淀
与重金属离子（Hg2+. Pb2+. Cu2+ 等）生成不溶性沉淀
D. 生物碱和某些酸类沉淀法
pH 小于等电时，蛋白质带正电荷，易与生物碱试剂和酸类的负离子生成沉淀
生物碱试剂：单宁酸、苦味酸、钨酸
酸类：三氯乙酸、磺基水杨酸
E. 加热变性沉淀：加热变性沉淀通常不可逆
三、蛋白质的变性
理、化因素影响，使蛋白质生物活性丧失，溶解度下降，不对称性增大。
1. 变性的因素
强酸、强碱；有机溶剂；去污剂；还原剂（β-硫基乙醇）；盐析、盐溶；重金属离子；温度；机械力（搅拌、研磨）
2. 蛋白质变性后的现象
①结晶及生物活性丧失
②疏水侧链基团外露，分子结构伸展松散
③理化性质改变，溶解度降低，沉淀，粘度增加
④生物化学性质改变，易被蛋白酶水解
实际应用
A.消毒灭菌：75%乙醇，紫外线，高温
B.提取活性蛋白质时防止蛋白质变性
3. 可逆变性与不可逆变性
二级、三级或四级结构遭受被破坏即为变性。
三级（或四级）结构被破坏时，往往引起可逆变性。
二级及三级（或四级）结构一并破坏时，往往引起不可逆变性。
四、分离纯化蛋白质的主要方法
目的：蛋白与非蛋白分开，蛋白质之间分开
1.溶解度差异：PEG 沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法
2.热稳定性差异：热处理沉淀法；铜锌SOD（65℃、15 分钟、稳定）
3. 电荷性质差异离子交换层析法、电泳法
4. 分子大小和形状差异
凝胶过滤、超滤法、透析法、离心法
5. 与配体亲和力的差异
亲和层析法（affinity chromatography）：目的蛋白与一种配基特异结合。配基是能与目的
蛋白结合的原子团和分子。酶与底物、激素与受体蛋白、抗原与抗体。
五蛋白质的分离方法
1.蛋白质的抽提材料预处理及细胞破碎（机械、渗透、反复冻融、超声波、酶法）
粗分离（盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、超滤、吸附）
2?蛋白质分离
纯化主要方法
280nm处有最大吸收
吸收差法：蛋白质浓度（g/ml）=1.45OD280-0.74OD260
Lowry法）：Pr Pr-铜复合物鉬蓝或钨蓝
3红棕色)
Pr(10-100μg/ml) -- 蓝色复合物（正比）--595nm Cu2+
双缩脲法：双缩脲 OH- 紫色复合物（正比）灵敏度差可用来快速鉴定
4. 色谱与氨基酸的分析分离
（1）色谱的分类：
按流动相可分为气相、液相、超临界色谱等；
按介质可分为纸层析、薄层层析、柱层析等；
按分离机制可分为吸附层析、分配层析、分子筛层析等
（2）.色谱的应用
可用于分离、制备、纯度鉴定等。
定性可通过保留值、内标、标准曲线等方法，定量一般用标准曲线法。
氨基酸的分析分离是测定蛋白质结构的基础。在分配层析和离子交换层析法开始应用于氨基酸成分分析之后，蛋白质结构的研究才取得了显著的成就。现在这些方法已自动化。
氨基酸从强酸型离子交换柱的洗脱顺序如下：
Asp,Thr,Ser,Glu,Pro,Gly,Ala,Cys,Val,Met,Ile,Leu,Tyr,Phe,Lys,His,(NH3),Arg
第一章蛋白质的结构与功能 [测试题] 一、名词解释：1．氨基酸 2．肽 3．肽键 4．肽键平面 5．蛋白质一级结构 6．α-螺旋 7．模序 8．次级键 9．结构域 10．亚基 11．协同效应 12．蛋白质等电点 13．蛋白质的变性 14．蛋白质的沉淀 15．电泳 16．透析 17．层析 18．沉降系数 19．双缩脲反应 20．谷胱甘肽 二、填空题 21．在各种蛋白质分子中，含量比较相近的元素是____，测得某蛋白质样品含氮量为15.2克，该样品白质含量应为____克。 22．组成蛋白质的基本单位是____，它们的结构均为____，它们之间靠____键彼此连接而形成的物质称为____。 23．由于氨基酸既含有碱性的氨基和酸性的羧基，可以在酸性溶液中带____电荷，在碱性溶液中带____电荷，因此，氨基酸是____电解质。当所带的正、负电荷相等时，氨基酸成为____离子，此时溶液的pH值称为该氨基酸的____。 24．决定蛋白质的空间构象和生物学功能的是蛋白质的____级结构，该结构是指多肽链中____的排列顺序。25．蛋白质的二级结构是蛋白质分子中某一段肽链的____构象，多肽链的折叠盘绕是以____为基础的，常见的二级结构形式包括____，____，____和____。 26．维持蛋白质二级结构的化学键是____，它们是在肽键平面上的____和____之间形成。 27．稳定蛋白质三级结构的次级键包括____，____，____和____等。 28．构成蛋白质的氨基酸有____种，除____外都有旋光性。其中碱性氨基酸有____，____，____。酸性氨基酸有____，____。 29．电泳法分离蛋白质主要根据在某一pH值条件下，蛋白质所带的净电荷____而达到分离的目的，还和蛋白质的____及____有一定关系。 30．蛋白质在pI时以____离子的形式存在，在pH>pI的溶液中，大部分以____离子形式存在，在pH 实验一 蛋白质及氨基酸的颜色反应 一、目的意义 1、学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理。 2、学习和了解一些鉴定蛋白质的特殊颜色反应及其原理。 二、实验原理 1、双缩脲反应 当尿素加热到180℃左右时，2分子尿素发生缩合放出1分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物，这一呈色反应称为双缩脲反应。 蛋白质分子中含有多个与双缩脲相似的键，因此也具有双缩脲的颜色反应。借此可以鉴定蛋白质的存在或测定其含量。应当指出，双缩脲反应并非蛋白质的特异颜色反应，因为凡含有肽键的物质并不都是蛋白质。 2、茚三酮反应 蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色化合物，此反应为一切蛋白质及α-氨基酸（除脯氨酸 和羟脯氨酸）所共有。含有氨基酸的其他化合物也呈此反应。 该反应十分灵敏，1:浓度的氨基酸水溶液就能呈现反应。因此，此反应广泛用于氨基酸的定量测定。 3、黄色反应 含有苯环侧链的（特别是含酪氨酸）蛋白质溶液与硝酸共热时，呈黄色（硝基化合物），再加碱则变为橙黄色，此反应也称为黄蛋白反应。 OH + HNO 3 HO NO 2 + H 2O HO NO 2 + O N OH OH 三、仪器与试剂 1、试剂 (1) 蛋白质溶液：取10mL鸡蛋清，用蒸馏水稀释至100mL，搅拌均匀后用纱布过滤得上清液。 (2) 0.3%色氨酸溶液、0.3%酪氨酸溶液、0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液、0.5%苯酚溶液。 (3) 0.1％茚三酮－乙醇溶液：称取0.1g茚三酮，溶于100mL 95％乙醇。 (4) 10％NaOH溶液、1％硫酸铜溶液、尿素、浓硝酸。 2、仪器：试管及试管夹、酒精灯。 四、操作方法 1、双缩脲反应 (1) 取一支干燥试管，加入少量尿素，用微火加热使之熔化，待熔化的尿素开始变硬时停止加 热。此时，尿素已缩合为双缩脲并放出氨气（可由气味辨别）。待试管冷却，加入约1mL10％NaOH溶液，振荡使其溶解，再加入1滴1％硫酸铜溶液。混匀后观察出现的粉红色。(2) 另取1支试管，加入1mL蛋白质溶液，再加入2mL 10％NaOH溶液摇匀，然后再加入2 滴1％的硫酸铜溶液。摇匀观察其颜色变化。 (3) 注意事项 加入的硫酸铜不可过量，否则会产生蓝色的氢氧化铜，从而掩盖了双缩脲反应的粉红色。 (4) 记载上述实验过程和结果，并解释现象。 2、茚三酮反应 (1) 取3支试管，分别加入蛋白质溶液、0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液各1mL，再加0.5mL 0.1％茚三酮－乙醇溶液，混匀后在小火上加热煮沸1－2min，放置冷却，观察颜色变化。 (2) 在滤纸的不同部位分别滴上一滴0.3%脯氨酸溶液、0.5%甘氨酸溶液，风干后再在原处滴 一滴0.1％茚三酮－乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察斑点出现及其颜色。 (3) 记载上述实验过程和结果，并解释现象。 3、黄色反应 向6个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。 1．在生理pH 条件下，下列哪种氨基酸带正电荷C A．丙氨酸B．酪氨酸C．赖氨酸 D．蛋氨酸E．异亮氨酸 2．下列氨基酸中哪一种是非必需氨基酸B A．亮氨酸B．酪氨酸C．赖氨酸 D．蛋氨酸E．苏氨酸 3．蛋白质的组成成分中，在280nm 处有最大吸收值的最主要成分是：A A．酪氨酸的酚环B．半胱氨酸的硫原子 } C．肽键D．苯丙氨酸 4．下列4 种氨基酸中哪个有碱性侧链D A．脯氨酸B．苯丙氨酸C．异亮氨酸D．赖氨酸 5．下列哪种氨基酸属于亚氨基酸B A．丝氨酸B．脯氨酸C．亮氨酸D．组氨酸 6．下列哪一项不是蛋白质α-螺旋结构的特点B A．天然蛋白质多为右手螺旋 B．肽链平面充分伸展 ） C．每隔个氨基酸螺旋上升一圈。 D．每个氨基酸残基上升高度为. 7．下列哪一项不是蛋白质的性质之一C A．处于等电状态时溶解度最小B．加入少量中性盐溶解度增加 C．变性蛋白质的溶解度增加D．有紫外吸收特性 8．下列氨基酸中哪一种不具有旋光性C A．Leu B．Ala C．Gly D．Ser E．Val 9．在下列检测蛋白质的方法中，哪一种取决于完整的肽链B / A．凯氏定氮法B．双缩尿反应C．紫外吸收法D．茚三酮法 10．下列哪种酶作用于由碱性氨基酸的羧基形成的肽键D A．糜蛋白酶B．羧肽酶C．氨肽酶D．胰蛋白酶 11．下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的A A．蛋白质分子的净电荷为零时的pH 值是它的等电点 B．大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出 C．由于蛋白质在等电点时溶解度最大，所以沉淀蛋白质时应远离等电点D．以上各项均不正确 ? 12．下列关于蛋白质结构的叙述，哪一项是错误的A A．氨基酸的疏水侧链很少埋在分子的中心部位 B．电荷的氨基酸侧链常在分子的外侧，面向水相 C．白质的一级结构在决定高级结构方面是重要因素之一 D．白质的空间结构主要靠次级键维持 13．列哪些因素妨碍蛋白质形成α-螺旋结构E A．脯氨酸的存在B．氨基酸残基的大的支链 C．性氨基酸的相邻存在D．性氨基酸的相邻存在 878 华南理工大学 2012年攻读硕士学位研究生入学考试试卷（请在答题纸上做答，试卷上做答无效，试后本卷必须与答题纸一同交回） 科目名称：生物化学与分子生物学 适用专业：微生物学；生物化学与分子生物学；生物医学工程；生物医学工程(专硕) 本卷满分：150分共页一、是非题（每题2分，答对得2分，答错倒扣2分，不答得0分，共20分） 1.核苷酸在水溶液中，其碱基都是顺式的构象。 2.蛋白质对波长280nm的光有最大的吸光值，而核酸对波长260nm的光有最大的 吸光值。 3.在低盐浓度下，蛋白质的溶解度随着盐浓度的升高而增大。 4.转录的过程中，以负链的DNA为模板转录成mRNA。 5.DNA聚合酶I在DNA复制过程中以5’‐3’的方向合成新的DNA链；翻译的过程中 核糖体沿着mRNA 3’‐5’的方向前进；蛋白质合成方向是N端到C端。 6.解旋酶（helicase）是拓扑异构酶的一种。 7.真核生物的所有mRNA都含有poly（A）结构 8.ATP、NAD、RNA、乙酰CoA都含有糖残基 9.在PH7.0的缓冲液中，二肽Ala－Glu向电场的阴极泳动 10.原核细胞的tRNA和rRNA分子受到广泛加工，而mRNA则很少进行修饰 二、问答题（130分） 1.糖是细胞能量的主要来源，也是构成细胞的重要成分（共24分） 1）请写出糖酵解和三羧酸循环的过程（12分） 2）cAMP、ATP、乙酰辅酶A、NADH对以上过程的调节起什么作用（4分） 3）细菌中的LPS和肽聚糖的结构是什么，起什么作用（4分） 4）糖蛋白是膜蛋白的重要组成，参与细胞信号传导等功能。糖蛋白中的糖与蛋白的连接方式是怎样的？（4分） 2.蛋白质是生物呈现不同性状的主要因素。（28分） 1)阐述蛋白质的一、二、三、四级结构，并阐述维系这些结构的主要相互作用力。 （12分） 2)阐述你知道的蛋白纯化方法及原理（8分） 3)如何预测或者检测蛋白质的高级结构（8分） 生物化学实验讲义 赵 国 芬 2010年9月 实验之前说明 1.各班学习委员将成员分成10个大组,每个大组中2人一小组,大组采用循环实 验的方法,同时开出不同的10个实验. 2.共开出10个不同的实验 实验一温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 实验二牛奶中蛋白质的提取与鉴定 实验三血液葡萄糖的测定-福林（Folin）-吴宪氏法 实验四双缩脲测定蛋白质的含量 实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 实验六植物组织中还原糖和总糖的含量测定 实验七应用纸层析法鉴定动物组织中转氨基作用 实验八植物组织中维生素C的定量测定 实验九琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察 实验十植物组织中DNA的提取和鉴定 3.穿着要利索,做好实验记录 4.注意实验室卫生和安全. 一. 实验室规则:按照实验室的规则给学生讲解. 二. 生物化学所用的实验技术 1.样品: :血液、血浆、血清、组织 植物样品：果实、花蕾、茎等 无论用什么做材料，为了提取物质，需匀浆 2．移液管的使用： 移液管吸管 移液管 奥氏吸管 读数时视线与凹面相平，取液时要用吸管嘴吸，放出液体时注意嘴部液体的残留问题。 3．离心机的使用： 平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停 4．分光光度计 机器原理和测定原理（比尔定律） 5．水浴锅的使用 三、实验报告的书写（用教务处统一印刷的报告纸写） 目的、原理、仪器、药品、步骤、结果及结论、讨论 实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 一、实验目的 通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。 二、实验原理 酶的化学本质是蛋白质。凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。酶的活性通常是用测定酶作用底物在酶作用前后的变化来进行观察的。 本实验用唾液淀粉酶作用的底物—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。 淀粉被酶水解的变化，可以用遇碘呈不同颜色来观察。淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。 三、试剂 1.0.5%淀粉溶液 2.碘化钾－碘溶液 3.1%尿素溶液。 4.1%CuSO4溶液 5.磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液pH5.0-8.0: 6.0.5%NaCl溶液。 7.唾液淀粉酶制备每人用自来水漱口3次，然后取20m1蒸馏水含于口中，半分钟后吐入烧杯中，纱布过滤，取滤液lOml，稀释至2Oml为稀释唾液，供实验用。 四、操作步骤 一、温度对酶活性的影响 （一）淀粉酶的观察 1、取3支大试管，编号后按表操作 2、在白色比色板上，置碘液2滴于各孔中，每隔1分钟，从第二管中取出反应 生物化学模拟题B卷 一、A型选择题 1. 蛋白质变性后将会产生的结果是（ C ） A.大量氨基酸游离出来 B.生成大量肽段 C.空间构象改变 D.肽键断裂 E.等电点变为零 2. 维系蛋白质α－螺旋和β－折叠结构稳定的化学键是（ E ） A. 肽键 B. 离子键 C. 二硫键 D. 疏水作用 E. 氢键 3. 酶活性中心的叙述，正确的是（ A ） A．有些酶可以没有活性中心 B．都有辅酶作为结合基团 C．都有金属离子 D．都有特定的空间构象 E．抑制剂都作用于活性中心 4. 关于同工酶的叙述，错误的是（） A．生物学性质相同 B．酶分子一级结构不同 C．同工酶各成员K m 值不同 D．是一组催化相同化学反应的酶 E．酶分子活性中心结构相同 5. 1分子乙酰CoA经三羧酸循环氧化后的产物是（ C ） A.柠檬酸 B.草酰乙酸 和H 2O D.草酰乙酸和CO 2 E. CO 2 和4分子还原当量 6. 磷酸戊糖途径生成的重要产物是（ C ） A. 5-磷酸核糖,NADH B. 6-磷酸葡萄糖,NADPH C. 5-磷酸核糖,NADPH D. 6-磷酸果糖,NADPH E. 5-磷酸核糖,FADH 7. 长期饥饿时，血糖主要来自（D ） A．肌肉蛋白降解的氨基酸 B．肝蛋白降解的氨基酸 C．肌糖原分解 D．肝糖原分解 E．甘油的糖异生 8. 成熟红细胞获得能量的主要途径是（ E ） A. 脂肪酸氧化 B. 2，3-二磷酸甘油酸旁路 C. 磷酸戊糖途径 D. 糖的有氧氧化 E. 糖酵解 9. 体内贮存的脂肪主要来自（ C ） A．类脂 B．生糖氨基酸 C．葡萄糖 D．脂肪酸 E．酮体 10. 脂酰CoA进行β氧化的酶促反应顺序为（ C ） A．脱氢、再脱氢、加水、硫解 B．硫解、脱氢、加水、再脱氢 C．脱氢、加水、再脱氢、硫解 D．脱氢、脱水、再脱氢、硫解 E．加水、脱氢、硫解、再脱氢 11. 有关酮体的描述错误的是（ A ） A．肝脏可生成酮体，但不能氧化酮体 B．仅在病理情况下产生 C．主要成分为乙酰乙酸、β－羟丁酸和丙酮 D．合成酮体的酶系存在于线粒体 E．原料为乙酰CoA 12. 关于电子传递链的叙述错误的是（ D ） A．电子传递链各组分组成4个复合体 B．主要有NADH氧化呼吸链和琥珀酸氧化呼吸链 C．每对氢原子氧化时都生成3个ATP D．抑制细胞色素氧化酶后,传递链组分都处于还原状态E．如果氧化不与磷酸化偶联,仍可传递电子 青岛大学2012年硕士研究生入学考试试题 科目代码： 638 科目名称：生物化学（共 6 页） 请考生写明题号，将答案全部答在答题纸上，答在试卷上无效 一、单项选择题（36分，每题1分） 1、测得生物样品每克含氮0.04克，每100克该样品蛋白质含量应是: A. 6.25克 B. 12.5克 C. 25克 D. 2.5克 E. 125克 2、在280m波长附近具有最大光吸收峰的氨基酸是： A．丝氨酸B．谷氨酸C．蛋氨酸D．色氨酸E．精氨酸3、稳定蛋白质分子中α-螺旋和β-折叠的化学键是： A．肽键B．二硫键C．盐键D．氢键E．疏水作用4、通常不存在RNA中，也不存在DNA中的碱基是： A．腺嘌呤B．黄嘌呤C．鸟嘌呤D．胸腺嘧啶E．尿嘧啶5、下列关于DNA双螺旋结构模型的叙述正确的是： A．由两条完全相同的多核苷酸链绕同一中心轴盘旋成双螺旋 B．一条链是左手螺旋，另一条链为右手螺旋 C．A+G与C+T的比值为1 D．A+T与G+C的比值为1 E．两条链的碱基间以共价键相连 6、下列几种DNA分子的碱基组成比例各不相同，哪一种DNA的解链温 度(Tm)最低。 A. DNA中A+T含量占15％ B. DNA中G+C含量占70％ C. DNA中G+C含量占40％ D. DNA中A+T含量占60％ E. DNA中G+C含量占25％ 7、酶促反应中决定酶特异性的是： A.作用物的类别 B.酶蛋白 C.辅基或辅酶 D.催化基团 E.金属离子 8、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制效应是： A. Vmax降低，Km不变 B. Vmax降低，Km降低 C. Vmax不变，Km增加 D. Vmax不变，Km降低 E. Vmax降低，Km增加 9、酶的活性中心是指： 简单蛋白质：完全由氨基酸构成的蛋白质 结合蛋白质：由AAs和其他非蛋白质化合物所组成 球状蛋白质：多肽链能够折叠，使分子外形成为球状的蛋白质。 纤维状蛋白质：能够聚集为纤维状或细丝状的蛋白质。主要起结构蛋白的作用，其多肽链沿一个方向伸展或卷曲，其结构主要通过多肽链之间的氢键维持。 单体蛋白质：仅含有AAs 寡聚蛋白质：由两个以上、十个以下亚基或单体通过非共价连接缔合而成的蛋白质。 等电点：蛋白质或两性电解质(如氨基酸)所带净电荷为零时溶液的pH，此时蛋白质或两性电解质在电场中的迁移率为零。符号为pI。 氨基酸残基：在多肽链中的氨基酸，由于其部分基团参与了肽键的形成，剩余的结构部分则称氨基酸残基。它是一个分子的一部分，而不是一个分子。氨基酸的氨基上缺了一个氢，羧基上缺了一个羟基。简单的说，氨基酸残基就是指不完整的氨基酸。一个完整的氨基酸包括一个羧基（—COOH)，一个氨基(—NH2)，一个H，一个R基。缺少一个部分都算是氨基酸残基,并没有包括肽键的。 钛键：氨基和羧基脱去一分子水形成的化学键。 钛键平面：肽键所在的酰胺基成为的刚性平面。由于肽键具有部分双键性质，使得肽基的六个原子共处一个平面，称为肽平面。 同源蛋白质：在不同有机体中实现同一功能的蛋白质。（结构和功能类似的蛋白质。） 蛋白质一级结构：蛋白质多肽链的氨基酸通过肽键连接形成的线性序列。 蛋白质二级结构：指多肽链借助H键折叠盘绕成沿一维方向具有周期性结构的构象。 构象：分子的三维结构即分子中的所有原子在空间的位置总和。 构型：分子中的原子在空间的相对取向。 α-螺旋：它是蛋白质当中最为常见、最丰富的二级结构。多肽主链沿中心轴盘绕成右手或左手螺旋；每个螺旋周期有3.6个氨基酸残基，螺距0.54nm，螺旋直径0.5nm；氨基酸残基侧链伸向外侧；同一肽链上的每个残基的酰胺氢原子和位于它后面的第4个残基上的羰基氧原子之间形成氢键，并且与螺旋轴保持大致上的平行。此外，肽键上的酰胺氢和羰基氧既能形成内部氢键，也能与水分子形成外部氢键。 β-折叠：常见的蛋白质的二级结构之一。呈片状,肽链主链取锯齿状折叠构象；肽链走向可能是平行的，也可能是反平行的。两条或多条肽链之间侧向聚集在一起，相邻多肽链羰基氧和酰胺氢之间形成氢键，氢键与肽链的长轴几乎呈直角；侧链R基交替分布于片层平面两侧。 β-转角：它大多分布在球状蛋白质分子表面，以改变肽链。它是一个发夹式转折，其特点是在于多肽链中第n个残基的一CO基与第n+3个残基的-NH基形成氢键。因此，一个多肽链的走向可以得到很好的扭转。因此，β-转角在球状蛋白质中是重要的二级结构，起到连接其他二级结构的作用。 超二级结构：蛋白质中，由若干相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，形成有规则、在空间上能辨认的二级结构组合体，以充当三级结构的构件。 结构域：对于较大的蛋白质分子（或亚基），多肽链往往由两个或两个以上相对独立的三维实体缔合而成三级结构，这种独立的折叠单位称为结构域。 蛋白质三级结构：指多肽链在二级结构的基础上借助各种次级键进一步盘绕成具有特定肽链走向的紧密球状构象。 蛋白质四级结构：具三级结构的球状蛋白质以非共价键缔合在一起，形成的聚集体称为蛋白质的四级结构。其中每个球状蛋白质称为亚基。 疏水相互作用：非极性的基团在极性溶液中相互靠近的相互作用。 别构蛋白质：是指除了具有结合底物的活性部位，还具有结合调节物别构部位的蛋白质。别构蛋白的活性部位和别构部位可以分属不同的亚基（活性亚基和调节亚基），活性部位之间以及活性部位与调节部位之间通过蛋白质构象的变化而相互作用。 生物化学实验报告 姓名： 专业： 院系： 学号： 实验一蛋白质分子量测定------凝胶层析法 一、实验原理 凝胶层析法是利用凝胶把分子大小不同的物质分开的一种方法，又叫做分子筛层析法，排阻层析法。凝胶本身是一种分子筛，它可以把分子按大小不同进行分离，如同过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。但这种“过筛”与普通的过筛不一样。将凝胶颗粒放在适宜溶剂中浸泡，使其充分戏液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的缝隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶内部，流速缓慢，以致最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。 凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质，无论是天然凝胶还是人工凝胶，它们的内部都具有很微细的多孔网状结构。凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶，人工合成的凝胶是聚丙烯酰胺凝胶和葡聚糖凝胶，后者的商品名为Sephadex型的各种交联葡聚糖凝胶，它具有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水。 这种聚合物的立体网状结构，其孔隙大小与被分离物质分子的大小有相应的数量级。在凝胶充分溶胀后，交联度高的，孔隙小，只有相应的小分子可以通过，适于分离小分子物质。相反，交联度低得孔隙大，适于分离大分子物质。利用这种性质可分离不同分子量的物质。 以下进一步来说明凝胶层析的原理。将凝胶装载柱后，柱床总体 积称为“总体积”，以Vt表示。实质上Vt是由Vo，Vi与Vg三部分组成，即Vt=Vi+Vg+Vo。Vo称为“孔隙体积”或“外体积”又称“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面孔隙之间的水相体积，相应于一般层析柱法中内流动相体积；Vi为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积，Vg为凝胶本身的体积，因此Vt-Vo等于Vi+Vg。 洗脱体积与Vo及Vi之间的关系可用下式表示： Ve=Vo+KdVi 式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大浓度（峰）出现时所流出的体积；Kd为样品组分在二相间的分配系数，也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数。它只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小分布有关，而与柱的长短粗细无光，也就是说它对每一物质为常数，与柱的物理条件无关。Kd 可通过实验求得，上式可改写成： Kd=(Ve-Vo)/Vi 上式中Ve为实际测得的洗脱体积；Vo可用不被凝胶滞留的大分子物质的溶液通过实际测量求出；Vi可由g.Wr求得。因此，对一层析柱凝胶床来说，只要通过实际实验得知某一物质的洗脱体积Ve就可算出它的Kd值。 Vo表示外体积；Vi内体积；Ve II、Ve III分别代表组分II和III的洗脱体积。Kd可以有下列几种情况： 1、当Kd=0时，则Ve=Vo。即对于根本不能进入凝胶内部的大分子物质，洗脱体积等于空隙体积。 生化习题 选择题 1.含有2个羧基的氨基酸是：（ A ） A.谷氨酸 B. 苏氨酸 C.丙氨酸 D. 甘氨酸 2.酶促反应速度V达到最大反应速度Vmax的80%时，底物浓度[S]: （ D ） A. 1 Km B. 2 Km C. 3 Km D. 4 Km 3.三碳糖、六碳糖与七碳糖之间相互转变的糖代谢途径是：（ D ） A．糖异生 B．糖酵解 C．三羧酸循环 D．磷酸戊糖途径 4.哪一种情况可用增加[S]的方法减轻抑制程度：（ B ） A．不可逆抑制作用 B．竞争性可逆抑制作用 C．非竞争性可逆抑制作用 D 反竞争性抑制作用 5.鸟氨酸循环中，尿素生成的氨基来源有：（ C ） A．鸟氨酸 B．精氨酸 C．天冬氨酸 D．瓜氨酸 6.糖酵解途径中，第二步产能的是: （ B ） A. 1，3-二磷酸甘油酸到 3-磷酸甘油酸 B. 磷酸烯醇式丙酮酸到丙酮酸 C. 3-磷酸甘油醛到 1，3-二磷酸甘油酸 D. F-6-P到 F-1,6-P 7.氨基酸的联合脱氨过程中，并不包括哪类酶的作用: （ D ） A 转氨酶 B L –谷氨酸脱氢酶 C 腺苷酸代琥珀酸合成酶 D 谷氨酸脱羧酶 8.下列哪一种物质不是糖异生的原料: （ C ） A. 乳酸 B. 丙酮酸 C. 乙酰CoA D. 生糖氨基酸 9.目前被认为能解释氧化磷酸化机制的假说是: （ C ） A、化学偶联假说 B、构象变化偶联假说 C、化学渗透假说 D、诱导契合假说 10、1958年Meselson和Stahl利用15N标记大肠杆菌DNA的实验证明了下列哪一种机制？（D） A．DNA能被复制 B．DNA基因可转录为mRNA C．DNA基因可表达为蛋白质 生物化学第二版答案 生物化学第二版答案 【篇一：医学生物化学答案】 【篇二：生物化学2010-2011-第二学期-a-答案】 ass=txt>第1 页（共12 页） 年级：09 课程号：1403010140 冈崎片段 dna复制过程中，2条新生链都只能从5’端向3’端延伸，前导链连续合成,滞后链分段合成，这些分段合成的新生dna片段称冈崎片段，细菌冈崎片段长度1000-2000核苷酸，真核生物冈崎片段长度 100-200核苷酸。 1．（√）蛋白质在低于其等电点的溶液环境中解离为带有净正电荷的状态。 3．（√）凯氏定氮法都可以用来测定氨基酸、肽和蛋白质等物质的含量，但是双缩 脲试剂法不能测定氨基酸含量。 去氨基。 机体代谢产生的二氧化碳和氨。 6．（√）酶的变构调节是指酶分子的空间结构受到效应分子的影响而发生一定改变， 从而使酶的活性增强或减弱，其一级结构不受影响。 a．精氨酸b．组氨酸c．酪氨酸d．亮氨酸 3．（ b ）利用蛋白质分子量的差异进行分离的方法是： a．等电点沉淀b．凝胶过滤层析 c．离子交换层析d．吸附层析 4．（ b ）在鸟氨酸循环中，中间代谢物中会出现的氨基酸有：a．脯氨酸和苏氨酸b．瓜氨酸和精氨酸 c．酪氨酸和缬氨酸d．鸟氨酸和赖氨酸 5．（ d ）下列过程不能脱去氨基的是： a．联合脱氨基作用b．氧化脱氨基作用 c．嘌呤核甘酸循环d．转氨基作用 第4 页（共12 页） ―― ―― ― ― ― ― ― :名― 姓― ― ― 线 ― ― ― ――:号―学― ― ― ― ― ― 订 ― ― ― ― ― :业――专― ― 生物化学实验讲义 化学工程与技术学院 基础部 实验一酪蛋白的制备 一、目的 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 二、原理． 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、器材 1 、离心机2、．抽滤装置 3、精密pH试纸或酸度计 4、电炉 5、烧杯 6、温度计． 四、试剂与材料 1、牛奶2500mL 2、95％乙醇1200mL 3、无水乙醚1200mL 4、0.2mol／L pH 4.7醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL 5、．乙醇—乙醚混合液2000mL 五、操作 1、将100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入 预热至40℃、pH 4.7的醋酸缓冲液100 mL。用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟(3 000r／min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 2、用水洗沉淀3次，离心10分钟(3000r／min)， 弃去上清液。 3、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬 浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 4、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯晶。 5、准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g／100mL牛乳(g％) 得率： 测得含量 100 % 理论含量 思考题 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 实验二小麦萌发前 后淀粉酶活力的比较 一、目的 1.学习分光光度计的原理和使用方法。 2.学习测定淀粉酶活力的方法。 3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 二、原理 种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 2（C6H10O5）n +nH2O nC12H22O11 麦芽糖有还原性，能使3，5---二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基-5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计测定。 生物化学选择题和填空题 ? ? ?一、最佳选择题：下列各题有A、B、C、D、E五个备选答案，请选择一个最佳答案。 1、蛋白质一级结构的主要化学键是() A、氢键 B、疏水键 C、盐键 D、二硫键 E、肽键 2、蛋白质变性后可出现下列哪种变化() A、一级结构发生改变 B、构型发生改变 C、分子量变小 D、构象发生改变 E、溶解度变大 3、下列没有高能键的化合物是() A、磷酸肌酸 B、谷氨酰胺 C、ADP D、1，3一二磷酸甘油酸 E、磷酸烯醇 式丙酮酸 4、嘌呤核苷酸从头合成中，首先合成的是() A、IMP B、AMP C、GMP D、XMP E、ATP 5、脂肪酸氧化过程中，将脂酰～SCOA载入线粒体的是() A、ACP B、肉碱 C、柠檬酸 D、乙酰肉碱 E、乙酰辅酶A 6、体内氨基酸脱氨基最主要的方式是() A、氧化脱氨基作用 B、联合脱氨基作用 C、转氨基作用 D、非氧化脱氨基作用 E、脱水脱氨基作用 7、关于三羧酸循环，下列的叙述哪条不正确() A、产生NADH和FADH2 B、有GTP生成 C、氧化乙酰COA D、提供草酰乙酸净合成 E、在无氧条件下不能运转 8、胆固醇生物合成的限速酶是() A、HMG COA合成酶 B、HMG COA裂解酶 C、HMG COA还原酶 D、 乙酰乙酰COA脱氢酶E、硫激酶 9、下列何种酶是酵解过程中的限速酶() A、醛缩酶 B、烯醇化酶 C、乳酸脱氢酶 D、磷酸果糖激酶 E、3一磷 酸甘油脱氢酶 10、DNA二级结构模型是() A、α一螺旋 B、走向相反的右手双螺旋 C、三股螺旋 D、走向相反的左手双螺旋 E、走向相同的右手双螺旋 11、下列维生素中参与转氨基作用的是() A、硫胺素 B、尼克酸 C、核黄素 D、磷酸吡哆醛 E、泛酸 12、人体嘌呤分解代谢的终产物是() A、尿素 B、尿酸 C、氨 D、β—丙氨酸 E、β—氨基异丁酸 13、蛋白质生物合成的起始信号是() A、UAG B、UAA C、UGA D、AUG E、AGU 14、非蛋白氮中含量最多的物质是() A、氨基酸 B、尿酸 C、肌酸 D、尿素 E、胆红素 15、脱氧核糖核苷酸生成的方式是() A、在一磷酸核苷水平上还原 B、在二磷酸核苷水平上还原 C、在三磷酸核苷水平上还原 D、在核苷水平上还原 E、直接由核糖还原 16、妨碍胆道钙吸收的物质是() 是非题 1．DNA是生物遗传物质，RNA则不是。 2．同种生物体不同组织中的DNA，其碱基组成也不同。 3．酶促反应的初速度与底物浓度无关。 4．酶有几种底物时，其Km值也不相同。 5．三羧酸循环中的酶本质上都是氧化酶。 7．三羧酸循环提供大量能量是因为经底物水平磷酸化直接生成ATP。 10．甘油不能作为糖异生作用的前体。 12. 糖酵解过程中，因葡萄糖和果糖的活化都需要ATP，故ATP浓度高时，糖酵解速度加快。 13. 蛋白质中所含的必需氨基酸的含量越高，其营养价值越高。 14. 尿素的生成发生在细胞的胞浆中。 15. 氨在血液中主要是以谷氨酰胺和丙氨酸的形式运输。 17.从热力学上讲,葡萄糖的船式构象比椅式构象更稳定。 18．T.Cech从自我剪切的RNA中发现了有催化活性的RNA,称之为核酶。 19、生物膜的不对称性仅指膜蛋白的定向排列，膜脂可做侧向扩散和翻转扩散，在双分子层中的分布是相同的。 20．构成天然蛋白质的氨基酸，其D－构型和L－型普遍存在。 21、组成蛋白质的二十种氨基酸都有旋光性。 22．β-折叠是主肽链相当伸展的结构，因此它仅存在于某些纤维状蛋白质中。 23．蛋白质的亚基（或称为亚单位）和肽是同义词。 24.功能蛋白质分子中，只要个别氨基酸残基发生改变都会引起生物功能的丧失。 25.变构效应是蛋白质及生物大分子普遍的性质，它有利于这些生物大分子功能的调节。 26.重金属盐对人畜的毒性，主要是重金属离子会在人体内与功能蛋白质结合引起蛋白质变性所致。 27. 测定酶活力时，底物的浓度不必大于酶的浓度。 28．当底物处于饱和水平时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。 1．解偶联剂可抑制呼吸链的电子传递。 29．电子通过呼吸链时，按照各组分的氧化还原电势依次从还原端向氧化端传递。30．TCA中底物水平磷酸化直接生成的是ATP。 31. L-谷氨酸脱氢酶不仅可以使L-谷氨酸脱氨基，同时也是联合脱氨基作用不可缺少的重要酶。 32. 脱氧核糖核苷酸是通过核糖核苷二磷酸还原生成的，NADH作为这一反应的还原力。 33. 诱导酶是指当特定诱导物存在时产生的酶，这种诱导物往往是该酶的产物。 35．ADP的磷酸化作用对电子传递起限速作用。 36. 鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂。 38、磷酸己糖旁路的重要的生理意义在于提供磷酸戊糖和NADPH。 1肠道细菌对不被消化的蛋白质所起的作用，称为腐败作用。其本质是细菌本身的代谢过程，以有氧代谢为主。 39．氨基酸的碳骨架可由糖分解代谢过程中的α-酮酸或其它中间代谢物提供，反过来过剩的氨基酸分解代谢中碳骨架也可通过糖异生途径合成糖。 40．大多数脱氧核苷酸的合成是在NDP的基础上进行的。 生物化学 第一章蛋白质化学 第一节蛋白质的重要性 ?蛋白质是机体最丰富的有机分子，占人体重量的16~20%，占干重的45%，肺组织高达80%。 ?蛋白质的生物学功能：生物催化作用、调节作用（激素，基因表达调控作用）、免疫防御与保护作用（细胞因子、补体、抗体）、转运和储存作用（转运蛋白）、结构功能（保护和维持细胞、组织、器官的正常生理形态，细胞骨架）、运动与支撑作用、信息接收 传递作用（受体蛋白）、生物膜功能 ?蛋白质组学：蛋白质组指的是基因组编码的全部蛋白质，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质；蛋白质组学本质上指的是在机体整体水平上系统地研究蛋白质的 特征，包括蛋白质的表达水平、翻译后的修饰、蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白 质水平上的关于疾病发生、细胞代等过程的整体而全面的认识。 第二节蛋白质的化学组成 ?蛋白质含氮量平均为16%，蛋白质的含量=含氮量x6.25。 ?天然存在的氨基酸约180种，组成蛋白质的氨基酸只有20余种（基本氨基酸）。 ?基本氨基酸的共同特点：①除脯氨酸为α-亚氨基酸外，其他组成蛋白质的基本氨基酸均为α-氨基酸；②除甘氨酸外，其他氨基酸的α-碳原子为手性碳原子，且天然蛋白质中基本氨基酸皆为L-型；③不同的氨基酸的R链不同，对蛋白质的空间结构和理化性质有重要影响。 ?20种常见氨基酸的名称和结构式（见书P11） ?氨基酸的分类非极性R基氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸；极性不带电R基氨基酸（易溶于水）：甘氨酸、丝氨酸、 氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；带负电的R基氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸；带正电的R基氨基酸：赖氨酸、组氨酸、精氨酸。 ?氨基酸的物理性质：①高熔点，200℃以上，以离子状态存在；②一般均溶于水，溶于强酸、强碱；不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂；③氨基酸一般有味；④除甘氨酸外均有旋 光性。 ?氨基酸的化学性质：①两性解离与等电点：pH高于等电点带负电，低于等电点带正电。 等电点时主要以两性离子存在，极少量以中性分子存在。中性氨基酸的pI在微酸性围，践行氨基酸的pI在碱性围，酸性氨基酸的pI在酸性围。②紫外吸收性质：色氨酸（280nm）、酪氨酸（275nm）和苯丙氨酸（257nm）含有苯环共轭双键系统，具有紫外吸收特性。③茚三酮反应：与大多数α-氨基酸加热反应产生蓝紫色物质，与脯氨酸、羟脯氨酸反应呈黄色，与天冬酰胺反应呈棕色；④α-羧基的反应：与碱、醇、硼氢化锂反应；⑤R基的反应：Million反应（Tyr-红色）、Folin反应（Tyr-蓝色）、坂口反应（Arg-红色）、Pauly反应（His、Tyr-橘红色）、乙醛酸的反应（Trp-紫红色环）。 ?氨基酸的功能：①寡肽、多肽、蛋白质的基本结构单位；②多种生物活性物质的前体； ③作为神经递质或神经营养素；④参与生物体的物质代和能量代。 第三节蛋白质的分子结构 ?蛋白质的一级结构包括：①组成蛋白质的多肽链的数目；②多肽链的氨基酸顺序；③多肽链或链间二硫键的数目和位置。 ?体多肽和蛋白质生物合成时，均是从氨基端开始，延长到羧基端终止，因此N末端被定为多肽链的头。 ?蛋白质一级结构的概念：蛋白质是由不同种类、数量和排列顺序的氨基酸，通过肽键而构成的高分子有机含氮化合物。它是蛋白质作用的特异性、空间结构的差异性和生物学 1．在生理pH 条件下，下列哪种氨基酸带正电荷？ C A．丙氨酸B．酪氨酸C．赖氨酸 D．蛋氨酸E．异亮氨酸 2．下列氨基酸中哪一种是非必需氨基酸？ B A．亮氨酸B．酪氨酸C．赖氨酸 D．蛋氨酸E．苏氨酸 3．蛋白质的组成成分中，在280nm 处有最大吸收值的最主要成分是： A A．酪氨酸的酚环B．半胱氨酸的硫原子 C．肽键D．苯丙氨酸 4．下列4 种氨基酸中哪个有碱性侧链？ D A．脯氨酸B．苯丙氨酸C．异亮氨酸D．赖氨酸 5．下列哪种氨基酸属于亚氨基酸？ B A．丝氨酸B．脯氨酸C．亮氨酸D．组氨酸 6．下列哪一项不是蛋白质α-螺旋结构的特点？ B A．天然蛋白质多为右手螺旋 B．肽链平面充分伸展 C．每隔3.6 个氨基酸螺旋上升一圈。 D．每个氨基酸残基上升高度为0.15nm. 7．下列哪一项不是蛋白质的性质之一？ C A．处于等电状态时溶解度最小B．加入少量中性盐溶解度增加 C．变性蛋白质的溶解度增加D．有紫外吸收特性 8．下列氨基酸中哪一种不具有旋光性？ C A．Leu B．Ala C．Gly D．Ser E．Val 9．在下列检测蛋白质的方法中，哪一种取决于完整的肽链？ B A．凯氏定氮法B．双缩尿反应C．紫外吸收法D．茚三酮法 10．下列哪种酶作用于由碱性氨基酸的羧基形成的肽键？ D A．糜蛋白酶B．羧肽酶C．氨肽酶D．胰蛋白酶 11．下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的？ A A．蛋白质分子的净电荷为零时的pH 值是它的等电点 B．大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出 C．由于蛋白质在等电点时溶解度最大，所以沉淀蛋白质时应远离等电点D．以上各项均不正确 12．下列关于蛋白质结构的叙述，哪一项是错误的？ A A．氨基酸的疏水侧链很少埋在分子的中心部位 B．电荷的氨基酸侧链常在分子的外侧，面向水相 C．白质的一级结构在决定高级结构方面是重要因素之一 D．白质的空间结构主要靠次级键维持 13．列哪些因素妨碍蛋白质形成α-螺旋结构？ E A．脯氨酸的存在B．氨基酸残基的大的支链 C．性氨基酸的相邻存在D．性氨基酸的相邻存在 E．以上各项都是 14．于β-折叠片的叙述，下列哪项是错误的？ C A．β-折叠片的肽链处于曲折的伸展状态 B．的结构是借助于链内氢键稳定的 单元测试一：蛋白质化学 班级：姓名：分数： 一．填空题（每空1.5分，共30分） 1.当溶液pH等于某种氨基酸的等电点时，其带_ 零 _电荷；当溶液pH大于某种氨基酸的等电点时，其带_ 负 _电；溶液pH小于某种氨基酸的等电点时，其带_ 正电。 2.盐浓度低时，盐的加入使蛋白质的溶解度_ 增大 _，称为_ 盐溶__现象。当盐浓度高时,盐的加入使蛋白质的溶解度降低，称为盐析现象。 3.由甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸6种氨基酸残基组成的肽链 有 5 个肽平面，有 3 个游离羧基。 4.蛋白质分子结构包括一级结构和二级结构。 蛋白质的一级结构是由氨基酸通过肽键连接而成的多肽链。 6.蛋白质分子的基本组成单位是氨基酸。蛋白质的一级结构维持作用力是肽 键。蛋白质的分子结构决定蛋白质的性质和功能。 7.蛋白质二级结构主要有 a螺旋和B折叠形状，维持其稳定结构的化学键是 氢键。 判断题 1．用凝胶过滤(Sephadex G-100)柱层析分离蛋白质时，总是分子量大的先被洗脱下来，分子量小的后下来。对 2．变性后，蛋白质的溶解度增加（减小），这是因为电荷被中和（空间结构被破坏），以及水化膜破坏所引起的。错 3．变性后（物理变性不可逆，化学变性可逆，可复性）的蛋白质在一定条件下，有些还能复性，恢复其生物学功能。对 4．有机溶剂沉淀法分离纯化蛋白质的优点是有机溶剂容易蒸发除去，且不会使蛋白质变性。错 5.蛋白质分子的种类和差别，是由其空间结构决定的。错（一级结构） 6．蛋白质主要是由C、H、O、N四种元素组成。对 7．氨基酸通过肽键连接而成的化合物称为肽。对 8．天然蛋白质的基本组成单位主要是L-α-氨基酸。对 9．肽键(-CO-NH-)中的C-N键可自由旋转，使多肽链出现多种构象。错（不可旋转） 10．维持蛋白质二级结构的化学键是氢键及范德华力（不是）。错 11．蛋白质一级结构对空间结构起决定作用，空间结构的改变会引起功能的改变。对 12．维持蛋白质二级结构稳定的主要作用力是氢键。对 13．蛋白质必须具有四级结构才具有生物活性。错（肌球蛋白是三级结构可存活） 14．蛋白质四级结构中的每个亚基单独都具有生物活性。错（不具有活性） 15．具有四级结构的蛋白质分子一定是由两条或两条以上的多肽链组成的。对 16．溶液中带电粒子在电场中向电性相同（相反）的电极移动，这种现象称为电泳。错 17．溶液pH值等于7时，蛋白质不带电荷。错 18．加热、紫外线、X射线均可破坏蛋白质的空间结构。对《生物化学》实验讲义
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【华南理工大学2012年考研专业课真题】生物化学与分子生物学2012
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