高效木质素降解菌株的分离筛选
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பைடு நூலகம்
２ 黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 博 士 后科 研 工 作 站 ， 龙 江 哈 尔 滨 １０ ８ ． 黑 ５０ ６ ３ 哈 尔 滨 理 工 大 学 化 学 与环 境 工程 学 院 ， ． 黑龙 江 哈 尔 滨 １０ ４ ） ５０ ０
摘 要 ：为 筛 选 能 高 效 降 解 木 质 素 的 菌株 ， ３ 从 １份 采 集 的 朽 木 和 土 壤 样 品 中分 离纯 化 获 得 １ ５株 茵 ； ５
质 素 过 氧 化 物 酶 、 过 氧 化 物 酶 和 漆 酶 的 活 力 分 别 为 ０ ０ ７ ０ ０ ０ ０ １ ４和 ０ ０ ０ ００ ９ ００ ０ 锰 ． ８ 、 ． ６ 、 ．４ ． ７ 、 ． ５ 、 ． ０
Ｕ ． Ｌ ． ｍ
关 键 词 ：木 质 素 ； 质 素酶 ； 质 素 降 解 菌 ； 离 筛选 木 木 分
基 于此 ， 文 从 黑龙 江 省 丰 富 的 自然朽 木 及 土 本 壤样 品中分离 、 纯化 相关 菌株 ， 并分 别通 过初 筛
１ ２ １ 菌株 分 离纯化 ．．
分别 称取 ５ｇ样 品
捣碎 后 ， 加入 到 装 有 ５ ． 生 理盐 水 和 ０ ｍＬ ０ ９
少 量玻 璃 珠 并 经高 压 灭 菌后 的三 角瓶 中， 荡 振
Ｄ Ｉ１ ．７ ５ｊｉ ｎ １ ０—２ ９ ２ １ ．３ ０４ Ｏ ： ０ ３ ８ ／ ． ｓ ． ０ ８ ９ ０ ．０ １ ０ ． ０ ｓ
高效 木 质 素 降解 菌 株 的分 离筛 选
燕 红 一，苏 俊 ，于 彩 莲。 ，艾 恒 雨 。 ，张 晓 甜 。
（ ． 北林 业 大 学 博 士 后 科 研 流 动站 ， 龙 江 哈 尔 滨 １０ ４ １东 黑 ５０ ０；
人 们 的重 视 ． 国在 ２ 我 Ｏ世 纪 ９ ０年 代 中期 开始
０． １， ３ ０ Ｈ ＢＯ３０ ０１， ２ ｏＯ４０ ０１． ． Ｎａ Ｍ ．
维 生素溶 液 ， ． ～ ： ｍｇ Ｌ 生物 素 ２ 叶酸 ２ 盐 ， ， 酸硫胺 素 （ 维生 素 Ｂ ） ， 黄 素 （ 生 素 Ｂ ） ， ５核 维 。 ５
以上 培养基 均 在 １ １℃下灭 菌 ２ ｉ ． ２ Ｏｒ ｎ ａ １ １ ３ 试验 器 材 ．． 恒温培养箱 、 紫外一 可见
分光 光度 计 、 恒温 水 浴 锅 、 净 工 作 台 、 压蒸 超 高
汽灭 菌锅 、 电子 分析 天平 、 心机等 ． 离
１ ２ 方 法 ．
己的菌种 却研 究得较 少 ， 因此 ， 开发 我 国本土 的 优 良白腐 真 菌菌 种 已成为 一 种 必然 的趋 势 ， 从 而使 我 国在 白腐 真 菌 领域 摆 脱 对 国外 的依 赖 ．
Ｋｅ ｒ ｙ ｗｏ ｄｓ：ｌｇ ｎ； ｌ ｉ ｎｉ ｉ ｎａ ｅ；ｌｇｎ ｎ ｄｅ ｒ ｄ ｎ ｕｎ ｇｎｉ ｓ ｉ ｉ － ｇ ａ ｉ ｇ ｆ ｇｕｓ；ｉｏ ａ ｉ ｄ ｓ ｒ ｅ ｎ ｓ ｌ ｔｏｎ ａｎ ｃ ｅ ｎｉｇ
收 稿 日期 ：２ １—５１ ０ ００ —３
基 金 项 目 ： 龙 江 省 博 士 后 基 金 资 助 项 目 （ ＢＨ—０ ０ ４ ； 龙 江 省 教 育 厅 面 上 资 助 项 目（ １ ３ ０ ５ ． 黑 Ｌ Ｚ ７１）黑 １ ５ １ ４ ） 作 者 简 介 ： 红 （９ ６ ）女 ， 龙 江 哈 尔 滨 人 ， 士 ， 教 授 ， 要 从 事 环 境 微 生 物 与 生 物 化 学 方 面 的 研 究 ． ｌ ０ ５ 燕 １ ７一 ， 黑 博 副 主 Ｔｅ：４ １
８ ３ ２ １ Ｅ ｍａｌｙ ｎ ０ ｇ Ｏ ８ １ ｙ ｈ ｏ ｃ ｒ ． ｒ ６ ９ ７ ２； — ｉ ａ ｈ ｎ ２ ４ ２ ＠ ａ ｏ ．ｏ ｅ ． ： ｎ ｉ
浙 江 大 学 学报（ 农业与生命科学版）
第 ３ 卷 ７
纤 维素 和木 质素作 为一 种潜 在 的可再 生资 源， 具有 很大 的利 用空 间 ． 由于纤维 素易 与半 但 纤 维素 、 木质 素等 难分 解 的物质 相结合 ， 在利 故 用 纤 维 素前 ， 须 把 它从 木 质 素 和半 纤 维 素 的 必 包 裹 中释放 出来 ； 而半 纤维 素较 木质 素易 降解 ， 因此 ， 纤维 素 的降解关 键就 在于 木质 素 的降解 ， 所 以利 用微 生物 降解 木质 素和 纤维 素一 直受 到
ＤＭ Ｓ： ｐＨ ． ４ ５．
了对 白腐 真菌 的大 量研 究 ， 管 其 中也 包 括 了 尽 对 白腐 真 菌 和木 质 素 降解 酶 的 降解 特 性 、 酶 产 条件 及 酶 分子 水 平 上 的研 究 ， 是使 用 的菌种 但
多 是 从 国 外 引 进 的 黄 孢 原 毛 平 革 菌 （ ｈ ｎ ｒｃ ａ ｔ ｃｒ ｓｓ ｏｉｍ ） 而 对 我 国 自 Ｐ ａ ｅｏｈ ｅ ｈ ｙ ｏｐ ｒｕ ， ｅ
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中 图 分 类 号 ： ９ ９９ Ｘ １ ２ Ｑ ３ ． ； ７ 文献标志码 ： Ａ
ＹＡＮ ｎ 一 ，Ｓ Ｊ ｎ ，ＹＵ ｉｌ ｎ ，ＡＩＨｅ ｇ ｙ 。 Ｈｏ ｇ ， Ｕ ｕ Ｃａ—ｉ 。 ａ ｎ — ｕ ，ＺＨＡＮＧ ａ —ｉｎ （ ．Ｐｏ ｔｄ ｃｏ ａ ｅｅ ｒｈ Ｘｉｏｔａ 。 １ ｓ ｏｔ ｒ ｌｒ ｓａ ｃ —
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浙 江大 学 学报 （ 农业与生命科学版） ３（ ： ５～ ６， ０１ ７３ ２９ ２２ ２１ ）
Ｊｕｎ ｌ ｆ ｈｊ ｎ ｎｖｒｉ Ａｇｉ ＬＬｆ ｃ ） ｏ ｒａ ｏ ｅｉ ｇＵ ｉｅｓｙ（ ｒ ．８ ｉ Ｓ ｉ Ｚ ａ ｔ ｃ ｅ ．
文 章 编 号 ： ０ ８９ ０ （ ０ １ ０ — ２ ９０ １ ０ — ２ ９ ２ １ ） ３０ ５ — ４
将 纯 化 获 得 的 菌 株 接 入 到 含 愈 创 木 酚 的 选择 培 养 基 上 进 行 初 筛 ， 察 其 颜 色 变化 ， 据 菌 落 圈和 变 色 圈 观 根 直径 的 比 值 ， 选 出 ９ 可 降 解 木 质 素 的 菌株 ； 这 ９株 茵 接 入 产 酶 培 养 基 中进 行 液体 静 止 培 养 并 测 定 筛 株 将 木质 素 酶 活 力 ， 终 获得 ２株 高产 木 质 素 酶 的真 茵 茵株 ｌ— 最 ４７和 １ — ． 这 ２株 真 菌 培 养 ７ｄ后 ， 产 木 ５１ 将 所
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均 匀后 ， 进行 逐 级 梯 度稀 释 ． ０ １ ～０ ２ｍＬ 取 ． ５ ． 经适 当梯度稀 释 的 样 品溶 液 涂 布 于 Ｐ Ａ 分 离 Ｄ
和 复筛 以获得 高效 降解 木质 素 的真菌菌 株 ．
平 板上 ， ２ 于 ８℃培 养 ４ ， 取 单 一菌 落 划 ～５ｄ 挑 线 培 养 于分 离 平板 上 ， 通 过反 复 平 板划 线 进 并 行 分 离纯 化 直 至 获得 纯 菌株 ； 后 将 纯菌 株 接 然
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种到 Ｐ ＤＡ斜 面培 养基 上 ， ２ 于 ８℃ 下恒 温 培 养 ４ｄ后 ， 放人 ４℃ 冰箱保 存备 用 ．
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பைடு நூலகம்
２ 黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 博 士 后科 研 工 作 站 ， 龙 江 哈 尔 滨 １０ ８ ． 黑 ５０ ６ ３ 哈 尔 滨 理 工 大 学 化 学 与环 境 工程 学 院 ， ． 黑龙 江 哈 尔 滨 １０ ４ ） ５０ ０
摘 要 ：为 筛 选 能 高 效 降 解 木 质 素 的 菌株 ， ３ 从 １份 采 集 的 朽 木 和 土 壤 样 品 中分 离纯 化 获 得 １ ５株 茵 ； ５
质 素 过 氧 化 物 酶 、 过 氧 化 物 酶 和 漆 酶 的 活 力 分 别 为 ０ ０ ７ ０ ０ ０ ０ １ ４和 ０ ０ ０ ００ ９ ００ ０ 锰 ． ８ 、 ． ６ 、 ．４ ． ７ 、 ． ５ 、 ． ０
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关 键 词 ：木 质 素 ； 质 素酶 ； 质 素 降 解 菌 ； 离 筛选 木 木 分
基 于此 ， 文 从 黑龙 江 省 丰 富 的 自然朽 木 及 土 本 壤样 品中分离 、 纯化 相关 菌株 ， 并分 别通 过初 筛
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高效 木 质 素 降解 菌 株 的分 离筛 选
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人 们 的重 视 ． 国在 ２ 我 Ｏ世 纪 ９ ０年 代 中期 开始
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汽灭 菌锅 、 电子 分析 天平 、 心机等 ． 离
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己的菌种 却研 究得较 少 ， 因此 ， 开发 我 国本土 的 优 良白腐 真 菌菌 种 已成为 一 种 必然 的趋 势 ， 从 而使 我 国在 白腐 真 菌 领域 摆 脱 对 国外 的依 赖 ．
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基 金 项 目 ： 龙 江 省 博 士 后 基 金 资 助 项 目 （ ＢＨ—０ ０ ４ ； 龙 江 省 教 育 厅 面 上 资 助 项 目（ １ ３ ０ ５ ． 黑 Ｌ Ｚ ７１）黑 １ ５ １ ４ ） 作 者 简 介 ： 红 （９ ６ ）女 ， 龙 江 哈 尔 滨 人 ， 士 ， 教 授 ， 要 从 事 环 境 微 生 物 与 生 物 化 学 方 面 的 研 究 ． ｌ ０ ５ 燕 １ ７一 ， 黑 博 副 主 Ｔｅ：４ １
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多 是 从 国 外 引 进 的 黄 孢 原 毛 平 革 菌 （ ｈ ｎ ｒｃ ａ ｔ ｃｒ ｓｓ ｏｉｍ ） 而 对 我 国 自 Ｐ ａ ｅｏｈ ｅ ｈ ｙ ｏｐ ｒｕ ， ｅ
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浙 江大 学 学报 （ 农业与生命科学版） ３（ ： ５～ ６， ０１ ７３ ２９ ２２ ２１ ）
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文 章 编 号 ： ０ ８９ ０ （ ０ １ ０ — ２ ９０ １ ０ — ２ ９ ２ １ ） ３０ ５ — ４
将 纯 化 获 得 的 菌 株 接 入 到 含 愈 创 木 酚 的 选择 培 养 基 上 进 行 初 筛 ， 察 其 颜 色 变化 ， 据 菌 落 圈和 变 色 圈 观 根 直径 的 比 值 ， 选 出 ９ 可 降 解 木 质 素 的 菌株 ； 这 ９株 茵 接 入 产 酶 培 养 基 中进 行 液体 静 止 培 养 并 测 定 筛 株 将 木质 素 酶 活 力 ， 终 获得 ２株 高产 木 质 素 酶 的真 茵 茵株 ｌ— 最 ４７和 １ — ． 这 ２株 真 菌 培 养 ７ｄ后 ， 产 木 ５１ 将 所
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均 匀后 ， 进行 逐 级 梯 度稀 释 ． ０ １ ～０ ２ｍＬ 取 ． ５ ． 经适 当梯度稀 释 的 样 品溶 液 涂 布 于 Ｐ Ａ 分 离 Ｄ
和 复筛 以获得 高效 降解 木质 素 的真菌菌 株 ．
平 板上 ， ２ 于 ８℃培 养 ４ ， 取 单 一菌 落 划 ～５ｄ 挑 线 培 养 于分 离 平板 上 ， 通 过反 复 平 板划 线 进 并 行 分 离纯 化 直 至 获得 纯 菌株 ； 后 将 纯菌 株 接 然
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