黄曲霉毒素B1人工抗原的合成及鉴定

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即求得抗原分子结合比为５．１３：ｌ，从而为制备抗ＡＦＢ１抗体奠定基础。
关键词：黄曲霉毒素Ｂ１；半抗原；完全抗原；ＮＨＳ法
文章篇号：１６７３．９０７８（２０１３）４ — ７９６．７９９
ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＩｄｅｎｉｆｔｉｃａｉｏｔｎｏｌＡｎｉｇｔｅｎ
（１．五邑大学化学与环境工程学院，广东江门５２９０２０）（２．东莞出入境检验检疫局，广东东莞５２３０７２）（３．广东工业大学轻－Ｔ－ｉｔ：￣学院，广东广州５１０００６）
摘要：采用衍生化在黄曲霉毒素Ｂ１（ａｌｆａｔｏｘｉｎＢ１，ＡＦＢ１）上引入羧基合成ＡＦＢ１羧甲基活化物，通过Ｎ．羟琥珀酰亚胺酯（Ｎ－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅＮＨＳ）法将ＡＦＢ１Ｏ与牛血清白蛋白（ａｓＡ）偶联，制备黄曲霉毒素Ｂ１完全抗原ＡＦＢｌ－ＢＳＡ。ＥＣＩ－ＭＳ和紫外光
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＣａｒｂｏｘｙｌｇｒｏｕｐｗａｓｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｔｏＡｌｆａｔｏｘｉｎＢ１（ａｌｆａｏｔｘｉｎＢ１，ＡＦＢ１）ｂｙｄｅｒｉｖａｉｆｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｔｏｓｙｎｈｅｔｓｉｓｈｅｔｈａｐｔｅｎ（ＡｒＢ１ｃａｒｂｏｘｙｍｅｈｙｔｌａｃｉｔｖａｔｏｒ）．ＡｎｄｈｅｔＡＦＢ￣ＯｗａｓｃｏｕｐｌｅｄｗｉｈＢｔＳＡｂｙｕｓｉｎｇＮ— ｈｙｄｒｏｘｙ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅｍｅｈｏｔｄｔｏｐｒｅｐａｒｅｔｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅａｎｉｔｇｅｎｏｆ
ｌｔｕｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙｎｄａｅｇｒｅｓｒｓｉｏｎｅｑｕａｉｔｏｎ，ｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｓｏｆｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｉｔｏｎｈａｐｔｅｎｎｄａＢＳＡｗｅｒｅａｂｔａｉｎｅｄａｓ
（３．ＬｉｇｈｔｎｄｉｕｓｔｒｙａｎｄｃｈｅｉｃｍａｌｎｓｉｔｉｔｕｔｅｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇｉｎｄｕｓｔｒｙｕｎｉｖｅｓｉｒｙ，ｔＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，Ｃｈｉｎａ）
ｗｕ）【ｉｎ－Ｉｎ，：ＡＮＧＸｕｅ－ｊｉａｏ，ＺＨＡＯＳｕ－ｑｉｎｇ３，ＺＨＡＮＧＫｕｎ
（１．ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＷＬ】ＹｊＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｍｅｎ５２９０２０，Ｃｈｉｎａ）（２．ＴｈｅｂｕｒｅａｕｏｆｅｎｔｒｙａｎｄｅｘｉｔｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄｑｕａｒａｎｔｎｉｅｎｉＤｏｎｇｇｕａｎ，Ｄｏｎｇｇｕａｎ５２３０７２，Ｃｈｎｉａ）
谱法的鉴定结果表明目标半抗原合成成功。结合紫外分光光度法和回归方程，分别测得不同浓度的半抗原和蛋白质线Ｉ陛曲线为：Ｙ＝０．１４４０Ｘ＋０．０１０３，：０．９９８６；Ｙ＝０．００５９Ｘ＋０．０８０８，＝０．９８８９。偶联物中半抗原和蛋白质的浓度分别为１８６．３２￣ｔｇ／ｍＬ、６１２７．４６￣ｇ／ｍＬ，
ＡＦＢ１．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＥＣＩ－ＭＳａｎｄｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔａｒｇｅｔｈａｐｔｅｎＷａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｓｎｔｙｈｅｓｉｚｅｄ．Ｔｈｒｏｕｇｈｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｈｔ
现代食品科技
ＭｏｄｅｒｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．４
黄曲霉毒素Ｂ人工抗原的合成及鉴定
伍鑫茹 ’ ，杨雪娇，赵肃清。，张煜。

黄曲霉毒素B_1化学发光免疫检测方法的建立

黄曲霉毒素B_1化学发光免疫检测方法的建立
裘雪梅;朱立鑫;刘仁荣;徐玲;王雪婉
【期刊名称】《畜牧与饲料科学》
【年(卷),期】2015(0)10
【摘要】在利用化学法合成吖啶酯标记的黄曲霉毒素B1(AFB1)抗原(AFB1-BSA-AE)的基础上,建立了化学发光免疫分析法(CLIA)检测样品中的黄曲霉毒素B1(AFB1)含量。

结果表明,该方法对应的回归线方程为y=-
16.995Ln(x)+166.06,R2=0.9996,AFB150%竞争抑制浓度(IC50)为0.924 ng/m L,检测的线性范围为0.1~5.0 ng/m L。

在黍米样品中的加标回收率为75%~115%,变异系数为0.36%~1.20%。

【总页数】4页(P29-32)
【关键词】黄曲霉毒素B1;吖啶酯;化学发光;免疫分析法
【作者】裘雪梅;朱立鑫;刘仁荣;徐玲;王雪婉
【作者单位】江西科技师范大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
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春慧;辛思培;曹敬政;王权;孙卫东
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黄曲霉素b1

发展史
• 1960年，英国发现有10万只火鸡死于一种以前没见过的病，被称为“火鸡X病”，再后来鸭子也被波及。追根溯源，最大的嫌疑是饲料。这些可怜的火鸡和鸭子吃的是花生饼。花生饼是花生榨油之后剩下的残渣，富含蛋白质，是很好的禽畜饲料。
基本认识
• 1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强. • B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT目前已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。其中以花生和玉米污染最严重。家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素，尤其是高温高湿地区的粮油及制品种检出率更高。
黄曲霉素B1知识
简介：【黄曲霉素B1 ......订-货-加 ⓠⓠ:⒈⒎⒎⒏⒌⒐⒏⒏⒍ ...数量有限】
黄曲霉毒素
• 黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉（aspergillus flavus)）寄生曲霉（a.parasiticus)）产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料 • • • 1.室温低于20℃或试剂及样本没有恢复到室温(20～25℃)会导致所有标准的 OD值偏低。 2.在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。 3.每种试剂使用前均需摇匀。 4.反应终止液为2M盐酸，避免接触皮肤。 5.不要使用过了有效期的试剂盒；也不要掺杂使用过了有效期的试剂盒；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。 6.储存条件 7.试剂变质的迹象：显色试剂有任何颜色表明显色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时，表示试剂可能变质。 8.加入显色液后，一般显色时间为15～30min。若颜色较浅，可延长反应时间到35min(或更长)，但不得超过40min。反之，则减短反应时间。 9.该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。试剂盒保存于2～8℃，不要冷冻，将不用的微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感，因此要避光保存。

黄曲霉毒素B1柱说明书

黄曲霉毒素B1柱说明书[用途]：免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素B1, 从而对黄曲霉毒素B1样品起到非常针对性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素B1含量的检测。

亲和层析柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。

[概述]：黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。

其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。

[原理]：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。

用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1，然后注入到分析仪器中用于检测。

[包装组成]：每一个盒中包括25支或15支黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱及1份说明书。

[注意事项]：----黄曲霉毒素B1可致癌，应戴手套操作。

----使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素B1溶液最好用pH7的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡过夜。

----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

----2~8℃储存，不得冻存。

[样品处理]：----玉米花生等样品粉碎；----粉碎的样品加入氯化钠与1甲醇溶液混匀；----高速匀浆----用蒸流水稀释滤液，再用微纤维滤纸过滤；----取上样检测。

* 根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加。

[操作程序]：----取出免疫亲和层析柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；----将柱子与泵流操作架上的玻璃针筒连接固定，处理后的溶液上样；----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体流出；----待液体排干后，用蒸馏水或去离子水洗涤2次----待液体排干后，上样甲醇，用样品瓶接洗脱液----洗脱后液体可用于HPLC。

黄曲霉毒素B1

黄曲霉毒素B1检测试剂Aflatoxin B1RIDASCREEN® Aflatoxin B1酶标免疫分析定量测定黄曲霉毒素B1试剂盒。

德国公司R-Biopharm制造（中文翻译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准）RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15（产品编号：R1211）简介采用竞争酶标免疫法定量测定谷物，饲料，花生，干果及其它食品中的黄曲霉毒素B1。

试剂盒中包括了所有检测用的试剂。

该试剂盒有96个试验孔包括标准试验，如果进行定量分析，必须有微孔板酶标仪。

样品制备谷物/饲料：粉碎，甲醇/水提取，过滤，稀释时间要求：（以10个样品为例）谷物/饲料………………………………….……大约30分钟测试时间………………………………………….大约1小时（与样品数量多少无关）检测下限1ppb回收率 80-100%交叉反应Aflatoxin B1…………………………………………….100% Aflatoxin G1…………………………………………..大约29% Aflatoxin B2………………………………………….大约13%A flatoxin G2…………………………………………大约3.2% Aflatoxin M1…………………………………………大约1.5%1. 用途Aflatoxin B1 30/15竞争酶标免疫法定量测定谷物，饲料中的黄曲霉毒素B1。

2. 概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌Aspergillus flavus 及A.paraticus的二级代谢物。

这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。

黄曲霉毒素B1属于自然最强烈的致癌物质。

黄曲霉毒素B1作为毒性最高的的分析物，它一般产生于玉米，花生，巴西坚果和棉花种子中。

鉴于这种霉菌毒素的毒性，欧洲国家做出了相近的限量，对黄曲霉毒素B1的限量为2ppb，对黄曲霉毒素总量的限量为4ppb。

使用RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15检测试剂盒，能够快速而准确的检测谷物，饲料和其他食品中的黄曲霉毒素B1。

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