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ABI7500校正步骤

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ABI7500校正
软件版本：SDS 2.0.4或1.4
1.校准前准备
A.原校准文件备份
到SDS Documents中把原校准文件拷出来进行备份，以防如果本次校准某个环节没通过，还可以使用原校准文件，以保证机器的运行。

B.校正试剂板融化回复到室温
C.准备96孔反应盘托
2.校准
1.ROI（region of interest）校准
试剂板采用ROI（含各种荧光染料），先后校正五个通道。

进入1.4software中点击instrument，在下拉菜单中选择calibrate；
A.首先点击block up让热盖升起
B.点击Snapshot照相，如果96孔没有全呈现白色，调节Exposure Time,然后再点击
Snapshot进行照相，直到96孔刚好到都呈现白色和极个别孔有一点点红色之间的临界状态，然后点击Generate Calibration查看校正的结果，当Weels Found显示数值为96，Save Calibration显示为可点击状态时这个通道校正成功，然后点击Save Calibration保存校正结果，此时下面的通道符号后对应显示为OK。

依次将5个通道校正完毕。

C. 如果因灯光强度不足造成校正通过不了，可清洁灯泡或更换卤素灯，然后再做校正。

2.背景校准：
A.原理：7500使用背景校正文件去除以后实验中的背景荧光，主要检测通道是否有污染
存在，试剂盘里为纯水
B.判断标准：A-D通道不能超过72000；E通道不能超过90000
1.4版本软件和
2.04版本软件适用这同一标准
C.校正步骤
C.1 1.4软件在New Document中的Assay的下拉菜单中选择Background，
2.04软件在Instument Maintenance Manager中选择Background
C.2 放入Background试剂盘，运行程序
C.3 结果分析：A-D通道不能超过72000；E通道不能超过90000
C.4 BLOCK清洁处理：对于Background数值超过标准的孔用纯水处理BLOCK，无纺布
擦干，再用10%乙醇处理BLOCK，无防布擦干。

C.5 清洁过后再次进行Background校正，达到标准后点击Extract将数据结果提取到文件
中。

图1为09年6月17日做的背景校正，各孔线均匀整齐，都在范围之内。

图2为10年11月3日做的背景校正，孔A6 A通道荧光值超过72000
此仪器目前使用09年的校准数据，因孔的不正，有所偏移，各别孔的荧光值无法准确读取，直接影响到CT值。

3.光学校正：
A．原理：7500软件产生五通道对于7500系统物理影响的数据补偿。

B．试剂盘：ROI试剂盘
C．校正步骤
C.1 1.4软件在New Document中的Assay的下拉菜单中选择Calibration，
2.04软件在Instument Maintenance Manager中选择Optical Calibration
C.2 放入ROI试剂盘，运行程序，60度5min
C.3 结果：5个通道都有一定的数值范围。

C.4点击Extract将数据结果提取到文件中。

4.纯荧光校正：
A.原理：使用96 孔纯荧光反应板运行程序，获得纯荧光数据，以确定仪器中所使用的纯
荧光特征。

对以下十种荧光进行校正。

B.试剂盘：dye试剂盘
C.校正步骤
C.1 1.4软件在New Document中的Assay的下拉菜单中选择Pure Spectra，
2.04软件在Instument Maintenance Manager中选择Pure Spectra
C.2 放入dye试剂盘，依次完成10个染料的校正，每个程序运行，60度5min
每个染料校正完应进行提取保存。

1．CY3
2．CY5
3．FAM
4．JOE
5．NED
6．ROX
7．SYBR
8．TAMRA
9．TEXAS RED
10．VIC
注：1.4软件校正完后要手动提取校正文件，2.04整个校正时连贯了自动分析提取校正结果。

合集下载

PCR实验室7500SOP

PCR实验室7500SOP

PCR实验室7500SOP【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使⽤、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.⽬的：确保ABI7500仪器的正确使⽤及正常运⾏2.适⽤范围：美国应⽤⽣物系统公司⽣产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运⾏环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。

通风：仪器的通风应该没有阻挡。

温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。

湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。

空间：易于操作，安全。

4.操作程序：4.1开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机⾯板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进⾏实验。

关机顺序：确认实验已经结束后，⾸先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。

4.2 创建绝对定量反应板⽂件：4.2.1依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌⾯双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。

4.2.2选择 File （⽂件） > New （新建）。

4.2.3在 New Document Wizard （新建⽂件向导）窗⼝中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。

接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空⽩96 孔板）和 Blank Document（空⽩反应板））。

4.2.4在 Default Plate Name （默认反应板名）字段中输⼊反应板⽂件名，或接受默认⽂件名。

ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程

ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程

ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程1. 目的：使ABI 7500 型核酸扩增荧光检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

2. 范围：适用于ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用操作。

3. 职责：操作人按照规程进行仪器的操作使用。

4. 程序：4.1 开机。

连接好所有连线，打开接线板开关，然后依次打开主机开关（在主机侧面），电脑显示器开关（按屏幕下方开关按钮），电脑开关（主机前面按钮）。

使用鼠标双击桌面上一体化仪3.2图标，连机后打开应用程序。

4.2 编辑样品板。

在区域选择界面中进行样品板编辑，同时输入待检样品的相关信息。

4.3 编辑实验程序。

在温度控制界面中进行程序编辑。

4.4 进行实验。

设定完成样品板和实验程序后，将实验样品按样品板设定的位置放入样品槽内，然后将样品槽放入主机内，在程序主界面下点击开始读图标开始运行实验。

实验过程中屏幕的下半部分同步显示实验的运行状态。

4.5 实验中仪器将实时显示每次的样品检测结果：在实验进行中间或实验结束后，均可组合界面中查看实时的检测结果：4.6 定量分析：实验结束后，可以点击定量图标进入定量分析功能。

4.7 打印报告单：定量完毕后，用鼠标单击文件（F）菜单中的刷新病历数据信息，用鼠标单击文件（F）菜单中的打印，系统将自动生成检测报告单，并进行打印。

4.8 关机。

实验全部结束后，可先点击Files菜单Save Data File保存实验结果，然后关闭Opticon Monitor。

依次关闭计算机主机，显示器，ABI 7500主机。

5. 相关文件：无6.相关记录：仪器设备使用、维护保养和清洁记录。

ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程

ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程

1. 目的为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪，保证扩增及结果分析的标准化、规范化，特制定本规程。

2. 适用范围适用于本公司ABI7500荧光定量PCR仪的操作。

3. 职责3.1使用人员负责本规程的实施。

3.2 设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。

3.3 质量监督员负责监督本规程的实施。

4.内容4.1 程序设置4.1.1 打开电脑及仪器电源，待仪器电源项显示power绿色状态。

4.1.2 双击电脑桌面上的7500 software V2.3 图标打开程序，打开程序单击OK，待软件连接仪器并测试校准状态后（若有出现连接失败可尝试重启电脑，检查USB线接口），出现如下界面，单击Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。

下拉菜单中有一个Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：点击这个选项，可以进入下面这个界面，①②③如上图所示，红色箭头从上到下指示的分别是①实验名称、②仪器型号和③反应程序类型。

（带*号的必需填）此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全），红色箭头从上到下指示的分别是①Plate Setup 选项、②探针类型和③程序应用速度类型，一般使用的探针就是TaqMan 探针，速度类型选择默认就可以了（如果是7500fast 的话则有快速模式可以选择）。

下一步我们可以看到左上角的红色箭头指示的一个Plate Setup 选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。

红色箭头①和②指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头③处可以填写反应探针名称（如P1,HBV ,HCV ）。

箭头⑤是选择报告荧光，一般使用的发光基团是FAM ，箭头⑥是选择粹灭荧光，达安现在使用的是TAMRA 荧光，科华现在使用的是BHQ ，在这个仪器中无此选择项，那么就选择none 。

箭头⑧处可以填写样品名称。

点击箭头④和箭头⑨处可以添加反应探针体系名称和样品名称。

ABI7500 Fast PCR作业指导书

ABI7500 Fast PCR作业指导书

1、目的规范该型号ABI7500Fast荧光定量PCR仪操作程序，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行，操作人员人身安全和设备安全。

2、适用范围适用于ABI7500Fast荧光定量PCR仪的使用操作与维护。

3、职责3.1 操作人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护。

3.2 保管人员负责对仪器进行定期维护、保养。

3.3 科室负责人监督检查本操作程序的执行。

4、操作程序4.1启动笔记本电脑，进入Windows XP系统。

4.2待电脑桌面图标出现后，打开ABI7500Fast荧光定量PCR仪主机电源。

4.3待主机电源指示灯亮后，双击电脑桌面7500 SDS图标，打开软件。

4.4新建文件：在Quick Startup document窗口点击Create New Document 按钮，出现New Document Wizard窗口，在Assay菜单中选择Standard Curve （Absolute Quantification），点击Finish按钮后打开一个空白96孔板文件。

4．5探针设置：双击任意一个孔打开Well Inspector窗口。

4．6点击Add Detector按钮，打开Detector Manager窗口，选择Detector List中的探针，例如用的是TaqMan-FAM标记探针，在列表中选择Reporter：FAM，Quencher：TAMRA；如果用的是SYBR Green I，则在列表中选择Reporter：SYBR，Quencher：（none）。

选择所需探针，按住Ctrl键可选择多个探针，再点击Add To Plate Document 按钮，最后点击Done按钮关闭Detector Manager窗口。

此时Well Inspector窗口仍然是打开的。

填样品表：在96孔表中选择有样品的一个或者多个孔，然后在Well Inspector窗口的Sample Name输入样品的名称，在探针列表中的Use项下的方框中打钩选择要用的探针，在Task栏中选择指定样品类型：未知样品选择Unknown，阴性对照选择NTC，标准品选择Standard。