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高效液相色谱法同时测定人血清中5-氟尿嘧啶及其代谢物5-脱氧尿苷

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（四）标准溶液的配制１．标准溶液：准确称取３５０．０ｍｇ　２，４－ＤＣＰＴＡ标样于１００ｍｌ容量瓶中，用甲

醇稀释至刻度。２．内标溶液：准确称取１．２０００邻苯二甲酸二戊酯于１００ｍｌ容量瓶中，用甲醇稀释至刻

度。

结果与讨论

（一）分离条件的选择在以甲醇－水为流动相

的反相色谱分离中，２，４－ＤＣＰＴＡ的色谱峰形极差，保留时间长。在甲醇－水流动相中分别加入氨水、

ＥＤＴＡ钠盐、四甲基氢氧化铵，色谱峰形均得到改善，保留时间缩短，其中四甲基氢氧化铵效果最佳。分离情况见图１，各峰用标样保留时间确定。（二）线性关系分别吸取１．０、２．０、３．０、４．０、

５．０ｍｌ标准溶液于５个１０ｍｌ容量瓶中，各加入２．０ｍｌ内标溶液，用甲醇稀释至刻度。每个实验点进样三次，令２，４－ＤＣＰＴＡ与内标的质量比为Ｘ，峰面积比为Ｙ，测得回归方程：Ｙ＝１．９０１Ｘ＋．０１１，相

关系数＝０．９９９９。

（三）方法的精密度准确称取三个不同含量的２，４－ＤＣＰＴＡ样品配成３．５０ｍｇ／ｍｌ的甲醇溶液，分别吸取５．０ｍｌ上述溶液于３个１０ｍｌ容量瓶中，各加入２．０ｍｌ内标溶液，用甲醇稀释至刻度。每个样品测定六次，变异系数均０．５２％，结果见表１。

（四）回收率试验在２，４－ＤＣＰＴＡ样品溶液中分别加入三个不同量的标样进行回收试验，回收率

为１００．１１０１．８％。本法操作简单、快速，结果准确，不但适合产品的分析，而且可以监测生产过程中其它组分的情况。

表１　２，４－ＤＣＰＴＡ含量分析结果

参考文献

［１］　Ｅｅｓｔ　Ｈａｙｍａｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ．３５（２），１８６（１９８７）．（收稿日期：１９９２年８月７日，修回日期：１０月１８日）Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ

２，４－ＤＣＰＴＡ　ｂｙ　Ｈｉｇｈ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　（ＨＰＬＣ）　Ｌｉａｏ　Ｙｕａｎｒｏｎｇ，ＧｕａｎｇｘｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ，５３０００１

Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｄｅｓｃｒｉｂｅｓ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ

ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ　２，４－ＤＣＰＴＡ［２－（２，４－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙ）　ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ］　ｂｙ　ＨＰＬＣ．

Ｔｈｅ　ＵＶ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　（２８０ｎｍ）　ａｎｄ　Ｎｏｖａ－Ｐａｋ　Ｃ１８　ｃｏｌｕｍｎｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ０．０６％　（ＣＨ８）４ＮＯＨ　ｉｎ　ｗａｔｅｒ　（７８：２２，Ｖ／Ｖ）．Ｔｈｉｓ

ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ．

高效液相色谱法同时测定人血清中

５－氟尿嘧啶ぜ及捌其代谢物５－脱氧尿蜍

刘会臣朱光文肖大伟

（白求恩国际和平医院，石家庄，０５００８２）

５－氟尿嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，５－ＦＵ）是治疗消化道恶性肿瘤的首选药，为探讨其最佳给药方案，本文利用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）建立了同时测定人血清

中５－ＦＵ及其活性代谢物５－脱氧尿苷（５－ｆｌｕｏｒ

ｏ－２＇ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，５－ＦＵｄＲ）的分析方法。

实验部分

（一）药品与试剂５－ＦＵ为上海第十二制药厂产品，５－溴尿嘧啶（５－ｂｒｏｍｏｕｒａｃｉｌ，５－ＢｒＵ）为上海化

学试剂二厂产品，５－ＦＵｄＲ为瑞士Ｆｌｕｋａ公司产品；醋酸乙酯、异丙醇为分析纯，甲醇为紫外光谱纯；实

验用水为灭菌注射用水。（二）仪器与测定条件日本岛津ＬＣ－４Ａ型

ＨＬＰＣ，ＳＰＤ－２ＡＳ型紫外检测器，Ｃ－Ｒ２ＡＸ型记录仪。ＹＷＧ－Ｃ１８Ｈ３７（４．６ｍｍ　ｉ．ｄ．２５０ｍｍ）色谱柱，天津化学试剂二厂产品。流动相为水：甲醇：醋酸缓

冲液（ｐＨ　６．１）＝９３．５：６：０．５，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ紫外检测波长２５０ｎｍ。以５－ＢｒＵ（１２０ｇ／ｍｌ）为内标定

量分析。（三）血清处理１０ｍｌ试管中加正常人血清０．１ｍｌ和提取液（乙酸乙酯：异丙醇＝１７：３，

Ｖ／Ｖ）３ｍｌ，振荡、离心各４ｍｉｎ；提取两次，共取５ｍｌ，氮气吹干；加０．１ｍｌ流动相，混匀、离心后进样

（２０ｌ）分析。（四）标准曲线取不同浓度的５－ＦＵ和５－ＦＵｄＲ的甲醇溶液１０ｌ，加至含有１０ｌ内标和０．１ｍｌ正常人血清的试管中，按上述血样处理法操作后进样分析；以已知浓度为横坐标，以峰高比值为

纵坐标绘制标准曲线。

实验结果

（一）色谱行为如图１所示，在上述条件下可得到良好的分离效果，５－ＦＵ、５－ＢｒＵ和５－ＦＵｄＲ的保

留时间分别为４．５、９．０和１０．３ｍｉｎ。

（二）线性关系血清中５－ＦＵ在０．０５５０ｇ／ｍｌ范围内的线性回归方程为Ｙ＝０．２０４５＋󰀀０．２７１６Ｘ（＝０．９９９９，ｎ＝６），５－ＦＵｄＲ在０．１～５０ｇ／ｍｌ范围内的线性回归方程为Ｙ＝０．０５４３２󰀀０．０７２２４Ｘ（＝０．９９９１，ｎ＝８）󰀀表１日内变异及回收率（ＸＳＤ，ｎ󰀀５）

（三）回收率及重复性方法同标准曲线制作，在同一天内于不同时间或隔日于同一时间提取并测定浓度为２１０及３５ｇ／ｍｌ的样品，共５次。结果见

表１和表２。表２日间变异及回收率（ＸＳＤ，ｎ＝５）

讨论

与文献方法［１，２］相比，本文方法以乙酸乙酯加少

量异丙醇为提取液，并分两次提取，提高了５－ＦＵ和５－ＦＵｄＲ的萃取回收率；以２５０ｎｍ为检测波长，提高了检测灵敏度。另外，本法仅需人血清０．１ｍｌ，更适

于临床应用。

参考文献

［１］　Ａ．Ｒ．Ｂｕｃｋｐｉｔｔ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０６，４３２

（１９８０）．［］　赵斌等，中国药理学报，９，２７５（１９８８）．（收稿日期：１９９２年１１月３０日，修回日期：１９９３年２月２７日）Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　５－Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ　５－Ｆｌｕｏｒｏ－２＇－ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ　ｉｎＨｕｍａｎ　Ｓｅｒｕｍ　Ｌｉｕ　Ｈｕｉｃｈｅｎ，Ｚｈｕ　Ｇｕａｎｇｗｅｎ　ａｎｄＸｉａｏ　Ｄａｗｅｉ，Ｔｈｅ　Ｂｅｔｈｕｎｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｐｅａｃｅ

Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ，０５００８２Ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　５－ｂｒｏｍｏｕｒａｃｉｌ（５－ＢｒＵ）ａｓ　ｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄ，ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ

ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ　（５－ＦＵ）　ａｎｄ　ｉｔｓｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，５－ｆｌｕｏｒｏ－２＇－ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ　（５－ＦＵｄＲ），ｉｎｈｕｍａｎ　ｓｅｒｕｍ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．５－

ＦＵ，５－ＢｒＵ　ａｎｄ５－ＦＵｄＲ　ｗｅｒｅ　ｗｅｌｌ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｏｎ　ａ　ｃｏｌｕｍｎ　ｏｆ　ＹＷＧ－

Ｃ１８Ｈ３７．Ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ．５－ＦＵ（０．０５－５０ｇ／ｍｌ）：Ｙ＝０．２０４５

＋０．２７１６Ｘ（Ｙ＝０．９９９９，ｎ＝６）；５－ＦＵｄＲ（０．１－󰀀５０Ｋｇ／ｍｌ）：Ｙ＝０．０５４３２＋０．７２２４Ｘ（＝０．９９９１，ｎ

＝８）．Ｆｏｒ　ｗｉｔｈｉｎ－ｄａｙ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ，ｔｈｅ　ｍｅａｎｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　５－ＦＵ　ａｎｄ　５－ＦＵｄＲ　ｗｅｒｅ　９８．４％（ＣＶ＝３．３％，ｎ＝５）　ａｎｄ　９８．２％（Ｃ＝４．７％，ｎ＝５）

ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｆｏｒ　ｂｅｔｗｅｅｎ－ｄａｙ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ，ｔｈｅｍｅａｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　５－ＦＵ　ａｎｄ　５－ＦＵｄＲ　ｗｅｒｅ　９６．９％（ＣＶ＝３．５％，ｎ＝５）　ａｎｄ　９８．５％　（ＣＶ＝４．９％，ｎ

＝５）　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．

低压离子色谱法分析水溶液中微量铝＊

张新申蒋小萍

（成都科技大学皮革系离子色谱研究室，成都，６１００６５）

水溶液中微量铝的测定，目前最常用的方法有比色法、原子吸收光谱及等离子体发射光谱法等。比色法耗时，用手工操作，容易引入误差且选择性较

差，常受共存离子干扰，试液ｐＨ值对显色条件有一定影响。光谱法仪器昂贵，基体干扰也较明显。测定

水溶液中微量铝，迄今仍缺少比较理想的方法。美国Ｄｉｏｎｅｘ公司的离子色谱仪（为高压体系），用试钛灵（Ｔｉｒｏｎ）１］或邻苯二酚紫（ＰＶ）为显色剂测定铝。我们采用低压离子色谱法，以铬天氰Ｓ（ＣＡＳ）为显色剂

（加入六次甲基四胺），测定水溶液中微量铝，检测灵敏度明显优于Ｔｉｒｏｎ和ＰＶ，获得了满意的结果。

实验部分

（一）仪器ＺＪ－２低压过渡金属离子色谱仪（带光学检测器、柱后混合器及反应器）。色谱柱为Ｃ３低

压柱（５５０ｍｍ）。工作压力为１．９６２．９４１０５Ｐａ。（二）标准溶液配制称取１．７５８４ｇ　ＫＡｌ（ＳＯ４）２・１２Ｈ２Ｏ，用约１００ｍｌ水溶解，加浓Ｈ２ＳＯ４　１．０ｍｌ，再用水稀释至１０００ｍｌ，摇匀，浓度为１００ｇＡ１３＋／ｍｌ，将此液稀释２０倍，获得５ｇ／ｍｌ　Ａ１３＋标准溶液。吸取此标液０．１０００．２０００．４００、０．６００、０．８００１．０００ｍｌ于

六只１０ｍｌ容量瓶中，各加入０．２ｍｌ　１．０ｍｏｌ／Ｌ的ＨＮＯ３，用水稀释至刻度，摇匀，获得Ａｌ３＋离子浓度

为０．１００、０．２００、０．４００、０．６００、０．８００１．０００ｇ／ｍｌ的Ａｌ３＋标准溶液。在色谱仪上进样１５０ｌ，获得Ａｌ３离子的一系列色谱图，以峰高对浓度作图，获标准工

作曲线。（三）显色液配制称ＣＡＳ　０．１００ｇ置于５００ｍｌ容量瓶中，加水４００ｍｌ，无水乙醇５０ｍｌ，摇动，加六次甲基四胺１５ｇ，振摇至全部溶解，水稀释至刻度，摇匀备用，含ＣＡＳ　０．０２，乙醇１０％，六次甲基四胺

３％。

结果与讨论

（一）色谱条件选择１．洗脱液选用５１０－３ｍｏｌ／Ｌ　Ｈ２ＳＯ４０．２ｍｏｌ・Ｌ－１（ＮＨ４）２ＳＯ４为洗脱液。洗脱液浓度再降低时，

色谱峰较宽，灵敏度降低。若增加洗脱液浓度，则Ｃｕ２Ｆｅ３＋等离子与Ａｌ３离子分离效果变差。

２．柱后显色液（反应液）Ｄｉｏｎｅｘ公司的离子色谱仪，用Ｔｉｒｏｎ或ＰＶ为显色剂，ｍｘ分别为３１０ｎｍ和５７０ｎｍ，本文试用铬天氰Ｓ－六次甲基四胺显色体

系，ｍａ为５３０ｎｍ，获得很高灵敏度，比ＰＶ法高５６倍，比Ｔｉｒｏｎ法高１个数量级以上，且基线稳定，噪

音小。

（二）工作曲线和检测限

在Ａｌ３

＋浓度为０２０ｇ／ｍｌ范围内，峰高与浓

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HPLC法测定生物羊膜浸泡5—氟尿嘧啶药物吸收量

HPLC法测定生物羊膜浸泡5—氟尿嘧啶药物吸收量

HPLC法测定生物羊膜浸泡5—氟尿嘧啶药物吸收量

目的 建立生物羊膜（面积为8mm×10mm）中5-氟尿嘧啶（5-Fu）浓度的HPLC测定法以观察不同浸泡时间生物羊膜浸泡5-Fu药物吸收量。 方法 色谱柱为Diamonsil（钻石）C18（4.6mm×250mm，5?m），流动相为甲醇-水（2︰98），流速为1.0mL/min，紫外检测波长为266nm，生物羊膜吸收液为5-氟尿嘧啶注射液（标示量为10mL；0.25g），吸收后用流动相提取，进样测定。 结果 以5-氟尿嘧啶峰面积为纵坐标，5-氟尿嘧啶浓度为横坐标，5-Fu在2～100?g/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9995），浸泡5min，吸收5-Fu为59.004μg/片，浸泡5min，吸收5-Fu为75.839μg/片。 结论 生物羊膜能够吸附一定量的5-氟尿嘧啶，通过测定羊膜中吸收的5-氟尿嘧啶的量，为临床以及基础合理用药提供依据。

[Abstract]Objective To establish a HPLC method for determination the

concentration of 5-fluorouracil（5-Fu） in biological amniotic membrane （area was

8mm×10mm） to observe the absorption of 5-Fu different soaking time in biological

amniotic membrane. Methods Determination was achieved on a Diamonsil

（diamonds） C18 （4.6mm×250mm， 5 ?m） with the mobile phase of

methanol-water （volume ratio of 2︰98）. The flow rate was 1.0mL/min， the UV

5-HTP和5-HT含量测定方法的建立

5-HTP和5-HT含量测定方法的建立

5-HTP和5-HT含量测定方法的建立

杨家丽;曾西;王晓敏;黄开勇;邓宇;杨骏;杨莉

【摘 要】目的:建立定性定量分析人体血清中5-羟色氨酸(5-HTP)和5-羟色胺(5-HT)含量的测定方法.方法:5-HTP、5-HT标准品和血清样品经过处理后,采用高效液相色谱一荧光检测法(HPLC-FLD)进行含量检测.结果:5-HTP和5-HT在9 min内完全分离,色谱峰分离良好.5-HTP和5-HT标准液日内和日间精密度、样品稳定性的相对标准偏差(RSD)均＜5％,加标回收率均在90％～110％之间.正常人血清中5-HTP的含量为(219.14±15.94)μg/L,5-HT的含量为(113.74±31.26)μg/L.结论:采用HPLC-FLD测定血清5-HTP和5-HT含量快速准确、特异性好、灵敏度高、重复性好,适用于临床和科研工作.

【期刊名称】《广西医科大学学报》

【年(卷),期】2015(032)006

【总页数】3页(P1007-1009)

【关键词】高效液相色谱一荧光检测法;血清;5-HTP;5-HT

【作 者】杨家丽;曾西;王晓敏;黄开勇;邓宇;杨骏;杨莉

【作者单位】广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室 南宁530021;广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室 南宁530021;流行病与卫生统计学教研室;广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室 南宁530021;广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室 南宁530021;广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室 南宁530021;广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室 南宁530021 【正文语种】中 文

【中图分类】R113

5-羟色胺(5-HT)是一种重要的神经递质,它与一系列疾病有关,例如胃肠道功能性疾病、原发性高血压等,同时也与许多精神障碍有关,例如抑郁症、精神分裂症、强迫症等[1]。5-羟色氨酸(5-HTP)在人体内可作为5-HT的前体物质，被认为有助于提高5-HT水平。5-HT能神经递质的检测方法有荧光测定法、放射免疫法、气相色谱法、气相色谱—质谱串联法、高效液相色谱法等[2]，近年来有文献报道使用酶联免疫吸附试验检测[3]。但高效液相色谱法由于其高灵敏度、高特异性、样品用量少、干扰因素少、可同时测定5-HT及其相关物质等特点依旧受到研究人员的青睐，更为普遍。本实验通过优化色谱条件，旨在提供一种简单快捷的测定方法。

高效液相色谱-串联质谱法检测人血浆中5-羟色胺

高效液相色谱-串联质谱法检测人血浆中5-羟色胺

作者简介:张杰,女,主管药师,主要从事体内药物分析方面的研究.　△　通信作者,EＧmail:jiangyi１０２５＠yahoo．com.本文引用格式:张杰,郭海洋,曹海微,等．高效液相色谱Ｇ串联质谱法检测人血浆中５Ｇ羟色胺[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(２２):２７３７Ｇ２７４０．论著􀅰临床研究高效液相色谱Ｇ串联质谱法检测人血浆中５Ｇ羟色胺

张　杰１,郭海洋１,曹海微１,姜　义２△(１．吉林大学第一医院,吉林长春１３００２１;２．吉林大学第二医院,吉林长春１３００２１) 摘　要:目的　建立高效、准确的高效液相色谱Ｇ串联质谱法(HPLCＧMS/MS)测定人血浆中５Ｇ羟色胺(５ＧHT)的方法,并应用于临床及科研的生物样本检测.方法　该方法采用奥卡西平作为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白,用初始流动相稀释后经AgilentZORBAXEclipseXDBＧC８色谱柱进行分离,流动相为０．２％甲酸水Ｇ乙腈,梯度洗脱.采用电喷雾离子源(ESI),正离子、多反应监测模式(MRM)进行监测,用于定量分析的离子为质荷比(m/z)１７７→１６０.结果　５ＧHT在１０~８００ng/mL范围内线性良好(r＞０．９９９),定量下限为１０．０ng/mL.待测物日内、日间相对标准偏差均小于１５％.符合生物样品分析要求.结论　本方法适合临床及科研的生物样本中５ＧHT的快速检测.关键词:５Ｇ羟色胺;　血浆;　高效液相色谱;　质谱DOI:１０．３９６９/j．issn．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．２２．００５中图法分类号:R４５７．１＋４文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)２２Ｇ２７３７Ｇ０４文献标识码:A

Determinationof５ＧhydroxytryptamineinhumanplasmawithhighperformanceliquidchromatographyＧtandemmassspectrometryZHANGJie１,GUOHaiyang１,CAOHaiwei１,JIANGYi２△(１．JilinUniversityFirstHospital,Changchun,Jilin１３００２１,China;２．JilinUniversitySecondHospital,Changchun,Jilin１３００２１,China)Abstract:Objective　ToestablishanefficientandaccuratehighperformanceliquidchromatographyＧtanＧdemmassspectrometry(HPLCＧMS/MS)methodforthedeterminationof５Ｇhydroxytryptamine(５ＧHT)inhumanplasma,andtoapplyittothedetectionofbiologicalsamplesinclinicalandscientificresearch．Methods　Okasepinwasusedastheinternalstandard,theplasmasampleswereprecipitatedproteinwithacetonitrile,andthenseparatedbyAgilentZORBAXEclipseXDBＧC８chromatographiccolumn．Themobilephasewas０．２％acetonitrileandgradientelutionwasusedaselutioncondition．Electrosprayionsource(ESI),positiveionsandmultiＧreactionmonitoringmode(MRM)wereusedformonitoring,andtheionsusedforquantitativeanalysiswerem/z１７７→１６０．Results　５ＧHTwaswelllinearintherangeof１０－１０００ng/mL(r＞０．９９９),andthelowerlimitofquantitationwas１０．０ng/mL,bothrelativestandarddeviationofintraＧdayandinterＧdaywerelessthan１５％,whichmeettherequirementsofbiologicalsampleanalysis．Conclusion　Thismethodmayapplytolargesamplesandrapidanalysis．Keywords:５Ｇhydroxytryptamine;　plasma;　HPLC;　massspectrometry ５Ｇ羟色胺(５ＧHT)亦称血清素,是色氨酸衍生出的一种生物胺,被血脑屏障分隔为中枢血清素和外周血清素[１Ｇ２],人体内９０％的５ＧHT存在于消化道黏膜,８％~１０％存于血小板,１％~２％存在于中枢系统中,另有一部分存在于各组织的肥大细胞中[３Ｇ４].由于其广泛的存在而参与多种病理和生理学过程,其含量测定对多种疾病的诊断及治疗具有重要意义[５Ｇ８].目前５ＧHT的检测方法繁多,包括酶联免疫法[９]、免疫荧光法[１０]、高效液相色谱法[１１]、高效液相色谱Ｇ电化学法[１２]、高效液相色谱Ｇ荧光法[１３]、高效液相色谱Ｇ程序波长紫外检测法[１４]、超高效液相色谱Ｇ串联质谱法(HPLCＧMS/MS)[１５]等.本文建立了一种快速、准确的HPLCＧMS/MS直接测定血浆中５ＧHT,前处理简单,分析时间短,分析方法稳定,检测限低,适合临床及科研快速检测的需求.１　材料与方法１．１　仪器与试剂１．１．１　仪器　AB５５００QTRAP型三重四极杆质谱仪,配有电喷雾离子源(ESI)和Analyst１．５数据处理软件(美国AB公司),LCＧ２０A型高效液相色谱议(日本岛津公司),VortexＧGenius２型涡旋混匀器(美国ScientificIndustries公司),PICO１７型离心机(美国􀅰７３７２􀅰国际检验医学杂志２０１８年１１月第３９卷第２２期　IntJLabMed,November２０１８,Vol．３９,No．２２Thermo公司);KQＧ１０００KDB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),MilliQDirectＧQ１６超纯水仪(美国MilliQ公司),DENVERTB２１５D分析天平(美国丹佛公司).１．１．２　试剂　５ＧHT(中国药品生物制品鉴定所,批号:１００６５７Ｇ２００４０１),奥卡西平(中国药品生物制品鉴定所,批号:１１１６５６Ｇ２００４０１),病毒灭活冰冻血浆(吉林省血液中心),甲酸(国药集团化学试剂有限公司,批号２０１７０４１９),乙腈(美国Sigma公司,批号WXBC５４４１V),实验用水为MilliQ超纯水.１．２　色谱条件　色谱柱:AgilentZORBAXEclipseXDBＧC８(４．６mm×１５０mm,５μm);柱温:４０℃;进样量:１０．０μL;流动相:A为０．２％甲酸水溶液,B为乙腈,流动相梯度组成和流速如表１所示.表１ 流动相梯度组成和流速时间(min)流速(mL/min)A(０．２％甲酸水)B(乙腈)０．１１．０９０１０１．５１．０９０１０２．１１．０５．０９５４．０１．０５．０９５４．１１．０９０１０８．０１．０９０１０

高效液相色谱-电化学检测法测定人尿液中的5-羟基吲哚乙酸和高香草酸

高效液相色谱-电化学检测法测定人尿液中的5-羟基吲哚乙酸和高香草酸

高效液相色谱－电化学检测法测定人尿液中的

５－羟基吲哚乙酸和高香草酸＊

唐琴梅

（中国科学院上海药物研究所上海２０００３１）

提要报道用反相高效液相色谱－电化学检测法同时测定人尿液中的５－羟基吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）和高香草酸（ＨＶＡ方法简便、快速、灵敏，尿样酸化后离心经稀释直接用于高效液相色谱ＨＰＬＣ）分析。尿液中５－ＨＩＡＡ和ＨＶＡ的浓度在．１２５２０ｇ／ｍＬ之间，回收率线性关系良好。测定了正常人和接触锰人群组尿液中的５－ＨＩＡＡ和ＨＶＡ。关键词反相高效液相色谱法，电化学检测。人尿，５－羟基吲哚乙酸，高香草酸

１前言

尿液中儿茶酚胺和５－羟基色胺（５－ＨＴ）的酸性代谢产物的测定常用溶剂提取法［１］或小柱［２４］进行

样品预处理，费时且成本高。Ｅｌｒｏｄ等［５］报道了直接测定稀释人尿液中的５－ＨＩＡＡ。本文探讨了同时测

定人尿液中５－ＨＩＡＡ和ＨＶＡ的色谱条件，用该方法测定了正常人和接触锰人群组１２小时尿液中的

５－ＨＩＡＡ和ＨＶＡ。

２实验部分

２．１仪器和试剂Ｗａｔｅｒｓ　Ｍ６０００　Ａ泵，Ｕ６Ｋ进样阀，ＬＣ－４Ｂ／１７型电化学检测器（Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｓｙｓｔｅｍ　ＩＮＣ）及岛津Ｃ－Ｒ３Ａ数据处理仪。５－ＨＩＡＡ为Ｆｌｕｋａ产品，ＨＶＡ

为Ｅ．Ｍｅｒｃｋ产品，其余为国产分析纯试剂，水为超

纯水。２．２色谱条件

色谱柱：预柱Ａｌｌｔｅｃｈ填料Ｃ１８󰀀３０ｍ，干法装填；分析柱１５０５ｍｍ　ｉ．ｄ．，填料ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ－１８

（５ｍ，由本所装填。流动相：甲醇－０．１ｍｏｌ／ＬＮａＨ２ＰＯ４缓冲液（ｐＨ４．２０，含０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ－

２Ｎａ󰀀１２８８Ｖ／Ｖ，流量１．５ｍＬ／ｍｉｎ。电化学检测器工作电位０．６５Ｖ，灵敏度ｎＡ。

２．３生物样本分组及尿样本预处理生物样本分为５组：正常组及接触锰５１０年

组、１０１５年组、１５２０年组和２５年以上组。未经饮食控制，收集晚７时至第二天早晨７时共１２小时尿液，记录体积，取５ｍＬ尿液用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸酸化至