激光扫描共聚焦显微镜操作手册
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北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 激光扫描共聚焦显微镜 （A1R-si） 操 作 指 南北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 目 录
第一章：Ti-E 显微镜操作 2-7 显微镜光路调节和照明注意事项 6 Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC 棱镜对照表 7
第二章：共聚焦开关机 8-10 第三章：共聚焦图像拍摄1-38 NIS-Elements C 软件开启和操作界面简介1-15 NIS-Elements C 的实时图像获得基本操作 16-23 图像拍摄 24-27 探测模式（标准探测器）设置 28-38
第四章: 图像的保存和查看 39-42 第五章：图像分析 43-46 附件一、多维拍摄功能和操作方式介绍 47-51 附件二：图像格式批量转换操作 52-53
- 1 -北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 第一章 Ti-E 显微镜操作指南 （一） 认识显微镜各个部件
（1）滤光片：包括 D---毛玻璃；NCB---色温 （8）滤色块转盘（包括 DIC 检偏器）； 平衡片；ND---减光片；“GIF”---绿色滤 （9）手动荧光光闸； 光片和用于 PFS 的红外滤光片； （10） 电动焦距调节旋钮； （2）视场光阑； （11） ND 减光片； （3）聚光器升降旋钮； （12） 遥控器； （4）起偏器（DIC 用）； （13） 透射光电源； （5）聚光器对中旋钮； （14） 汞灯荧光光源； （6）孔径光阑； （15） PFS 控制器 （7）聚光器模块（包括明视场，DIC）； （16） HUB 控制器
- 2 -北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 遥控器示意图(根据具体配置有些图标可能不显示) 1） 物镜切换按钮； 2） 滤光块，DIC 检偏器切换按钮； 3） DIC 检偏器快速切换按钮； 4） 光路端口切换按钮； 5） PFS 开关控制按钮； 6） 聚光器转盘切换按钮； 7） 透射光源控制按钮*。
*请注意：CNTL 按钮灯亮，则可以通过遥控器或电脑控制软件来调节透射光源强度，此时显微 镜底座左侧光源开关和调节旋钮锁定；CNTL 功能关闭，可以通过显微镜底座开关和旋钮来控制 透射光源。
3北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 前面板示意图 1） 状态显示屏； 2） PFS 开关按钮和 PFS 聚焦状态指示灯（需要选购 PFS 部件）； 3） 光路端口切换按钮； 4） 中间变倍旋纽；
侧面板示意图 1） 调焦旋钮 2） 粗微调切换按钮 3） 物镜切换按钮； 4） 滤光块，DIC 检偏器切换按钮 5） 透射光光源开关（当遥控器透射光源控制按钮打开时，此按钮无效）； 6） 透射光量度调节旋钮（当遥控器透射光源控制按钮打开时，此旋按钮无效）； 7） 物镜复位； 8） 物镜向下移动 2 毫米； 注意：在使用显微镜之前，要把主机底座右后端的黑色 HUB 控制器（显微镜示意图 15 位置） 右侧的电源开关打开。
4北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 （二） 明视场透射光操作要点 1） 打开电源开关，并打开显微镜透射光卤素灯电源开关； 2） 把滤色块移到空位； 3） 把起偏器，检偏器移出光路； 4） 把聚光器转盘切换到 A 状态； 5） 检查柯勒照明（柯勒照明调节方法参看附录 1）； 6） 检查出光端口。
（三） 微分干涉(DIC)操作要点 1） 按照明视场透射光观察方法调节好显微镜； 2） 把起偏器，检偏器移入光路； 3） 按照相对应物镜将聚光器镜转盘转到相应 N1/N2 位置（请参见另外所附对照表）； 4） 检查出光端口； 5） 旋转起偏器，选择最佳显示效果。
（四） 荧光观察操作要点 1） 打开荧光电源稍待片刻至光源指示灯不闪；（打开约 10min 稳定，关闭需要超过 15min 后才可以再次启动） 2） 确认透射光开关处于关闭状态； 3） 检查出光端口； 4） 选择合适的滤色块； 5） 打开光闸（汞灯面板的 shutter 旋钮），调节荧光亮度（汞灯面板的 ND 旋钮），进行观察； 6） 不观察时，把光闸关掉，以避免荧光淬灭。
注意：该系统配置透射和荧光光闸，在做相应操作时，应将对应光闸打开。光闸开关可在遥 控器上设定。
落射光照明 光闸按钮
透射光光闸 按钮 汞灯光闸按钮
（电动型号）
5北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 显微镜光路调节和照明注意事项 （一） 柯勒照明的调节方法 1） 选择 10X 物镜； 2） 调焦，使标本清晰成像； 3） 缩小视场光阑（显微镜视图 2 位置）； 4） 上下调节聚光器（显微镜视图 3 位置），使视场光阑边缘清晰； 5） 调节聚光器对中旋钮，使其居中； 6） 放大视场光阑，使其刚刚外切于视野。
（二） 长寿命汞灯电源的注意事项 1） 电源打开以后，大约 10 分钟左右光源达到稳定状态； 2） 电源关闭以后，至少要等 10 分钟才能重新打开。
（三） 物镜盖玻片矫正环的调节方法
1） 调焦，使图像相对最清楚； 2） 把矫正环向一个方向转动一定角度，此时图像变模糊，调焦，使图像相对最清楚； 3） 判断此时的图像质量是否有所改善。如有改善，则按照该方向再旋转一定角度；如质量 下降，则反方向旋转； 4） 重复 2）和 3）直到图像质量改善之后又有所下降； 5） 反方向旋转，回到倒数第二次的位置即可。
6北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC 棱镜对照表
Ti-E: Combinations of objective and DIC prism Objective DIC Slider N1/N2 Plan Apo 10× 10× N1 Plan Apo VC 20× 20× N2 Plan Apo 40× 40×Ⅰ N2 Plan Apo VC 60× 60×I N2 Plan Apo VC 100× 100×I N2
7北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 第二章 共聚焦开关机操作指南
（1） Ti-E 电动倒置荧光显微镜； （2） A1 共聚焦显微镜总控制器； （3） A1 共聚焦显微镜光谱探测模块 （4） A1 共聚焦显微镜标准 4 通道探测模块； （5） A1 共聚焦显微镜扫描头； （6） A1 共聚焦显微镜 4 激光台； （7） A1 共聚焦显微镜激光器电源柜； （8） A1 共聚焦显微镜透射光探测器；
注意：开机时，必须是先打开硬件（包括显微镜，激光器，共聚焦总控制器），再打开 NIS-Elements 软件；关机时，必须是先关掉软件，再关掉硬件。
8北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 （一） A1R-si 开机顺序 1. 打开 UPS 或接线板总电源开关（一般都处于开机状态）； 2. 打开需要使用的激光器，不使用的激光器可以不打开（具体见后面）； 3. 打开共聚焦控制器左侧面板右上角的控制器开关； 4. 依次打开电脑，显微镜的长寿命汞灯电源，卤素灯电源，电动载物台控制电源； 5. 打开显微镜底座右后端的 HUB 控制部件电源； 6. 待确认控制器打开的状态下，双击桌面 NIS-Elements 3.0 快捷图标，选择 Nikon A1/C1 confocal 选项进入软件，开始共聚焦操作。
（二） A1R-si 关机顺序 1. 请先确认关闭软件，再关闭共聚焦控制器（此条请特别注意）； 2. 依次关闭显微镜各个控制部件电源； 3. 依次关闭各个激光器之后，关闭激光器电源总开关； 4. 关掉 UPS 或接线板总开关（遇到如停电等特殊情况时进行此步骤）。
（三） 激光器的开关机顺序 各个激光器的开关是独立的。下面分别加以介绍：
首先要打开激光器电源盒前面钥匙旋钮，然后根据需要打开相应的激光器。 （1）640nm 激光器电源操作面板 开机：电源开关拨到 ON 位置--钥匙开关拨到 I 位置; 关机：钥匙开关拨到 O 位置--电源开关拨到 OFF 位置 （2）405nm 激光器电源操作面板 开机：电源开关拨到 ON 位置--钥匙开关拨到 I 位置; 关机：钥匙开关拨到 O 位置--电源开关拨到 OFF 位置 （3）488nm 多线 Ar 离子激光器
开机：确认开关○5 处于 Standby 位置后，将钥匙开关○6 转到 on 位置，这时风扇开始
9北京大学化学学院中级仪器实验室 A1R 操作说明书 转动--大约 30 秒后，液晶面板会有数字显示 17 左右--把左侧开关○5 由 standby 拨到 operate，液晶面板显示数值 40 左右，打开完成； 关机：把左侧开关由 run 拨到 standby--3a 上的钥匙开关转到垂直位置--等几分钟， 待风扇停止转动之后，把电源开关拨到 OFF 位置。 （4）543nm 激光器（开关内置在激光底座电源中）
注意：多线 Ar 离子激光器功率较高，请务必按照操作步骤开关机，否则会造成该激光器 使用寿命的缩短，并有可能导致激光器的损坏。
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