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薄层色谱法薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
1.仪器与材料（1）薄层板市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。
自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。
最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为10～40μm，加水或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%~0.5%）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。
使用涂布器涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。
（2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。
（3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或有双槽展开缸，展开时须能密闭，水平展开用专用的水平展开缸。
（4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出，浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。
（5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。
（6）薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。
2.操作方法(1) 薄层板制备市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。
聚酰胺薄膜不需活化。
铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。
如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，110℃活化，置干燥器中备用。
薄层色谱分离
薄层色谱分离（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的色谱分析技术，用于分离化合物混合物中的组分。
它利用固定在薄层板上的吸附剂对化合物进行分离，并通过相对迁移率来定量或定性分析样品。
薄层色谱分离的基本步骤如下：
1.准备薄层板：将特定吸附剂涂布在玻璃、金属或塑料基板
上，形成薄而均匀的吸附层，通常用硅胶（Silica gel）或氧化铝（Alumina）作为吸附剂。
2.样品的制备：将待分析的混合物溶解在适当的溶剂中，并
按照需要进行前处理，如过滤或萃取。
3.样品的施加：将样品溶液施加到薄层板上，通常使用微量
吸管或毛细管在吸附层上形成一个小斑点。
4.开展色谱：将薄层板垂直放置在色谱槽或密闭的容器中，
让溶剂通过毛细作用（毛细管上升作用）自下而上渗透到吸附层中，并将化合物带上和分离。
5.可视化：待溶剂到达上部时，取出薄层板并立即使用不同
的可视化方法来可视化分离的斑点。
可使用紫外线灯、化学反应剂或染料等方法。
6.分析和解释：通过对斑点的迁移距离、颜色、形状和强度
进行比较和测量，对化合物进行分析和解释。
这通常涉及与标准物质的比较或进行色谱图谱分析。
薄层色谱分离技术具有操作简便、分析快速、结果直观等优点。
它广泛应用于药物分析、天然产物化学、食品分析和环境检测等领域。
薄层色谱分离偶氮苯和苏丹实验报告一、实验目的1、掌握薄层色谱的基本原理和操作方法。
2、学习使用薄层色谱分离偶氮苯和苏丹混合物。
3、了解影响薄层色谱分离效果的因素。
二、实验原理薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种快速、简便、灵敏的分离分析技术。
它基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。
在本实验中，偶氮苯和苏丹是两种结构和性质不同的化合物。
偶氮苯为芳香族化合物，苏丹为偶氮类染料。
选择合适的展开剂，使它们在薄层板上的迁移速度不同，从而达到分离的目的。
三、实验仪器与试剂1、仪器玻璃板（5×20cm）层析缸点样毛细管紫外灯喷雾器2、试剂偶氮苯苏丹硅胶 G羧甲基纤维素钠（CMCNa）石油醚乙酸乙酯四、实验步骤1、制备薄层板将 3g 硅胶 G 置于研钵中，加入 7mL 05% CMCNa 溶液，充分研磨均匀。
将调好的硅胶糊倒在洗净的玻璃板上，用玻璃棒均匀涂布，使其成为厚度约 025mm 的均匀薄层。
水平放置，在室温下晾干后，置于 110℃烘箱中活化 30 分钟，取出备用。
2、点样用毛细管分别吸取少量偶氮苯和苏丹的溶液，在距薄层板一端 1cm 处，轻轻点样，使样点直径不超过 2mm，每次点样后，用电吹风冷风档吹干，重复点样 2-3 次。
3、展开在层析缸中加入适量的展开剂（石油醚：乙酸乙酯＝ 9:1），将点好样的薄层板放入层析缸中，使展开剂液面低于样点。
盖好层析缸盖，让展开剂自下而上展开。
当展开剂前沿上升至距板顶端 1cm 左右时，取出薄层板，用铅笔标记展开剂前沿的位置，用电吹风吹干。
4、显色将展开后的薄层板置于紫外灯下观察，偶氮苯和苏丹会呈现出不同颜色的斑点。
5、计算比移值（Rf 值）用尺子测量样点中心至展开剂前沿的距离（a）和样点中心至原点的距离（b），计算 Rf 值：Rf ＝ a ／ b 。
五、实验结果与分析1、实验结果偶氮苯的 Rf 值约为 07，苏丹的 Rf 值约为 04。
聚酰胺薄层色谱操作步骤聚酰胺薄层色谱是一种常用的分离技术，常用于分析和纯化化合物。
下面将介绍聚酰胺薄层色谱的操作步骤。
材料准备•薄层色谱板：选择合适的聚酰胺薄层色谱板，平整且无明显损坏。
•色谱溶剂：根据样品的特性和分离需求选择合适的溶剂系统。
•样品：确定好需要分离的样品，并按照要求制备好样品溶液。
•试管或样品瓶：用于保存和处理样品。
•扫描仪或可见光仪：用于分析并记录色谱结果。
操作步骤步骤1：准备色谱板1.将聚酰胺薄层色谱板放置在水平的操作台上。
2.使用尺子和笔在色谱板的底端标出起点线（一般距离底端约2 cm处）和样品斑点线（一般距离起点线约1 cm处）。
步骤2：样品上样1.准备好样品溶液，并使用微量移液器将样品滴于标有样品斑点线的位置上。
2.等待样品完全干燥，确保样品被均匀地吸附在色谱板上。
步骤3：溶剂上升1.准备好合适的色谱槽或玻璃瓶，倒入色谱溶剂至约0.5 cm深度。
2.将准备好的色谱板放置在色谱槽内，确保样品斑点线在色谱溶剂面上方。
3.盖上色谱槽的盖子，让色谱板在暴露于饱和溶汽的环境中。
4.等待溶剂上升，直至达到最上端，再将色谱板取出并放置水平的操作台上晾干。
步骤4：样品检测1.对于无色或淡色化合物，直接观察色谱板即可确认分离效果。
2.对于有色化合物，可以使用可见光仪器或者扫描仪进行分析和记录。
步骤5：结果分析1.根据色谱板上的斑点形状、颜色和位置，对样品进行初步的分析和判断。
2.通过比对标准品或者其他已知化合物的色谱性质，进一步确认样品的纯度和组成。
注意事项•操作过程中要注意避免空气湿气的进入，以免影响色谱结果。
•选择合适的溶剂系统，使得需要分离的物质具有明显的色谱行为。
•严格控制上样量，避免过浓样品斑点导致分离不清晰。
•在操作过程中要小心，避免损坏色谱板。
以上就是聚酰胺薄层色谱的操作步骤，希望能够对您有所帮助！。
薄层板的制备及应用中的问题（1）配制优质CMC 溶液。
取50g 缩甲基纤维素钠，在搅拌下加入到5000mL 水中，强力摇匀，放置备用。
使用时，用300 目丝网过滤，所得滤液即为铺制薄层板的优质CMC 溶液。
(由于CMC 在水中溶解速度很慢，放置两周或更长的时间，才可以溶解比较完全。
可以采用一次性配制较多的溶液，留待以后多次使用。
尽管放置较长时间，CMC 胶粒也无法完全溶解解，所以采用300 目丝网过滤除去胶团，而得到非常均匀澄清溶液。
由于GF254 硅胶为260~280 目，所以300 目丝网过滤后滤液中存在的较小的CMC 胶粒，对于所铺薄层板的平整度不会造成任何影响。
检测CMC 溶液是否均匀澄清，可以取一块干净的玻璃板，在其表面倾倒少许CMC 溶液，倾斜玻璃板使CMC 溶液流动展开。
从侧面观察溶液表面，如果液面平整光洁，则说明此CMC溶液中不含较大胶粒。
)（2）取适量 GF254 型硅胶（薄层色谱专用硅胶），与适量优质 CMC 混合均匀，不断搅拌，静置，再搅拌，反复进行此操作，使所有硅胶完全润湿，最后用超声波处理几分钟，充分排出溶液中的气泡，即可用于铺板。
（3）将制作薄层板的玻璃片清洗干净并烘干，排布于水平桌面上，桌面上事先涂布少量的水以固定玻璃片，再将适量已配好的硅胶与CMC 的混合液小心倾倒于玻璃片上，用玻璃棒使之尽量涂敷均匀，然后用玻璃棒按所需硅胶层的厚度将硅胶刮平，自然晾干。
（4）水分蒸发完毕后，即得表面非常平整光洁的薄层板，小心地将薄层板从桌面上取下，轻轻抹平边缘，然后在110℃下烘烤30min，置于干燥器中待用。
用本方法所铺制的薄层色谱板分离效果极佳，对于多组份系统的监测非常有效，与商品化的薄层板具有同样的分离效果。
尤其是铺制的制备薄层色谱板(PreparativeThin layer Chromatograph)对于制备少量样品非常有效。
第一条里面是5克CMC ! 一般是用0.5%的CMC水溶液！硅胶与CMC水溶液的比例是1比3！关于配制CMC-Na：先将称好的CMC-Na加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，实际操作中0.4％～0.5％最为实用，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞.0.5%CMC-Na与水溶涨至充分，搅拌溶涨，如果不好溶涨，可在溶涨前加几滴乙醇，比较好溶，但是尽量不加，因为加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。
简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项一、实验操作步骤采用硅胶板薄层色谱分离实验的操作步骤如下：1.硅胶板的制备：选择合适的硅胶板，如硅胶G板或硅胶H板。
将硅胶与适量的黏合剂混合，搅拌均匀后涂在玻璃板上，制成硅胶薄层板。
薄层板制成后需干燥，然后活化处理，以提高分离效果。
2.点样：将待分离的样品溶液点在硅胶板上，用毛细管或自动点样器进行点样操作。
点样时需注意控制点样量，过量的样品可能导致拖尾、边缘效应等。
3.展开：在密闭的容器中进行展开，选择合适的展开剂，确保待分离的组分能够得到较好的分离。
展开剂的选择应根据样品的性质进行优化。
4.显色：展开后的薄层板需进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
根据待分离组分的性质选择合适的显色剂，如荧光剂、金属盐等。
5.检测与记录：通过合适的方法对薄层板上的组分进行检测，如紫外可见吸收光谱法、荧光法等。
记录各组分的斑点位置、大小及颜色等信息，以便后续的分析和处理。
6.薄层板的回收和处理：实验结束后，需对薄层板进行回收和处理。
对于有价值的组分，可进行进一步分离和纯化。
对于不再需要的薄层板，需按照实验室规定进行处理，避免对环境造成污染。
二、注意事项在进行硅胶板薄层色谱分离实验时，需要注意以下几点：1.硅胶板的选择与制备：根据实验需求选择合适的硅胶板类型（如硅胶G 板或硅胶H板）。
制备时需确保硅胶与黏合剂的比例合适，搅拌均匀，避免出现硅胶颗粒等杂质。
同时，制成的薄层板需干燥并活化处理，以提高分离效果。
2.点样操作：点样时需控制点样量，避免过量的样品导致拖尾、边缘效应等问题。
可以采用毛细管或自动点样器进行点样，提高点样精度和效率。
3.展开剂的选择与优化：展开剂的选择对于薄层色谱分离的效果至关重要。
应根据待分离组分的性质选择合适的展开剂，并进行优化实验，以提高分离效果。
同时，需注意展开剂的配比和组成，以获得最佳的分离效果。
4.显色处理：选择合适的显色剂对展开后的薄层板进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
、实验目的:1、掌握湿法制作薄层色谱的操作方法。
2、了解薄层色谱的基本原理和应用。
3、掌握使用薄层色谱的操作技术。
4、掌握样品检测前的处理方法。
二、实验原理:1、原理薄层色谱常用TLC表示，又称薄层层析，属于固-液吸附色谱。
样品在薄层板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分离。
由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。
2、薄层色谱的用途: 1）化合物的定性检验。
（通过与已知标准物对比的方法进行未知物的鉴定）在条件完全一致的情况，纯净化合物在薄层色谱中呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用薄层色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定物质种类。
影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，外界温度和展开剂纯度、黏度等。
要获得重现的比移值就比较困难。
为此，在测定某一试样时,最好用已知样品进行对照。
R f =溶质最高浓度中心至原点中心的距离溶剂前沿至原点中心的距离2、快速分离少量物质。
（几到几十微克，甚至0.01 Q3、跟踪反应进程。
在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失，来判断反应是否完成。
4、化合物纯度的检验（只出现一个斑点，且无拖尾现象，为纯物质。
）此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
三、实验仪器、试剂。
1.仪器：载玻片（5块）、玻璃棒、小烧杯（100ml）、烘箱、干燥器、普通天平、吹风机、紫外灯、分液漏斗、锥形瓶（250ml）、广口瓶、毛细管、量筒（10ml）、镊子、表面皿、铅笔、尺子。
2.试剂：硅胶GF254 1%羧甲基纤维素钠（CMC、APC药片1片、二氯甲烷、无水MgSO、水、展开剂（苯：乙醚：冰醋酸：甲醇=120: 60： 80： 1的混合溶液）四、实验操作步骤:1溥层板的制备（湿板的制备）：在实验台上的水槽中取出五块载玻片，小心除去上面的部分水分，放在实验台上待用。
实验一薄层色谱板的制备和使用目的要求：通过实验进一步理解薄层色谱技术理论，熟悉掌握薄层色谱板的制备和使用方法。
一、薄层层析的基本原理把吸附剂（固定相）均匀地铺在一块玻璃板上，将待分离的样品溶液点加在一薄层板的一端，在密闭的容器中用适当的溶剂（流动相）展开，由于吸附剂对不同物质的吸附力大小不同及溶剂对不同物质溶解分配系数不同，当溶剂流过时，各物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附，解吸附，再吸附，再解吸附。
不易被吸附或易被溶剂溶解的物质相对移动得快一些。
经过一段时间的展开，不同的物质被彼此分开，最后形成相互分离的斑点。
将展开完毕的薄层板从密闭容器中取出后，应用特定的试药或方法将斑点显色，从而达到定性和定量的目的。
二、薄层板的制备1．玻璃板用一块玻璃板涂上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等，玻璃板要求薄厚一致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎这些要求就可。
如果找不到平整均一的，将旧光学照像底片截成同样大小也可以。
用前先将玻璃用肥皂和水洗干净，必要时浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用纱布擦光。
玻璃板大小有各种规格，一般有20×20、20×10、20×5厘米，也有更小的，可根据需要自行设计。
宽度要求至少能点开两三个样品，每两点之间相隔至少1.5厘米，玻板长度一般要满足展开10厘米的距离。
点样的起点应距底边至少1.5厘米的距离。
2．吸附剂应用最广泛的为硅胶和氧化铝，市场上有专供薄层色谱用的吸附剂，规格分不含粘合剂的硅胶H，氧化铝H和含有粘合剂熟石膏的硅胶G，氧化铝G，如市售硅胶G含13％熟石膏，氧化铝分中性、酸性、碱性三种。
吸附剂的粒度范围最好在180－200目之间，太小了流速慢，太大则影响分离效果。
如不合要求，应过筛。
3．薄层板的涂布最简单的涂布方法是用两条比玻璃板厚0．25毫米的玻璃条或有机玻璃条（或在同样厚度的玻璃条下粘一层胶布），将玻璃板夹住，把调好的吸附剂浆液平铺在薄层板上，然后用一有机玻璃条或直尺，迅速均匀地向前推进，就象推血片一样，只要推进的速度均匀一致，即可得到薄厚均匀的薄层板，如在一块玻璃板末端再接一块相同的玻璃板，把剩余的装液接过去，可使涂层边缘整齐，厚度一致，吸附剂浆液的加水量和搅拌时间是涂布成败的关键，像12×8平方厘米的玻璃板需要2~3克硅胶G，加4~6毫升水即可，只要技术熟练即能涂成厚薄一致，光滑平整的一块薄层板。
不同性质不同批号的吸附剂，加水量和搅拌时间有时可有差异，应根据情况摸出规律。
为了达到涂布的各板厚度均匀一致，最好采用涂布器进行薄层的涂布。
为了增加薄层的牢固性及易于保存，可在涂布过程中加入某些粘合剂以增加薄层的硬度。
一般采用添加剂羧甲基纤维素钠（CMC—Na），应用方法是取CMC-Na 1克溶于100毫升水中，加热煮沸溶解，按比例与硅胶搅匀，铺板。
涂成之后先把玻板放在平面上，室内干固，再对光检查，看是不是均匀，有无气泡，平整光洁度如何，合格的上烤箱110℃加热30分钟进行活化，冷却后贮于干燥器内备用。
在进行实验时，应尽量可能采用同批号涂布活化的薄层板，以减少因活化不一致引起的Rf值发生差异，目前国内市场已有成品供应，如黄岩化学分析材料厂即有各种类型的薄层板出售。
三、薄层板的使用1．点样将样品溶于适当的溶剂中（应尽量避免有水），取微量注射器或玻璃毛细管截齐后，吸取一定量的检样，轻轻接触到薄层上，使样品自动吸到薄层上，点的直径不要超过0.3厘米，一次不能点完，待干后再点，稍有过分就会损伤板面，影响展开后的斑点形状。
每两个样点之间相距至少1.5厘米。
点样的起点距薄板底边至少1.5厘米，以免样点浸入展开溶剂中，同块薄板上各样点应保持在与底边平行的一条直线上，为控制好点样距离，应用薄层点样尺架。
2．展开根据薄层板大小，自行选用适当玻璃标本缸，长方形，如17×10×6厘米的标本缸可容纳下15×9厘米的玻璃板。
采用较大的玻璃缸和玻璃板时，在缸内沿周围缸壁衬一层预先浸有溶剂的滤纸，以便缸内展开溶剂易达到饱和，防止边缘效应（即两边缘的点走得快）和同一物质Rf值不一致现象。
一般将薄层板斜置展开容器内，密闭。
先不使溶剂浸湿薄层板，饱和10~15分钟后再进行展开，展开溶剂沿着薄层板向上移动。
对加粘合剂的涂板可以近于垂直的状态进行展开，而对未加粘合剂的薄层板则必须以倾斜状态（15度角）进行展开。
为了防止产生“边缘效应”和展开溶剂不饱和现象。
还可采用夹心式展开容器，其方法是将薄层板的左右两侧各刮去5~10毫米，垫上条状玻璃或塑料，盖一块与薄层板同样大小的玻璃，用夹子将两边夹好，插入展开溶剂中进行展开，并能取得良好效果。
3．显色薄层展开后，凉干。
如含粘合剂，即可直接喷显色剂，使之显色，有的还需经紫外线（254nm）照射后方能显色；对不含粘合剂的薄板，在喷显色剂时应尽量远离薄层板，否则会连吸附剂一起吹掉，应予以注意。
四、检样的定性定量分析1．比移值（Rf）的测定当样品的薄板一端被展开，经过毛细管作用流向另一端，样品是按一定的比例分配在固定相与流动相之间。
并沿着溶剂流动的方向移动，由于样品中各组分在两相中分配系数不同，各组分的移动速度也不同，经一定距离后使各组分彼此分离。
样品各组分移动的速率，亦即分离后在薄层板上的位置与溶剂展开前沿的距离的比值为比移植。
2．定性分析相同的物质Rf值应当是相同的，但因能影响Rf值的因素很多，要想得到与标准物质相同的Rf值，最好在鉴定时，将样品与标准物质点在同一张薄层板上一同展开，根据检样斑点的Rf值与标准样品的Rf值比较，即可确定二者是否相同，但要做到准确的定性，需要两种以上展开溶剂系统所得的Rf值比较判断。
3．定量分析（1）目测比较法①用吸附剂（如硅胶G）涂布成厚0.25~0.5毫米，大小20×20厘米的薄层板，110℃活化30分钟，室温冷却。
②用微量注射器（10微升）在距板底1.5厘米处，将标准样品溶液按1、3、5、7微克自左向右点在起始线上，然后再吸取不同量的检材提取溶液（相同于1、3、5克检材的提取溶液）按次序点在同一板的右侧。
③选择比移值适中的展开剂（Rf在0.45~0.75之间者）用夹心式展开法或连续薄层展开法。
展开距离为10厘米，显色剂要求能使显色后的斑点明显清晰。
这样得到的色斑比较集中，重现性好，便于比较。
④显色后，观察其色斑大小，深浅与已知不同浓度的标准样品系列色斑相比较，粗略定出含量，然后算出检液总体中含量，根据所取检材量，求出百分含量。
（2）洗脱测定法①在制备好的薄层板左端，先点一标准样品点，作为对照定位用，然后根据检材提取溶液的多少，在同一板的右端点成点状或线状。
②置玻璃缸中展开（如有连续薄层展开仪更好），展开后晾干，再用玻璃板遮住右侧检材部分，仅使对照定位点显色。
③显色后，根据斑点位置将未显色部分（相当于色斑所在部分）的吸附剂用刮刀刮下或用抽吸法收集起来。
④将收集的吸附剂置于小层析柱管中，用极性大的溶剂甲醇或乙醇进行洗脱，收集洗脱液并加以浓缩。
⑤用适当溶剂调整到一定体积，可用紫外分光光度计，在被检物最大吸收波长处进行测定。
同时用薄层吸附剂洗脱液作空白吸收值测定。
如有灵敏度高专属性好的比色反应，还可用比色计测定化合物的含量。
上述洗脱液亦可作为气相色谱仪、液相色谱仪分析前的处理液。
（3）薄层色谱扫描仪测量法以洗脱法处理层析色斑，不仅操作麻烦，而且有些待测成分不能定量地洗脱下来。
或者在洗脱过程中发生分解，影响测定结果的准确性，最好是采用双波长薄层色谱扫描仪直接定量检测，经电子积分器积分推算出检样中待测物质的含量。
其测定方法包括为：①斑点面积测量法；②斑点光密度测量法；③斑点荧光测量法。
附：实验仪器1．薄层涂布器 2．微量注射器 3．薄层点样尺架4．薄层板展开缸 5．吸引器 6．喷瓶7．烘烤箱实验二氢氰酸及氰化物的检测目的要求：了解氰化物中毒的条件和毒性反应，掌握氰化物的化学性质，检材的采取及处理方法和常见的鉴定方法。
一、检材采取和毒物的分离1．检材采取：最好的检材为中毒者剩余的食物、饮料、呕吐物及尸体胃和胃内容物，其次为血液，肺、肝、脑等。
吸入中毒的应采取血液为宜。
检材应盛于密闭容器内，并尽量少留空间，尽快进行检验，不能及时检验者应将检材低温冰冻保存。
2．毒物分离：含氰化物中毒检材的分离采用水蒸气蒸馏法（1）分离原理：氰化物遇酸可形成易挥发的氢氰酸，氢氰酸具有较高的蒸气压，检材在酸性条件下当和水同时加热或通入热水蒸气时，能随水蒸汽在较低的温度沸腾蒸馏出来，在碱性环境下被冷却收集，达到分离的目的。
（2）操作方法：取适当量检材（10～50克），剪碎或捣碎，放入250毫升圆底烧瓶中，加水2倍，再加10％的酒石酸酸化（PH5）。
取1000毫升烧瓶作为水蒸气发生瓶，倒入热水，投入数小块沸石，上插安全管（长度60厘米的玻璃管）。
按图所示：用连接管将两瓶相连，将检材瓶浸入水浴锅中接上冷凝管，收集液瓶中加入5毫升0.01N氢氧化钠溶液使接收管直接通到受液瓶中稀碱液液面下，以防馏出氰化物逸失，检查所有瓶塞及各接头处紧密不漏气后，将水蒸气发生瓶和水浴锅同时加热，收集馏液10分钟备检。
〔注意事项〕（1）检材处理的愈碎愈好，检材溶液必须呈酸性。
（2）蒸馏装置的各接头处必须严密不漏气。
（3）蒸馏完毕后，应先将受液瓶取下，再将水蒸气发生瓶的瓶塞放松，或将水蒸气发生瓶与检材瓶之间的连接处拆开，然后再停止加热以防各瓶之间相互倒流。
（4）对血液、面糊、稀粥等检材，可加入2～3毫升液体石蜡或适量的三氯醋酸溶液，以避免蒸馏时发生大量的泡沫溢入冷凝管。
（5）蒸馏瓶中的内容物，不能超过瓶容积的1/3。
二、氢氰酸及氰化物的鉴定方法（一）普鲁士蓝反应：1．原理：蒸馏出来的氢氰酸吸收在稀碱溶液中生成氰化钾，加硫酸亚铁后生成亚铁氰化钾（黄血盐），后者与溶液内亚铁氧化成高铁，在酸性条件下，化合为亚铁氰化铁，即普鲁士兰或柏林蓝。
该反应是氰化物的专属反应，阳性结果可确证氰化物的存在，反应灵敏度为1：5000。
2．操作方法：取蒸馏液3～5毫升，加新配的20％硫酸亚铁2滴，加热至恰沸，加稀硫酸使成酸性，如有氰根视含量多少，溶液有蓝绿色至深蓝色。
量多即析出蓝色沉淀，量少时颜色和沉淀可能要隔24－48小时后才显出。
（二）氰化物的快速检验法检材不经水蒸气蒸馏，可直接做普鲁士兰试验。
1．原理：氢氰酸与硫酸亚铁－氢氧化钠试纸作用生成亚铁氰化物，在酸性条件下，再与由空气氧化产生的三价铁离子作用生成普鲁士兰。
6HCN+Fe2++6OH-= Fe（CN）64-+6H2O4Fe3++3 Fe（CN）4-6＝Fe4[Fe（CN）6]3（普鲁士兰）2．操作方法：取检材5～10克，置锥形瓶中，加适量水调成稀糊状，加10％的硫酸使之变成酸性，取滤纸一小方，滴加新配制的20％硫酸亚铁2滴及10％氢氧化钠2滴，将此滤纸覆盖于锥形瓶口，瓶底缓缓加热，待有蒸气上冒，取下滤纸，浸入6N盐酸内，如有氰根，滤纸即蓝色斑点，水洗，色斑更鲜艳。
