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单核细胞向淋巴管内皮细胞转分化潜能的研究摘要：传统的观点认为，单核细胞仅是吞噬细胞的前体细胞，在体内不同环境下能分化为巨噬细胞、树突状细胞、kupffer细胞、小胶质细胞。
但近几年的研究发现，单核细胞经诱导具有多向性的分化潜能。
本文将单核细胞向淋巴管内皮细胞转分化潜能的研究现状进行综述。
关键词：单核细胞；淋巴管内皮细胞；转分化。
干细胞替代治疗是近些年来医学研究领域的热点。
单核细胞参与血管新生一直是近些年来非常活跃的课题。
研究发现，单核细胞能受组织环境影响、发生不同方向的分化。
单核细胞不仅是巨噬细胞、树突状细胞的前体细胞，还能在特殊环境下分化成内皮祖细胞（endothelial progenitor cell， epcs）[1]，参与血管新生。
然而，单核细胞参与淋巴管新生的研究相对较少。
相对于血管内皮标志物，淋巴管内皮特异性标志物发现较晚，在1984年以后才陆续被发现[2]，因此对于淋巴管内皮的研究一直滞后于血管内皮。
近年来，随着研究者对于一些淋巴管内皮特异性标志物的发现，关于淋巴管在诸多领域的研究均有所突破。
因此，随着单核细胞向血管内皮细胞转分化的研究的深入，单核细胞向淋巴管内皮细胞转分化的研究已经有了初步进展，但至今仍未有定论。
目前这方面的研究，只能给单核细胞向淋巴管内皮细胞转分化的可能性提供一些依据。
一、单核细胞向血管内皮细胞的转分化从胚胎发育学看，淋巴管内皮细胞与血管内皮细胞具有同源性。
胚胎主静脉的一部分内皮细胞出芽形成淋巴囊，再由淋巴囊出芽形成成熟的淋巴管网络[3]。
所以，单核细胞向血管内皮细胞转分化的研究，能提示单核细胞向淋巴管内皮细胞转分化的可能性。
研究发现，从人类血中分离培养cd34-cd14+单核细胞，表达特异性内皮细胞表面标志物的细胞的比例随时间推移增加，到第4周时，表达vwf、ve-cadherin和e-nos的细胞比例分别达到94.2%，89.7%和58.8%，在三维基质胶中，这些细胞形成了条索状或管状结构，表明这些细胞聚集可能是参加血管生成的[4]。
小鼠免疫器官摘取及淋巴细胞分离
“小鼠免疫器官摘取及淋巴细胞分离”实验过程
1. 培养皿加入纱布，在纱布上滴2ml淋巴细胞分离液。
2. 脱颈处死小鼠，在75%酒精中浸泡30s(示意消毒小鼠)。
3. 无菌条件下将腹部剪开，脱皮。
(2min)
4. 选取小鼠腹部左侧，剪开腹膜，深红色细长组织即脾脏（淋巴细胞组织）
5. 用镊子从下方夹取脾脏，，剔除结缔组织和脂肪后，将组织置于滴有小鼠淋巴细胞分离液的纱布上。
6. 脾脏用弯头镊子在纱布上研磨至无血色组织后，纱布上加入1ml淋巴细胞分离液，再用移液器吸取研磨的液体，移至1.5ml离心管内。
(3min)
7. 离心（1500rpm,3min）留上清，移入新的15ml 离心管中，去除红细胞，此时可以取胸腺。
(可以做到这里停止，示意淋巴细胞和免疫器官胸腺)
8. 在装有上清的离心管中加入3ml 1640培养基，离心1500rpm，3min，取沉淀，弃上清，重复清洗2次。
（6min）
9. 在显微镜下将细胞浓度调为5×106个/ml备用。
肠癌淋巴管内皮细胞ICAM-1、CEA的表达
陈尧;刘执玉;李瑞祥
【期刊名称】《解剖科学进展》
【年(卷),期】1999(5)4
【摘要】肠癌转移的主要途径是淋巴结转移。
直接影响患者的预后。
而淋巴系统转移首先是癌细胞沿着淋巴管转移 ,淋巴管转移涉及淋巴管内皮细胞与癌细胞的相互作用。
这种相互作用的分子基础与细胞粘附分子有关。
为此 ,本文运用石蜡切片免疫组化方法 ,研究 ICAM、CEA在淋巴管内皮细胞的表达 ,结果发现转移淋巴管内皮细胞表达 ICAM和 CEA,而正常淋巴管内皮细胞不表达 ICAM和 CEA,提示肠癌淋巴转移与淋巴管内皮细胞分泌 ICAM和
【总页数】3页(P341-343)
【关键词】肠肿瘤;淋巴管内皮细胞;ICAM-1;CEA
【作者】陈尧;刘执玉;李瑞祥
【作者单位】华西医科大学基础医学院解剖学教研室;山东医科大学解剖学教研室【正文语种】中文
【中图分类】R735.302;R73－37
【相关文献】
1.直肠癌癌周组织ICAM-1、CEA和CD31的表达 [J], 巩念明;魏璐婉;陈尧;刘执玉;房云海;孙平
2.CEA,ICAM-1和CD31在人直肠癌淋巴管内皮细胞的表达 [J], 田铧;刘执玉;陈尧;
房云海;李瑞祥;李贵宝
3.结直肠癌患者血清CEA、CA19-9、CA72-4、ICAM-1及VCAM-1表达研究[J], 雷振川
4.人直肠腺癌淋巴管内皮细胞ICAM-1的转录调节 [J], 陈尧;刘执玉;李瑞祥;靳升荣
5.肠癌淋巴管内皮细胞局部粘附激活酶的表达 [J], 陈尧;张晓;李瑞祥;刘执玉;靳升荣
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淋巴细胞分离液的原理1.淋巴组织的获取:首先要从动物或人体中获得淋巴组织。
这可以通过手术或解剖的方式进行，包括淋巴结、脾脏、扁桃体等。
2.组织的机械分解:得到淋巴组织后，需要将其经过机械分解，以便释放出细胞。
常用的方法有用剪刀剪碎组织，或者用均质器均质组织。
3.组织的酶解:机械分离后，需要用酶液对组织进行酶解，以分解胶原蛋白，以便获得单个细胞悬浮液。
常用的酶包括胶原酶、玻璃粉酶、DNA酶等。
酶的选择和使用浓度需要视实验的具体要求而定。
4.细胞的沉淀:所有的细胞悬浮液需要经过离心，以将细胞沉淀。
通常采用低速离心，离心速度和时间需要根据细胞类型和具体实验而定。
5.细胞的再分离:经过低速离心后，得到一个含有多种细胞的细胞悬液。
为了分离出特定的细胞类型，需要采用进一步的分离方法，如：巨噬细胞分离法、负选择法、阳选择法等。
这些方法可以通过利用物理性质（如细胞大小、形态）、免疫学性质（如特异抗原表达）、亲和性柱等进行。
6.淋巴细胞的保存:完成细胞分离后，需要将淋巴细胞保存起来，以备后续的实验使用。
常用的保存方法有液氮冷冻、液氮培养、液体培养等。
7.细胞检测:细胞分离液中所获得的淋巴细胞可以用于进一步的研究，如：细胞培养、细胞增殖、细胞分化等。
也可以通过流式细胞仪、显微镜等仪器进行细胞检测和鉴定。
总结:淋巴细胞分离液的制备过程相对复杂，需要多种方法和试剂的配合。
然而，通过精确的步骤操作和仔细的实验设计，可以高效地分离出淋巴细胞，为深入研究淋巴细胞的功能和特性提供了重要的工具。
淋巴细胞分离液的原理在科研和临床诊断中具有广泛的应用前景。
康莱特注射液对淋巴管内皮细胞增殖影响的研究郑海兴;赵微;秦俭;李明秋【摘要】目的:探讨康莱特注射液对淋巴管生成的影响.方法:取健康猪的胸导管内皮细胞进行分离、培养;Ⅷ因子对LECs进行鉴定;采用MTT法检测康莱特注射液对LECs增殖的影响.结果:康莱特注射液能抑制LECs增殖.结论:康莱特注射液能抑制淋巴管生成.【期刊名称】《牡丹江医学院学报》【年(卷),期】2011(032)003【总页数】2页(P37-38)【关键词】康莱特注射液;淋巴管生成;淋巴管内皮细胞;迁移【作者】郑海兴;赵微;秦俭;李明秋【作者单位】牡丹江医学院解剖教研室,黑龙江,牡丹江,157011;牡丹江医学院解剖教研室,黑龙江,牡丹江,157011;牡丹江医学院解剖教研室,黑龙江,牡丹江,157011;牡丹江医学院解剖教研室,黑龙江,牡丹江,157011【正文语种】中文恶性肿瘤是严重危害人民身体健康的恶性疾病，扩散是恶性肿瘤的主要特征。
淋巴道转移是恶性肿瘤的主要转移方式，因此如何切断肿瘤的淋巴道转移是关系到肿瘤患者预后的关键。
肿瘤与新生淋巴管的基础研究取得了较大的进展，抗肿瘤新生淋巴管治疗有希望成为肿瘤生物治疗一种新模式［1］。
肿瘤淋巴管生成是通过内皮细胞的增殖、游走和粘附等方式实现的［2］，因此，如何找到有效而不良反应又小的淋巴管生成抑制剂来抑制肿瘤淋巴管的生成，从而抑制肿瘤淋巴道转移，提高肿瘤患者的生存率便成了当务之急，本文通过不同浓度的中药制剂康莱特注射液对淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells，LECs)增殖影响的实验，初步探讨了康莱特注射液对LECs的作用。
1 材料1.1 药物与试剂康莱特注射液，浙江康莱特药业有限公司生产。
胎牛血清，购于hyclone公司。
DMEM培养基，美国GIBCO公司产品。
MTT购于华美生物工程公司，进口分装。
1:250胰蛋白酶，吉泰科技有限公司，进口分装。
1.2 仪器与设备自动灭菌器，自动三重纯水蒸馏器(SZ－97)，SIEMENS电冰箱(KKZZE18T)，二氧化碳细胞培养箱(HH·CP)，Boxun超净工作台(垂直单向流型)，电子分析天平(BS214D)，低速台式离心机(KA－1000)，OLYMPUS倒置荧光显微镜(CK×41)。
一、实验目的1. 观察淋巴管的形态结构。
2. 学习淋巴管与血管的区分方法。
3. 掌握淋巴管的分布特点。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：人体解剖图谱、新鲜人体组织标本、显微镜、载玻片、盖玻片、染色液等。
2. 实验仪器：显微镜、解剖镜、剪刀、镊子、解剖盘、解剖针等。
三、实验步骤1. 观察淋巴管的形态结构（1）取新鲜人体组织标本，将其置于解剖盘上。
（2）用解剖针轻轻挑开皮肤，暴露出淋巴管。
（3）用剪刀剪取一段含有淋巴管的组织，将其置于载玻片上。
（4）用盖玻片覆盖，观察淋巴管的形态结构。
2. 淋巴管与血管的区分（1）观察淋巴管的管壁结构，血管壁由内膜、中膜和外膜组成，淋巴管壁较薄，主要由内皮细胞构成。
（2）观察淋巴管内的淋巴液，淋巴液呈乳白色，含有脂肪、蛋白质等物质，而血管内的血液呈红色。
3. 淋巴管的分布特点（1）观察淋巴管的分布，淋巴管广泛分布于人体各部位，如皮肤、肌肉、内脏等。
（2）淋巴管在器官内部呈网状分布，器官周围的淋巴管呈放射状分布。
四、实验结果与分析1. 淋巴管的形态结构观察结果显示，淋巴管呈管状，管壁较薄，主要由内皮细胞构成。
淋巴管内含有淋巴液，淋巴液呈乳白色。
2. 淋巴管与血管的区分通过观察，淋巴管与血管在管壁结构和淋巴液颜色上存在明显差异。
淋巴管壁较薄，淋巴液呈乳白色，而血管壁较厚，血液呈红色。
3. 淋巴管的分布特点淋巴管广泛分布于人体各部位，器官内部的淋巴管呈网状分布，器官周围的淋巴管呈放射状分布。
五、实验结论通过本次实验，我们观察了淋巴管的形态结构、淋巴管与血管的区分方法以及淋巴管的分布特点。
实验结果表明，淋巴管在人体内具有重要的作用，包括输送淋巴液、清除组织液中的废物和细胞碎片等。
了解淋巴管的形态结构和分布特点，有助于我们更好地认识人体淋巴系统的功能。
六、注意事项1. 实验过程中，注意操作轻柔，避免损伤组织标本。
2. 观察淋巴管时，注意区分淋巴管与血管，以免误判。
3. 实验结束后，妥善处理实验材料，保持实验室卫生。
内皮细胞成管实验步骤内皮细胞是一种具有重要生物学功能的细胞类型，其在血管形成和维持血管功能方面起着关键作用。
内皮细胞成管实验是一种常用的实验方法，用于研究内皮细胞的管腔形成能力和血管生成的机制。
下面将介绍内皮细胞成管实验的详细步骤。
步骤一：细胞培养和准备1.1 培养内皮细胞：从小鼠或人的血管组织中分离内皮细胞，并将其培养在含有内皮细胞培养基的培养皿中，细胞密度一般为1×10^4 - 1×10^5个细胞/ml。
1.2 细胞的准备：用内皮细胞培养基洗涤细胞，将细胞悬浮于含有血清的培养基中。
步骤二：细胞的涂层和培养2.1 准备基质涂层：在培养皿中加入适量的基质涂层溶液（如胶原、玻璃纤维基质等），在室温下静置1小时或在4°C下静置过夜。
2.2 细胞的涂层：将细胞悬液加入基质涂层的培养皿中，使细胞均匀分布在涂层表面。
2.3 培养细胞：将培养皿放入细胞培养箱中，以37°C、5% CO2的条件下培养。
步骤三：细胞的处理和观察3.1 添加适当的刺激物：在培养基中加入适当的刺激物（如VEGF、FGF等），以促进内皮细胞的管腔形成。
3.2 处理时间的控制：根据实验的需要，控制细胞处理的时间，通常为24-72小时。
3.3 细胞的观察：使用光学显微镜观察培养皿中的细胞形态变化，特别注意细胞的管腔形成情况。
步骤四：结果分析和图像获取4.1 细胞成管评价：根据观察到的管腔形成情况，使用成管指数等评价指标对细胞成管能力进行定量分析。
4.2 图像获取：使用显微镜和成像设备获取细胞成管的图像，用于结果展示和进一步分析。
步骤五：数据分析和结果呈现5.1 数据的统计分析：使用合适的统计学方法对实验结果进行分析，比较不同处理组之间的差异。
5.2 结果的呈现：将实验结果以表格、图表或图片的形式进行呈现，准确描述实验结果和得出的结论。
内皮细胞成管实验是研究内皮细胞生物学功能的重要方法之一。
通过对内皮细胞的培养、处理和观察，可以深入了解内皮细胞的管腔形成过程和相关的信号通路。
1 关于淋巴管内皮细胞的分离和鉴定 淋巴系统是由广泛的淋巴管网络组成,主要功能是收集组织间隙中的液体和蛋白质并将它们输入循环系统,同时也是白细胞和肿瘤细胞的进出口。淋巴管通过引导白细胞和抗原从组织到淋巴结在启动免疫反应中发挥重要作用。因此,淋巴系统在维持组织液平衡、参与肿瘤转移和调节免疫等功能中扮演重要角色。淋巴管内皮细胞衬覆于淋巴系统管道的管腔面,是构成淋巴管壁的主要结构。近年来,随着人们对淋巴管系统认识的不断深入,淋巴管内皮细胞逐渐成为研究热点。 淋巴管瘤是由淋巴管内皮细胞增生和扩张形成的一种良性肿瘤,好发于舌、唇、颊及颈部。淋巴管瘤通过压迫和浸润周围组织引起组织器官功能破坏,目前治疗以手术为主,但存在术后容易复发等问题。有学者采用局部注射博莱霉素,或者高渗盐水等,但可能引起周围组织的免疫反应或瘢痕回缩,导致原始病症扩大。因此,人们期待新的治疗方法,从而克服上述治疗方法的缺陷。迄今为止,淋巴管瘤病因仍不清楚。本研究体外分离培养淋巴管瘤相关淋巴管内皮细胞,为研究淋巴管新生在淋巴管瘤复发及肿瘤淋巴结转移中的作用提供体外细胞模型。 1 材料与方法 1.1 材料 M199培养基、DMEM 培养基和胎牛血清均购于Gibco公司;胶原酶和collagen typeⅠ均购于sigma公司;鼠抗人FLT-4单克隆抗体购于Santa Cruz;兔抗人LYVE-1多克隆抗体购自RD公司;HRP-羊抗兔、HRP-羊抗鼠二抗均购于北京金桥公司;Cultrex BME 购于Trevigen公司;VEGF-C购于BD公司。舌淋巴管瘤标本来源于武汉大学附属口腔医院,本研究获得武汉大学附属口腔医院伦理委员会的批准。 1.2 淋巴管内皮细胞分离培养 舌淋巴管瘤标本分成两块,其中一块用4%多聚甲醛固定做蜡块,另一块置于冰M199培养基中(其中含10mg/L两性霉素、100u/mL青霉素、100mg/L链霉素和10%胎牛血清)用于分离细胞。组织取回后,在超净台内用Hanks液洗数次,用剪刀取出肿瘤周围的组织,xxxx0.5mm 大小,用0.25%(w/v,胶原酶/无血清DMEDM)胶原酶在37℃条件下消化45～60min;消化产物通过30mm孔径大小的过滤网过滤,过滤液1200r/min10min离心,然后用HankS液洗3次再次离心,用EGM 完全培养基重悬细胞,移至T25培养瓶,37℃、5%CO22
培养箱中培养。 1.3 免疫组织化学染色 石蜡切片常规脱蜡至水,切片置枸橼酸缓冲液(pH 6.0)中,用微波中高火加热5min,室温冷却,PBS缓冲液漂洗,5min加50L过氧化物酶阻断溶液,室温孵育15min,PBS缓冲液漂洗,5min吸干PBS缓冲液,加50L正常羊血清37℃ 封闭10min后吸去不洗;加适当稀释度的一抗4℃孵育过夜;PBS缓冲液漂洗,5min3次,加辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育30min;PBS缓冲液漂洗,5min3次,加新鲜配制DAB溶液染色,显微镜下观察出现阳性棕黄色着色时终止(5min);自来水冲洗,苏木素复染5min,1%盐酸酒精作用10s;自来水冲洗,1氨水浸泡30s;梯度酒精脱水(70%,80%,95%和100%各2min),二甲苯透明5min,中性树胶封片。 1.4 电镜标本的制备 淋巴管内皮细胞接种后24h换液。72h用2.5%戊二醛磷酸缓冲液(pH 7.2)固定1h,然后用橡皮铲刮下贴壁生长的淋巴管内皮细胞,连同固定液移入离心管,离心(2000r/min)10min。沉淀物用1%锇酸固定,梯度乙醇脱水,树脂包埋,超薄切片,枸橼酸铅及醋酸铀染色,日立H-600透射电镜下观察。 1.5 细胞增殖实验 将淋巴管内皮细胞制成细胞悬液,进行细胞记数。1104 个细胞接种于96孔板,加入含10%胎牛血清DMEM 200L,在37℃、5%CO2的培养箱中培养,1g/L MTT溶液加入每孔,培养4h,弃去MTT溶液,每孔加入DMSO(二甲基亚砜)中止,振荡15min,酶标仪测定560nm波长的A 值,绘制曲线。实验重复3次。 1.6 细胞体外成管试验 取200LⅠ型胶原(2g/L)加入24孔板中,37℃作用30min,使胶凝固;每孔加入约1104 个淋巴管内皮细胞于胶表面。置37℃、5%CO2培养箱中孵育培养7d,期间倒置显微镜观察并拍照记录,胶原胶固定于2.5%戊二醛,透射电镜观察形成管腔的超微结构。 2 结果 2.1 舌淋巴管瘤标本HE染色及免疫组织化学染色 HE染色结果显示舌淋巴管瘤组织中有大量扩张和增生的淋巴管,管腔中未见血细胞,而见少量淡染的液体,为管腔内残留的淋巴液。免疫组织化学染色结果显示,管腔中内皮细胞均高表达目前公认的淋巴管内皮细胞特异性标志物FLT-4、和LYVE-1,与文献报道一致。因此,可以认为淋巴管瘤为分离淋巴管内皮细胞提供了可靠的标本来源。 2.2 淋巴管内皮细胞的形态和超微结构 原代培养淋巴管内皮细胞生长较为3
缓慢,单层贴壁生长,显微镜下见细胞呈扁平的梭形或多边形,大小均匀,胞核呈卵圆形,有核的区域较无核的区域突出,培养14d左右生长至约90%融合。原代细胞生长至90%融合度时开始传代,淋巴管内皮细胞多在接种1h后开始贴壁,多个细胞组成的细胞团更易贴壁和分裂增殖,贴壁后的细胞呈梭形、三角形或多边形,形态与原代细胞相似,但生长速度较快,约7d融合,从传代第2天开始迅速增殖,至第6天开始生长缓慢,体现内皮细胞生长特有的接触抑制现象;当内皮细胞长满形成单层后,呈现典型的 铺路石 样外观,其中中央细胞较小而密集,周边细胞大而不规则,排列松散,其间可见少数几个梭形细胞。透射电子显微将观察淋巴管内皮细胞的超微结构,细胞呈鳞片状单层排列,镜下见大部分细胞呈团存在,可见细胞间的紧密或缝隙连接,可见内皮细胞特异性颗粒weibel-palade小体;可见到其它内皮细胞特征性细胞器如胞质小突和质膜小泡等。 2.3 淋巴管内皮细胞的体外增殖和成管实验 体外增殖实验显示淋巴管内皮细胞于第3天开始进入增殖活跃期,第5天进入高峰期,第6、7天进入平台期。体外成管实验显示淋巴管内皮细胞在Ⅰ型胶原培养基中可以形成管腔样的结构,并且随着培养时间的延长,从不同方向形成的管腔互相连接,形成类似于体内的复杂的三维淋巴管网络。透射电子显微镜观察管腔样结构的超微结构,可见由淋巴管内皮细胞围成的管腔,在这种细胞外基质成分存在的条件下,相邻细胞间的紧密或镶嵌重叠连接可见,模拟了体内淋巴管内皮细胞与细胞外基质相互作用的过程。 3 讨论 淋巴管瘤与淋巴管的扩张和异常增殖有关,Sironi M 等研究者在小鼠腹腔内注射弗氏不完全佐剂产生淋巴管瘤,然后再分离培养,得到鼠源性淋巴管内皮细胞,用于研究淋巴管内皮细胞的生物学特性,为研究淋巴管发生提供了细胞模型。本文中应用的舌淋巴管瘤标本,其病理特征与以往报道的淋巴管瘤病例一致。HE染色结果显示切片中有大量扩张的淋巴管,管腔中没有血细胞,而是有少量嗜伊红淡染的淋巴液;为进一步确定这些扩张管腔的性质,应用免疫组化染色检测淋巴管内皮细胞标志物的表达,结果显示管腔内皮细胞均表达FLT-4和LYVE-1,证实了其淋巴管的性质。因此,舌淋巴管瘤是淋巴管内皮细胞非常有价值的标本来源。 4
本文应用胶原酶消化法分离淋巴管内皮细胞,处理标本时应注意避免肿瘤周围舌组织细胞的污染,尽量去除周围组织,保证分离细胞的纯度;多次用含高浓度抗生素溶液洗涤去除组织表面的细菌和真菌。胶原酶作用时间的控制是能否得到高纯度目的细胞的关键,作用时间太短,得到的细胞较少,不易培养;时间太长,容易导致一些杂细胞的污染。在发现淋巴管内皮细胞特异性标志物之前,研究者大部分应用胶原酶消化法分离细胞。近年来,由于淋巴管内皮细胞标志物的发现,学者们开始应用免疫磁珠从各种不同组织中分离淋巴管内皮细胞。Simona Podgrabinska、Ernst Kriehuber和Taija Makinen等人分别应用标记有LYVE-1、Podoplanin和VEGFR-3抗体的磁珠从组织中分离相关亚型的淋巴管内皮细胞。事实上,这类方法分离得到的只是部分亚型的淋巴管内皮细胞,而且可能有其它细胞的污染如血管内皮细胞,不能较全面反映淋巴管内皮细胞的生物学特点;胶原酶消化法也有可能造成杂细胞的污染,如血管内皮细胞,间质细胞等等。为了得到较高纯度的淋巴管内皮细胞,本实验利用内皮细胞比较容易且呈团被消化的特性,使淋巴管内皮细胞与较难消化的污染细胞分开,传代时换新的培养瓶,弃去未被消化的细胞;同时,EGM培养基中添加能够选择性使淋巴管内皮细胞增殖的生长因子VEGF-C,有报道VEGF-C能够选择性使淋巴管内皮细胞增殖,而对血管内皮细胞没有作用;同时,有文献报道在内皮细胞培养基中加入适量的肝素能增强内皮细胞的生长能力,并能降低生长因子的用量,以便细胞长期培养,并保持细胞表型不变。因此本文在培养基中添加了肝素,在最大程度上获得高纯度淋巴管内皮细胞,并保留其在体内的分子表型和生物学特性以供研究。 在倒置显微镜下,淋巴管内皮细胞生长至80%～90%融合时,呈典型的内皮细胞形态学特征的 铺路石 样外观。传代培养后,收获细胞在透射电镜下观察超微结构,如以往文献报道,可以看到内皮细胞特征性颗粒weibel-palade小体;在超微切片中也可见到大量的胞质小突和质膜小泡等淋巴管内皮细胞特征性细胞器,也可见到细胞间的紧密和缝隙连接。细胞在Ⅰ型胶原培养基中形成复杂的管腔样网络,透射电镜观察证实淋巴管内皮细胞具有体外形成淋巴管样结构的能力,特征性细胞间的重叠连接,作为细胞间液中的液体和颗粒进出淋巴管的瓣膜,在电镜切片中均可见到。 本实验提示舌淋巴管瘤提供了宝贵的淋巴管内皮细胞标本来源,体外分离培
