HPLC测定20(S)-原人参二醇脂质体的含量及包封率
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南京中医药大学学报２００９年５月第２５卷第３期］ＯＩｆＲＮＡＬＯＦＮＡＮ，ｌＩＮＧＴＣＭＵＮＩ｝ＥＲＳＩＴＹＶ０１．２５Ｎｏ．３Ｍａｚ．２００９・－－——１９７・—。——
ＨＰＬＣ测定２０（Ｓ）一原人参二醇脂质体的含量及包
封率
金圣煊，雷荣剑，刊、静芸（浙江省杭州创新中药标准化研究所有限公司，浙江杭州３１１）０５３）
摘要：目的建立测定２０（ｓ）一原人参二醇脂质体的含量及包封率的方法。方法采用高效液相色谱法测定２０（ｓ）一原人参二醇的浓度，色谱柱：Ｚｏｒｂａｘ８０ＡＥｘｔｅｎｄＣ１８柱（４．６Ｗｍ［１１×２５０舢，５肿）；流动相：乙腈一水（８５：５）；流速：１．０ｍＬ・ｍｉｎ．１；检测波长：２０３舢。采用微柱离心法分离２０（ｓ）一原人参二醇脂质体和游离药物。结果２０（ｓ）一原人参二醇与其
他组分分离良好，线性范围１０．００～１６０．００／ｘｇ・１１１Ｌ＿１（ｒ＝１．００００），回收率为９９．０％～１００．８％，日内精密度≤０．８３％及日间精密度≤１．０５％。微柱离心法能完全分离２０（ｓ）一原人参二醇脂质体和游离药物。结论方法准确、简便，可用于２０（Ｓ）一原人参二醇脂质体含量及包封率的测定。关键词：２０（ｓ）一原人参二醇；脂质体；高效液相色谱法；包封率中图号：Ｒ２８４．１文献标识码：Ａ文章编号：１１３００—５００５（２００９）０３—０１９７—０２
２０（ｓ）一原人参二醇（２０（ｓ）．Ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ，
２０（ｓ）一ＰＰＤ）是二醇组人参皂苷的苷元。药理研
究发现２０（Ｓ）一ＰＰＤ具有较强的抗癌活性，能诱导
肿瘤细胞凋亡、抑制Ｐ一糖蛋白（Ｐ—ｇＰ）和多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）、增强化疗药对多药耐药癌细
胞的敏感性…１。
但２０（Ｓ）．ＰＰＤ不溶于水，以普通制剂口服给
药存在生物利用度低、起效缓慢，个体差异大等
缺点。作者结合药物亲脂性强的特点，首次将其
制成脂质体制剂用于静脉注射，以实现靶向递药，
充分发挥抗肿瘤作用。为了控制脂质体制剂的质量，本文采用高效液相色谱法（Ｉ－ＩｐＬＣ）Ｎ定２０（ｓ）一
ＰＰＤ脂质体的含量和包封率。
１仪器与试剂
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００型高效液相色谱仪（美国安捷伦
公司）；ＤＡＤ二极管阵列检测器；ＴＤＬ－５０Ｂ低速台
式离心机（上海安亭科学仪器厂）；２０（ｓ）．ＰＰＤ对
照品（浙江亚克药业有限公司提供，归一化法测定
纯度为９９．５％）；２０（ｓ）一ＰＰＤ脂质体（自制，批号分
别为０６０９０１、０６０９０２、０６０９０３）；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５（Ｐｈａｒ—
ｍａｃｉａ进口分装）；乙腈（色谱纯，德国Ｍｅｒｃｋ公司）；其它化学试剂均为分析纯。
２方法与结果
２．１色谱条件
色谱柱：Ｚｏｒｂａｘ８０ＡＥｘｔｅｎｄＣ１８柱（４．６ｎｆｆｎ×
２５０ｌｎＩｌｌ，５ｔａｎ）；流动相：乙腈一水（８５：５）；柱温：３５℃；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２０３ｎｍ；进样
量：１０ｔｔＬ。外标法。２．２方法专属性
取空白脂质体破乳溶液、２０（Ｓ）一ＰＰＤ对照品溶液、２０（Ｓ）一ＰＰＤ脂质体破乳溶液各ｌＯ止进样分
析。在此色谱条件下，辅料租试剂对药物测定无
干扰，２０（Ｓ）．ＰＰＤ峰的保留时间约为１２．１ｍｉｎ。２．３标准曲线的绘制
精密称取２０（ｓ）．ＰＰＤ对照品１０．００ｍｇ，置于
１０ｍＬ量瓶中，加甲醇适量，水浴超声处理，使主
药溶解，摇匀放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀。
精密吸取适量，配制成浓度为ｌｏ．００、２０．００、
４０．００、６０．００、８０．００、１６０．００ｔｃ，／ｍＬ的甲醇溶液。按“２．１”项下色谱条件进样１０皿，进行药物浓度
检测，以峰面积Ａ对浓度Ｃ（ｖｇ／ｍＬ）进行线性回
归，得标准曲线方程：Ａ＝７．０５４４Ｃ＋３．０８３ｌ，
收稿日期：２００９一Ｏｌ一１５；修稿日期：２００９—０２—２５基金项目：浙江省重大科技专项（２００６Ｃ１３０１０）作者简介：金圣煊（１９７６一），男，浙江三门人，浙江省杭州创新中药标准化研究所有限公司工程师，药学博士，＊通讯作者：０５７１—
８６６７４８８０
万方数据・－－——１９８・－－——
ｒ＝１．００００。可见在１０．００—１６０．００ｔ，－ｇ／ｍＬ浓度范围内，线性关系良好。
２．４精密度试验
依法配制２０（Ｓ）一ＰＰＤ对照品溶液ｌＯ．００，
４０．００，１２０．００ｔ，ｇ／ｍＬ（低、中、高浓度），于２，４，６，
８，１０ｈ测定，计算１３内精密度；于１，２，３，４，５ｄ测
定，计算日间精密度。低、中、高浓度的１３内精密度分别为０．８３％、０．６８％、０．５７％（坨＝５），１３问精
密度分别为１．０５％、１．００％、０．８６％（／＇ｔ＝５）。
２．５回收率试验精密称取２０（Ｓ）．ＰＰＤ对照品ｌＯ．２０畔，置于
１０ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
取该液０．１，０．４，１．２ｍＬ于１０ｍＬ容量瓶中，加入
处方量的空白脂质体，用甲醇稀释至刻度，配成
１０．２０，４０．８０，１２２．４０ｔｃ／ｍＬ低、中、高３浓度水平，分别进样１０皿，测定峰面积，代人标准曲线换
算成实际浓度，计算同收率，结果见表１。
表ｌ２０（Ｓ）．ＰＰＤ在空白脂质体中的回收率（ｒｇ＝５）
加入虽．测定量。回收率（％）ＲＳＤ（％）！ｇ：竺！：：！鳗：些：１０．２０１０．２８１００．８１．５５４０．８０４０．６２９９．６１．２４１２２．４０１２１．２２９９．００．９５
２．６稳定性试验
取２０（Ｓ）一ＰＰＤ脂质体（批号：０６０９０１）０．５ｍＬ约（１．０ｍｇ），置于１０ｍＬ最瓶中，加甲醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，精密吸取１０止，分别于０、１、３、６、１２ｈ进样，测定峰面积，计算
ＲＳＤ为０．７１％，结果表明供试品溶液在１２ｈ内能
保持稳定。２．７重复性试验
取２０（ｓ）一ＰＰＤ脂质体（批号：０６０９０１），按“２．６”项下制备供品溶液，平行试验５份，测定含量并
计算ＲＳＤ为１．３０％，结果表明该方法重复性良
好。
２．８样品含量测定
取２０（ｓ）一ＰＰＤ脂质体（批号：０６０９０１、０６０９０２、
０６０９０３），按“２．６”项下制备供试品溶液，进样１０
止，测定峰面积，按外标法计算脂质体中２０（Ｓ）一
ＰＰＤ的含量。药物含量分别为２．０５、１．９６、１．９８ｇ／Ｌ。壶塞尘医药盔堂堂拯２螋生墨旦箜箜鲞筮！塑
２．９２０（Ｓ）一ＰＰＤ脂质体包封率的测定
采』Ｈ微柱离心法【２Ｉ。精密吸取２０（Ｓ）．ＰＰＤ脂质体０．１０ｍＬ，加入经预处理的ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５微
型柱，２０００ｒ／ｍｉｎ离心，收集离心液。再加０．２ｍＬ
水，重复操作４次，合并离心液，加甲醇溶解并稀
释至适宜浓度。按“２．１”项下色谱条件测定离心
液中药物量，按下式计算脂质体的包封率（ＥＮ）：
ＥＮ（％）兰慧×１００％
式中ｃ包为经微柱离心后脂质体中２０（ｓ）一
ＰＰＤ的浓度，ｃ总为离心前脂质体中２０（ｓ）一ＰＰＤ
的浓度。
结果：３批脂质体（０６０９０１、０６０９０２、０６０９０３）的
包封率分别为１０１．２％、９８．６％和９９．７％。
３讨论
因人参皂苷的结构中缺乏生色团，如共轭双
键，２０（Ｓ）．ＰＰＤ在紫外区的最大吸收波长为２０３
ｎｌｎ，且吸收系数较小，选择流动相溶剂和添加剂
有些受限。为了提高检测灵敏度，减少溶剂干扰，
选择乙腈一水系统为流动相，建立了ＨＰＬＣ．ＩＮ分
析方法，可满足样品的检测要求。
２０（Ｓ）．ＰＰＤ，不溶于水，易溶于氯仿和正辛醇
等非极性溶剂，具有极强的亲脂性。通常认为对
于油水分配系数ｌｏｇＰ，５的脂溶性药物，几乎能
完全包人脂质体双分子层；同时因其在水中不溶，
脂质体包封的药物在贮存过程中的泄漏也是极小
的１３］。由此提示，２０（Ｓ）一ＰＰＤ可能成为脂质体制
剂开发的理想药物。
我们比较了凝胶柱色谱法、超速离心法和微
柱离心法分离２０（Ｓ）．ＰＰＤ脂质体中的游离药物，
结果发现应用微柱离心法简便、快速，能完全分离
２０（Ｓ）．ＰＰＤ脂质体和游离药物。自制３批２０（Ｓ）．
ＰＰＤ脂质体包封率均在９８％以上，能满足工业化
生产的要求，有望开发成新型抗肿瘤药物。
参考文献：【１］ＢａｅＥＡ，ＨａｎＭＪ，ＣｈｏｏＭＫ，ｅｔａ１．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｒ２０（ｓ）一ａｎｄ２０（Ｒ）－ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲ９３ｂｙｈｕｍａｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｉｔｓｒｅｌｍｉｏｎｔＯｉｎｖｉｔｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．ＢｉｏｌＰｈａｒｍＢｕｌｌ，２００２，２５：５８—６３．［２］’ｉｂｒｃｈｉｌｉｎＶ，ｗｅｊｓｓｉｇＶ．１Ｊｐｏｓｏｍｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ（２ｎｄ）［Ｍ］．Ｏｘｆｏｒｄ：ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，２００３．２７．［３］ＧｕｌａｔｉＭ．ＧｒｏｖｅｒＭ，ＳｉｎｇｈＳ，ｅｔａ１．ｉ，ｉｐｏｐｈｉｌｉｃｄｒｕｇｄｅｆｉｖａ－ｆｉｖｅｓｉｎｌｉｐｏｓｏｍｅｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＰｈａｎｎ，１９９８，１６５：１２９一１６８．
（编辑：李伟东）
万方数据
