植物组织培养方法及步骤
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花卉组织培养中应用最多的为MS培养基。
其组成是在配制1升(1000毫升)培
养基时,加硝酸铵1.65克、硝酸钾1.9克、氯化钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二
氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、钼酸钠0.25毫克、硫酸铜0.025毫克、氯化钴0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖
30克和琼脂7克。
其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确定。
MS培养
基中大量元素浓度过高,为此常采用1/2、1/4大量元素浓度作培养用,这样生长效果列好。
配制培养基前要准备好三角瓶、试管、烧杯、量筒、吸和等玻璃器皿,预先称好
药品。
配制时先将琼脂溶化,再加入在水中深解的各种营养元素和蔗糖,然后用氢氧
化钠或盐酸调整培养基的pH,一般掌握在5.7左右。
以后可分注到养瓶中,盖好瓶盖。
培养基配好要经高压灭菌。
冷却后放到培养室预培养3天,如没有杂菌污染,才可进
行花卉材料的接种。
取来的材料虽经选择,外部总还有不少杂菌。
为此,接种前应进行表面灭菌。
通
常先用自来水冲洗十几分钟,有泥的应刷去。
冲洗干净后,用70%的酒精浸泡10-15
秒钟消毒。
接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗两次,再用10%的漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒,最后用无菌水冲洗3-4次。
带有茸毛不易湿润消毒的材料可加些洗衣粉。
上述操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件进行。
经过表面灭菌的
材料,用无菌滤纸将水吸掉。
再用解剖刀切取所需部位,通常几毫米大小,培育无病
毒苗则应在1毫米以下,然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到培养瓶上培养。
工具
用完即应在95%酒精中蘸一下,或用火焰消毒法消毒,避免工具带菌造成交叉污染。
操作时应穿工作服、戴工作帽,事先洗净手,后再用酒精棉擦试一遍
培养室的温度大多采取昼夜恒温培养,保持在25℃±2℃,也有采取昼夜变温培养的,夜晚温度可低些,这应根据花卉生长需要而定。
每天日光灯照明12-16小时。
花卉试管苗开始移出时,仍应罩上玻璃瓶,或盖上薄膜袋(上开几个小孔),1
周后去掉。
有喷雾条件则更理想。
开始7-10天要遮荫,以后逐渐见阳光。
移植基质以沙与蛭石各半为好,要排水、通风好,隔一天浇一次营养液。
这样逐步锻炼,让其适
应环境。
2-3周后经驯化锻炼苗即可移至培养土中栽植.。