山仙颗粒对Lewis肺癌瘤株转染中TNF-α和uPA的影响

用癌症杂志２００８年９月第２３卷第５期Ｔｈｅ　Ｐｒａｃ—ｔｉｃａ—ｌ　Ｊｏ—ｕｒｎ—ａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ，Ｓｅｐ　２００８，Ｖｏｌ　２３，Ｎｏ．５　・４４５・　

山仙颗粒对Ｌｅｗｉｓ肺癌瘤株转染中ＴＮＦ．　和ｕＰＡ的影响　

范明明　周光华　苏加利　陈光伟　

【摘要】　目的研究山仙颗粒对Ｌｅｗｉｓ肺癌瘤株转染的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内肿瘤坏死因子ｏｔ（ＴＮＦ—ｏｔ）和尿激酶型纤　溶酶原激活物（ｕＰＡ）的影响及意义。方法４０只小鼠适应性喂养１周后，随机取出１０只作为空白对照组（Ａ组）；其余　的３０只小鼠每只右腋皮下接种瘤细胞悬液０，２　ｒｎｌ，再随机分成３组，每组１０只，分别设为荷瘤对照组（Ｂ组）；金龙胶囊　组（ｃ组）；山仙颗粒组（Ｄ组）；４组动物分笼喂养，于接种２４　ｈ后开始给药，Ａ、Ｂ组每只小鼠每天用生理盐水０，２　ｍ１灌　胃；Ｃ组用金龙胶囊悬液０。２　ｍ１灌胃；Ｄ组用山仙颗粒混悬液０．２　ｍ１灌胃，共灌胃２１天。２１天后脱颈椎处死小鼠，检测　ＴＮＦ—ｄ与ｕＰＡ水平。结果Ｃ、Ｄ组出瘤时间、移植瘤重、肺内转移灶个数、去瘤去肺后体重、血清ＴＮＦ—ｏｔ与血浆ｕＰＡ水　平与Ｂ组小鼠比较均有显著性差异（Ｐ＜０。０５），ｃ与Ｄ组肺转移灶个数比较有显著性差异（Ｐ＜０，０１），其他均无显著性　差异（Ｐ＞０．０５）。结论山仙颗粒能使血清ＴＮＦ—ｏｔ水平升高和血浆ｕＰＡ水平下降，从而显著抑制Ｃ５７ＢＩＭ６小鼠Ｌｅｗｉｓ　肺癌的生长和自发性肺转移。　【关键词】Ｌｅｗｉｓ肺癌；转移；肿瘤坏死因子ｏｔ；尿激酶型纤溶酶原激活物；山仙颗粒　中图分类号：Ｒ７３４．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－５９３０（２００８）０５－０４４５－０３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓｈａｎ　Ｘｉａｎ　Ｇｒａｎｕｌｅ　ｏｎ　ＴＮＦ－　ａｎｄ　ｕＰＡ　ｉｎ　Ｃ５７８Ｌ／６　Ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　Ｌｅｗｉｓ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ　ｏｆ　Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　ＭｅｔａＳｔａｓｉｓ　ＦＡＮ　Ｍｉｎｇ—ｍｉｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｇｕａｎｇ—ｈｕａ，ＳＵ　Ｊｉａ—ｌｉ，ｅｔ　ａｌ。　Ｃｅｎｔｒｅｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ＆Ｌｉｂｅｒａｔｉｏｎ　Ａｒｍｙ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　１６３，Ｃｈａｎｇｓｈａ，４１０００３　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｓｈａｎ　Ｘｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ—ｄ（ＴＮＦ—ｄ）ａｎｄ　ｕｒｏｋｉ—　ｎａｓｅ—ｔｙｐｅ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ（ｕＰＡ）ｉｎ　Ｃ５７ＢＩＭ６　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　Ｌｅｗｉｓ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ　ｏｆ　Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ。Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｆｔｅｒ　１　ｗｅｅｋ　ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ　ｆｅｅｄｉｎｇ，１０　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　４０　ｍｉｃｅ　ａｓ　ａ　ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ａ　ｇｒｏｕｐ），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｔ　３０　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｐｌａｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｌｗｅｉｓ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ：ｔｕｍｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｂ　ｇｒｏｕｐ），Ｊｉｎ　Ｌｏｎｇ　ｃａｐｓｕｌｅ　ｇｒｏｕｐ（Ｃ　ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ　Ｓｈａｎ　Ｘｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｅ　ｇｒｏｕｐ（Ｄ　ｇｒｏｕｐ）．２４　ｈ　ａｆｔｅｒ　ｔｕｍｏｒ　ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ａ　ａｎｄ　Ｂ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｉｓｅｄ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｓａ—　ｌｉｎｅ．Ｃ　ａｎｄ　Ｄ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｇｉｖｅｎ　Ｊｉｎ　Ｌｏｎｇ　ｃａｐｓｕｌｅ　ａｎｄ　Ｓｈａｎ　Ｘｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴＮＦ—ｄ　ａｎｄ　ｕＰＡ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　２１　ｄａｙｓ　ｌａｔｅｒ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｔｉｍｅ，ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｔｕｍｏｒ，ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｌｕｎｇ　ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ，ｎｏｎ—ｔｕｍｏｒ　ａｎｄ　ｎｏｎ—ｌｕｎｇ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ，ｓｅｒｕｍ　ＴＮＦ—ｄ　ａｎｄ　ｕＰＡ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，Ｄ　ａｎｄ　Ｂ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｌｕｎｇ　ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｄ　ｗｅｒｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｓｈａｎ　Ｘｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｅ　ｃａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ＴＮＦ—ｄ　ａｎｄ　ｕＰＡ　ｌｅｖｌｅ，ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｉｎ　Ｃ５７ＢＬ／６　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　ｌｅｗｉｓ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｏｆ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｌｅｗｉｓ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ；Ｔｒａｎｓｆｅｒ；Ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ｄ；Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ—ｔｙｐｅ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ；Ｓｈａｎ　Ｘｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｅ　（Ｔｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ，２００８，２３：４４５～４４７）　侵袭与转移是恶性肿瘤最本质的表现，也是肿瘤　治疗失败的最根本原因，控制转移是决定癌症患者预　后的关键因素。我们通过山仙颗粒对Ｌｅｗｉｓ肺癌瘤株　转染的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠血清肿瘤坏死因子　（ｔｕｍｏｒ　ｌｌｅｃ—　ｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ．ｏｔ，ＴＮＦ．ｏｔ）和血浆尿激酶性纤溶酶原激活　物（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ．ｔｙｐｅ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｕＰＡ）影响的实　验研究，进一步探讨山仙颗粒抗肿瘤侵袭与转移的机　

作者单位：４１０００３解放军第一六三中心医院（范明明，周光华，苏加　利）；７１２０００陕西中医学院附属医院（陈光伟）　理，为临床开发新药提供理论依据。　ｌ材料与方法　１．１实验材料　瘤株：ｌｅｗｉｓ肺癌瘤株（购于甘肃医学科学院）。　实验动物：健康雄性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠４Ｏ只，体重１８～２２　ｇ，６～８周龄（购于第四军医大学实验动物中心）。主　要药品：金龙胶囊（ＪＬＣ）购自北京建生药业有限公司，　按照小鼠０．５　ｇ／ｋｇ（相当于临床治疗剂量），用生理盐　

水配成５０　ｍｇ／ｍｌ。山仙颗粒（ＳＸＧ）购自陕西中医学　维普资讯 http://www.cqvip.com 实用癌症杂志２００８年９月第２３卷第５期Ｔｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　０ｆ　Ｃａｎｃｅｒ，Ｓｅｏ　２００８．Ｖ０ｌ　２３．Ｎ０．５　院附属医院制剂中心，按照小鼠５　ｇ／ｋｇ（根据小鼠与人　临床剂量的折算）、与生理盐水的配制比例为１：２　（０．５　ｇ／ｍ１）。主要试剂：ＴＮＦ－　试剂盒（由西安宝信生　物有限公司提供）；ｕＰＡ试剂盒（由宝航生物工程有限　责任公司提供）；人ｕＰＡ标准品（购自卫生部生物制　品检定所）；抗ｕＰＡ抗体（购自江苏省血液研究所）。　主要仪器：Ｂｉｏ—Ｒａｄ酶标仪（美国），解剖显微镜（日产　ＯＬＹＭＰＵＳ），倒置显微镜（重庆光学仪器厂，ＸＤＸ．　ＩＢ），电子天平（上海第二分析仪器厂），超净＿丁作台　（苏州净化设备厂），离心机（北京医用离心机厂，　Ｌ１）４－２型），组织研磨器，２００目筛网。　１．２方法　１．２．１模型的建立在无菌实验室脱颈椎处死Ｌｅｗｉｓ　肺癌荷瘤小鼠，放入７５％酒精中浸泡１０　ｒａｉｎ，在超净　工作台上分离瘤体，取其中生长较好，无坏死的瘤组　织，用生理盐水冲洗后剪碎，用Ｈａｎｋ’Ｓ液洗涤后按１　ｇ瘤组织加入４　ｍｌ生理盐水的比例放入组织研磨器内　研磨，经２００目筛网制成瘤细胞悬液，用生理盐水调细　胞浓度至１×１０　个／ｍｌ，用０．２％台盼蓝染色，在倒置　显微镜下计数活细胞数（即未染色数）＞９５％，在每只　实验小鼠右腋皮下接种该瘤细胞悬液０．２　ｍｌ，瘤细胞　数为２×１０。个／只。　１．２．２动物分组４Ｏ只小鼠适应性喂养１周后，随　机取出１Ｏ只作为空白对照组（Ａ组）；其余的３Ｏ只小　鼠每只右腋皮下接种瘤细胞悬液０．２　ｍｌ，再随机分成　３组，每组１Ｏ只，分别设为荷瘤对照组（Ｂ组）、金龙胶　囊组（Ｃ组）、山仙颗粒组（Ｄ组）；４组动物分笼喂养，　于接种２４　ｈ后开始给药，Ａ、Ｂ组每只小鼠每天用生理　盐水０．２　ｍｌ灌胃；Ｃ组用金龙胶囊悬液０．２　ｍｌ灌胃；Ｄ　组用山仙颗粒混悬液０．２　ｍｌ灌胃，共灌胃２１天…。　１．２．３动物分组检测项目与方法　观察各组小鼠出　瘤时间并记录。造模２２天后，脱颈椎处死小鼠，置　７５％酒精中浸泡１０　ｒａｉｎ后，置小鼠于超净工作台上，　完整剥离腋窝移植瘤体，去除血污、脂肪等非肿瘤组　织，用电子天平称重，计算抑瘤率。　抑瘤率（％）＝对照组平均瘤重一用药组平均瘤　重／对照组平均瘤重×１００％　计数肺表面转移灶个数：取小鼠双侧肺脏，电子天　平称重，置Ｂｏｕｉｎｓ液中固定２４　ｈ，在解剖显微镜下分　叶并计数肺表面转移灶个数（肺组织呈黄色，瘤组织　呈米黄色隆起，圆形或椭圆形，边缘清晰），计算肺转　移抑制率。　肺转移抑制率（％）＝（对照组平均肺转移灶数一　用药组平均肺转移灶数）／对照组平均肺转移灶数×　１００％　取去瘤去肺后小鼠用电子天平称重。　检测肿瘤坏死因子ＴＮＦ．Ｏｔ：准备无菌试管，每管内　加抑肽酶５Ｏ　ｌ备用。取２００　Ｉｘｌ／ｍｌ的ｌ　ｐｓ，每只小鼠　尾静脉注射１　ｇ，２　ｈ后均采用摘眼球取血法，收集　全血１．０　ｍｌ，离心２０　ｒａｉｎ，取上清，放入一３ＯｑＣ冰箱中　待测。采用放免法检测ＴＮＦ．　水平。　从小鼠尾静脉取血６０　与抗凝剂处理过的硅化　管中离心制备血浆，应用发色底物法　检测血浆中的　ｕＰＡ活性。　１．３统计学处理　采用方差分析及两独立样本间ｔ检验，数据采用　均数±标准差（　±ｓ）表示。　２结果　４组动物均存活并生长，未出现中间死亡现象。　各组小鼠进食状况良好，活动正常，荷瘤对照组一般情　况差，明显消瘦。　２．１　各组小鼠出瘤时间的观察　出瘤时间荷瘤对照组为（７．６６±１．１１）天，金龙胶　囊组为（８．７８±１．１２）天，山仙颗粒组为（８．８２±０．９５）　天。统计分析显示：山仙颗粒与金龙胶囊均能延长荷　瘤小鼠的出瘤时间（Ｐ＜０．０５），两者比较无显著性差　异（Ｐ＞０．０５）。　２．２各组小鼠移植瘤重的测定　各组小鼠移植瘤重分别为荷瘤对照组（２．４５±　０．３８）ｇ；金龙胶囊组为（１．８９±０．２０）ｇ，抑瘤率为　２２．６％；山仙颗粒组为（１．９１±０．２１）ｇ，抑瘤率　２２．Ｏ％。统计分析显示：山仙颗粒与金龙胶囊均能抑制　Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长（Ｐ＜０．０１），两者比较，抑瘤率无显　著性差异（Ｐ＞０．０５）。　２．３各组小鼠肺转移灶个数的观测　荷瘤对照组小鼠肺转移灶为（１６．８±３．９７）个，金　龙胶囊组（１３．１±２．６４）个，山仙颗粒组为（１０．６±　２．５９）个。统计分析显示：山仙颗粒组与荷瘤对照组　比较，山仙颗粒能阻抑Ｌｅｗｉｓ肺癌的转移（Ｐ＜０．０５）。　金龙胶囊组与荷瘤对照组比较，金龙胶囊能抑制Ｌｅｗｉｓ　肺癌的转移（Ｐ＜０．０１）。山仙颗粒组与金龙胶囊组比　较，山仙颗粒的抗转移作用比金龙胶囊明显增强（Ｐ＜　０．０５）。　２．４各组小鼠去瘤去肺后体重测定