第五章 第三节 冬虫夏草无性型菌种研究概况

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第五章冬虫夏草菌种分离与鉴定实录第三节冬虫夏草无性型菌种研究概况关键词:冬虫夏草菌种无性型蝙蝠蛾被毛孢姚一建RAPD方法分析ITS 序列一、今天中国分离到的“冬虫夏草”菌种有22种学名之多从所有发表的关于冬虫夏草无性型菌种研究文章看来,还是在《菌物系统》22(1):161-176,2003 蒋毅姚一建发表的《冬虫夏草无性型研究概况》一文最为全面,据称已报道的冬虫夏草无性型菌种有22个学名,涉及13个属。

文中按国际植物命名法的规定,分为两类:合格发表的新种名称(6种)和不合格发表或作为异名的名称(9种);文中按作者的谨慎判断,又分为四类:不可能是冬虫夏草无性型的名称(3种)、可能不是冬虫夏草无性型的名称(2种)、与冬虫夏草的关系有待验证的名称(12种)、目前可以确认为冬虫夏草无性型的名称(6种)。

在菌种验证方法上,全世界公认的、最可靠的是按照柯赫法则(Koch's postulate),分离的菌株经过人工培养或接种昆虫后能够形成冬虫夏草有性型子实体,产生子囊孢子,才可以确定其是冬虫夏草的正确无性型。

(这是中国老祖宗的话――种瓜得瓜,种豆得豆)虽然由于冬虫夏草子实体形成条件苛刻,但至今为止还是最可靠的、无可替代的办法。

不能因“冬虫夏草子实体形成条件苛刻”而盲目判断是否和真伪。

其实,冬虫夏草子实体形成条件并不苛刻,(详见本书第五章第一节),《冬虫夏草无性型研究概况》提到“大量的无性型菌株在人工培养的条件下不形成有性子实体”,这是真的,主要因为它本来就不是冬虫夏草的无性型菌种。

笔者按从冬虫夏草中分离到的菌种能否在人工培养基上长出与冬虫夏草一样的子座、子囊孢子的菌种,作为确认是否是冬虫夏草无性型菌种的标准来分类,以上的22个种名也只能分为两类:一,能在人工培养基上长出与冬虫夏草一样的子座和子囊孢子的、可以确认为是冬虫夏草无性型菌种:Cephalosporium sp. 头孢属新种,沈南英1983Cephalosporium dongchongxiacae冬虫夏草头孢菌,菌种同上,沈南英等自行命名,在1985年申请并获得了国家专利,专利号为85101971。

Synnematium sinense Yin & Shen中华束丝孢1990年由印象初和沈南英联合将Cephalosporium dongchongxiacae冬虫夏草头孢菌重新定名,发表在《中国高原生物学杂志》。

蒋毅姚一建(2003)说明:“Synnematium属现被列为被毛孢属的异名”。

Hirsutella hepiali C.T.Chen & N.Y.Shen 蝙蝠蛾被毛孢1985 年由陈庆涛与沈南英联合将Cephalosporium sp. 头孢属新种重新定名,但未发表。

(后张显耻和何道珍公开发表,1995)。

――以上不难看出,这4个菌名是同一菌种的不同名称。

现在,这菌种使用名称是:蝙蝠蛾被毛孢Hirsutella hepiali C.T.Chen & N.Y.Shen 由沈南英主持分离到的,1980、1983、2004年长出子座芽、子座、子囊孢子的照片(图一~四)如下:这沈南英分离的冬虫夏草菌种是至今为止,使用全世界公认的、最可靠的、按照柯赫法则(Koch's postulate)鉴定:分离的菌株在人工培养基上,唯一能够形成冬虫夏草有性型子座,产生子囊孢子,而可以确认无疑是冬虫夏草的正确无性型菌种。

二,不能在或至今还未在人工培养基上长出与冬虫夏草一样的子座和子囊孢子的、不能确认为是冬虫夏草无性型菌种:Cephalosporium acremoneum(顶头孢)Cephalosporium sinensis(虫草头孢)Chrysosporium sinense (中国金孢霉,与冬虫夏草的RAPD 图谱的相似性低)Hirsutella sinensis 中国被孢霉Isaria farinosa(虫花棒束孢)Isaria sp.(棒束孢属未定名种)Metarhizium anisopliae(绿僵菌,广布种,多寄主)Mortierella hepiali(蝙蝠蛾被孢霉,为接合菌的名称,不可能是子囊菌的无性型)Paecilomyces hepiali(蝙蝠蛾拟青霉)西藏拟青霉(方焕谋,1991)Paecilomyces sinensis(中国拟青霉,已为分子证据所排除)Sporothrix insectorum(虫生簇孢,已为分子证据所排除)Scydalium sp.(柱霉属未定名种)Scytalidium hepiali(蝙蝠蛾柱霉)Stachybotrys sp.(葡萄穗霉属未定名种)Tolypocladium sinense(中国弯颈霉)Verticillium sinensis(中国轮枝孢)Acremoneum strictum(直立顶孢)Paecilomyces farinosa(粉拟青霉)Verticillium sp.(轮枝孢属未定名种)三、制成药品和保健食品的菌种有:1、蝙蝠蛾被毛孢Hirsutella hepiali Chen et Shen――百令胶囊2、中国被孢霉Mortierella sinensis)――至灵胶囊3、蝙蝠蛾拟青霉蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai, sp. nov--金水宝胶囊4、中国拟青霉--天赐康胶囊(台湾)5、虫草头孢霉――宁心宝胶囊下面把《冬虫夏草无性型研究概况》节选如下并略加点评注。

菌物系统22(1):161-176,2003Mycosystema冬虫夏草无性型研究概况蒋毅姚一建中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学重点实验室北京l00080摘要:文献调查结果表明与冬虫夏草有关的无性型菌种已报道有22个学名,涉及13个属。

针对这些名称上存在的命名问题本文展开了讨论,并评述了不同名称与冬虫夏草的关系及其有关菌种的研究进展。

在已报道的分离菌种中,作为新种正式描述的名称有8个,其中6个为合格发表,其余2个未能满足名称合格发表的条件:还有4个名称在文献中作为新种提到,但没有合格发表的出处,也有一例只提到名称而无其他要素;另有5个名称则只有属名,尚未鉴定到种的水平。

中国被毛孢为多个独立的研究证明为冬虫夏草的无性型,还有3个无性型名称已被证明不可能是冬虫夏草的无性型。

其他无性型名称与冬虫夏草的关系有待进一步验证。

文中对与冬虫夏草有关的菌种定名、无性型分离和验证方法、复无性型现象,以及有关学名问题作了讨论。

关键词:综述、冬虫夏草、无性型、虫草属中图分类号:Q939.5 文献标识码:C 文章编号:1007-3515(2003)01-0161-01761 引言冬虫夏草Cordyceps sinensis(Berk.)sacc.是我国名贵的滋补强壮中药之一。

由于受生长条件的限制,天然冬虫夏草产量很有限,且呈逐渐下降的趋势(杨大荣,1997)。

从上个世纪80 年代起,我国研究人员就冬虫夏草的菌种分离、人工培养和发酵制药等方面开展了大量的研究工作。

冬虫夏草是一种子囊菌,在其生活史中具有分生孢子阶段(无性型)和子囊孢子阶段(有性型)。

在人工培养、液体发酵等实际生产中使用的冬虫夏草菌种均为无性阶段,其菌种的正确鉴定至关重要,故而其无性型问题特别引人关注。

关于冬虫夏草无性型菌种的报道散见于各种刊物和印刷材料,经过系统的文献调查,收集得到了多达22个的名称,蒋毅和姚一建(Jiang & Yao,2002)对这些名称进行了总结、本文现就有关冬虫夏草无性型的研究报道进行汇总,以期对这一研究能有所裨益。

2 冬虫夏草无性型研究概况为了叙述方便,己报道的与冬虫夏草无性型有关的名称按拉丁学名字母顺序排列,简单介绍其文献出处、相应菌株的特点和有关的研究进展,同时探讨它们与冬虫夏草的关系。

对名称之间的复杂关系也进行了分析,并尽可能予以澄清。

就拉丁学名所对应的汉语学名尽量以最先发表的名称进行统一,并引用发表的中文文献为依据。

1)、Cephalosporium acremonium Corda,Icones Fungorum 3:11(1839).顶头孢(中国科学院微生物研究所一室等,1976)。

据宋士良等(1988)报道,从云南德庆分离得到鉴定为“顶头孢霉Cephalosporium acremonium”的“虫草纯菌株0153”,液体深层培养“冬虫夏草菌丝体”取得了较好的效果。

在同一报道中,宋士良等还指出分离物在25℃下生长较快,收率较好,液体发酵24小时的菌丝干重达0.57g/ml,96小时收率最大。

2)、Cephalosporium dongchongxiacae N.Y.Shen,S.M.Zhang,L.Zeng,X.C.Zhang & S.L.Wei in China patent(中国专利)No.85101971 (1985).nom. inval.Cephalosporium dongchongxiacae Anon. in P.Q.Liang & D.J.Lu in Edible Fungi(食用菌)1990(3):2(1990).nom. tant.冬虫夏草头孢(沈南英等,1985;原为“冬虫夏草头孢菌”)。

沈南英(1983)最初报道从青海玉树和化隆两县采集的冬虫夏草上分离得到无性型菌物的时候,这个菌种被初步鉴定为“头孢菌属(Cephalosporium)新种”。

根据沈南英(1983)及沈南英等(1983)的报道,该菌生长缓慢,气生菌丝不发达,菌落坚硬,20℃以上生长不良,培养物多次在固体培养基上形成子座,光照处理后在子座上形成子囊孢子,这些人工培养产生的子囊果、子囊孢子被认为与冬虫夏草天然的子囊果、子囊孢子形态特征完全一样。

沈南英等在1985年申请并获得了国家专利,专利号为85101971(沈南英等,1985)。

在该专利说明书中,他们分离的菌种被定名为冬虫夏草头孢菌(Cephalosporium dongchongxiacae),名称后未直接引证名称作者,因为沈南英等为该专利的发明人,所以他们应为该名称的作者。

这是一个不合格的名称(Jiang & Yao,2002),因为沈南英等(1985)的发明名称是“中国冬虫夏草真菌及其人工培养方法”,申请的专利是培养方法,对所提出的新种并没有进行详细的形态描述,也无拉丁文特征集要(diagnosis)。

梁佩琼和陆大京(1990)在总结冬虫夏草研究进展时提到沈南英等的工作,列举了“Cephalosporium dongchongxiacae”一名,这可能是该名称在正式出版发行的刊物上最早出现的地方,但对这个分离菌种也没有进行特征描述或标本引证。