艾滋病初筛实验室标准操作规程-精选.pdf

附件1：艾滋病初筛实验室标准一、必备条件一人员条件有3名以上的医技人员,其中中级卫生技术职称人员1名以上采供血机构的HIV抗体检测人员须具有技师以上卫生技术职称,从事病毒血清学检测技术工作2年以上,接受过国家或省级HIV抗体确认中心举办的HIV 抗体检测学习班培训,并获得合格证书;二设备条件有独立的实验室用房或至少有专用的检测台,污染区和清洁区要分开;从我国HIV抗体检测工作发展要求,要以酶联免疫法测定考虑所需的检测器材,包括酶标读数仪和洗板机、精确的移液器、专用的普通冰箱、低温冰箱、离心机以及各种消毒与污物处理设施、安全防护用品和恒温设施;二、HIV抗体检测程序一检测试剂初筛用的HIV抗体检测试剂,必须是HIV-1/2混合型,经卫生部批准或注册,经过批检检定合格,并在有效期内;常用的检测方法有固相酶联免疫吸附试验Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay,ELISA等;二HIV抗体检测程序及其流程图1、血液标本验收合格后,用初筛试剂进行检测,如呈阴性反应,则作HIV抗体阴性报告；2、初筛检测结果呈阳性反应的标本,须进行重复检测;复检时用两种不同的初筛检测试剂复测；3、如两种试剂复检结果均呈阴性反应,则作HIV抗体阴性报告；如均呈阳性反应,或有一份阳性,该标本需送上级实验室加以进一步证实;送检时应将重新采集的该受检者血液标本和原有血液标本一并送检;4、初筛检测的流程图三、检测结果的判定和处理对HIV抗体阳性者应做好咨询、保密和报告工作;对HIV抗体阴性者,如近期有高危行为如性乱史、吸毒史、受血史,或有急性流感样症状等情况,为排除窗口期的可能,建议每3个月复查一次,连续2次;对HIV抗体可疑的对象要做好咨询和随访工作;四、反馈与报告程序一初筛检测中发现HIV抗体阳性反应的标本,应尽快城区一般要求在48小时内,农村要求在96小时内将血样连同原始实验资料包括厂家批号、试剂种类、有效期,如ELISA实验应附上阴性、阳性对照值,Cut off值及样品OD值和送检化验单送卫生行政部门指定的初筛中心实验室,再转送确认实验室,或直接送至HIV抗体确认实验室;送检化验单必须由初筛实验室一名直接实验操作人员和一名中级技术职称以上的负责人员签名;初筛实验室不得向受检者宣布初检阳性反应结果；二做好标本收集与检测登记工作,每月5日按统一表格向卫生行政部门指定的HIV抗体初筛中心实验室报告检测情况,如无HIV抗体中心实验室,则直接向省级HIV抗体确认中心报告;附件2：艾滋病初筛实验室安全措施一、实验室要求一有专用实验室或至少有专用的检测台,应划分清洁区和污染区有条件的可设半污染区,并有明显标记,有充足的操作空间；二实验室墙面、地面、台面材料应耐酸、耐碱、易清洁消毒、不渗漏液体；室内应有防蚊、防蝇、防鼠等设备；三检验台上应装置紫外灯；四备有消毒药品、消毒器材和设备；五装有脚踏或感应流水装置,备有冲眼睛水,足够的一次性手套、口罩、隔离服和防护眼镜；六清洁区间备有存放个人衣服、用品的设施；有条件的可设专用沐浴设备；七实验室应装置恒温设备,室温保持在20-250C;二、安全操作一实验室工作人员要熟悉生物安全操作知识和消毒技术；二不得在实验室内喝饮料、吸烟、吃食物和化妆打扮等；不得在实验室内会客；三实验室用品包括工作服不得用于其他用途；不可将私人和无关的物品带入实验室；四工作时,要戴手套、穿工作衣和隔离衣,操作时手套破损应立即丢弃、洗手并戴上新手套；五不要用戴着手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等；六尽量避免使用尖锐物品和器具；宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物质；七工作结束后,要对工作台面消毒,如用消毒液清洗后要干燥20分钟以上；操作时有标本、检测试剂外溅时应及时消毒；平时要保持环境整洁；八工作完毕,脱去手套后洗手,再脱去工作衣,用肥皂和流动水洗手；九遇有意外事故,应立即处理并分别以口头和书面报告上级部门;如工作人员皮肤被刺伤,可以用流动水局部清洗或用刺激性较轻的含氯消毒剂浸泡皮肤创口；样品或检测试剂溅入眼内立即用生理盐水冲洗,溅入嘴内,先吐出残留的液体后,用水反复漱口；十遇有高危的意外事故发生,除进行局部处理外,同时应立即采取预防措施,包括对其随访、HIV检测、休息并暂时离开原岗位3个月,按医嘱服用抗HIV药物进行预防;三、物品消毒处理一血液标本置于合适容器内,加盖盖紧后运送,切勿污染盛器外部;如果盛器被污染,要用消毒液消毒;也可将血样置于有盖的塑料管内,外面套上塑料袋,封口,连同送检单一并运送,有血液外溢时,立即用消毒液消毒；二各种试剂和化学品均应贴有标签,放置于合适的位置,实验台上不放置不必要的物品;任何测试用的样品和试剂不宜置于桌面或架子的边沿,以防滑落打破,污染环境;一旦污染,先在污染区外周围倒入消毒液,逐渐向中心消毒处理;三实验室所有垃圾,包括用过的一次性手套和工作衣,置于专门污物袋内,经焚烧或有效消毒剂处理后丢弃,污染的非一次性工作衣应先消毒后再洗涤；四所有用过的实验用品,尤其是血样管和血液标本先在实验室内消毒,再移出清洗,待消毒后再用；五所有尖锐物品应置于不宜刺破的容器内,消毒后用合适的方法处理；六常用的消毒剂和消毒方法与病毒性肝炎消毒方法相同;四、健康监护一实验室工作人员从事工作前必须进行HIV抗体和乙肝、丙肝等肝炎病毒标记物的检测；二每半年进行一次HIV抗体的复检,并保留血样一年以上；三遇有意外事故,接触者应在接触当时、接触后6周、3个月、6个月及12个月各采血检查一次；四患有皮肤疾患,尤其有皮肤溃烂、破损情况要及时诊治;附件3：HIV实验室操作技术要求一、样本的采集一血液是最常见的样品,包括血清、血浆和全血,有时用唾液或尿液作测试样本;样品采集应按试剂盒说明书要求采集;二采血时一定要注意安全,采血用一次性注射器,谨慎操作,防止发生刺伤皮肤和造成外界污染;血样如即时用,可存于普通冰箱,如要长期保存,则置于一200C及以下;如用滤纸采样,则手指或耳垂局部消毒严格按常规进行,在刺破皮肤后,迅速把滤纸沾上,切勿让血液滴落在其他物体表面造成污染;采血后要待血样干燥后再包装送检;如要置于低温,将滤纸放进塑料袋,可以长时间保存;滤纸上的血量,一般直径为6．3毫米的圆点滤纸血样相当于10微升全血或5微升的血清;二、样本的运送样品从一个实验室转送到另外一个实验室,必须是血清或血浆,除特殊需要外,一般不能用全血,且须置于带有盖帽的试管内,防止样品流出,试管上应有明显的标记,标明种类、姓名、地区、时间或原有的编号;将试管放入专门带盖的容器内,容器的材料要易于消毒处理,在所放试管周围上下均垫有软性物质,以免碰碎,容器外标有HIV检测专用字样;如果路程较远或者气候炎热时,盛有样本的容器应置于40C以下运送;送样同时需附送验单;如有特殊情况,对个别样品进行复测,可以用特快专递形式投寄,但盛样品的试管,必须包扎好,保证不会破碎、溢漏;如果为滤纸标本,置于塑料袋后再放入特快专递投寄;三、样本的处理一对从其他实验室送来的样品,注意检查并注明其送检单与标本记录的符合、样品管破损、溢漏情况;如有溢漏应立即将尚留存的血样移出,并对管壁和盛器消毒;要检查并记录样品的质量有无严重溶血、细菌污染、血脂过多以及黄疸等情况;如经过某些临床治疗可导致样品自发荧光的,不能供荧光方法测试用;二对实验室自己采集的样品,最好将血液先自然存放1-2时后,再用3000rpm离心15分钟,吸出上清液备用,如在几天内检测可放在2－8℃冰箱中,如要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内;四、样本的加量和稀释严格按照每种试剂说明书规定加样量和稀释度操作,不能擅自更改,要做到准确地取样、加样和稀释;加样器刻度必须标化,包括移液器、刻度吸管和机械吸液管,尤其移液器一定要高质量的,要随时测定其容量精确度;加样要小心,不要使吸头碰着了酶标板或细胞板孔上的包被抗原或抗体层;一般均应先加入样品稀释液后再加入样品;为保证加样的准确,加入稀释液、酶抗体、底物等均应以多孔道加样器为主,使用时要注意防止吸头间的交叉污染;五、血清制品的检验目前市售的各类诊断试剂主要适合于人血清或血浆样品,而血制品如免疫球蛋白、凝血因子VIII和IX等均为浓缩制品,检测方法与直接采集人血测定有别,要按照国家有关要求进行检验;六、样本测试时的其他条件要严格按照各厂家试剂盒说明书操作,包括试剂加量、洗涤次数、保温温育反应时间、显色时间、读数时间、阴、阳性对照状态、仪器设备稳定性等;如ELISA法俗称酶标法,必须用仪器测定,不能目测;测试时,必须按规定波长测试;要随时掌握仪器的正确性;七、检测工作规范化要建立标本采集、运输保存、实验操作、消毒隔离以及实验结果解释与最终报告等一套完整的工作制度,并实行岗位责任制,避免差错附：初筛实验室合格标准附件2009年甘肃省艾滋病初筛实验室资格审评评分情况。

标准操作程序（SOP）艾滋病筛查实验室宾县人民医院艾滋病实验室标准操作程序（SOP）目录BXYY_AIDS_SOP001 抽血标准操作程序BXYY_AIDS_SOP002 酒精棉球的制备BXYY_AIDS_SOP003 样品接收登记处理程序BXYY_AIDS_SOP004 检测结果报告程序BXYY_AIDS_SOP005 HIV抗体筛查检测程序BXYY_AIDS_SOP006 废弃物处置和实验室消毒程序BXYY_AIDS_SOP007 检测数据的记录与保存程序BXYY_AIDS_SOP008 ELISA法HIV抗体检测操作程序（珠海丽珠）BXYY_AIDS_SOP009 仪器保养维护校准程序BXYY_AIDS_SOP010 微量可调移液器标准操作程序BXYY_AIDS_SOP011 实验室的消毒和处理程序BXYY_AIDS_SOP012 实验室质量控制程序BXYY_AIDS_SOP013 保密程序BXYY_AIDS_SOP014 实验室意外和事故处理程序BXYY_AIDS_SOP015 实验室安全防护程序BXYY_AIDS_SOP016 ELISA法HIV抗体检测操作程序（上海科华）BXYY_AIDS_SOP017 酶标仪标准操作程序（Anthos 2010）BXYY_AIDS_SOP018 自动洗板机标准操作程序（Anthos Fluido）BXYY_AIDS_SOP019 生物安全柜标准操作程序（Biobase BSC-1500ⅡA2）BXYY_AIDS_SOP020人类免疫缺陷病毒抗体操作程序(胶体金法)说明：1、《艾滋病实验室标准操作程序（SOP）》由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，并定期修订。

2、修订应该在实验室主任领导下进行，每年至少修订1次。

3、日常工作中，工作人员有义务随时发现并报告SOP文件中的不足和错误，实验室主任组织调查核实后负责修订。

4、所有实验室各岗位工作人员要在SOP文件上签名，表示已经阅读并掌握了有关内容。

永济黄河中医院（SOP）文件HIV初筛实验室标准化操作规程生效日期：2011年10月28日修改日期：2014年8月4日
责任部门：永济黄河中医院HIV初筛实验室责任人：彭玉英
一、责任与要求
1、保证艾滋检测法准确无误，实验室人员必须按标准程序要求操作；
2、凡违反此SOP操作程序的检验，将视为无效检验。

二、样本要求及检验条件
1、采血时注意安全，用一次性注射器谨慎操作，防止发生刺伤和造成外界污染血样并做好记录；
2、采集到样品后及时填写标本登记，采样人签字，登记初筛结果和实验方法及所用试剂情况；
3、样本为血清或血浆，无明显溶血，血浆混浊和脂肪；
4、样本在两小时内完成，注意无菌操作；
5、检测在8——30℃下进行，多余试剂放冰箱2——8℃保存，检测时需要与室温平衡；
6、样品冷冻保存一年以上，申请上级领导批查后才能销毁。

三、检测试剂
1、以发现更多的艾滋病感染者为目的，本实验室只做筛查实验；
2、将试剂从冰箱取出后按试剂盒的要求恢复室温，检查记录冰箱及恒温箱的温度；
3、按照试剂盒要求准备实验原始记录表，标好空白、阴影对照、阳性对照、外部质控及检测标本的位置，登记日期和实验起止时间，登记试剂厂家、批号及效期，每一步操作都要在原始记录表上详细登记；
4、按照试剂盒的要求配置洗液及其他需要的试剂；
5、按照试剂盒的要求完成检测；
6、所用的仪器使用后及时填写使用记录。

四、结果登记和报告
1、检查原始记录表是否填写完整，操作者和复检者签字；
2、阳性标本血清封口包好运送确认实验室。

HIV抗体初筛实验室SOP文件适用部门：检验科目录第一部分工作制度- 1 -实验室工作制度- 1 -HIV标本采集与接收登记制度- 1 -艾滋病实验室保密制度- 2 -艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度- 2 -差错事故处理制度- 3 -报告单签发审核制度- 3 -设备管理制度- 4 -试剂管理制度- 4 -艾滋病筛查实验室安全防护制度- 5 -艾滋病病毒职业暴露预防处理方案- 5 -第二部分标准操作规程- 8 -第二章样品采集与处理- 8 -第二章标准操作程序- 8 -一、北京金豪- 8 -二、上海科华生物- 9 -三、英科新创- 10 -第三章结果报告与注意事项- 12 -第三部分设备SOP文件- 13 -一、多功能自动酶标仪RT-2100C- 13 -二、KHB ST－36W洗板机- 16 -三、电热恒温水箱- 18 -第四部分流程图- 20 -一、HIV抗体筛查流程图- 20 -二、暴露级别的评估- 21 -附件：血清加样表- 22 -第一部分工作制度实验室工作制度1.室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐，标志清晰，有良好的通风设备。

2.实验室工作人员工作时一律穿制服，保持衣帽整洁，试验过程中应专心致志、认真负责，坚守工作岗位，不得随意串岗、闲谈，保持实验室安静，下班离开实验室前要检查并关好水、电、门、窗等，注意实验室安全。

3.认真开展实验室质量控制工作，仪器设备应定期保养，有温度记录，检测标本的保存要求符合规范要求。

4.实验室不得放置与测试无关的物品，水、温、湿度、光照、防震、防尘、防噪声等，环境必须符合实验室的工作要求。

5.实验和楼道内必须配置足够的安全防火措施，并定期检查保养。

6.对不同属性、品种和含量水平的试样，应有足够的试验区域，予以分离检验，尤其是已知具有生物危害的试样必须分离检验。

防止损害工作人员健康和污染环境。

7.与检验无关人员不得进入实验室，外单位人员联系工作，一律在办公室接待。